超氧化物歧化酶SOD活性的测定方法
超氧化物歧化酶S O D活
性的测定方法
Jenny was compiled in January 2021
超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定方法
一、试剂
1. 0.1mol/LHCl
2. 10mmol/LHCl
3. 0.1mol/LTris标准溶液:12.114g三羟甲基氨基甲烷溶于蒸馏水,并定容至1000ml.
4. 50mmol/LTris缓冲溶液:50ml0.1mol/LTris标准溶液中加入0.1mol/LHCl19.9~22.0ml,定容至100ml,PH为8.20。
5. 30mmol/L邻苯三酚盐酸溶液:3.7833g邻苯三酚溶于10mmol/LHCl中,并用
10mmol/LHCl定容至1000ml.
二、仪器
1.紫外分光光度计
2.酸度计
3.恒温水浴锅
三、操作方法
1.邻苯三酚自氧化速率测定
在试管中加入4.5ml50mmol/LTris缓冲溶液,于25℃保温20min,加入10~
20ul30mmol/L邻苯三酚,立即计时并摇匀,倾于比色杯内,于325nm下,每隔1min测吸光值一次,空白以10mmol/LHCl代替邻苯三酚,要求自氧化速率控制在0.070OD/min左右。
2.SOD活性测定
将样液加入到Tris缓冲溶液中,其余步骤同自氧化速率测定方法。
活力单位定义:将一定条件下使每毫升反应液自氧化速率抑制50%的酶量定义为一个单位(u)。
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