硕士学位论文预答辩意见书

硕士研究生学位论文预答辩意见书双酶分步制备鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽及生物活性的研究

（论文题目）

学生姓名 马华威 学科专业 海洋生物学 研究方向 海洋生物资源综合开发与利用 指导教师 郑 斌 所在学院 海洋科学与技术学院 填表日期 2014.02.26 浙江海洋学院研究生处制二〇一〇年三月问题，关于管护层采用金对全部料试系，根中资都可以写复题，作电力总体配可能地工况进试技术

一、学位论文摘要与关键词（由硕士研究生本人填写，限500-800字）摘 要 本文基于鮟鱇鱼皮为原料，以胃蛋白酶、2709碱性蛋白酶分两步水解，制备胶原蛋白肽且探讨抗氧化及协同抗菌活性，为今后鮟鱇鱼皮及胶原蛋白或者其肽的制备和应用提供参照数据。

经胃蛋白初步酶解鮟鱇鱼皮制备出产量为9.23±0.54%的I 型酶溶性胶原(PSC)；PSC 中甘氨酸(Gly)和亚氨基酸含量分别为344残基/1000残基和193残基/1000残基，相对溶解度在NaCl 浓度低于2%(w/v)时较高；PSC 的超微结构似海绵，呈疏松式、纤维性、多孔状结构，其热变性温度(T d )为18.78°C 。 正交试验确定最佳制备该胶原蛋白肽工艺是：2709碱性蛋白酶添加量1%，料液比为1:20，酶处理时间6h ，酶处理温度5°C ；SDS-PAGE 结果表明胶原蛋白肽主要含有相对分子量低于50 kDa 的多肽链；鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽的发泡能力(FC)在pH4最大，酸性条件下pH 对该胶原蛋白肽的发泡稳定能力(FS)影响较强；该胶原蛋白肽乳化能力(EAI)和乳化稳定性(ESI)呈pH 趋于碱性而增强的趋势。结果表明，鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽质量分数为10 mg/mL 时其体外抗氧化作用效果

最佳；经超滤后，分子量低于2 000 D 的组分活性最高；给药后，小鼠体内过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性显著增强，丙二醛(MDA)含量增加，羟脯氨酸(Hyp)水平降低，且100 mg?kg -1?d -1剂量效果最佳；该胶原蛋白肽和抗生素以比例配制成复合液能够提高抗生素抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的能力，对白色念球菌几乎无影响。

关键字：鮟鱇；胶原蛋白肽；表征；抗氧化；抗菌；MIC （最低抑菌浓度） 研究生签名： 年 月 日

、管路敷设技术通过管线敷设技术，不仅可以解决吊顶层配置不规范问题，而且可保障各类管路习题到位。在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径标高等，要求技术交底。管线敷设技术中包含线槽、管架等多项方式，为解决高中语文电气课件中管壁薄、接口不严等问题，合理利用管线敷设技术。线缆敷设原则：在分线盒处，当不同电压回路交叉时，应采用金属隔板进行隔开处理；同一线槽内，强电回路须同时切断习题电源，线缆敷设完毕，要进行检查和检测处理。、电气课件中调试对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料试卷相互作用与相互关系，根据生产工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷调试方案，编写重要设备高中资料试卷试验方案以及系统启动方案；对整套启动过程中高中资料试卷电气设备进行调试工作并且进行过关运行高中资料试卷技术指导。对于调试过程中高中资料试卷技术问题，作为调试人员，需要在事前掌握图纸资料、设备制造厂家出具高中资料试卷试验报告与相关技术资料，并且了解现场设备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。、电气设备调试高中资料试卷技术电力保护装置调试技术，电力保护高中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资料试卷总体配置时，需要在最大限度内来确保机组高中资料试卷安全，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免错误高中资料试卷保护装置动作，并且拒绝动作，来避免不必要高中资料试卷突然停机。因此，电力高中资料试卷保护装置调试技术，要求电力保护装置做到准确灵活。对于差动保护装置高中资料试卷调试技术是指发电机一变压器组在发生内部故障时，需要进行外部电源高中资料试卷切除从而采用高中资料试卷主要保护装置。

二、硕士学位论文目录（总体框架）：

目 录

摘 要...........................................................................................I ABSTRACT........................................................................................II 目 录..........................................................................................IV

1.1海洋生物活性多肽的研究 (1)

1.1.1海洋生物活性多肽的生理功能活性 (1)

1.1.2海洋生物活性多肽展望 (2)

1.2水产胶原蛋白的研究 (2)

