primer 6.0 引物设计教程

首先，需要知道基因序列，如，我们要设计rat的 CK18 mRNA 检测的引物，我们先到https://www.360docs.net/doc/1d4510023.html,/ 这个网站查找CK18 mRNA的基因序列，

首先选择Nucleotide 然后在搜索栏输入基因序列号（如果不知道基因序列号则输入 rat CK18）如图

然后点击搜索，就会出现rat CK18 mRNA的基因序列

现在，往下拉就会看到基因序列

将这个序列复制到primer 6.0中就可以进行引物设计，我们先打开peimer 6.0 基因序列号

破解版打开会出现这个对话框，关闭即可

将序列复制至这个对话框点击新建

点击 Add

点击这个图标

出现下面对话框，这里可以选择引物在序列哪些地方设计引物，我一般不更改，也就是引物可以设计在整个序列，你也可查一下序列有几个区，一般引物应该跨两个区。

之后点击 primer Parameters

这里可以设置退火温度、引物长度、产物长度等，我一般只是更改产物长度，我一般设为100到300bp，因为如果产物太大，在染料法中会影响扩增效率，

之后点击 Search 之后出现下面对话框

点击OK 出现下面引物序列