小鼠受精卵显微去核技术的研究

武迪迪　刘莹　郑洁　王雁　于秉治

(中国医科大学基础医学院生物化学教研室,沈阳110001)

摘要　目的:探索昆明系小鼠受精卵细胞的去核技术。方法:借助显微操作系统,利用带有小针尖的去核针通过负压将细胞核连同少量细胞质及包裹其外的细胞膜一同吸进去核针内。结果:通过此种方法有66.5%的受精卵去核成功。结论:此种方法为有效的去核方法。

关键词　显微操作;受精卵;去核

The Study on the Enuclea tion of M ouse Fetil ized Em bryos

W u D id i,L iu Y ing,Z heng J ie,W ang Y an,Y u B ing z h i

(D epartm ent of B i ochem istry,Co llege of Basic M edical Sciences,Ch ina M edical U niversiry,Shenyang,110001)

ABSTRACT　Objective:R emoving the nuclear of the kun2m ing strain mou se.M ethods:U sing the em b ryo m i2 crom an i pu lati on system,W e in sert the sharp ti p of the p i pette in to the cell,w h ich leads to negative p ressu re.W ith th is fo rce,w e suck the nuclear together w ith som e cytop las m a and cell m em b rane around it ou t of the cell in to the p i pette.Results:W ith th is m ethods abou t66.5%nuclears w ere removed successfu lly.Conclusion:T h is is a u sefu l m ethod fo r removing nuclear.

KEY WOR D S　m icrom anpu lati on;zygo te;enucleati on

1997年7月苏格兰Ro slin研究所报道的“多利”的诞生[1]在世界范围内掀起了一场克隆热。克隆动物一时引起科学界特别是生物界的关注,克隆动物制作技术将成为遗传工程动物的主导性技术。而去核技术也成为克隆动物的关键环节,在核移植初期,移核针必须刺破细胞膜进行去核,对细胞损伤很大。1986年日本人T sunoda用切透明带的方法进行去核[3],此种方法适用于初学显微操作者。本实验用小鼠的受精卵为材料探索去核技术。

1　材料与方法

1.1　超排　选取4～6周健康昆明系雌性小鼠(中国医科大学实验动物部提供),于下午3时左右腹腔注射孕马血清(PM SG)10I U(天津华浮生物研究所)48h后腹腔注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)10 I U(上海生物化学制药厂),当晚与雄鼠1∶1合笼,次日检查阴栓待用。

1.2　取受精卵　注射hCG17～24h后,脱颈处死有阴栓的母鼠,取输卵管,在显微镜下撕开壶腹,释放带有卵丘细胞的细胞团,于含1m g m l的透明质酸酶的M2液中消化2～3m in,于M2[4]中洗涤4～6次,获得裸卵,置于M16[4]液中,在含5%CO2、95%空气的孵箱中培养,供去核用。

113　固定吸管的制备　将外径为1.0Λm的毛细玻璃管在水平拉针仪上拉成外径合适的小管,在锻烧仪上断开,使其外径为100Λm,内径为20～30Λm的玻璃管,再进一步钝化,制成所需的固定吸管。

1.4　去核针的制备　将毛细玻璃管在水平拉针仪上拉成针尖细部分为8～9nm长,管的粗端为4～5 nm长的玻璃针,在锻烧仪上于外径25～30Λm处断开,在磨针仪上将末端磨成45°角,然后进行洗涤,洗涤后,在锻烧仪上用微温煅烧,使其拉出一条细尖。

1.5　操作过程

1.5.1　预处理:将12细胞期受精卵置入含5Λg m l 细胞松弛素B(CB)和0.1Λg m l乙酰甲基秋水仙碱的培养液中培养30～45m in,然后将12细胞期的受精卵置入含细胞松弛素B和乙酰甲基秋水仙碱的操作滴中。

1.5.2　固定细胞:将固定吸管靠近细胞,轻轻稳定吸住12细胞期的受精卵,调节与固定吸管相连的注射器,施加微小的负压力,由于细胞松弛素B和乙酰甲基秋水仙碱的作用,有部分透明带及细胞膜包绕的细胞质凹入固定吸管中。

1.5.3　调节显微操作系统:固定吸管吸住细胞后,调节显微镜的焦距及操作部分的旋纽,使去核针、固定针和细胞位于同一平面,去核针的针尖清晰。1.5.4　去核针刺入细胞周隙:将去核针轻轻刺入透

?中国医科大学学报　J Ch in M ed U n iv　第29卷　增刊　2000年8月

明带使其进入细胞周隙,然后回缩去核针,操作时注意不要刺破细胞膜,尽量使去核针的斜面贴近细胞膜。

1.5.5　去核:移动去核针使其达到能够靠近一个细胞核的位置,调节与去核针相连的注射器,然后施加微小的负压力,细胞膜就会包绕核呈弧形凹入去核针中,移动去核针使其靠近另一个核,用同样方法使另一个核吸入去核针内,轻轻向回拉动去核针,吐出核小体,去核成功[5]。去核后的细胞置入培养箱中待用。

2　结果

共进行8次实验,对209个受精卵进行去核, 139个细胞去核成功。成功率为66.5%。

3　讨论

随着“多利”的诞生,克隆技术倍受人们的关注。去核技术的研究也有了很大的进展。很多人研究用不同的方法进行去核。日本人T sunoda采用切透明带的方法进行去核,但也有不足之处。首先,切完透明带的细胞切口不易寻找,且细胞膜包绕的细胞质易从切口中脱出,细胞数损失较多。另外,在这一方法中,去核针同切透明带的针不同,去核时需换针,这样既费时又麻烦。

在进行去核操作过程中,去核针的制作,细胞松弛素的浓度和作用时间及显微操作系统的调节是本实验的关键环节。

首先,去核针在制作时针尖要细并且不能过长还要有一定弯曲,这是因为细的针尖易于穿过透明带进入细胞周隙,而太长的针尖又容易把细胞膜刺破,另外针尖要求有一定的弯曲是有利于去核针的斜面靠近细胞膜.满足这些条件的去核针去核成功率较高。

其次,细胞松弛素的浓度一定要控制在5Λg m l,浓度小于5Λg m l,细胞膜不够柔软,去核时细胞膜易破;浓度大于5Λg m l时细胞易变形,细胞膜变为不规则状,对细胞损伤太大。另外细胞松弛素的作用时间控制在30～45m in,作用效果最佳。时间太长或太短效果都不好。

