运动生物化学实验

实验一实验基本技能操作

一.实验目的

1. 了解实验室的一般规则;

2. 学习实验中常用玻璃器皿的洗涤、干燥方法;

3. 了解运动生化常用仪器名称、用途、操作方法

及注意事项;

4. 掌握移液管的使用及注意事项。

二、基本技能

(一)玻璃器皿的洗涤、干燥(略)

(二)移液管的使用

(三)采指血技术

(四)S22PC分光光度计的使用

(五)离心机的使用

(二)移液管的使用

1.首先选择与所取量相近的移液管(注:常用移液管规格为0.5ml、1ml、2ml、5ml、10ml);

2.左手持移液管,右手持洗耳球,移液管下端置于液面以下适中部位;

3.眼睛平视移液管液面,吸取所需液体,以持移液管手的食指指腹快速封住移液管的上口,并将液量调整到所需刻度;

4.将移液管移至目的容器中,放开食指,放出所移取的溶液。

(三)采指血技术

1.用75%酒精棉球消毒无名指末端指腹,然后用干棉球擦干手指。

2.用一次性采血针,垂直刺破已消毒的指端(深约2~3mm,动作要快、准、狠);

3.挤出第一滴血,并用干棉球擦去,然后,用一次性吸血管吸取第二滴血至20μl刻

度线以上一点,用干棉球擦去吸血管外壁多余血液,调整血液至20μl刻度线。

4.取血后用干棉球压针孔,直到出血停止

(四)S22PC分光光度计的使用

1.检查电源插头,打开电源开关,预热20分钟;

2.调节波长旋钮,使波长移到所需之处;

3.将比色杯放入样品池的比色杯架中,盖上样品池盖;

4.按模式键,使仪器处于透射比调整状态.将参比试样或空白管推入光路,进行

调零和调满度:

5.测试样品光密度值:按模式键,使仪器处于吸光度检测状态,将待测试样推

入光路,显示所测样品的OD值.

(五)离心机的使用

1.插上电源插头前确认离心机的开关处于关闭状态,检查转速调节旋钮是否归零;

2.打开离心机盖,按对称平衡的原则放置样品离心管;

3.打开电源开关,先定时, 再慢慢调节转速。

4.离心完毕,先将转速归零, 开盖取出样品管,再将开关关闭,最后切断电源.

实验二尿蛋白的定量测定

(双缩脲法)

实验目的

1加深对尿蛋白的认识及其测试的意义

2掌握双缩脲法测定尿蛋白的原理和操作方法

3学习使用离心机,掌握分光光度计的使用

正常成年人尿中蛋白质含量很少,其浓度在10m g%以下,日排出总量不超过150m g。

运动员安静状态下尿蛋白质含量与一般人没有差异。

采样时间:运动后15分钟,因为这时尿蛋白达最高值,20分钟尿蛋白开始下降,4小时内基本恢复,时间延长说明机能下降。

?两个差异:个体差异和项目差异

?年龄:

?环境:

?训练与比赛:

实验原理:蛋白质是含氮的有机高分子化合物,分子中含有多个与双缩脲分子相似的结构(肽键),在碱性硫酸铜溶液中,蛋白质与铜离子等络合生成紫色的络合物,其颜色深浅与蛋白质浓度成正比,故用比色法测定其含量。

测定管(离心管)

5m l尿液

0.15N硫酸2.5m l

1.5%钨酸钠

2.5m l

混匀后离心5分钟(3000转/分)

倾去上清液,加生理盐水1m l,搅拌

加双缩脲试剂4m l

混合后放置20-30分钟

540n m比色,空白调零读取测定管吸光度值(O D测)

实验结果:

计算公式:

尿蛋白(m g%)=O D测/O D标χ50

其中测得O D标为0.131

结果与分析:

1、尿蛋白与运动量及负荷强度的关系。

2、在正常生理条件下,尿蛋白含量为10m g%以下,

大运动量训练后尿蛋白含量会高于10m g%。

3、结果大于零而小于10m g%,说明生理条件正常,或运动量合适。

4、测定结果大于10m g%,分析近期运动强度和负荷量的情况

5、结果为零可能有如下因素:离心之后不小心将蛋白质沉淀倒掉;操作过程中没有及时摇匀,蛋白质沉淀没有溶解;加入生理盐水等过多,将蛋白质稀释;加钨酸钠溶液后静置时间不够,蛋白质没有充分沉淀下来;加双缩脲试剂后放置时间太短,反应没有完全进行。

6、结果过高,或出现混浊,可能是尿液中磷酸盐、草酸盐等过多,在尿液呈酸性或碱性时结晶析出。

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