血清胆固醇含量的测定实验报告

实验二 血清胆固醇含量的测定的实验报告

实验目的：学会利用氧化酶法测定血清胆固醇含量的原理和方法。

实验原理：血清胆固醇由游离胆固醇（30%）和胆固醇酯（70%）组成。血清胆固醇经酯化酶水解后，生成游离胆固醇和脂肪酸；在胆固醇氧化酶的作用下，游离胆固醇产生的H 2O 2与4-氨基安替比林和DHBS 反应生成微红色的醌亚胺。醌亚胺在520nm 有特异吸收，反应产生的颜色与胆固醇含量成正比。 胆固醇酯+ H 2O ???→?胆固醇酯酶

胆固醇+脂肪酸

胆固醇+O 2??

??→?胆固醇氧化酶

△4胆甾烯酮+ H 2O 2 H 2O 2+4-氨基安替比林+DHBS ???→?过氧化物酶

醌亚胺+ H 2O 实验步骤：

1、取2支试管分别加入的血清和标准胆固醇溶液，并分别标注为“H ”和“SH ”试管。往每支试管加入的沉淀剂，在室温下静置15min ，用2000rad/min 的离心机分离10min 。

2、准备5支试管分别标注为“T ”（总胆固醇）、“H ”（高密度脂蛋白胆固醇）、“ST ”（标准总胆固醇）、“SH ”（标准高密度脂蛋白胆固醇）、“B ”（空白实验）。按照下表准备各支试管：（标准胆固醇浓度为50mg/dL ）

3、准备好以上试管后，充分混合并在37。

的温度下放置20min ，用波长520nm 的分光光度计测量各支试管的吸光度值。 实验结果： 计算公式：总胆固醇=ST T 吸光度值吸光度值×02

.01

.0×50

高密度脂蛋白胆固醇=SH

H

吸光度值吸光度值×50

代入数据得：总胆固醇=252

.0167

.0×02.01.0×50=（mg/dL ）

高密度脂蛋白胆固醇=430

.0605

.0×50=（mg/dL ）