硒 荧光法
HZHJSZ0048 水质 硒的测定 荧光法
HZ-HJ-SZ-0048
水质２二氨基萘荧光法
ｌ 范围
1.1 主题内容
水样经混合酸液消解然后测定硒浓度以及低价硒(系指四价以下的无机和有机硒)
éú???????°?3D?1¤òμ·???(见附录A)
??à?×ó2??éè???μ?2a?¨ìú
?éó?EDTA及盐酸羟胺消除硒含量为0.05ìg时钴5ìg镉27ìg铍40ìg锰锌钒等不干扰
取20mL??μ?×?μí?ì3??¨?è?a0.25ìg/L 3????D?μ?ó???????à?×ó·′ó|éú3é4苯并硒
脑(4beozopiaselenol)绿色荧光物质所产生的荧光强度与四价硒含量成正比高氯酸混合酸液消解再经盐酸消解将六价硒还原为四价硒
3 试剂
除另有说明外
3.1 蒸馏水及去离子水）以上
不得含荧光杂质收集80~81ê1ó?1yμ??·?o
íé?é????oó?ùó?
密度(?20)为1.4g/mL
3.4 高氯酸(HClO4)优级纯
高氯酸混合酸液
３．６ 盐酸(HCl)优级纯
1+4(V/V)
??0.1mol/L用水(3.1)稀释至1000mL
密度(?20)为0.9g/mL
3.10 氨水溶液
３．１１ 甲酚红溶液将20mg甲酚红(C22H18O5S)溶于少量水中加1滴氨水(3.9)?ó??(3.1)稀释至100mL
??10g Na2?óèèèü?a
HCl)及10mL甲酚红溶液(3.11)贮于冰箱内
3.13 精密pH试纸
３．１４ ２二氨基萘溶液将100mg 2二氨基萘[C10H6(NH2)2?óè?0.1mol/L盐酸(3.8)100mL ?óè?20mL环己烷(3.2)继续振摇5min?·ò?íé?àóD′óá?o?é?Dü???????à?ù?ó?·?oíé·′?′Yíè??′?á?·?oíé?à?Té?í??÷ê±
?2??·?2?oó?????à·????-×?D????ú
??′?′??ˉμ?èüòo?üóú×?é????D
置冰箱内保存经常使用每月配制一次为宜
3.15 硒标准贮备溶液准确称取0.1000g光谱纯元素硒(Se)溶于少量硝酸(3.3)中
在沸水浴上加热除去硝酸继续加热2minó?????êí?á±ê??2￠?ì?è
??oáéy±ê×?èüòoo?100ìg硒
5.00mg/Ló?0.1mol/L 盐酸溶液(3.8)稀释至标线并混匀每毫升溶液含5.00ìg硒
5.00ìg/Ló?0.1mol/L 盐酸溶液(3.8)稀释至标线并混匀每月配制
４ 仪器
本法首次使用的玻璃器皿用自来水及水(3.1)洗净
以自来水冲洗后洗衣粉溶液中浸泡2h以上
常用实验室设备和以下仪器
250mL及100mL
250mL及25mLè?2?ò××a?ˉê±
4.3 具塞比色管
４．４ 电热板
4.6 荧光分光光度计或荧光光度计
然后用大量自来水和水(3.1)冲洗干净的玻璃瓶或塑料瓶
一般天然水及饮用水可于室内阴凉处保存
勿加酸保存(注)
ììè????°ò?ó????D?÷òao?óDáù???ò??
????
o?óD?÷????ì???è??ó?á±￡′?ê±?ééú3é???ˉ?a??ì?òYé￠
６ 操作步骤
6.1 试样
将样品(5.2)摇匀后立即取20mL或适量
6.2 空白试验
用水(3.1)代替试样按6.4.1~6.4.3测定步骤进行空白试验
必须控制空白试验的荧光强度应尽可能低
所用器皿均需重新洗净
分别加入硒标准溶液(3.17)0.00.30.7 1.5及2.0mL加水(3.1)至与试样相同体积
分别以测定的各荧光强度减去空白试验(零浓度)的荧光强度后
6.4 测定
6.4.1 消解
将适量试样(6.1)放入锥形瓶(4.1)中高氯酸(3.5)á￠?′è???
