植物细胞工程实验报告
植物细胞工程实验报告—（附）开题报告和自选试验报告
李洋
级班
学号：20
2011年12月
实验一、培养基母液的配制
摘要：培养基母液的配置是植物组织培养技术中最基础的操作技术之一，培养基的配方是决定培养物能否正常生长或是否能达到培养目的的首要前提。通过本实验掌握培养基母液的配制，为以后植物组织培养技术的学习打下基础。
关键词：植物组织培养培养基母液
1。原理及目的
1.1 实验目的：通过本实验掌握培养基配置的基本原则，以及母液配置的方法。
1.2实验原理
MS培养基为植物组织培养中的基础培养基，许多的培养基都是在它的基础上发展建立的。培养基是植物细胞、组织和器官吸取营养的场所。在植物细胞的分裂和分化过程中，需要各种营养物质，这些营养物质包括无机营养成分、有机营养成分、植物生长调节物质等。在对植物的器官、组织和细胞进行离体培养时，只是切取植物体的一小部分，它们无法象整体植株那样合成生长发育所需的全部物质。
2.实验试剂与仪器设备
2.1 药品试剂：
MS培养母液所需的药品、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA等。
2.2仪器设备：
电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。
3.实验内容
无机物·大量元素硝酸铵NH4NO3 1650
硝酸钾KNO3 1900 钙盐二水氯化钙CaCl2·2H2O 440
七水氯化镁MgCl2·7H2O 370
磷酸二氢钾KH2PO4 170 无机物·微量元素碘化钾KI 0.83
硼酸H3BO3 6.20
四水硫酸锰MnSO4·4H2O 22.30
七水硫酸锌ZnSO4·7H2O 8.60
二水钼酸钠Na2MoO4·2H2O 0.25
五水硫酸铜CuSO4·5H2O 0.025
六水氯化钴CoCl2·6H2O 0.025 无机物·铁盐七水硫酸亚铁FeSO4·7H2O 27.80
EDTA钠盐Na2·EDTA·2H2O 37.3 有机物肌醇100.00
烟酸0.50
盐酸吡哆醇VB6 0.50
盐酸硫胺素VB1 0.10
甘氨酸 2.00
蔗糖30g
pH5.80
配置过程如下：
分别称取20倍用量的各种大量无机盐，依次溶解于大约500mL去离子水中。（一种成分完全溶解后再加入下一种，最后加水，定容至1000mL后装入试剂瓶中，存放冰箱内备用。）
2. 微量元素母液（200倍液）
分别称取200倍用量的微量无机盐，依次溶解于约500mL去离子水中，加水定容到1000mL。
3. 铁盐母液（100倍液）
称取100倍用量的Na2-EDTA（乙二胺四乙酸钠）和FeSO4·7H2O，溶于约500mL去离子水中，最后定溶到1000mL。
4. 钙盐母液(20倍):
称取20倍用量的CaCl2·2H2O溶于500mL去离子水中，最后定溶到1000mL。
5. 有机物质母液（100倍液）
分别称取100倍用量的各种有机物质，依次溶解于约500mL去离子水中，定容至1000mL装入棕色试剂瓶中，存放在冰箱中备用。
4.实验结果及分析
4.1结果
按照步骤配好母液：大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液，放在冰箱中保存。
4.2实验中注意事项：
1、配置一些难容的物质时，为了保证母液浓度的准确性，一定要等药品充分溶解后在定容。
2、称量微量元素时要用分析天平，称量时一定要精确。
3、母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。
实验二、香蕉吸芽的组织培养
摘要：香蕉传统的繁殖方法多采用吸芽分株繁殖法，这种方法的繁殖系数低，速度慢，而且容易传播疾病。利用组织培养的技术来对香蕉优质品种进行无性繁殖，这样不但可以保持香蕉的优良性状，加快繁殖速度，而且，试管苗不带病虫害和病毒病，此外，利用组织培养技术得到的幼苗生长比较一致，有利于田间的管理和采收。本实验利用香蕉的吸芽作为外植体，诱导培养基为MS＋BA 5.0 mg／L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶，继代培养基为MS＋BA 5.0 mg／L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶
关键词：组织培养蕉吸芽灭菌外植体
1、实验目的
香蕉为热带地区广泛栽培食用，味香、富于营养，并且有多种用途，终年可收获，在温带地区也很受重视。香蕉其实在自然条件下以种子繁殖。传统的繁殖方法多是采用吸芽分株法，这种方法的繁殖系数低，速度慢，难以满足当前大规模的栽培生产，且容易传播疾病。利用组织培养的技术来对香蕉优质品种进行无性繁殖，这样不但可以保持香蕉的优良性状，加快繁殖速度
2、实验材料和步骤:
2.1材料
(1)香蕉吸芽：从农学院基地挖取品种优良无病虫害的香蕉吸芽
(2)实验采用MS基本培养
(3)诱导培养基： MS＋BA5.0mg／L L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶
(4)继代培养基： MS＋BA5.0mg／L L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶
(5)PH： 5.8-6.0
2.2步骤
2.2.1外植体消毒
用自来水冲洗吸芽表面的泥土，剥离外假茎，只留下茎和假茎各2-3cm长，假茎的的直径有2-3cm，
然后，用洗衣粉清洗一遍，用自来水冲洗，转入0.1%升汞浸泡15-20min，其间不断搅拌，弃去升汞用无菌水洗3遍（无菌水漂洗：将从升汞中取出的香蕉吸芽组织块转入无菌水中漂洗，不断摇动使漂洗干净）留在瓶中备用。
2.2.2诱导培养
将香蕉吸芽放到无菌工作台的无菌纸上，用消毒刀将外植体的假茎的最外层剥掉，以及有消毒刀将已经变色的茎外面一小层也切掉，然后从外植体茎中间一分为四，接入诱导培养基，共8瓶。7天后观察，发现诱导培养基中香蕉吸芽组织裂开并且有转绿现象。
2.2.3继代培养
将已经启动培养的香蕉材料从培养室内取出，在超净工作台上将生长良好的香蕉芽丛分开，切去顶部叶片部分，削去底部褐化部分，将芽丛接种于香蕉继代增殖培养基中。继代增殖培养中每瓶培养基的接种香蕉芽丛数2代内可为1-2块，3-4代可为3-4块。
2.2.4培养：
在组培实验室的条件下培养,每个星期观察一次。
3、实验结果与分析：
3.1 对香蕉的吸芽进行诱导培养时，共接种了4瓶，污染率为1瓶，后来有一瓶在培养过程中死去了。说明用0.1%的升汞对香蕉的吸芽消毒18min的时间控制比较合理，造成污染的原因可能是因为操作不熟或者接种过程中导致然菌。
3.2继代培养时获得了2瓶继代培养物，但是都发生褐化现象，并没有发育成苗。可能的原因是由于继代培养时，并没有完全切除掉原来的褐化组织导致继代培养继续发生褐化。
3.3由实验结果与分析可知，诱导培养基对外植体诱导效果不错，说明诱导培养基比较合理，由于褐化并未得到分化的小苗，不能验证分化培养基是否合理。
3.4实验中注意事项：
1、香蕉吸芽组织不能太大也不能太小，大小适宜才能在以后的操作中方便使用。；
2、在升汞中灭菌时要注意不断摇晃，是灭菌充分彻底。
3、发现污染的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的；
4、按时观察，认真描述并做好记录香蕉的生长状况。
实验三、烟草叶片组织培养
摘要：烟草具有多种实际应用价值，在药用、工业和保健业都有重要用途。烟草一般采用有性繁殖，但繁殖的烟苗不均衡，易发生变异，而且易感病菌，造成多种病害发生，品质退化，从而影响经济收人，所以烟草组织培养具有重要的意义。本实验利用烟草的叶片作为外植体，培养基为MS＋BA 1.0 mg／
L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶，进行对烟草进行组织培养，以获得烟草的组培苗。
关键词：植物组织培养烟草叶片诱导外植体
1、实验目的
烟草具有多种实际应用价值，在药用、工业和保健业都有重要用途。烟草更是重要的经济作物。并且烟草生长速度快，生长周期短，也是基因工程中最为广泛使用的模式植物之一。烟草一般采用有性繁殖，但是后代生长势不均衡，并且易发生变异，而且易感病菌，造成多种病害发生，品质退化，从而影响经济收入，所以烟草组织培养具有重要的意义。