最后,在去核的操作过程中注意调节显微镜的操作系统,一定要使固定针、去核针及细胞在一个平面,以去核针的针尖清晰为准。操作过程中动作要轻柔缓慢。

本实验所采用的去核方法是高效、快捷的去核方法。去核技术是研究细胞的全能性及核质关系的重要手段,同时去核技术也是克隆技术的关键环节,通过对去核技术的进一步完善,用去核技术克隆有经济价值或社会价值的器官和动物,如克隆人体器官及珍惜动物大熊猫成为可能,其科学意义和应用价值不可估量。

参考文献

1　丁小燕.体细胞克隆与转基因动物1科学,1997,49:52～54

2　M cGrath J,So lter D.N uclear transp lantati on in the mouse em2 bryo bu m icro surgery and cell fusi on.Science,1983,220:1300-

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3　Y T sunoda,T Yasui,K N akam ura.Effect of cutting the zona pellucida on the p ronuclear transp lantati on in the mouse.J Exp Zoo l,1986,240:119-125

4　B rigid Hogan,F rank Co stantini,E lizabeth L acy,M ani pulating the mouse em bryo.Co ld Sp ring H arbo r L abo rato ry,1986,250-

252

5　严云勤,李光鹏,郑小民.发育生物学原理与胚胎工程.哈尔滨:黑龙江科学技术出版社,19951259～260

增刊武迪迪等1小鼠受精卵显微去核技术的研究

计算机网络技术试题及答案电子教案

计算机网络技术试题及答案一.填空题（每空1分，共20分） 1. 在计算机网络中，协议就是为实现网络中的数据交换而建立的________________。协议的三要素为：__________，__________和__________。 2．根据IEEE802模型的标准将数据链路层划分为_________子层和__________子层。 3．五类UTP又称为数据级电缆，它的带宽为________MHz，能够运行________MBPS以太网，此类UTP的阻抗为____________欧姆。 4．同轴电缆按阻抗可分为50欧姆和75欧姆两种，50欧姆同轴电缆主要用于传输__________信号，此类同轴电缆叫做_________同轴电缆。而75欧姆同轴电缆主要用于传输____________，此类同轴电缆又称为宽带同轴电缆。 5．计算机网络体系可划分为资源子网和____________子网。 6．决定局域网特征的主要技术有___________，_______________， ________________________。 7．在RS-232C/>的DB-9针接口中，_____号针定义为发送数据,____号针定义为接收数据，而____ 号针定义为信号地线。 8．我国的顶级的域名是______________。二. 选择题（每题1分，共30分） 1. 用同轴电缆构成局域网时，使用终端电阻的作用是：（A）防止信号流失（B）吸收信号防止信号返射造成干扰（C）使同轴电缆的内芯与外屏蔽线相连构成回路。（D）没有任何作用，可有可无。 2. 10Base-T以太网中，以下说法不对的是： (A) 10指的是传输速率为10MBPS (B) Base指的是基带传输 (C) T指的是以太网 (D) 10Base-T 是以太网的一种配置 3. 下列说法中不对的是：（A）可以同时双向传输信号的通信方式称为全双工通信方式。（B）在数字通信信道上，直接传送基带信号的方法称为频带传输。（C）TCP/IP参考模型共分为四层，最底层为网络接口层，最高层是应用层。

小鼠胚胎干细胞培养

以下培养针对于小鼠的R1胚胎干细胞系，其它胚胎干细胞的培养可以参考。不过人的胚胎干细胞培养不可以采用下面的protocol，需要用专用的protocol和培养基。一般培养－－维持ES细胞处于未分化状态 ES细胞培养用含有LIF（白血病抑制因子）和Feed细胞的培养基（高糖）来阻止细胞的分化。为细胞提供包被有0.1％明胶的平板作为粘附细胞的基质。建议每2－3天从达到80％－90％融合的平板按1：8的比率传代细胞一次，细胞传代以后，在将细胞接种在0.1％明胶包被的培养皿之前，通过预先将细胞接种在没有经过包被的组织培养板2个小时，使分化细胞粘附，从而将分化和未分化细胞分开。将细胞全程置于37℃，5％CO2，100％湿度条件下培养。如果在Feed细胞，那么就需要采用MMC进行处理，抑制Feed细胞增殖，但仍然能保持其分泌LIF因子的活性。下文中暂不提及Feed细胞。Feed细胞可以来源于STO细胞或原代胚胎成纤维细胞。培养基 ES: 配制一20×不含DMEM，HS，LIF的溶液（该溶液也能用于EB培养基－－见下文）。分装在50ml 离心管中，（稀释为2×，每管42ml），贮存在-20℃。通过将21ml该溶液，HS和LIF加入450ml DMEM中制备培养基，0.22 μm滤膜过滤。贮存于4℃，时间不要超过2周。贮存液 DMEM（高糖）马血清（HS） L-谷氨酰胺（200mM） MEM NEAA（10mM） HEPES（1M） β-巯基乙醇（55Mm） PEST LIF 复苏细胞细胞被冻存在10％二甲基亚砜（DMSO）中防止结晶的形成，结晶的形成会损害细胞。然而，二甲基亚砜对细胞有毒性，快速的进行细胞复苏是很重要的。步骤： 1．从液氮中取出一管细胞； 2．将冻存管置于37℃水浴中2分钟（或放到管内溶液恰好完全溶解）； 3．将细胞转移到一15ml Falcon管中； 4．加入5ml ES培养基（用培养基冲洗冻存管）； 5．离心3分钟； 6．弃上清，用2ml ES培养基重悬细胞，至少吹打10次； 7．接种在明胶包被（见下文）的6孔或6cm组织培养皿； 8．孵育。冻存细胞冻存液