继续加热至再产生浓白烟
注高氯酸消解不完全时杂质荧光高所以消解快到终点时不要过多摇动瓶应立即取下
溶液呈桃红色
放冷
硒与2二氨基萘必须在酸性格液中反应过低时溶液易乳化甲酚红指示剂有pH2~3及7.2~8.8两个变色范围后者是由黄色变成桃红(微带蓝)色不可混淆确保溶液的pH 值为1.5~2.0
??2.0mL DAN溶液(3.14)加入上述各瓶中
置沸水浴中加热5min(自放入水浴锅中算起)
然后将全部溶液移入25mL分液漏斗(4.2)中将环已烷相由分液漏斗上口倾入具塞比色管(4.3)中
6.4.3 荧光测定
用荧光分光光度计发射光波长为520nm????êêò?????ò?2a?¨ê??ùμ?ó?1a???è??è￥??°×ê??é(6.2)的荧光强度
注1?ù??óDμ?????2?í???DD????êêò?μ?????
荧光滤片为510nm(截止型)和530nm(带通型)组合滤片.
7 结果计算
硒含量c (ìg/L)按下式计算
ｍ/V
m从校准曲线上查得样中硒含量
V测定用试样体积
结果以两位小数表示
含其他元素浓度(ìg/L)为砷(22.4)镉(7.4)钴(34.4)铁(17.1)锰(10.3)铅(34.4)
锌(80.0)
和3.7
8.2 再现性
实验室间相对标准偏差为5.2
8.3 准确度
相对误差为+4.5
9 参考文献
GB11902-89
附录Ａ
本方法一般说明
（参考件）
A1 消解时所用的混合酸液中高氯酸试剂浓度一定要用约为72òò?a???è?á?úóD??′??úμ??é????ê1ó?ê?°2è?μ?òò′??úê1ó?1y3ì?Dòaì?±eD?D????é3yê1???eê§ía
A2 测定总硒时需加盐酸将六价硒还原至四价硒
本法采用盐酸溶液(1+4)2.5mL
EDTA盐是为消除水样中铜钼等重金属离子的干扰
在含50ng硒的标准溶液中分别加入其他元素(ìg)为铬(1~30)钴(5~30)铁(10~100)锰(2~40)
钒(15~100)铵(3.4~27.5)
á?óí3§?o??3§?ì??3§2￡á§3§o???á??a15.4~875ppb回收率为96.2~105.2%o???á??a22.5ppb回收率为48
可能含有大量还原性物质有待进一步研究探讨
分子荧光光谱法实验报告
分子荧光光谱法实验报告 一、实验目的 1.掌握荧光光度计的基本原理及使用。 2.了解荧光分光光度计的构造和各组成部分的作用。 3.掌握分子荧光光度计分析物质的特征荧光光谱：激发光谱、发射光谱的测定方法。 4.了解影响荧光产生的几个主要因素。 5.学会运用分子荧光光谱法对物质进行定性和定量分析。 二、实验原理 原子外层电子吸收光子后，由基态跃迁到激发态，再回到较低能级或者基态时，发射出一定波长的辐射，称为原子荧光。对于分子的能级激发态称为分子荧光，平时所说的荧光指分子荧光。 具有不饱和基团的基态分子经光照射后，价电子跃迁产生荧光，是当电子从第一激发单重态S1的最低振动能级回到基态S0各振动能级所产生的光辐射。 (1)激发光谱 是指发光的某一谱线或谱带的强度随激发光波长(或频率)变化的曲线。横坐标为激发光波长，纵坐标为发光相对强度。 激发光谱反映不同波长的光激发材料产生发光的效果。即表示发光的某一谱线或谱带可以被什么波长的光激发、激发的本领是高还是低；也表示用不同波长的光激发材料时，使材料发出某一波长光的效