2.1材料
1、烟草叶片
2、诱导培养基： MS＋BA 1.0 mg／L L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶
3、继代培养基： MS＋BA 1.0 mg／L＋NAA 0.5 mg／L L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶
2.2方法
2.2.1外植体消毒方法
将烟草叶片洗净，将烟草叶片左右垫与牛皮纸上用手术刀切取2cm长，2cm宽的无主叶脉、主侧叶脉的长方形叶片块（10片左右），置于加了1-2滴土温的0.1%的升汞溶液中消毒10-15min，期间注意不断摇动，取出叶片置于无菌水中清洗3次，留于最后清洗的无菌水中备用。
2.2.2诱导培养
将烟草叶片取出将叶片周遍切去，再将每片叶切成2片，接入诱导培养基中，每7天观察记录一次。
2.2.3继代培养
待烟草的愈伤组织分化成为烟草的叶片与茎时，从诱导培养基中取出烟草幼苗分成小丛后转接继代培养基中，每7天观察记录一次。（如果需要分化获得更多的烟草幼苗可以再次接入诱导培养基中培养）。
2.2.4培养条件：
培养温度为28（-1、+1）℃，光照强度2000—3000LX，光照时间为12h/d，,每个星期观察一次。
3.实验试剂与仪器设备
3.1 药品试剂：
MS培养母液所需的药品、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA等。
3.2仪器设备：
电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。
4、实验结果与分析：
4.1第一次烟草组织培养时，全部被污染，污染率100%，诱导率为0。原因可能有两个，（1）用升汞消毒的时间过短，为了和同学们作对照，我的消毒时间是最短的12min，因此应适当延长消毒时间。（2）由于做实验前后几天，天气一直阴天下雨，可能对实验造成影响，增加了然菌的的机会。
第一次烟草诱导培养结果统计表
4.2由于第一次诱导培养的材料均被污染，而后来做继代培养时已经没有实验材料，并且已经来不及从新在做，所以继代培养没能正常进行。
4.3由实验结果与分析可知，烟草叶片的组织培养污染率比较高，说明用实验中的消毒方法可能存在一些弊端，此外，在操作时应该格外注意，以防止感染杂菌。
4.4实验中注意的问题：
1、烟草叶片要平放在培养基表面，并且要让切口与培养基充分接触，有利其吸收养分；
2、在升汞里消毒时间不宜太长，也不宜太短，要控制好消毒时间；
3、在组织培养观察的过程中，发现有污染的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的。
实验四、木薯的组织培养
摘要：木薯是用其茎干来进行无性繁殖的，但是往往新品种刚刚出现时，其茎干是非常有限的，因此利用组织培养的方法不仅可以保持母树的性状，而且繁殖速度快，有利于品种的推广。本实验利用木薯的茎段作为外植体，诱导培养基为MS + 0.5 mg/L CaSO4+ 4.0 mg/L2,4-D L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶,完成对木薯茎秆的组织培养。
关键词：木薯茎段诱导组织培养外植体
1、实验目的与意义
木薯是重要的热带经济作物其块根富含淀粉，是节粮型的淀粉资源，在饲料、食品、化工、医药、纺织、造纸等方面。木薯是用其茎干来进行无性繁殖的，但是往往新品种刚刚出现时，其反制材料是非常有限的，利用对木薯茎段的组织培养不仅可以保持母树的性状，而且还能大大提高繁殖速度。
2、实验材料与步骤：
2.1实验材料：
1、木薯幼枝
2、诱导培养基：MS + 0.5 mg/L CaSO4+ 4.0 mg/L2,4-D L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶
2.2步骤
2.2.1外植体的消毒方法：
从苗圃剪取幼嫩木薯枝条，剪去叶子，然后以一个芽节为一段（芽节上下端保持1.5cm左右）切下，在置于0.1%升汞溶液中消毒10-15min左右，其间注意不断摇动，取出木薯枝条置于无菌水中清洗3次。