计算机网络应用基础试题与答案

计算机网络基础参考试题及答案解析－、单项选择题（1）我国在1991年建成第一条与国际互联网连接的专线，与斯坦福大学连接成功，实现者是中国科学院的（）。 A）数学所 B）物理所 C）高能所 D）情报所答案：B）解析：1991年6月我国第一条与国际互联网连接的专线建成，它从中国科学院高能物理研究所接到美国斯坦大学的直线加速器中心。（2）关于计算机网络的讨论中，下列哪个观点是正确的？（） A）组建计算机网络的目的是实现局域网的互联 B）联入网络的所有计算机都必须使用同样的操作系统 C）网络必须采用一个具有全局资源调度能力的分布操作系统 D）互联的计算机是分布在不同地理位置的多台独立的自治计算机系统答案：D）解析：目前计算机网络的基本特征有：计算机网络建立的主要目的是实现计算机资源的共享；互联的计算机是分布在不同地理位置的多台独立的“自治计算机”；联网计算机之间的通信必须遵循共同的网络协议，并不要求连入网络的计算机使用相同的操作系统。（3）广域网覆盖的地理范围从几十公里到几千公里。它的通信子网主要使用（）。 A）报文交换技术 B）分组交换技术 C）文件交换技术 D）电路交换技术答案：B）解析：广域网的通信子网主要使用分组交换技术，将分布在不同地区的局域网或计算机系统互联起来，达到资源共享的目的。（4）关于城域网建设方案特点的描述中，下列哪些是正确的？（

） ①主干传输介质采用光纤 ②交换结点采用基于IP交换的高速路由交换机或ATM交换机 ③采用ISO／OSI七层结构模型 ④采用核心交换层，业务汇聚层与接入层3层模式 A）①②④ B）②③ C）①③④ D）①②③ 答案：A）解析：本题考查城域网建设方案的共同点。目前各种城域网的建设方案有几个共同点，那就是：传输介质用光纤，交换结点采用基于IP交换的高速路由交换机或者ATM交换机，在体系结构上采用核心交换层、业务汇聚层与接入层的3层模式，以适应各种业务需求、不同协议与不同类型用户的接入需要。（5）广域网一般采用网状拓扑构型，该构型的系统可靠性高，但是结构复杂。为了实现正确的传输必须采用（）。 I.光纤传输技术 Ⅱ.路由选择算法 Ⅲ.无线通信技术 Ⅳ.流量控制方法 A）I和Ⅱ B）I和Ⅲ C）Ⅱ和Ⅳ D）Ⅲ和Ⅳ 答案：C）解析：网状拓扑结点之间的连接是任意的，可靠性高，结构复杂，广域网基本上都采用这种构型。网状拓扑的优点是系统可靠性高，但是结构复杂，必须采用路由选择算法与流量控制方法来实现正确的传输。目前实际存在和使用的广域网基本上都是采用网状拓扑构型。（6）常用的数据传输速率单位有Kbps、Mbps、Gbps，lGbps等于（）。 A）1×103Mbps B）1×103Kbps C） l×106Mbps D） 1×109Kbps 答案：A）解析：本题考查简单的单位换算。所谓数据传输速

小鼠胚胎干细胞mES小鼠iPS培养Protocol

小鼠胚胎干细胞（mES细胞）、小鼠iPS细胞培养Protocol MEF细胞铺制： 1. 在T25培养瓶中加入0.2%明胶，摇匀后覆盖底面即可，于37℃细胞培养箱至少放置15 min以上。 2. 吸除0.2%明胶，加入事先水浴加热至37℃的MEF完全培养液。一般地，一个T25培养瓶中加入5 ml MEF完全培养液。 3. 按实验需要：小鼠胚胎干细胞使用KM-r P3 MEF或CF-1 P3 MEF；小鼠iPS 使用ICR-r P3 MEF，复苏MEF细胞若干支。将冻存管从液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超净台内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁，防止污染。 4. 将冻存管内细胞悬液转移至含2 ml MEF完全培养液的15 ml离心管内，以 1000 rpm，离心5 min，离心后将上清液吸除，另加入新鲜的MEF完全培养液1 ml，重悬后按照一个T25培养瓶铺1?106的MEF细胞，平均加入到T25培养瓶中，轻轻摇匀后置于37℃细胞培养箱。24 h以后可以传入小鼠胚胎干细胞或小鼠iPS细胞。 5. 复苏或传代小鼠胚胎干细胞或小鼠iPS细胞前，将T25培养瓶中的MEF完全培养液吸除，加入2 ml小鼠胚胎干细胞、小鼠iPS细胞完全培养液轻轻冲洗一遍后吸除，加入新鲜的小鼠胚胎干细胞、小鼠iPS细胞完全培养液待用。复苏： 1. 将小鼠胚胎干细胞、小鼠iPS细胞冻存管从液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超净台内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁，防止污染。 2. 将冻存管内细胞悬液转移至含3-4 ml小鼠胚胎干细胞、小鼠iPS细胞完全培养液的15 ml离心管内，以1000 rpm，离心5 min。 3. 离心后将上清液吸除，另加入新鲜的小鼠胚胎干细胞、小鼠iPS细胞完全培养液2 ml，吹打悬浮。 4. 重复吹打，制成单细胞悬液，尽量避免气泡。 5. 转移至1个已经铺好MEF细胞的T25培养瓶中培养。 6. 每天更换小鼠胚胎干细胞、小鼠iPS细胞完全培养液。传代： 1.一般在复苏后第2-3天传代，视克隆大小和密度而定。 2.吸除废液。 3.用PBS（不含钙镁离子）轻轻冲洗一遍。

计算机网络技术期末试题及答案

一、填空题 1、按网络覆盖的地域范围来划分，可将计算机网络分成_局域网_、城域网__、_广域网额与个人区域网。依据不同使用者来划分又可以分为公用网与专用网。 2、电路交换的三个阶段：建立连接、通信与释放连接。 3、常用的有线传输介质包括_双绞线__、_同轴电缆_和___光纤__等。 4、在数据传输中，为了保证数据被准确接收，必须采取一些统一收发动作的措施，这就是所谓_同步__技术。 5、在网络边缘的端系统中运行的程序之间的通信方式通常可划分为两大类：一是客户服务器方式（C/S 方式），二是对等方式（P2P 方式）。 6、IEEE802局域网协议与OSI参考模型比较，主要的不同之处在于：对应OSI的链路层，IEEE802标准将其分为____ MAC________控制子层和_____ LLC______控制子层。 7、在数据报服务中，网络节点要为每个_____数据报_____选择路由。 8、计算机网络技术是____计算机系统______ 和___通信技术_____ 技术的结合。 9、频分复用、时分复用是常用的多路复用技术，其中，___频分复用_______比较适合于传输模拟信号，_时分复用_________比较适合于传输数字信号。 10、模拟信号之所以能够转变成数字信号来进行传输，是基于一个基本的定理，这个定理就是____采样______定理。 11、常见的数据交换技术包括电路交换、_报文交换、和__报文分组交换____等。 12、所谓网络主要指“三网”，即电信网、有线电视网与计算机网络。 13、试列举四种主要的网络互连设备名称：___集线器___ 、___交换机__ 、___路由器____和 ______网关______。 14、计算机网络的性能指标有速率、带宽、吞吐量、时延、时延带宽积、往返时间与利用率。 15、写出三个顶级域名：____ cn ___、___ org ____和 ___ com _____。 16、常见的网络拓扑包括__星形___、___总线形__和___环形___等。 17、常见的广域网连接技术包括___帧中继__、____ ISDN ____和__ ATM ___等。 18、计算机网络向用户提供的的最重要功能有两个一是连通性，二是共享。 19、网络是由若干个节点与连接这些节点的链路组成。

