临床前药物代谢动力学研究指导原则(动物)

临床前药物代谢动力学研究指导原则

一、研究目的及内容

临床前进行药物动力学研究，日的在于了解新药在动物体内动态变化的规律及特点，给临床合理用药提供参考；其内容包括药物的吸收、分布、排泄、蛋白结合等。根据数学模型，求算重要的药物动力学参数。

二、动物选择与注意事项

必须采用成年、健康动物。常用动物为大鼠、小鼠、免、豚鼠、狗等。首选动物与性别尽量与药效学或毒理学研究所用动物一致。尽量在清醒状态下进行。动物进实验室应饲养3—5天再开始实验。给药途径要选择拟在临床上用的途径(如有特殊情况加以说明)。

三、药物在生物样品中的分离与测定

要建立一个灵敏、特异、重现性好的测定方法。

(一)灵敏度：

一般以ng(或ug)／ml(g)生物样品表示。

度，或能检测出Cmax的1／10浓度。

(二)特异性：

必须证明所测药物为原形药或其代谢产物。

(三)重现性：

用cv％表示药物加入生物样品中反复测定的变异系数，在实际所用标准曲线(至少四个浓度)范围内，日内变异系数争取达到5％以内，但不能超过10％。(四)标准曲线及回收率：

1．要指明药物的化学纯度。

2．要进行药物在血、尿、粪、胆汁及组织匀浆等中的标准曲线，每条标准曲线在应用浓度范围内，最少包含四个药物浓度；并指出其相关系数。要注意不同组织的空白干扰及回收率可能不同。

3．在所测浓度范围内，药物自生物样品的回收率不低于70％。(如有特殊情况，请加以说明。)

(五)分离及测定：

1.根据实验室条件，首选先进的HPLC、HPTLC、GC等分离方法，以及可见光、紫外光、荧光等测定方法。

2．用放射性核素标记药物，在用前要进行纯度检查，放化纯度要＞95％。定位标记要指明标记位置。尽量不用以曝射法法制备的非定位3H标记物。

3．放射免疫法和酶标免疫法具有—定持异性，灵敏度高，但原药与其代谢产物或内源性物质常有交叉反应，需提供证据，说明其特异性。

4．生物检定法常能反映药效学本质．一般特异性较差，最好用特异性好的方法予以对比、证明，否则要加以说明。

四、药物动力学参数测定

(一)血药浓度一时间曲线(药一时曲线)：

1．给药后取血时间应注意到下列三个时相的时间点分布。光做项试，摸索各自范围。

静脉注射：分布相、平衡相相消除相。血管外给药，吸收相、平衡相和消除相。在有限取血次数下，为提高参数计算的可靠性，取血样至少7—9次。其时间点分布尽可能靠近平衡相1—2次，其前相(分布相或吸收相)2—3次，消除相4—6次。实验观察期不要小于3个半衰期(如有特殊情况，请加以说明)。

2．口服给药，一般在给药前12h拿去动物饲料。研究口服给药，不宜选用免和反刍动物如羊等。

3．最好从同一动物多次采样，尽量避免用多只动物合并样本。多只动物合并样品应相应增加动物数。每个时间点应有3—5只动物数据。如用狗、猴等大动物．同一动物多次采样，亦不得少于3只动物数据。

4．剂量选择：在有效安全剂量范围内，要选择三种剂量。

(二)药一时曲线及数据处理：

1．要提出描述血一药时程的数学表达式，并确定其参数，对线性房室模型，一般提供：

静脉注射：t1/2a、t1/2b、K12、K21、K10、Vd、CL、AUC

血管外给药：Ka、t1/2a、CL、Vd、AUC、tmax、Cmax

如以上数据无法提供，应说明原因。

非线性过程常以MichaelM—Menten式表达，要提供Vm及Km值。

2．在做了静脉及口服给药后，可计算原料药的生物利用度。

3．如用电子计算机处理数据，应指出所用程序名称。

(三)实验报告材料必须包括：

1．每只动物、每个时间点的原始数据、均数及标准误或标准差。

2．比较曲线拟合计算值与观测值的符合程度。

五、药物的分布

(—)选用大鼠或小鼠做分布试验较为方便。选择一个剂量(—般以治疗剂量为宜) 给药后，至少测定药物在心、肝、脾、肺、肾、胃肠道、生殖腺、脑、体脂、骨路肌等组织的分布。特别注意药物在靶器官(包括药效学与毒理学)的分布。以药一时曲线作参考，选2—3个时间点分别代友分布相(或吸收相)、平衡相和消除相的药物分布(消除相的组织分布必须包括在内)。每个时间点的组织，必须有至少5只动物的数据。

(二)做分布实验，必须注意取样的代表性。如取1／2或1／4个肾脏应注意对称取样。

六、药物的排泄

(一)进行尿和粪的药物排泄试验，要将动物放入代谢笼内，给药后不同时间间隔收集尿或粪全部样品。记录尿体积，惧匀，取一部分样品、测定药物浓度。粪样品可先制成匀浆，记录总体积．取出一部分进行药物含量测定；也可先称重，后研磨均匀，取出一定量进行药物测定。尿、粪应每隔一定时间收集一次，以测定药物经此途径排泄的速度。直至收集到药物已排尽为止。

(二)胆汁排泄：一般用大鼠在乙醚麻醉下作胆管插管引流途径给药，并以合适的时间间隔分段收集胆汁，进行药物测定。

(三)要记录药物自粪、尿、胆汁排出的速度及总排出量。

七、药物与血浆蛋白的结合研究药物与血浆蛋白结合的方法很多，如平衡透析

法、超过滤法、分配平衡法、凝胶过滤法、光谱法等，其中以平衡透析法最简单、经济，但较费时，一般约需24h方达平衡，最好置冷室进行，以免药物或蛋白质破坏。其它方法各有优缺点，根据所研究药物的理化性质及实验室条件，均可供选择使用。

(一) 如按各种透析法进行实验，应按下式计算药物与血浆蛋白结合的百分数。

(二)注意事项：

1.药物与血浆蛋白结合程度受很多因素影响，如血浆PH、血浆浓度、药物浓度等。血浆PH应固定为7.4，至少选择三个血药浓度(包括有效浓度在内)进行实验。2．必须证明药物与半透膜本身有无结合，应做对照予以校正。如结合严重，必须改用其它方法。

3.有时从半透膜上溶解下来的成分合影响药物测定，应特别注意。要分析引起空白读数高的原因，设法除去。

4.可放血浆转化的药物，要加少量酶抑制剂，如氟化钠等，以终止其转化。

八、总结

通过全面实验观察，要对该药在动物体内的药代动力学特点做综合性论述。包括吸收、分布、消除的特点，自尿、娄、胆汁的排泄情况，有无蛋白结合，结合百分数，有无积蓄，在什么器官或组织积蓄，积蓄程度等。如首次发现的新药，应将药物的主要去向做一探讨，交待，以免积蓄中毒。