SRT实验报告

白芨多糖微球的制备与质量控制

一、实验目的

本实验通过乳化交联法制备白芨微球，并设计单因素实验，分析水油比、白芨多糖浓度、交联剂浓度对白芨微球粒径的影响。同时测定制备的白芨微球大小、形态、悬浮性等性状，了解白芨血管栓塞剂的质量要求。

二、实验原理

白芨多糖是从白芨药材中经一定工艺提取所得的多糖,由葡萄糖和甘露糖(1∶4)以β糖苷键聚合而成一种甘葡聚糖,平均分子量在65000～150000 kDa,具有抗炎、促凝血、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化等生物学活性,作为天然高分子材料,有功能缓释性、局部滞留性、自身降解性、无刺激性、无毒副作用、资源丰富、廉价易得等辅料的特性。

乳化化学交联法是利用带有氨基的高分子材料易和其他化合物相应的活性基团发生反应的特点，交联制备得微球。制备过程中往往先用乳化法把药物分散成w/o或o/w型乳浊液，再加入交联剂，由于交联剂中的醛基可以和该分子材料的氨基（或者羟基）发生胺醛缩合（或醇醛缩合）作用使微球固化。

三、实验材料

白芨多糖、无水乙二胺(500ml)、环氧氯丙烷(500ml)、液体石蜡（1000ml)、司盘85（100ml）、吐温80(100ml)、异丙醇(500ml)、丙酮(500ml)、石油醚(500ml)、浓硫酸、5%葡萄糖注射液、欧乃派克（碘海醇）、生理盐水、氯仿（500ml）、正丁醇（100ml）、蒸馏水

四、实验仪器

精密增力电动搅拌器、恒温水浴锅、真空干燥箱、冷冻干燥机、电子天平、超声波清洗器、分样筛、紫外分光光度计、温度计、西林瓶、烧杯等常用玻璃仪器。

五、实验步骤

1、白芨多糖的提取

1)浸泡:取多糖适量,用蒸馏水浸泡12小时

2)提取:采用超声波提取仪，在温度为35℃，提取40分钟

3)过滤:过滤提取液,除去多糖残渣

4)蒸发浓缩:将上步所得滤液用旋转蒸发仪蒸发浓缩

5)离心（除去蛋白质等杂质）:取粗多糖溶液，氯仿—正丁醇（预先配置成体

积比为4：1的混合液）溶液，按4：1的比例置于具塞试管中，充分振摇30min 后，经离心机1000转离心1min，然后将水相与氯仿相分开。将水相再加入到相当于其体积1/4的氯仿—正丁醇溶液，重复上述过程，共计重复两次。

再将样品溶液与氯仿—正丁醇溶液体积比改为3：1、2：1、1：1，重复前面操作。

6)冷冻干燥：将上述所得的多糖液置于冷冻干燥机中冷冻干燥为多糖的粉末。

2、白芨微球的制作

1)处方：白芨多糖溶液(5ml，水相) 液体石蜡（25ml，油相）

司盘85（0.2ml）吐温80（0.1ml）[混合作为乳化剂]

无水乙二胺（1ml）、环氧氯丙烷（1ml）[交联剂]

石油醚（适量）、异丙醇（适量）、丙酮（适量）

2）实验操作：采用乳化-冷凝-交联法

①司盘85 2ml、吐温80 1ml，加入蒸馏水配成30ml乳化剂，取3ml与25ml液相石蜡混合。置于250ml三颈烧瓶中，电动搅拌30min；

②取冷冻干燥后的白芨多糖1.0g，配成溶液5ml，边搅拌边加入油相中；搅拌30min后，0℃下冷凝；

③搅拌下加入处方量的乙二胺1ml、环氧氯丙烷1ml；搅拌1h 后加入石油醚适量，静置分层后用分液漏斗除去油相，重复三次；然后用适量的异丙醇、丙酮多次洗涤；

④将得到的产物置于表面皿中，放入真空干燥箱，60℃干燥2h；将干燥后的微球用标准筛筛分，分装，备用。

3、单因素实验

分别考察水、油（V/V）相比率1：5、1：8、1：10；白芨多糖浓度0.12g/ml、0.16g/ml、0.20g/ml；搅拌速度500r/min、1000r/min、1500r/min;交联剂浓度（V/V）3%、5%、7%等因素对白芨微球粒径的影响。

4、微球的表征测试

1）微球大小、形态及表面状态：在高倍镜下观察微球的状态

2）分散性、悬浮性及沉降时间测定：取系列粒径的白芨微球，在加有欧乃派克（碘海醇）的烧杯中配制成不同浓度（20%、30%、50%），振荡2min，静置，观察微球分散性、悬浮性及沉降时间。沉降时间以微球加入溶液，振荡、静置后到完全沉降到杯底部为止。

3）融解时间测试：取200-300um 及500-700um 大小白芨微球各10mg，加入有生理盐水的小烧杯中，观察全部微球彻底融解的时间。

六、实验结果及分析

水油比（A）白芨多糖浓度（B）转速（C）交联剂浓度（D）

1：5 220 0.12g/ml 粒径极小500r/分 970 3% 60

1：8 610 0.16g/ml 390 1000r/分 380 5% 610

1：10 950 0.20g/ml 940 1500r/分 210 7% 610

1. 在光学显微镜下见微球形态圆整、结实，流动性好

分散性、悬浮性及沉降时间：白芨微球悬浮于生理盐水中，水分子逐渐深入微球开始溶胀，经过4周后微球开始破碎，6周后微球基本上完全碎成絮状；白芨微球在生理盐水和造影剂中分散性较好。在造影剂中，沉降时间约150-300秒；在生理盐水溶液中，微球的沉降时间较造影剂中稍短，约为100-150秒。

3.融解时间测试：

由图1得知，固定其他因素不变，白芨微球的平均粒径随水-油比率的变化成正比。高水-油比的白芨多糖水溶液有利于大粒径白芨微球的合成，随着水-油比率的逐渐降低，微球的粒径也随之缩小。有图2得知，低浓度的白芨多糖溶液有力于小粒径微球的合成，白芨多糖浓度越高，微球的粒径越大。有图3得知，固定其他因素不变，白芨微球的平均粒径随搅拌速度的变化成反比，高搅拌条件下微球的平均粒径变小，随着搅拌速度逐渐变慢，微球的粒径逐渐增大。有图4得知，固定其他因素不变，白芨微球的平均粒径随交联剂用量的增加先减小后增大，随着交联剂用量的继续增大，微球的平均粒径变化幅度并不明显