胚胎干细胞体外培养

胚胎干细胞体外培养 (一)胚胎干细胞的来源目前胚胎干细胞的主要来源有：①囊胚的ICM及受精卵发育至桑葚胚之前的早期胚胎细胞；②从胚胎生殖嵴及肠系膜中分离原始生殖细胞PGCs后培养建系的胚胎生殖细胞(embryonic germ cells，EG细胞)，也具有ESCs的特性，可以分化为各种类型的成熟细胞；③体细胞核转移(somatic cell nuclear transplantation，SCNT)至去核卵母细胞后培育出来的全能细胞。其中囊胚的ICM最为常用。 (二)胚胎干细胞的分离 1.分离获取ESCs的时间：以既保证ESCs的全能性又要有足够的细胞数量为原则来确定ESCs分离获取的最佳时间。以ICM为ESCs来源时：小鼠取3～5天囊胚；猪取9～10天囊胚；羊取7～8天囊胚；牛取6～7天桑葚胚或早期囊胚；人取7～10天囊胚。以PGCs取ES细胞时：小鼠取1 2.5天胎儿生殖嵴；大鼠可取10.5天尿囊、中胚层组织块、12.5天背肠系膜或1 3.5～1 4.5天生殖嵴；牛取29～35天胎儿生殖嵴；人取35～63天的生殖嵴。 2.分离获取ESCs的方法：从PGCs分离ESCs的方法常为机械剪切与消化相结合法，即把采取的胚胎组织充分剪碎，采用EDTA、EDTA/胰酶消化。从囊胚分离ICM的方法主要有三种： (1)免疫外科学方法：体外培养的小鼠胚泡去除透明带后，经兔抗JCR小鼠脾脏细胞抗血清(抗H-26)作用30分钟，移至1∶6稀释的新鲜豚鼠血清中作用30分钟，Hank’s液冲洗，此时胚泡的滋养外胚层呈空泡状，用眼科手术刀挑去死了的滋养层细胞，留存ICM 细胞用于培养。这种方法利用囊胚腔对抗体的不通透性，通过抗体、补体结合对细胞的毒性杀伤作用，去除滋养层细胞，保留ICM细胞进行培养。 (2)组织培养法：在小鼠受精2.5天后切除卵巢，给予外源激素，使胚胎继续发育，但延缓着床，4～6天后，由子宫冲取胚泡进行培养。结果滋养层细胞生长并推开饲养层细胞，在培养皿底壁上铺展；而ICM细胞增殖，垂直向上生长，形成卵圆柱状结构，在显微镜下用细玻璃针挑出这种柱状结构，消化传代。Evans和Kaufman采用这种方法第一个建立了小鼠ESCs系。 (3)显微外科学方法：小鼠受精后3～4天，由子宫冲取胚泡，利用显微操作系统直接从胚泡中吸出ICM细胞进行培养。由于免疫外科学方法需要特殊的试剂去除透明带和滋养层，易对内细胞群造成损伤，而显微外科学方法需要专门的仪器设备，且对人员的技术水平要求较高，均难以推广应用。组织培养法将胚泡接种在饲养层上，模拟体内胚泡的着床，更接近自然发育过程，内细胞群增殖旺盛，较易获得胚胎干细胞样集落。 (三)胚胎干细胞的培养和建系 ESCs的分离培养和建系是其得以应用的前提。ESCs建系的原理是：将分离获取的ICM 或PGCs与饲养层共同培养，使之增殖而又保持其未分化状态，这样代代相传从而使ESCs