2.2.2诱导培养
将消毒好的木薯枝条取出，置于无菌的牛皮纸上，切去上下端各一小部分后，接入诱导培养基中培养，7天后观察。
2.2.3培养条件：
在组培实验室的条件下培养,每个星期观察一次。
3.实验试剂与仪器设备
3.1 药品试剂：
MS培养母液、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA等。
3.2仪器设备：
电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。
4、实验结果与分析
4.1结果分析：一共接种4瓶木薯，每瓶中接种2个木薯茎段。培养一周后观察，发现有两瓶污染，污染率达到50%。
可能的原因如下：1、在升汞中消毒的时间不够，应再适当延长消毒时间；2、取材的时间不合理，由于气候问题，增加了然菌的机会。3、可能由于实验过程中有些操作不规范导致，比如在接种时说话。
4.2实验中注意的问题
1、实验过程中要严格注意操作步骤，注意全程无菌操作。
2、在对木薯茎段灭菌过程中，一定要控制好灭菌时间，在灭菌过程中要不断摇晃，是升汞溶液充分和茎段接触，是灭菌彻底。
3、组织培养的过程中，发现有污染的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的。
4、接种后在定期观察，认真做好实验记录。
实验五、桉树的组织培养
摘要：桉树有性繁殖很容易引起变异，很难保持物种的优良性状，无性繁殖如扦插等繁殖得很慢，无法满足生产的需要。而桉树组培快繁可使桉树保持其遗传稳定性，其繁殖系数大，一年内一个桉树带节茎段，可以繁育百万株以上的苗木。本实验利用桉树的茎段作为外植体，诱导培养基为MS＋NAA 0.5 mg ／L＋6-BA 1.0 mg／L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶
关键词：桉树茎段诱导培养外植体
1、实验目的与意义
桉树是当今世界三大速生树种之一,已成为我国大面积造林和“四旁”植树的主要树种。它的显桉树的木材是造纸、坑木、造船等良材，叶子可提油料，树皮可提树脂，残渣培养食用菌后还可当肥料，花是良好蜜源。桉树是异花授粉作物，有性繁殖很容易引起变异，很难保持物种的优良性状，无性繁殖如扦插等繁殖得很慢，无法满足生产的需要。而桉树组培快繁可使桉树保持其遗传稳定性，其繁殖系数大，一年内一个桉树带节茎段，可以繁育百万株以上的苗木。
2、实验材料与步骤：
2.1实验材料：
1、桉树幼枝
2、芽的诱导培养基：MS＋NAA 0.5 mg／L＋6-BA 1.0 mg／L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶
2.2步骤
2.2.1外植体的消毒方法：
采取幼嫩桉树枝条（选取腋芽还没有抽出芽枝的），剪去叶子，置于清水下洗净，在洗衣粉水中浸泡20min左右，清洗干净后用流水（自来水）冲洗到下午做实验时。取出以一个芽节为一段（芽节上端保持1-1.5cm，下端2cm左右）切下，在置于0.1%升汞溶液中消毒10-15min，其间注意不断摇动，取出桉树枝条置于无菌水中清洗3次。
2.2.2芽的诱导培养
将消毒好的桉树枝条取出，置于无菌的牛皮纸上，切去上下端各一小部分后，接入芽的诱导培养基中培养。
2.2.3培养条件：
在组培实验室的条件下培养,每个星期观察一次。
3.实验试剂与仪器设备
3.1 药品试剂：
MS培养母液所需的药品、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA等。
3.2仪器设备：
电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。
4、实验结果与分析
4.1结果分析：总共接种5瓶桉树，每瓶中接种2个桉树茎段。培养一周后观察，有两瓶被污染，污染率为40%。可能的原因如下：可能的原因如下：1、在升汞中消毒的时间不够，应再适当延长消毒时间；
2、取材的时间不合理，由于气候问题，增加了然菌的机会。
3、可能由于实验过程中有些操作不规范导致，比如在接种时说话。