1.3水产胶原蛋白肽的制备工艺研究现状分析 (3)

1.4 鮟鱇鱼的开发和利用状况 (4)

1.4.1鮟鱇鱼的加工利用现状 (6)

1.4.2鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽研究现状分析 (7)

1.5本课题的研究背景意义及内容 (8)

第二章 鮟鱇鱼皮胶原蛋白的制备 (10)

2.1 试剂与仪器 (10)

2.1.1 材料 (10)

2.1.2试剂 (10)

2.1.3仪器设备 (10)

2.2实验方法 (11)

2.2.1鮟鱇鱼皮酶溶胶原蛋白(PSC) (11)

2.2.2 鮟鱇鱼皮和PSC 相似性分析 (11)

2.2.3 氨基酸组成分析 (12)

2.2.4 扫描电镜分析 (12)

2.2.5 鮟鱇鱼皮胶原蛋白溶解性分析 (12)

2.2.6 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析(SDS-PAGE) (12)

2.2.7紫外波谱分析 (13)

2.2.8 傅里叶变换红外波谱分析 (13)

2.2.9 鮟鱇鱼皮胶原蛋白溶液粘度测定 (13)

2.3 结果与讨论 (13)

2.3.1 鮟鱇鱼皮胶原的产量及相似性分析 (13)

2.3.2 氨基酸组成分析 (14)

2.3.3 PSC 微结构 (15)

2.3.4 PSC 溶解性 (15)

2.3.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 (17)

2.3.6 波谱分析 (18)

2.3.7 粘度和热变性分析 (19)

2.4 本章小结 (20)

第三章 鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽制备及理化性质 (21)

3.1 试剂与仪器 (21)

3.1.1 材料 (21)

3.1.2 试剂 (21)

3.1.3仪器设备 (21)

3.2 实验方法 (22)

3.2.1 Hyp 含量测定 (22)

3.2.2 鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽最佳酶解条件确定 (22)

3.2.3 SDS-PAGE (23)

3.2.4 发泡性能 (23)

3.2.5 乳化性能 (23)

3.3 结果与分析 (24)

3.3.1 L-Hyp 标准曲线 (24)

3.3.2确定最佳酶处理条件 (24)

3.3.3最佳提取条件的确定 (26)

3.3.4 SDS-PAGE 分析 (28)

3.3.5 发泡性能分析 (28)

3.3.6 乳化性能分析 (29)

3.4 本章结论 (30)

第四章 鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽抗氧化活性的研究 (31)

4.1 试剂与仪器 (31)

4.1.1 材料 (31)

4.1.2 试剂 (31)

4.1.3仪器设备 (31)

4.2实验方法 (32)

4.2.1鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽清除?OH 活性测定 (32)

4.2.2 鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽清除O -2?活性测定 (32)

4.2.4 鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽抗D-半乳糖诱导氧化活性的测定..................................33、管路敷设技术通过管线敷设技术，不仅可以解决吊顶层配置不规范问题，而且可保障各类管路习题到位。在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径标高等，要求技术交底。管线敷设技术中包含线槽、管架等多项方式，为解决高中语文电气课件中管壁薄、接口不严等问题，合理利用管线敷设技术。线缆敷设原则：在分线盒处，当不同电压回路交叉时，应采用金属隔板进行隔开处理；同一线槽内，强电回路须同时切断习题电源，线缆敷设完毕，要进行检查和检测处理。、电气课件中调试对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料试卷相互作用与相互关系，根据生产工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷调试方案，编写重要设备高中资料试卷试验方案以及系统启动方案；对整套启动过程中高中资料试卷电气设备进行调试工作并且进行过关运行高中资料试卷技术指导。对于调试过程中高中资料试卷技术问题，作为调试人员，需要在事前掌握图纸资料、设备制造厂家出具高中资料试卷试验报告与相关技术资料，并且了解现场设备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。

、电气设备调试高中资料试卷技术电力保护装置调试技术，电力保护高中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资料试卷总体配置时，需要在最大限度内来确保机组高中资料试卷安全，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免错误高中资料试卷保护装置动作，并且拒绝动作，来避免不必要高中资料试卷突然停机。因此，电力高中资料试卷保护装置调试技术，要求电力保护装置做到准确灵活。对于差动保护装置高中资料试卷调试技术是指发电机一变压器组在发生内部故障时，需要进行外部电源高中资料试卷切除从而采用高中资料试卷主要保护装置。