小鼠胚胎干细胞的培养

小鼠胚胎干细胞分化为精子细胞的研究进展郑晨光生科091 学号090304109 (河北科技大学生物科学与工程学院石家庄050018) 摘要:胚胎干细胞(ESCs) 是一种具有分化发育为三个胚层组织细胞潜能的全能性细胞, 哺乳动物的精子起源于原始生殖细胞(PGCs), ESCs 可分化为PGCs, 并进一步分化为精子细胞。通过在培养基中添加诱导分化因子(如维甲酸等) 或与希望诱导分化的目的细胞(如Sertoli细胞等) 共培养, 并通过鉴别ESCs分化为生殖细胞的各阶段特异性基因标志物 c-kit、VASA、DAZL、fragilis、miwi、mil1和mil2等, 获取不同阶段的生殖细胞。鼠的ESCs 已诱导出了不成熟的精子细胞, 但到目前为止尚无成熟精子培养成功, 且诱导分化的效率很低。关键字：小鼠；胚胎干细胞；精子胚胎干细胞是由哺乳动物早期胚胎分离克隆的一类未分化二倍体细胞, 能在体外增殖, 并能保持未分化状态。在一定条件下可以分化为包括生殖细胞在内的三个胚层的所有细胞类型。目前, 已从ESCs 诱导出神经细胞、心肌细胞、肝细胞、骨细胞、胰岛素分泌细胞等。小鼠胚胎干细胞体外已成功诱导分化为精子细胞和卵母细胞, 人胚胎干细胞理论上也具备分化为生殖细胞的潜能。2003 年5 月Hubner 等成功将鼠胚胎干细胞体外分化为生殖系统的卵母细胞,并在Science 上报道了该成果。近来有实验室从小鼠ESCs体外分化产生雄性原始生殖细胞, 孵育分化后注入到卵母细胞可发育成囊胚, 且检验为正常的二倍体核型。本文从小鼠胚胎干细胞定向分化为精子细胞的基因标记和方法学2 个方面, 对ESCs 向精子细胞分化的最新研究进展作一综述。 1 原始生殖细胞的发育雌、雄鼠合笼至母鼠见阴栓后(days post-coitum,dpc) 7 d ,鼠胚胎中出现原始生殖细胞(primordiralgerm cells, PGCs), 经过增殖, 移行到生殖嵴, 并继续分化为生殖干细胞(germ stem cells, GSCs), 这些细胞是精子和卵子发生的基础。大部分研究者都认为, PGCs 是生殖细胞最初的形式,小鼠胚胎在三个胚层形成时, PGCs同时出现。PGCs 从性腺原条移行到尿囊再移行到近端内胚层中, dpc 7 d 后在中胚层远端可观察到PGCs, dpc 8 d移行到尿囊再到原肠, 这被称为移行期PGCs, 在dpc 9.5-11.0 d , 移行至生殖嵴, 这一阶段被称为移行后期PGCs, 当PGCs 分化为生殖母细胞时, 睾丸或卵巢的结构就已经确立。对于雄性小鼠, 生殖母细胞一直停留在有丝分裂期直到出生后2 d , 然后到达输精管基底膜或者停留在管腔中退化, 那些存活下来的细胞则继续分化为GSCs, 经过多细胞分化阶段, 分化为精母细胞, 精母细胞减数分裂为精子细胞, 后者最终分化为精子。也就是说, 在雄性胚胎中生殖细胞要经历移行前期P G C s 、移行期PGCs、移行后PGCs 、生殖母细胞、A 型精原细胞、GSCs 和减数分裂前生殖细胞, 才形成成熟的精子。在这段复杂漫长的变化中, 有多种不同的特异基因的表达。 2 生殖细胞分化的基因标记 PGCs的很多标志物在未分化的ESCs 上也有表达, 摆在研究者面前的挑战就是如何区分这2种细胞。且ESCs 在分化为PGCs 的过程中, 各个阶段的基因标记也不同。ESCs的分化依赖于特异基因表达, 在生殖细胞分化中起关键作用的基因有c - k i t 、V A S A 、DAZL、fragilis、miwi、mil1和mil2等, 这些基因的表达有阶段特异性, 即在生殖细胞的不同发育阶段, 它们分别稳定地表达, 从而成为原始生殖细

计算机网络与internet应用试题及答案

计算机网络与Internet应用试题及答案一、是非题 1．分布式处理是计算机网络的特点之一。 A．对 B．错 2．组建一局域网时，网卡是必不可少的网络通讯硬件。 A．对 B．错 3．在IE浏览器中，系统会把我们浏览过的网页保存在缓存的特定文件夹中。 A．对 B．错 4．WWW中的超文本文件是用超文本标识语言写的。 A．对 B．错 5．广域网是一种广播网。 A．对 B．错 6．分组交换网也叫网。 A．对 B．错 7．Yahoo是典型的目录搜索引擎。 A、对 B、错 8．Google就是典型的目录搜索引擎。 A、对 B、错 9．搜索引擎是一个应用程序。 A、对 B、错 10．网络信息安全是一门涉及计算机科学、网络技术、通信技术、密码技术、应用数学、数论、信息论等多种学科的综合性学科。 A、对 B、错 11．对称加密与非对称加密的区别在于加密结果的对称性。 A、对 B、错 12．数字签名是对称加密技术的一种应用。 A、对 B、错 13．计算机协议实际是一种网络操作系统，它可以确保网络资源的充分利用。 A、对 B、错 14．国际标准化组织（ISO）制定的开放系统互联参考模型（OSI）将网络体系结构分成七层。 A、对 B、错 15．Internet是计算机网络的网络。 A、对 B、错二、单选题 1．按网络的范围和计算机之间的距离划分的是______。 A．Windows NT B．WAN和LAN C．星型网络和环型网络 D．公用网和专用网 2．网络的物理拓扑结构可分为______。 A．星型、环型、树型和路径型 B．星型、环型、路径型和总线型 C．星型、环型、局域型和广域型 D．星型、环型、树型和总线型 3．在基于个人计算机的局域网中，网络的核心是______。

小鼠胚胎干细胞培养实验步骤

细胞的原代培养点击次数：540 作者：佚名发表于：2009-03-06 16:26转载请注明来自丁香园一、原代细胞培养原理原代细胞培养是将机体内的某组织取出，分散成单细胞，在人工条件下培养使其生存并不断生长、繁殖的方法。借助这种方法可以观察细胞的分裂繁殖、细胞的接触抑制以及细胞的衰老、死亡等生命现象。 ? 幼稚状态的组织和细胞，如：动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养 ? 掌握无菌操作技术 ? 了解小鼠解剖操作技术 ? 了解原代细胞培养的一般方法与步骤 ?了解培养细胞的消化分散 ? 了解倒置显微镜的使用二、实验材料 ? 实验动物：孕鼠或新生小鼠 ? 液体：细胞生长液（内含20%小牛血清） 0.25%胰蛋白酶平衡盐溶液 70%乙醇 ?器材：灭菌镊子、剪刀若干把灭菌培养皿、细胞培养瓶、小瓶、烧杯若干个吸管若干支酒精灯原代细胞培养方法三、胰酶消化法（1）胰酶消化法操作步骤——取材 a. 用颈椎脱位法使孕鼠迅速死亡。

b. 把整个孕鼠浸入盛有75%乙醇的烧杯中数秒钟消毒，取出后放在大平皿中携入超净台。 c. 用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用无菌镊子将皮肤扯向后腿。 d. 用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子宫，置于无菌的培养皿上。 e. 剔除胚胎周围的包膜（若胚胎较大，应剪去头、爪），将胚胎放于无菌的含有平衡盐溶液的培养皿中。 f. 漂洗胚胎，去掉平衡盐溶液。继续用平衡盐溶液漂洗胚胎直至清洗液清亮为止。（2）胰酶消化法操作步骤——切割 a. 将部分胚胎转移至一个无菌小瓶中，用平衡盐溶液漂洗。 b. 然后用眼科手术剪刀小心地绞碎胚胎，直到成1mm3左右的小块，再用平衡盐溶液清洗，洗到组织块发白为止。 c. 静置，使组织块自然沉淀到管底，弃去上清。（3）胰酶消化法操作步骤——消化、接种培养 a. 视组织块量加入5-6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20-40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。 b. 加入3-5ml细胞生长液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。 c. 静置5-10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。 d. 1000rpm，离心10分钟，弃上清液。 e. 加入平衡盐溶液5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。 f. 加入细胞生长液l-2ml（视细胞量），血球计数板计数。 e. 将细胞调整到5×105/ml左右，转移至25ml细胞培养瓶中，37℃下培养。（4）胰酶消化法操作步骤——消化、接种培养

