《高三生物复习资料》实验6-α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测
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包埋法
将酶蛋白包埋在凝胶交 联后的“格子”中。
1. 吸附法 (1)物理吸附法:将酶蛋白分子吸附在惰性载
体上。惰性载体指对蛋白质有高度吸附能力的 活性炭、石英砂等。
(2)离子交换法:酶蛋白带有电荷的基团与离子 交换剂形成离子键。
二、实验内容 1、用吸附法将α-淀粉酶固定在石英砂上。
三、设备及用品 塑料注射器、烧杯、滴管、自行车用气门心
和夹子、注射器架、试管或微量离心管等。
四、实验材料 1、 α-淀粉酶,石英砂, 2、可溶性淀粉溶液 3、5mmol/LKI-I2溶液
五、实验原理
一定浓度的淀粉溶液经过固定酶柱后, 可使淀粉水解成糊精。用淀粉指示剂溶液测 试,流出物呈红色,表明水解产物糊精生成。
淀粉α-淀粉酶 糊精 β-淀粉酶麦芽糖糖化淀粉酶 葡萄糖
将洗涤流出液滴加到一定量的可溶性淀粉溶液中, 用手握住试管增加温度,几分钟后滴加碘液,如果 仍显蓝色,说明通过洗涤已经除去未吸附的游离淀 粉酶,洗涤目的达成
2.冰箱保存后的固定化酶柱,重复实验,是否 有相同结果?
酶促反应的温度、pH等条件与之前不同, 或蒸馏水洗涤时流速过快导致酶数量过少等。
实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测
学前思考: 1、蛋白质初步水解,彻底水解,氧化分解的产物分别是什么?
2、淀粉在α-淀粉酶催化下初步水解的产物?写出淀粉逐步水 解的酶和相关产物。
淀粉α-淀粉酶 糊精 β-淀粉酶麦芽糖糖化淀粉酶 葡萄糖
遇碘显 蓝色
遇碘显 红色
遇碘不 显色
3、实验室导师让某同学通过淀粉和α-淀粉酶溶液,每天制备 一些纯净的糊精,会遇到什么问题?
一、基础知识
固定化酶:是将酶用物理或化学的方法 固定在某种介质上,使之成为不溶于水 而又有酶活性的制剂。
优点:固定化酶固定在一定的空间范围 内,可以重复使用,且能及时与产物分 离。
酶固定化的常用方法
吸附法
(1)物理吸附法
(2)离子交换法
共价偶联法
酶蛋白的一些基团与载体 共价结合。
交联法
酶蛋白的氨基以戊二醛 与载体相连。
10倍体积蒸馏水洗涤注射器4℃保存
七、实验结果
淀粉溶液
吸附有α-淀粉酶的石英砂
1234 1、2mL水+1~2滴KI-I2溶液 2、2mL淀粉液+1~2滴KI-I2溶液 3、2mL淀粉滤液+1~2滴KI-I2溶液 4、2mL淀粉滤液+1~2滴KI-I2溶液+稀释1倍
八、问题讨论
1.如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀 粉酶?
遇碘显 蓝色
遇碘显 红色
遇碘不 显色
六、实验步骤
5mg α-淀粉酶+4mL蒸馏水 +5g石英砂(搅拌30min)
装入下端接有气门心并 用夹子封住的注射器中
10倍体积蒸馏水洗涤注射器以除去 未吸附的淀粉酶,流速1mL/min
用滴管滴加淀粉溶液,以 0.3mL/min流速过柱Fra Baidu bibliotek为什么要控制流速?
流出5mL溶液后接收0.5mL流出液,加 1~2滴过柱KI-I2溶液,观察颜色
将酶蛋白包埋在凝胶交 联后的“格子”中。
1. 吸附法 (1)物理吸附法:将酶蛋白分子吸附在惰性载
体上。惰性载体指对蛋白质有高度吸附能力的 活性炭、石英砂等。
(2)离子交换法:酶蛋白带有电荷的基团与离子 交换剂形成离子键。
二、实验内容 1、用吸附法将α-淀粉酶固定在石英砂上。
三、设备及用品 塑料注射器、烧杯、滴管、自行车用气门心
和夹子、注射器架、试管或微量离心管等。
四、实验材料 1、 α-淀粉酶,石英砂, 2、可溶性淀粉溶液 3、5mmol/LKI-I2溶液
五、实验原理
一定浓度的淀粉溶液经过固定酶柱后, 可使淀粉水解成糊精。用淀粉指示剂溶液测 试,流出物呈红色,表明水解产物糊精生成。
淀粉α-淀粉酶 糊精 β-淀粉酶麦芽糖糖化淀粉酶 葡萄糖
将洗涤流出液滴加到一定量的可溶性淀粉溶液中, 用手握住试管增加温度,几分钟后滴加碘液,如果 仍显蓝色,说明通过洗涤已经除去未吸附的游离淀 粉酶,洗涤目的达成
2.冰箱保存后的固定化酶柱,重复实验,是否 有相同结果?
酶促反应的温度、pH等条件与之前不同, 或蒸馏水洗涤时流速过快导致酶数量过少等。
实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测
学前思考: 1、蛋白质初步水解,彻底水解,氧化分解的产物分别是什么?
2、淀粉在α-淀粉酶催化下初步水解的产物?写出淀粉逐步水 解的酶和相关产物。
淀粉α-淀粉酶 糊精 β-淀粉酶麦芽糖糖化淀粉酶 葡萄糖
遇碘显 蓝色
遇碘显 红色
遇碘不 显色
3、实验室导师让某同学通过淀粉和α-淀粉酶溶液,每天制备 一些纯净的糊精,会遇到什么问题?
一、基础知识
固定化酶:是将酶用物理或化学的方法 固定在某种介质上,使之成为不溶于水 而又有酶活性的制剂。
优点:固定化酶固定在一定的空间范围 内,可以重复使用,且能及时与产物分 离。
酶固定化的常用方法
吸附法
(1)物理吸附法
(2)离子交换法
共价偶联法
酶蛋白的一些基团与载体 共价结合。
交联法
酶蛋白的氨基以戊二醛 与载体相连。
10倍体积蒸馏水洗涤注射器4℃保存
七、实验结果
淀粉溶液
吸附有α-淀粉酶的石英砂
1234 1、2mL水+1~2滴KI-I2溶液 2、2mL淀粉液+1~2滴KI-I2溶液 3、2mL淀粉滤液+1~2滴KI-I2溶液 4、2mL淀粉滤液+1~2滴KI-I2溶液+稀释1倍
八、问题讨论
1.如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀 粉酶?
遇碘显 蓝色
遇碘显 红色
遇碘不 显色
六、实验步骤
5mg α-淀粉酶+4mL蒸馏水 +5g石英砂(搅拌30min)
装入下端接有气门心并 用夹子封住的注射器中
10倍体积蒸馏水洗涤注射器以除去 未吸附的淀粉酶,流速1mL/min
用滴管滴加淀粉溶液,以 0.3mL/min流速过柱Fra Baidu bibliotek为什么要控制流速?
流出5mL溶液后接收0.5mL流出液,加 1~2滴过柱KI-I2溶液,观察颜色