4.2实验中注意的问题：
1、外植体一定要选取幼嫩的桉树枝条，老的组织不易培养。
2、在植入外植体时要注意几条的形态学上下端，要注意使形态学下端插入到培养基中。
3、组织培养的过程中，发现有污染的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的。
4、接种后在定期观察，认真做好实验记录
实验六、柱花草的组织培养
摘要：柱花草主要用于放牧、水土保持、果园间作、青饲料及干草粉加工，成为热带亚热带地区的希望之草，有着广泛的用途。本实验利用柱花草的叶片作为外植体，诱导培养基为MS+BA
4.0mg/L+NAA1.0mg/ml+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶
关键词：柱花草叶片诱导组织培养外植体
柱花草又名热带苜蓿、巴西苜蓿，原产于美洲的热带。分布于世界热带、亚热带。柱花草生长快而繁茂，再生性较强，年可刈割2—3次，产草量高，每公顷产鲜草30～60t，而且营养价值较高，栽培也比较容易，可刈割青饲、青贮、调制干草或放牧利用。因而在我国南方热带和亚热带地区作为饲草有种植推广价值。
1、实验目的
组织培养是生物技术育种的基础，具有无性繁殖快，时代间隔短，不受季节影响，可严格控制培养条件等特点，是当今应用现代生物学技术改良作物的主要措施之一。本实验即采用住花草叶片为外植体对住花草进行组织培养，为柱花草的育种改良提供原材料。
2、实验材料和步骤:
2.1材料
1、柱花草叶片
2、诱导培养基为MS+BA 4.0mg/L+NAA1.0mg/ml+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶
2.2步骤
2.2.1外植体消毒方法
将柱花草叶片洗净，然后将叶片放在牛皮纸上，用手术刀切取2cm长的片块（10片左右），置于0.1%的升汞溶液中消毒10min，期间注意不断摇动，取出叶片置于无菌水中清洗3次，留于最后清洗的无菌水中备用。
2.2.2诱导培养
将柱花草叶片取出放入超净工作台中无菌的牛皮纸上，然后将叶片两端切去少许，接入诱导培养基中，每7天观察记录一次。
2.2.3培养条件：
在组培实验室的条件下培养,每个星期观察一次。
3.实验试剂与仪器设备
3.1 药品试剂：
MS培养母液所需的药品、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA等。
3.2仪器设备：
电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。
4、实验结果与分析：
4.1第一次对柱花草进行诱导培养时，接种三瓶，结果全部污染。原因可能是，用升汞消毒的时间过短，因此应适当延长消毒时间，或者用其他的消毒方法。
由实验结果与分析可知，柱花草叶片的组织培养污染率比较高，说明取材方法和消毒措施不佳，可
4.3实验中注意的问题：
1、要选取幼嫩的柱花草叶片为实验材料，切取外植体时也一定要切叶尖等幼嫩部位
2、消毒时一定要注意不时摇晃升汞溶液，使升汞溶液与外植体充分接触。
3、发现污染的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的；
4、定期观察，观察时要仔细，认真描述柱花草生长状况。
实验七、玉米成熟胚的培养
摘要：玉米组织培养及再生，目的是让外植体能够高频率地诱导出愈伤组织，建立高效的体细胞再生体系，为玉米遗传转化操作和细胞工程研究创造有利条件。本实验采用MS培养基对玉米的成熟胚进行诱导培养。
关键词：玉米胚诱导培养基培养
1、实验目的
玉米是一种非常重要的粮食和饲料作物,近些年,地球资源的短缺向玉米等生物能源的供应者提出
了迫切的要求, 组织培养工作是玉米遗传转化的重要环节，玉米的组织培养能让玉米组织能够高效的诱导出愈伤组织建立高效的体细胞再生体系，为玉米遗传转化操作和细胞工程研究创造有利条件。
2、实验材料与步骤：
2.1实验材料：
1、新鲜玉米种子
2、培养基： MS培养基+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶
2.2步骤
2.2.1种子的消毒方法：
从新鲜的玉米棒上剥下玉米粒（20粒左右），直接在转入0.1%升汞溶液中消毒10-20min左右，期间注意不断摇动，取出置于无菌水中清洗3次留于瓶中备用。
2.2.2诱导培养
将消毒好的玉米粒取出，置于无菌的牛皮纸上，切开玉米粒将其胚挑出接入1／2 MS培养基中培养。
2.2.3培养条件
在组培实验室的条件下培养,每个星期观察一次。
3.实验试剂与仪器设备
3.1 药品试剂：
MS培养母液所需的药品、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA等。
3.2仪器设备：
电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。
4、实验结果与分析
4.1结果分析：用MS培养基对玉米的不成熟培养一周后观察，培养基中不成熟玉米胚已发育成玉米苗，根、茎、叶齐全且长势良好高度达到了5cm左右，诱导率达到100%，污染率为0；两周后观察，高度已经高达12cm左右。说明玉米的不成熟胚易于脱毒，而且容易诱导。
4.2实验中注意的问题：
1、一定要挑取健康的无病的；
2、倒培养基时要边用玻璃棒搅拌，边倒培养基，防止培养基的浓度不均匀；
3、现污染的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的；
4、按时观察，并且做好记录玉米的生长的状况。
实验八、花生成熟胚的培养
摘要：花生的组织培养及再生是选育新品种的重要手段，通过对花生成熟胚的培养，可以建立高效的体细胞再生体系，为花生的遗传转化操作和细胞工程研究创造有利条件。本实验采用MS培养基对花生的成熟胚进行诱导培养。
关键词：花生胚诱导培养基培养
1、实验目的
花生在经济生活中占有十分重要的地位。花生的组织培养及再生是选育新品种的重要手段，通过对花生成熟胚的培养，可以建立高效的体细胞再生体系，为花生的遗传转化操作和细胞工程研究创造有利条件。
2、实验材料与步骤：
2.1实验材料：
1）、花生成熟种子
2）、培养基： MS培养基+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶
2.2步骤
2.2.1种子的消毒方法：
取成熟花生剥取花生粒（15粒左右），直接置于0.1%升汞溶液中消毒10-20min左右，期间注意不断摇动，取出置于无菌水中清洗3次留于瓶中备用。
2.2.2诱导培养
将消毒好的花生粒取出，置于无菌的牛皮纸上，将其子叶掰开将其胚挑出接入1／2 MS培养基中培养。
2.2.3培养条件
在组培实验室的条件下培养,每个星期观察一次。
3.实验试剂与仪器设备
3.1 药品试剂：
MS培养母液所需的药品、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA等。
3.2仪器设备：
电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。
4、实验结果与分析
4.1结果分析：本实验用MS培养基对花生的成熟培养一周后观察，培养基中成熟花生胚已发育成玉米苗，根、茎、叶齐全且长势良好高度达到了5cm左右，诱导率达到100%，污染率为0；两周后观察，高度已经高达10cm左右。说明花生的成熟胚易于脱毒，而且容易诱导。
4.2实验中注意的问题：
1、一定要挑取健康的无病的
2、实验时要不时摇晃升汞溶液，使溶液与其充分接触，达到理想的消毒效果；
3、现污染的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的；
4、按时观察，并且做好记录花生胚的生长的状况。
实验九、水稻盾片的组织培养
摘要：水培育高产优质的水稻品种一直是世界范围的重要研究课题。由于水稻盾片取材方便，在实际的研究工作中作为诱导愈伤组织的外植体材料来源应用越来越广泛。本实验以水稻盾片为外植体，用MS 培养基为发芽培养基、用诱导培养基：MS＋2，4-D2.0mg／L＋BA1.0mg／L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶，来对其进行组织培养。