小鼠胚胎干细胞培养体系的建立

第19卷第2期江西农业大学学报 V o l.19,N o.2 1997年6月 A cta A gricu ltu rae U n iversitatis J iangx ien sis June,1997 α 小鼠胚胎干细胞培养体系的建立汪河海1　刘红林2　范必勤1　钟　卉3　丁家桐4 (1　江苏农科院牧医所,南京　210014;2　南京农业大学动物科技学院,南京　210059;3　南京铁道医学院,南京　210009;4　扬州大学农学院动物科学系　225009) 摘要通过探讨影响小鼠胎儿成纤维细胞饲养层制备及胚胎干细胞体外培养的若干因素,建立了小鼠胚胎干细胞体外培养体系,并建成小鼠ES细胞系。关键词:小鼠;胚胎干细胞;培养体系;ES细胞系中图分类号:S865.1 胚胎干细胞又称ES细胞(Em b ryon ic Stem Cells)。其特点是在体外特定的培养条件下能保持其只生长、不分化的增殖状态,并具早期胚胎细胞发育的全能性。哺乳动物的ES细胞系自Evan s和Kaufm an(1981)首次建立以来[1],引起人们高度的重视,并被广泛地用于动物发育遗传学的基础理论研究和转基因动物的生产实践。但ES细胞系要在体外克隆成功,必须有成纤维细胞或STO细胞饲养层的支持[2],为建立有效的哺乳动物ES细胞体外培养体系,本文就影响小鼠胎儿成纤维细胞饲养层制备及胚胎干细胞体外培养的若干因素做初步探讨,为今后进一步开展研究奠定基础。 1　材料和方法 111　动物准备选3～4月龄的性成熟的昆明鼠,母鼠自然发情或超排后与公鼠交配,第2天早晨检查阴道栓,见栓查为发情受精。妊娠至一定日龄后取其胚胎或胎儿用于分离囊胚内细胞团细胞或制备胎儿成纤维细胞饲养层。 112　溶液的配制按日本学者管原七郎的配方配制D PB S液,胰蛋白酶溶液、DM E M液及ES细胞培养液(配方略)。 113　胎儿成纤维细胞饲养层的制备 α

计算机网络应用基础试题与答案

－、单项选择题（1）我国在1991年建成第一条与国际互联网连接的专线，与斯坦福大学连接成功，实现者是中国科学院的（）。 A）数学所B）物理所 C）高能所D）情报所答案：B）解析：1991年6月我国第一条与国际互联网连接的专线建成，它从中国科学院高能物理研究所接到美国斯坦大学的直线加速器中心。（2）关于计算机网络的讨论中，下列哪个观点是正确的（） A）组建计算机网络的目的是实现局域网的互联 B）联入网络的所有计算机都必须使用同样的操作系统 C）网络必须采用一个具有全局资源调度能力的分布操作系统 D）互联的计算机是分布在不同地理位置的多台独立的自治计算机系统答案：D）解析：目前计算机网络的基本特征有：计算机网络建立的主要目的是实现计算机资源的共享；互联的计算机是分布在不同地理位置的多台独立的“自治计算机”；联网计算机之间的通信必须遵循共同的网络协议，并不要求连入网络的计算机使用相同的操作系统。（3）广域网覆盖的地理范围从几十公里到几千公里。它的通信子网主要使用（）。 A）报文交换技术B）分组交换技术 C）文件交换技术D）电路交换技术答案：B）解析：广域网的通信子网主要使用分组交换技术，将分布在不同地区的局域网或计算机系统互联起来，达到资源共享的目的。（4）关于城域网建设方案特点的描述中，下列哪些是正确的（） ①主干传输介质采用光纤 ②交换结点采用基于IP交换的高速路由交换机或ATM交换机 ③采用ISO／OSI七层结构模型 ④采用核心交换层，业务汇聚层与接入层3层模式

A）①②④B）②③ C）①③④D）①②③ 答案：A）解析：本题考查城域网建设方案的共同点。目前各种城域网的建设方案有几个共同点，那就是：传输介质用光纤，交换结点采用基于IP交换的高速路由交换机或者ATM交换机，在体系结构上采用核心交换层、业务汇聚层与接入层的3层模式，以适应各种业务需求、不同协议与不同类型用户的接入需要。（5）广域网一般采用网状拓扑构型，该构型的系统可靠性高，但是结构复杂。为了实现正确的传输必须采用（）。 I.光纤传输技术Ⅱ.路由选择算法Ⅲ.无线通信技术Ⅳ.流量控制方法 A）I和ⅡB）I和Ⅲ C）Ⅱ和ⅣD）Ⅲ和Ⅳ 答案：C）解析：网状拓扑结点之间的连接是任意的，可靠性高，结构复杂，广域网基本上都采用这种构型。网状拓扑的优点是系统可靠性高，但是结构复杂，必须采用路由选择算法与流量控制方法来实现正确的传输。目前实际存在和使用的广域网基本上都是采用网状拓扑构型。（6）常用的数据传输速率单位有Kbps、Mbps、Gbps，lGbps等于（）。 A）1×103Mbps B）1×103Kbps C）l×106Mbps D）1×109Kbps 答案：A）解析：本题考查简单的单位换算。所谓数据传输速率，在数值上等于每秒钟传输构成数据代码的二进制比特数，单位为比特／秒，记做b／s或bps。对于二进制数据，数据传输速率为s＝l／T，常用位／秒千位／秒或兆位／秒作为单位。 lKbps＝1 000bps，lMbps＝1 000Kbps，lGbps＝1 000Mbps。（7）Internet 2可以连接到现在的Internet上，但其宗旨是组建一个为其成员组织服务的专用网络，初始运行速率可以达到（）。 A）B) C）D)10Gbps 答案：D）解析：Internet 2是非赢利组织UCAID的一个项目，初始运行速率可达

小鼠早期胚胎发育的研究 )