率。荧光为光致发光，合适的激发光波长需根据激发光谱确定——激发光谱是在固定荧光波长下，测量荧光体的荧光强度随激发波长变化的光谱。获得方法：先把第二单色器的波长固定，使测定的λem不变，改变第一单色器波长，让不同波长的光照在荧光物质上，测定它的荧光强度，以I为纵坐标，λex为横坐标所得图谱即荧光物质的激发光谱，从曲线上找出λex，，实际上选波长较长的高波长峰。 (2)发射光谱 是指发光的能量按波长或频率的分布。通常实验测量的是发光的相对能量。发射光谱中，横坐标为波长，纵坐标为发光相对强度。 发射光谱常分为带谱和线谱，有时也会出现既有带谱、又有线谱的情况。发射光谱的获得方法：先把第一单色器的波长固定，使激发的λex不变，改变第二单色器波长，让不同波长的光扫描，测定它的发光强度，以I为纵坐标，λem为横坐标得图谱即荧光物质的发射光谱;从曲线上找出最大的λem。 (3)荧光强度与荧光物质浓度的关系 用强度为I0的入射光，照射到液池内的荧光物质时，产生荧光，荧光强度If用仪器测得，在荧光浓度很稀(A 三、实验试剂和仪器试剂：罗丹明B乙醇溶液；1-萘酚乙醇溶液；3,3’-Diethyloxadicarbocyanine iodide：标准溶液，10μg/ml, 20μg/ml,30μg/ml,40μg/ml和未知浓度；蒸馏水；乙 醇。 仪器：Fluoromax-4荧光分光光度计；1cm比色皿；
荧光光度法
荧光分析法测定维生素B2药片含量 一实验目的 1.掌握荧光分析法测定维生素B2含量的原理及方法。 2.熟悉荧光分光光度计的结构和使用方法。 二基本原理 维生素B2（即核黄素）的溶液在430~440nm蓝光照射下，会发黄绿色荧光，荧光峰值波长为535nm。在pH6~7的溶液中荧光最强，在pH>11时荧光消失。醋酸溶液中荧光强度将会增强。其它条件一定时，维生素B2的稀溶液（0.5~5μg/ml）的荧光强度与荧光物质的浓度成正比。 本实验采用标准曲线法。利用维生素B2可被还原剂（连二亚硫酸钠）还原为非荧光性物质，通过测定加还原剂前后样品液的荧光强度，来消除可能的样品基体干扰，基于上述原理来测定药片的维生素B2含量。 三仪器与试剂 （一）仪器 荧光分光光度计，样品池（石英），10ml刻度吸管，10ml具塞比色管 （二）试剂 维生素B2贮备液（100μg/ml） 避光操作，精确称取100mg维生素B2(生物试剂，避光干燥保存)置于250ml烧杯中加冰醋酸10ml及蒸馏水90ml在水浴上加热溶解后，放冷，转入1000ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，移入棕色瓶中放暗处保存。 维生素B2标准应用液（1.0μg/ml） 实验当天用移液管准确吸取标准贮备液5.0ml于500ml棕色容量瓶中，用1%醋酸溶液稀释至刻度，摇匀。 1%醋酸溶液 取1ml冰醋酸用去离子水稀释至100ml。 连二亚硫酸钠（AR，保险粉） 四操作步骤 1.样品药液制备 1）取核黄素药片10片，研细，称出适量（约相当于维生素B210mg）置于250ml烧瓶中加冰醋酸10ml，加蒸馏水90ml，置水浴上加热约1小时，并时时振摇使其溶解澄清后放冷，转入1000ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，移入棕色瓶中避光保存。该样品药液含维生素B2 10μg/ml。 2）用移液管准确吸取维生素B2药液10ml于100ml容量瓶中，用1%醋酸液稀释至刻度，摇匀，取此溶液10ml于比色管中，按与标准系列同样步骤测定此溶液的荧光强度。 2.标准系列的配制 取10ml比色管6支，按下表配制标准系列管： 0 1 2 3 4 5 维生素B2标准应 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 用液（1.0μg/ml）
实验一,二 原子荧光光谱法测量条件的选择和水样中总砷的测定