4.3 结果与分析.............................................................................334.3.1 鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体外清除?OH 和O -2?分析.........................................334.3.2不同分子量的鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽的制备.............................................344.3.3 鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体内抗氧化活性................................................354.4 结论...................................................................................37第五章 鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽协同抗菌活性研究.......................................................385.1 试剂与仪器.............................................................................385.1.1 材料............................................................................385.1.2 试剂............................................................................385.1.3 仪器设备........................................................................385.2实验方法................................................................................385.2.1 菌种培养........................................................................385.2.2复配液配置.......................................................................395.2.3 抑菌圈测定......................................................................395.2.4 受试菌对复配液的敏感试验判断....................................................395.2.5 抑菌曲线的测定..................................................................395.2.6 最小抑菌浓度(MIC)的测定.........................................................405.3 结果与分析.............................................................................405.3.1 鮟鱇胶原蛋白肽协同抗生素抑菌效果................................................405.3.2 菌种受试菌对复配液敏感试验......................................................415.3.3复配液抑菌曲线测定...............................................................425.3.4 MIC 测定结果.....................................................................435.4本章小结................................................................................44结果与讨论......................................................................................45参考文献........................................................................................46中英名称术语对照表..............................................................................53致 谢..........................................................................................54在读期间发表的学术论文及研究成果. (55)

三、硕士生在校期间发表的与学位论文相关的学术论文及获奖情况

发表论文：

《鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽抗氧化活性的研究》食品科学

获奖情况：

获得浙江海洋学院2011年新生入学二等奖学金

、管路敷设技术通过管线敷设技术，不仅可以解决吊顶层配置不规范加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径标高等，要求技术交底。管线敷设技术中包含线槽、管架等多项方式，为解决高中语文电气课件中管壁薄、接口不严等问题，合理利用管线敷设技术。线缆敷设原则：在分线盒处，当不同电压回路交叉时，应采用金属隔板进行隔开处理；同一线槽内，强电回路须同时切断习题电源，线缆敷设完毕，要进行检查和检测处理。、电气课件中调试对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料试卷相互作用与相互关系，根据生产工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷调试方案，编写重要设备高中资料试卷试验方案以及系统启动方案；对整套启动过程中高中资料试卷电气设备进行调试工作并且进行过关运行高中资料试卷技术指导。对于调试过程中高中资料试卷技术问题，作为调试人员，需要在事前掌握图纸资料、设备制造厂家出具高中资料试卷试验报告与相关技术资料，并且了解现场设备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。、电气设备调试高中资料试卷技术电力保护装置调试技术，电力保护高中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免错误高中资料试卷保护装置动作，并且拒绝动作，来避免不必要高中资料试卷突然停机。因此，电力高中资料试卷保护装置调试技术，要求电力保护装置做到准确灵活。对于差动保护装置高中资料试卷调试技术是指发电机一变压器组在发生内部故障时，需要进行外部电源高中资料试卷切除从而采用高中资料试卷主要保护装置。

四、指导教师评阅意见（请明确是否同意推荐该研究生参加预答辩）：

是否同意研究生参加学位论文预答辩 同意

不同意

指导教师签字： 年 月 日

、管路敷设技术通过管线敷设技术，不仅可以解决吊顶层配置不规范问题，而且可保障各类管路习题到位。在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径标高等，要求技术交底。管线敷设技术中包含线槽、管架等多项方式，为解决高中语文电气课件中管壁薄、接口不严等问题，合理利用管线敷设技术。线缆敷设原则：在分线盒处，当不同电压回路交叉时，应采用金属隔板进行隔开处理；同一线槽内，强电回路须同时切断习题电源，线缆敷设完毕，要进行检查和检测处理。、电气课件中调试对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料试卷相互作用与相互关系，根据生产工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷调试方案，编写重要设备高中资料试卷试验方案以及系统启动方案；对整套启动过程中高中资料试卷电气设备进行调试工作并且进行过关运行高中资料试卷技术指导。对于调试过程中高中资料试卷技术问题，作为调试人员，需要在事前掌握图纸资料、设备制造厂家出具高中资料试卷试验报告与相关技术资料，并且了解现场设备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。、电气设备调试高中资料试卷技术电力保护装置调试技术，电力保护高中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资料试卷总体配置时，需要在最大限度内来确保机组高中资料试卷安全，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免错误高中资料试卷保护装置动作，并且拒绝动作，来避免不必要高中资料试卷突然停机。因此，电力高中资料试卷保护装置调试技术，要求电力保护装置做到准确灵活。对于差动保护装置高中资料试卷调试技术是指发电机一变压器组在发生内部故障时，需要进行外部电源高中资料试卷切除从而采用高中资料试卷主要保护装置。