关键词：水稻盾片诱导培养外植体
1、实验目的
世界上近一半人口，都以大米为食。大米的食用方法多种多样，有米饭、米粥、米饼、米糕、米线等。水稻除可食用外，还可以酿酒、制糖作工业原料，稻壳、稻秆也有很多用处。目前组织培养技术已被广泛应用于水稻育种研究中。本实验通过对水稻盾片的诱导培养和继代培养可得到水稻的组培小苗。
2、实验材料与步骤：
2.1实验材料：
1、水稻干燥成熟种子
2、水稻发芽培养基MS
3、诱导培养基：MS＋2，4-D2.0mg／L＋BA1.0mg／L
2.2步骤
2.2.1外植体的消毒方法：
取水稻种子20-30粒，在室温下直接浸于 0.1%升汞溶液中消毒20min左右，其间注意不断摇动，取出种子置于无菌水中清洗3次。
2.2.2诱导培养
将发芽好的幼苗从培养基中取出，取下水稻的盾片，接入诱导培养基中培养。
2.2.3培养条件
在组培实验室的条件下培养,每个星期观察一次。
2.实验试剂与仪器设备
2.1 药品试剂：
MS培养母液所需的药品、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA等。
2.2仪器设备：
电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。
3、实验结果与分析
3.1用MS培养基诱导水稻种子发芽，总共接种4瓶，每瓶接种3粒水稻种子。培养1周后观察，发现所有的水稻种子以发芽，并且都以长出小苗。
3.2第二次诱导培养时，接种4瓶，一周后观察，有一瓶被污染，另外三瓶发生褐化现象，并没有完成诱导。
可能原因：在配置培养基时，母液中的某些成分已经变性，或者在配置的过程中可能加错了剂量。
3.3 实验中注意的问题：
1、取水稻种子时一定要注意挑取饱满的水稻种子。
2、在水稻盾片移植到继代培养基时一定要注意无菌操作，防止杂菌侵入。
3、在组织培养的过程中，发现有污染的外植体，要及时清理干净。按时定期观察记录。
实验十、芦荟的组织培养（自选实验）
前言：芦荟属（学名：Aloe）通称芦荟，原产于地中海、非洲，为独尾草科多年生草本植物，据考证的野生芦荟品种300多种，主要分布于非洲等地。这种植物颇受大众喜爱，主要因其易于栽种，为花叶兼备的观赏植物。因此芦荟具有积极重要的经济价值。
摘要：本实验以芦荟的芽为外植体进行组织培养，通过不定芽萌发途径再生植株。诱导培养基：MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L；(4)继代培养基：MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L；生根培养基：1/2MS+NAA0.1mg/L；
关键词：芦荟茎段外植体诱导培养
1、实验目的
芦荟的常规繁殖同许多植物一样有有性繁殖和无性繁殖两种。由于芦荟雌雄花开放时间不一致，授粉不亲和，故而结实少，并且种子细小，再加上芦荟有些品种只开花不结果，因而有性繁殖速度慢,因而无法满足芦荟种植业发展和开发芦荟资源对种苗的要求。芦荟的组织培养不仅可在短期内繁殖大量规格一致、种性稳定的芦荟种苗，还具有可以保持芦荟资源的永续利用。
2、材料和步骤:
2.1材料
1、芦荟幼嫩茎段
2、诱导培养基：MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶
3、继代培养基：MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶
4、生根培养基：1/2MS+NAA0.1mg/L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶
5、PH： 5.8-6
2.2步骤
2.2.1外植体消毒方法
用自来水冲洗芦荟茎段表面的泥土，用干净的手将幼嫩芦荟苗的叶片大部分摘除，只留下约1cm左右的叶段。将芦荟茎段切成1cm长，用70%酒精消毒15-30 s，用灭菌水冲洗1次后，放入0.15%升汞消毒约10min，灭菌水冲洗3-4次，滤干水分，准备接种。
2.2.2诱导培养