实验一原子荧光光谱法测量条件的选择 一、实验目的 1．了解原子荧光光谱仪的基本结构及使用方法； 2．掌握原子吸收光谱分析测量条件的选择方法及测量条件的相互关系及影响，确定各项条件的最佳值。 二、方法原理 原子荧光光谱仪工作原理： 在一定工作条件下，荧光强度I F与被测元素的浓度c成正比，其关系如下： I F = K c 氢化物发生原理： BH4- + H++ 2As3+ +3H2O →2AsH3↑+H2↑+ BO33-生成的AsH3蒸汽在载气的带动下，经过火焰原子化，As原子接受由低压砷灯发出激发光照射，基态砷原子被激发到高能态，当返回到基态时辐射出共振荧光，此荧光经聚光镜聚焦于光电倍增管，实现光电转换，最后得到信号。 在原子荧光光谱分析中测量条件选择得是否正确，直接影响到分析方法的检出限、精密度和准确度。本实验通过砷的原子荧光光谱分析测量条件的选择，如灯电流、载气流量等，确定这些测量条件的最佳值。 三、仪器设备与试剂材料 1．PF6型原子荧光光谱仪（北京普析通用），砷高强度空心阴极灯。 2．试剂： （1）砷标准贮备液（1000u g?mL-1）：国家标准。 （2）砷实验工作溶液（1u g?mL-1）：由砷标准贮备液1000u g?mL-1逐级稀释得到。 （3）硫脲溶液（100g?L-1）：称取硫脲10g，加入80mL蒸馏水，水浴加热溶解，蒸馏水稀至100mL，摇匀。 （4）硼氢化钠-氢氧化钠溶液（15g?L-1）：称取5g氢氧化钠溶于200mL蒸馏水，加入15g硼氢化钠并使其溶解，用蒸馏水稀至1000mL，摇匀。 （5）2% 盐酸溶液（v/v）：移取20ml HCl（GR）,用蒸馏水稀释至1000mL，摇匀。 （6）（1+1）盐酸溶液（v/v）。 四、测量条件的选择 1．10ng?mL-1标准溶液的配制
同步荧光光谱法在环境分析中的应用
同步荧光光谱法在环境分析中的应用 环境分析化学是分析化学的一个新分支。在某种意义上讲,环境科学的发展依赖于环境分析化学的发展。随着人们对环境问题 认识的深入,环保意识的增强,环境分析受到越来越多的重视,已有大量综述性章发表[3]。随着有机化工、石油化工、医药工业的发展,以及农药(杀虫剂、除草剂等) 的大量使用,有机化合物对环境的危害和污染日益严重。目前,有机污染物分析测试的重要对象包括,多环芳烃和有机氯等污染物;与空气污染有关的挥发性有机 物、胺类化合物;与水污染有关的表面活性剂;砷、汞、锡等金属 有机化合物[3]。环境有机物的分析手段很多,其中荧光分析法由 于灵敏度高和选择性较等优良性能而得到广泛的应用。 早在16 世纪人们就观察到了荧光现象。20世纪以来,特别是近几十年,荧光现象在理论和实际应用方面都取得了很大进展,并 建立了荧光分析方法[4]。荧光分析法是通过测量样品的荧光强度,用于定量测定许多无机物和有机物,而又具有灵敏度高、选择性强、试样量少和方法简单等特点的一种很有用的分析手段。正因 为如此,近年来催化荧光法、荧光淬灭法、同步荧光技术以及荧光技术与其他技术联用得以不断涌现和完善,引起了分析界广泛地兴趣和瞩目[4]。本主要就近年来同步荧光光谱法在环境有机污染物分析中的应用作一综述,重点是介绍国内的情况。
正常规的化学分析是在样品沉淀、分离、萃取之后通过重量分析、色层析、光分析、电分析等分析技术来完成的,通常需消耗大量的溶剂和时间,并且在取样和处理过程中产生大量污染物,分析成本高。荧光技术灵敏度高,但常规的荧光分析法在实际应用中往往受到限制,对一些复杂混合物分析常遇到光谱互相重叠、不易分辨的困难,需要预分离且操作繁琐。[1] 1971 年L loyd首先提出了用同步荧光光谱技术[2]。和常规荧光分析法相比, 同步荧光分析法具有谱图简化、选择性提高、 光散射干扰减少等特点, 并且不需要预分离、操作简便、节省分 析成本、缩短分析时间, 尤其适合对多组分混合物的分析[2]。该法近几年得到迅速发展和广泛的应用, 出现了许多的新技术, 如 导数恒能量同步荧光法、三维同步荧光法和可变角同步荧光法等[5]。该法已应用于多组分多环芳烃的定性定量分析,环境、药物 分析, 食品、蛋白质、氨基酸、石油产品分析等。 近年来,人们对环境污染物质的分析十分重视,由于环境样品 中微量有机物的系统测定要求尽可能地采用高灵敏度和高选择性 的分析法, 所以在分析方面有较大的困难[2]。同步荧光技术在痕量分析方面尤有前途。酚为环保检测项目之一, 但在普通的荧光 光谱中, 瑞利峰和拉曼峰对荧光峰有干扰,用同步荧光光谱通过筛选最佳波长差,消除了这些因素的干扰,对酚进行了定量测定,并用于大气中酚的测定[2]。杜娟等[6]用同步荧光分析法测定工业及