小鼠早期胚胎发育的研究（实验方案）基础生物学课程设计所在学院生物科学与工程学院专业班级生物科学学生姓名学生学号指导教师 XXXX年XX月XX日小鼠早期胚胎发育的研究一、引言胚胎发育一词通常是指从受精卵起到胚胎出离卵膜的一段过程。而无脊椎动物胚胎学家则常把其概念扩展到胎后发育直到性成熟，甚至整个生活史。动物胚胎的发育过程虽然动物的种类繁多，但是胚胎的发育依然拥有相似的过程，能够分成受精、卵裂、桑葚胚、囊胚、原肠胚与器官形成等阶段。此外脊椎动物的胚胎发育过程中，各种动物共同拥有的特征会首先出现(如皮肤)，之后才逐渐发展出特化的构造(如鱼鳞)，而且较复杂的物种与较原始的物种之间一开始相当类似，之后才随着发育的时间而慢慢增加变异。受精:卵子和精子融合为一个合子的过程。它是有性生殖的基本特征，普遍存在于动植物界，卵裂:精子与卵子结合之后会形成受精卵，由于卵黄的分布具有不对称的特性，因此受精卵可以分为动物极(会发展成外胚层)和植物极(会发展成中胚层与内胚层)。在卵裂时期，卵子会先分裂成两个细胞，之后细胞通常会逐次倍增，但是

对哺乳类而言，有时候会有不同时分裂并造成只有奇数个细胞的现象。在这个阶段，胚胎的总体积大致不变。不同的物种具有不同的卵裂方式，可以分为完全卵裂(holoblastic cleavege)和不完全卵裂(meroblastic cleavage)，分别又可以细分成许多不同方式。如无脊椎动物的辐射卵裂与螺旋卵裂、哺乳动物的旋转式分裂等。原肠胚:当细胞分裂成为囊胚之后，会经过一段称为原肠形成的型态发生过程，之后形成原肠胚。原肠形成过程有许多不同方式，能够大致分成5种:内陷式(Invagination)、衰退式(Involution)、进入式(Ingression)、脱层式(Delamination)、包覆式(Epiboly)，动物的胚胎利用这5种方式形成了外胚层、中胚层与内胚层的组合，而这三种胚层在之后会形成各种细胞。例如由内胚层发展而来，具有具有多潜能性的的间叶细胞，可以分化成纤维母细胞、软骨母细胞、硬骨母细胞、脂肪细胞、平滑肌细胞、横纹肌母细胞、造血母细胞等等。器官形成:外胚层、中胚层与内胚层形成各种组织和器官的过程，称为器官形成，也称做器官发生。以青蛙的胚胎为例，在器官形成的早期，外胚层会在突起之后向内凹陷，形成神经脊与神经管;中胚层则会形成中胚叶节(somite)与脊椎，中胚叶节包围的空间称为体腔。小鼠应用于生命科学研究中已有上百年的历史，成为研究人类遗传疾病的最佳动物模型。它是最小的哺乳动物之一，体形小，易于饲养管理;繁殖和发育速度都特别快;性情温顺，胆小怕惊;对外来刺激极为敏感;便于提供同胎和不同品系动物;成雌鼠在动情周期不同级段，阴道粘膜可发生典型变化，根据阴道涂片的细胞学改变，可以推断卵巢功能的周期性变化，且市场价格较低，。虽然小鼠和人类在体型大小和形态上相差很大，但在生物进化上非常接近。所以以小鼠作为研究人类遗传疾病的材料最为合适。

网络技术应用选择题(附答案)

网络技术应用选择题（附答案） [日期：2010-04-28] 来源：作者：[字体：大中小] 1、下列IP地址书写正确的是（）： A：192.16.9.268 B：192,168,222,1 C：166 163 268 8 D：192.16 8.2.22 2、当你在网上下载软件时，你享受的网络服务类型是（） A 文件传输 B 远程登陆 C 信息浏览 D 即时短信 3、以下设置密码的方式中哪种更加安全（） A 用自己的生日作为密码 B 全部用英文字母作为密码 C 用大小写字母、标点、数字以及控制符组成密码 D 用自己的姓名的汉语拼音作为密码 4、因特网最常用的通信协议是( ) A BBS B ISDN C TCP/IP D PPP 5、建立主题网站的顺序是（） A 规划→设计→实现→发布管理 B 设计→规划→实现→发布管理 C 规划→实现→设计→发布管理 D 设计→实现→规划→发布管理 6、因特网起源于上个世纪的（） A、互联网 B、广域网 C、阿帕网 D、公共网 7、网络病毒的共同特点有（） ①可传播性②进化性③破坏性④可能发性⑤可执行性⑥可自然死亡性 A、①② B、③④⑥ C、①④⑤D①③④⑤ 8、学校计算机房中某台电脑的IP地址为“192.168.0.27”此地址为（）地址 A、 A类 B、B类 C、C类 D、D类 9、因特网上提供的服务有很多，以下不是其中的服务的是（） A、QQ聊天 B、在线电影 C、传真 D、IP电话 10、下列属于网页元素的是（） ①表格②文字③图片④动画⑤音频⑥视频 A、①②⑥ B、②③④⑤ C、①④⑤ D、以上都是 11.世界上是最初的计算机网络是（） A.CHINANET B.TELNET C.INTERNET D.ARPANET 12.按照网络覆盖范围分类，校园网属于（）

FTOC Protocol 小鼠胚胎胸腺培养

Protocol Fetal Thymus Organ Culture INTRODUCTION The generation of functionally competent T-cells from their progenitors involves a series of developmental events including proliferation, differentiation, and survival. T-cell development is a non-cell-autonomous event, and requires interactions with thymic stromal cells. Fetal thymus organ cultures provide an in vitro system in which isolated embryonic thymus lobes can be maintained in culture, allowing the study of T-cell development as well as thymic stromal cell function. This system remains the only in vitro system that supports a complete program of T-cell development, including positive and negative selection of the developing T-cell receptor repertoire. Modifications of the basic fetal thymus organ culture system, such as hanging drop cultures and reaggregate thymus organ cultures, provide useful systems to analyze thymus colonization and thymic stromal cell function, respectively. MATERIALS Reagents All media should be prewarmed to 37°C before use. 10% CO2 in air, contained in gas cylinder 2'-deoxyguanosine (dGuo) (Sigma-Aldrich, D0901) Prepare a 9 mM stock in 1X PBS. It takes ~1 h at 37oC for the dGuo to dissolve. Mix the solution well during this period.Dilute the dGuo stock to a final concentration of 1.35 mM in1X PBS (see Step 3). Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM) for thymus organ culture 70% ethanol Mice, pregnant female (gestational age E14-E16) 1X PBS (Ca++/Mg++-free) RF10-H medium 10X trypsin (Sigma-Aldrich,T4674)

