斐林试剂配制,标定以及还原糖测定

斐林试剂配制，标定以及还原糖测定糊精溶液中还原糖含量测定(DE值测定)

A斐林试剂(碱性酒石酸铜溶液)的制备

1)斐林试剂甲液

称取69.28g的硫酸铜(CSO.5HO)溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过U42

滤

2)斐林实际乙液

分别称取酒石酸钾钠346g和氢氧化钠100g，溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过滤

B斐林试剂标定

精确称取已在105?下干燥至恒重的分析纯葡萄糖0.8g，用蒸馏水稀释，移入250ml容量瓶并稀释至刻度，摇匀。用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中(预备数份)，于电炉上煮沸，用上述葡萄糖溶液(置于25ml滴定管中)滴定至蓝色消失时，加入1%的亚甲基蓝指示剂两滴，继续用糖液滴定至蓝色刚好消失。此操作在1min内完成。再重复操作第二次标定过程，取两次葡萄糖溶液消耗体积的平均值(允许误差不大于0.1ml)，按下式计算斐林试剂常数(10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量)。

R=WG/V

式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g;

W——葡萄糖溶液消耗的体积，ml

G——葡萄糖的质量，g

V——葡萄糖定容体积，250ml

C测定步骤

称取糊精溶液(液化)15g，移入250ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中。其余步骤同斐林试剂标定法，即以样品稀释液代替葡萄糖溶液滴定斐林试剂。

计算

还原糖含量按下式计算

还原糖(%)=100RV/WG

式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g;

W——葡萄糖溶液消耗的体积，ml;

G——样品质量，g;

V——葡萄糖定容体积，250ml。