将芦荟茎段放到无菌工作台的无菌纸上，用消毒刀剥去几层外裹的叶片，然后切成两半，按生长极性方向植入诱导培养基。每瓶诱导分化培养基接种1小块，共接7瓶。每周观察记录一次。
2.2.3培养条件：
在组培实验室的条件下培养,每个星期观察一次。
3、实验结果与分析：
3.1对芦荟茎段进行诱导时，污染率1
4.3%，诱导率为100%。说明本实验中用的诱导培养基适宜，消毒时间合适。此法可以对芦荟进行大规模的生产提供参照。
芦荟茎段诱导培养结果统计表
3.2由于自选材料时间有限，没有进行继代培养和生根培养。
3.3结果图片：
4、注意事项
1、配制培养基时，要严格精确地称取各种化学试剂。
2、实验时一定要注意无菌操作，万不可引入杂菌污染培养基。
3、观察记录时，要注意拿组培瓶的方式，手要握住组培瓶的下方而不要握住组培瓶的盖子。
4、观察记录时要仔细，认真描述并做好记录。
细胞工程自选试验开题报告：
芦荟组织培养
一、基本背景
芦荟属（学名：Aloe）通称芦荟，原产于地中海、非洲，为独尾草科多年生草本植物，据考证的野生芦荟品种300多种，主要分布于非洲等地。这种植物颇受大众喜爱，主要因其易于栽种，为花叶兼备的观赏植物。
芦荟是百合科芦荟属多年生常绿多肉质草本植物。据科学研究，发现芦荟中有不少成分对人体皮肤有良好的营养滋润作用，且刺激性少，用后舒适，对皮肤粗糙、面部皱纹、疤痕、雀斑、痤疮等均有一定疗效。此外芦荟对轻度的撞伤、挫伤、香港脚、冻伤、皮肤龟裂、疣子等都有一定的疗效。根据现代研究显示，其叶含芦荟大黄素、异芦荟大黄素及芦荟苦味素等，药理实验有泻下、抗癌作用。芦荟花性寒，味苦涩，有清热、止咳、止血功效，可治疗咳嗽、吐血。而且芦荟还有极高的营养价值，食用芦荟的发展把对芦荟的研究带入了一个新的研究阶段，尤其是对芦荟组织培养技术发展有了极大地推动作用。
二、实验设备和药品
1、所需设备
高压灭菌锅、超净工作台、培养瓶、称量仪器、移液管、锥形瓶、量筒、镊子、解剖刀、支架、酒精灯、牛皮纸、牛皮袋
2、药品
（1）大量元素、钙盐、微量元素、铁盐、有机元素、蒸馏水、BA、IBA、NAA 、蔗糖、卡拉胶（2）75%酒精、0.1%升汞（加吐温）、95%酒精
3、材料
幼嫩芦荟的芽
三、实验内容及方法
1．研究方法：
对芦荟茎尖、吸芽进行灭菌处理，然后接入无菌培养瓶进行组织培养，快速繁殖试管苗。
采集芦荟→截取根尖、吸芽→外植体消毒→在超净工作台接种→放入培养室培养→继代培养→生根培养
2.试验方法及步骤：
1 )愈伤组织培养将准备好的芦荟幼苗在清水中冲洗数次，剪去叶片和大部分茎段，取茎尖部分，再冲洗1-2次，淋干。在超净台上，先用75%的乙醇将茎尖浸泡30-60s，再用升汞浸5-l0min，最后用无菌水冲洗数次。用解剖刀取出包括茎尖生长点的组织切块，接种到愈伤组织诱导培养基上。培养条件为:
就会长出新芽
3 )生根培养当培养瓶中的幼苗叶片长到3cm左右时，将幼苗在无菌条件下取出，放入装有生根培养基的培养瓶中培养，培养条件同分化培养。大约半个月后，幼苗即可生根。
3.可行性分析：
外植体接种到诱导培养基上培养10天后，顶芽开始伸长生长，到25天左右在组织块的基部开始长出腋芽，并且在每个外植体的嫩茎组织基部长出多个小突起，45-50天后小突起和腋芽逐渐长成7-9个绿色单芽，此时芽约有2.0-2.5cm可进行下一步的培养。
将长至3厘米高以上的无根增殖苗由丛生芽块上单芽切下转到生根培养基上，7天后在苗的基部形成白色的突起，并逐渐伸长，至12天可形成明显的幼根，逐渐长成完整的小植株，小苗长至7cm以上时即可移栽。
四、可能出现的问题及解决方法:
1、要注意严格遵守灭菌操作程序，防止被环境中的微生物的污染，这是组织培养的关键。
2、在培养中，如果出现杂菌污染，应立即将该污染培养瓶中的培养物倒掉并将培养瓶洗净，烘干备用。
3、对于愈伤组织或试管苗长势良好，仅有局部杂菌污染的试管或培养瓶，也可在无菌条件下，将愈伤组织或试管苗取出，重新放入装有相应培养基的试管或培养瓶中，继续培养。
4、严格的把握外植体灭菌时间，消毒时间不能太短，也不能太长，一定要好好把。
五、预期结果
完成对芦荟的诱导培养以及分化培养，如果时间允许，最好可以获得芦荟的组培幼苗，对其进行炼苗移栽，获得完整的植株，如果时间允许，经过炼苗和移栽，获得自然条件的生长的植株。