小鼠超数排卵与早期胚胎体外培养效果研究

江丙农业学报2010，22(12)：144～146 A c t a A g r i c uhu r ae J i an gxi 小鼠超数排卵与早期胚胎体外培养效果研究林峰，陈玉霞+，孙克宁，杨婷，田晓军 (河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002) 摘要：为探讨冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响，分别采用子宫切碎法与子宫冲胚法对超排小鼠进行了冲胚。结果表明：子宫冲胚法的平均采卵数和平均获胚数极显著高于子宫切碎法(P<0．01)，而平均可用胚数显著高于子宫切碎法(P< O．05)，两种方法的平均未受精卵数则差异不显著(P>0．05)，说明冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响显著，且子宫冲胚法明显优于子宫切碎法。小鼠早期胚胎发育观察结果表明：超排处理后，在公母鼠合笼后76～79．5h采胚，胚胎大多处于桑椹胚期，而在公母鼠合笼后88～91．5h采胚，胚胎大多处于致密桑椹胚期与囊胚期；采用TC M l99+15％胎牛血清培养液对小鼠胚胎进行体外培养是可行的。关键词：小鼠；超数排卵；早期胚胎；体外培养；冲胚方法中图分类号：Q132．8文献标识码：A文章编号：1001—8581(2010)12—0144—03 St udy on E f f ect of Super ovul a t i on and i n vi t r o C ul t ur e of Ear l y Em br yo i n M ous e LI N Fe n g，C H E N Y u—xi a‘，SU N K e—ni ng，Y A N G Ti ng．T I A N X i ao—j u“ (C ol l ege of A n i m a l H us ba ndr y a nd V et er i nar y M e di ci ne，H enan A矛c ul t ur al U ni ver si t y．Z he ngzhou450002，C hi na) A bs t r act：I n t hi s paper．t he e ffe c t of dif f erent m e t h ods of c o l l ec t i n g e m br yos on t he s uper ovul at i on of m i c e w a s s t udi ed，and t he e m br yos i n t he suoer ovul at ed m i Ce w er e coll ected by usi ng t he ut erus—m i nc i ng m e t ho d a nd ut er us—col l ect i ng m e t hod re s pec t i ve l y．ne r es ult s show e d t ha t t he aver age num ber of eggs and em bryos obt ai ned by t he ut er us—co l l ect i ng m e t ho d w er e,ext r em el y s ignif i ca ntl y hi gher(P<0．01)t han t hos e obt ai ned by t he ut e r us—m i nci ng m e t hod，an d t he aver age nu m ber of us abl e em bryos obt ai ned by t he u t e r r us—coll ect i ng m e t he d w强si gni f i cant l y hi gher(P<0．05)t han t ha t di d by t he ut erus—m i nc i ng m et hod．ne aver age num be r of an-fe r t i l i zed eggs obt ai ned by t hes e t w o m e t h ods w a s no t s ignif i cant ly di f f er e nt(P>O．05)．So t he s uper ovu l at i on e ffe c t of m i c e W a S s i g-nif i e ant lv i nnue nee d by t he m e t ho d of coll ect ing em bryos．T he obs er vat i on r es ult s of ear l y e m br yos de vel opm ent i ndi cat ed t hat m ost of t he em bryos coll ected76—79．5hour s aft er com bi ni ng cages w e r e at m or ul a s t age．w hi l e m os t of t}l e em bryos coll ected88～91．5 hour s a ft e r com bi ni ng cages w e r e a t com pa ct e d m or u l a s t a ge and bla s t o e yst s t ag e．I t W a S f eas i ble t ha t t he em bryos of m i c e w er e cul t i—vat ed i n vi t ro by usi n g t he m i xed s o l ut i o n of T C M l99and15％F C S． K e y w or ds：M ouse；Sup er ov ul at i on；E ar l y em br yo；I n vi t ro cul t ur e；M e t hod of coll ect ing em bryos 雌性哺乳动物一生所产的卵子总数早在其胚胎发育形成卵巢的过程中已被确定，成熟卵子在成年后的发情周期中分别排出，但是单纯依靠动物的自然排卵，一方面所得到的卵母细胞数或胚胎数较少，另一方面又消耗大量的时间和浪费较多的动物．因此为了获取大最的胚胎，多采用超数排卵的方法，即利用外源性促性腺激素诱发多个卵泡同时发育并排出具有正常受精能力的卵子¨。1。该技术大幅度地开发利用了卵巢上的卵母细胞资源，为胚胎工程和转基因动物等相关领域的研究提供了大量的研究素材。小鼠具有个体小、生长快、繁殖力强等特点，是畜牧兽医科学研究领域应用最为广泛的实验动物，研究小鼠超数排卵对动物胚胎工程等研究具有重要意义。近年来，随着遗传工程小鼠的大量开发，人们对小鼠卵母细胞和胚胎的需求量日趋增多，因而完善的超数排卵技术是遗传工程小鼠研究获得成功的重要前提条件。到目前为止，能够获得大量胚胎来源的技术仍为超数排卵。超数排卵反应是一个极其复杂的生理过程。研究资料表明，小鼠超排效果受激素的种类、剂鼍以及动物的生理状态等多种因素影响，这些因素错综复杂，使超数排卵效果很不稳定H—o。为了进一步研究冲胚方法对超数排卵的影响及小鼠冲胚的有效方法，本试验在控制以上因素一致的条件下，采用两种不同的冲胚方法来进行对比，以期为今后的小鼠超数排卵研究提供一定的参考依据，为胚胎生物技术研究提供借鉴。 l材料与方法 1．1试验地点和时间本试验于2009年l O月16日至2010年5月27日在河南农业大学牧医工程学院胚胎生物技术研究室进行。 1．2试验动物 1．2．1试验动物的条件试验用昆明小白鼠购于河南省实验动物中心。雌性小鼠(未经产)为17周龄、体重30 收稿日期：2010一基金项目：河南省重点科技攻关计划项目(82102130005)；河南省蕈大科技攻关计划项目(0422011200)。作者简介：林峰(1972一)。男．山东栖霞人．副教授，博士，主要从事动物胚胎生物技术研究。通讯作者：陈玉霞。