五、论文预答辩小组意见（对论文的创新性、学术水平、完成工作量、理论和实验研究的立论依据、研究成果、关键性结论等作出评价，提出不足及需要修改建议）： 该论文的创新性主要表现在以下几个方面：(1)立足于现存成果，胃蛋白酶初步水解制备

鮟鱇鱼皮胶原且进行了表征； (2)2709碱性蛋白酶二次酶解制备鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽，确定其最佳提取工艺；(3)研究鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体内外对自由基清除作用；(4)研究鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽与抗生素协同抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的作用。 作者在该论文中合理充分的展示了理论和实验研究的立论依据，该论文符合硕士研究生论文的质量标准，达到了硕士毕业要求。 但是，专业性描述上尚需修改，逻辑性需要加强，格式需按要求调整。

预答辩小组组长签名：年 月 日

、管路敷设技术通过管线敷设技术，不仅可以解决吊顶层配置不规范问题，而且可保障各类管路习题到位。在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径标高等，要求技术交底。管线敷设技术中包含线槽、管架等多项方式，为解决高中语文电气课件中管壁薄、接口不严等问题，合理利用管线敷设技术。线缆敷设原则：在分线盒处，当不同电压回路交叉时，应采用金属隔板进行隔开处理；同一线槽内，强电回路须同时切断习题电源，线缆敷设完毕，要进行检查和检测处理。、电气课件中调试对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料试卷相互作用与相互关系，根据生产工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷调试方案，编写重要设备高中资料试卷试验方案以及系统启动方案；对整套启动过程中高中资料试卷电气设备进行调试工作并且进行过关运行高中资料试卷技术指导。对于调试过程中高中资料试卷技术问题，作为调试人员，需要在事前掌握图纸资料、设备制造厂家出具高中资料试卷试验报告与相关技术资料，并且了解现场设备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。、电气设备调试高中资料试卷技术电力保护装置调试技术，电力保护高中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资料试卷总体配置时，需要在最大限度内来确保机组高中资料试卷安全，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免错误高中资料试卷保护装置动作，并且拒绝动作，来避免不必要高中资料试卷突然停机。因此，电力高中资料试卷保护装置调试技术，要求电力保护装置做到准确灵活。对于差动保护装置高中资料试卷调试技术是指发电机一变压器组在发生内部故障时，需要进行外部电源高中资料试卷切除从而采用高中资料试卷主要保护装置。

说明：本表由硕士研究生本人和指导教师填写，一式二份，一份留学院存档，一份报研究生处备案，导师或研究生本人留存复印件。预答辩结果通 过不通过姓 名

专业技术职务学科（专业）

所在单位签 名郑斌副高 食品工程浙江省海洋开发研究院杨会成中级食品科学浙江省海洋开发研究付万东副高渔业机械浙江省海洋开发研究院廖妙飞中级生物化工浙江省海洋开发研究院周宇芳中级海洋生物浙江省海洋开发研究预

答

辩

小

组

成

员所在学院意见：学院领导签字： （公章） 年 月 日、管路敷设技术通过管线敷设技术，不仅可以解决吊顶层配置不规范问题，而且可保障各类管路习题到位。在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径标高等，要求技术交底。管线敷设技术中包含线槽、管架等多项方式，为解决高中语文电气课件中管壁薄、接口不严等问题，合理利用管线敷设技术。线缆敷设原则：在分线盒处，当不同电压回路交叉时，应采用金属隔板进行隔开处理；同一线槽内，强电回路须同时切断习题电源，线缆敷设完毕，要进行检查和检测处理。、电气课件中调试对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料试卷相互作用与相互关系，根据生产工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷调试方案，编写重要设备高中资料试卷试验方案以及系统启动方案；对整套启动过程中高中资料试卷电气设备进行调试工作并且进行过关运行高中资料试卷技术指导。对于调试过程中高中资料试卷技术问题，作为调试人员，需要在事前掌握图纸资料、设备制造厂家出具高中资料试卷试验报告与相关技术资料，并且了解现场设备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。、电气设备调试高中资料试卷技术电力保护装置调试技术，电力保护高中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资料试卷总体配置时，需要在最大限度内来确保机组高中资料试卷安全，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免错误高中资料试卷保护装置动作，并且拒绝动作，来避免不必要高中资料试卷突然停机。因此，电力高中资料试卷保护装置调试技术，要求电力保护装置做到准确灵活。对于差动保护装置高中资料试卷调试技术是指发电机一变压器组在发生内部故障时，需要进行外部电源高中资料试卷切除从而采用高中资料试卷主要保护装置。