荧光分析法检测原理及应用举例
1 荧光定义 某些化学物质从外界吸收并储存能量而进入激发态，当其从激发态回到基态时，过剩的能量以电磁辐射的形式放射出去即发光，称之为荧光。可产生荧光的分子或原子在接受能量后引起发光，供能一旦停止，荧光现象随之消失。 2 荧光分类 由化学反应引起的荧光称为化学荧光，由光激发引起的荧光称为光致荧光，课题主要研究光致荧光。按产生荧光的基本微粒不同，荧光可分为原子荧光、X 射线荧光和分子荧光，课题主要研究分子荧光。 3 光致荧光机理 某一波长的光照射在分子上，分子对此光有吸收作用，光能量被分子所吸收，分子具有的能量使分子的能级由最低的基态能级上升至较高的各个激发态的不同振动能级，称为跃迁。分子在各个激发态处于不稳定的状态，并随时在激发态的不同振动能级下降至基态，在下降过程中，分子产生发光现象，此过程为释放能量的过程，即为光致荧光的机理。光致荧光的过程按照时间顺序可分为以下几部分。 分子受激发过程 在波长为10~400nm的紫外区或390~780nm的可见光区，光具有较高的能量，当某一特征波长的光照射分子时，是的分子会吸收此特征波长的光能量，能量由光传递到分子上，此过程为分子受激发过程。分子中的电子会出现跃迁过程，在稳定的基态向不稳定的激发态跃迁。跃迁所需要的能量为跃迁前后两个能级的能量差，即为吸收光的能量。分子跃迁至不稳定的激发态中即为电子激发态分子。 在电子激发态中，存在多重态。多重态表示为2S+1。S为0或1，它表示电子在自转过程中，具有的角动量的代数和。S=0表示所有电子自旋的角动量代数和为0，即所有电子都是自旋配对的，那么2S+1=1，电子所处的激发态为单重态， 用S i 表示，由此可推出，S 即为基态的单重态，S 1 为第一跃迁能级激发态的单重 态，S 2 为第二跃迁能级激发态的单重态。S=1表示电子的自旋方向不能配对，说明电子在跃迁过程中自旋方向有变化，存在不配对的电子为2个，2S+1=3，电子 在激发态中位于第三振动能级，称为三重态，用T i 来表示，T 1 即为第一激发态中 的三重态，T 2 即为第二激发态中的三重态，以此类推。
实验三 食品中硒的测定-原子荧光光谱法
光谱技术在食品分析中的应用 实验三食品中硒的测定-原子荧光光谱法 一、实验目的 1、了解原子荧光光度计仪器的基本结构和原理； 2、学会原子荧光光度计的操作技术； 3、了解食品中硒的测定意义； 4、学会湿法消化样品的操作。 二、基本原理 利用硼氢化钠作为还原剂，将四价硒在盐酸介质中还原为硒化氢（SeH2），由载气带 入原子化器中进行原子化，在硒特制空心阴极灯照射下，基态硒原子被激发至高能态，再 去活化回到基态时，发射出特征波长的荧光，其荧光强度与硒含量成正比，从而定量硒在 食品中的含量。 三、仪器和试剂 1、仪器： AFS-230E型双道原子荧光光谱仪、硒特制空心阴极灯、可调式电热板 2、试剂 除非另有规定，本方法所使用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的三级水；所用玻璃仪器均需以硝酸（1+5）浸泡过夜，用水反复冲洗，最后用纯水冲冼干净。 硝酸（优级纯）、盐酸（优级纯）、氢氧化钠（5g/L，优级纯）、硼氢化钠溶液（8g/L）、铁氰化钾溶液（100g/L）、硒标准储备液（100μg/mL，光谱纯）、盐酸（6 mol/L）、混合酸：将硝酸与高氯酸按9：1 体积混合等。 硒标准储备液制备（100μg/mL）：称取0.100g高纯硒粉于1000mL容量瓶中，溶于少 量硝酸中，加入2mL高氯酸，置沸水浴中加热3h~4h冷却后再加8.4mL盐酸，再置沸水浴 中煮2min，用蒸馏水准确稀释至1000mL，摇匀。 硒标准应用液制备：取100μg/mL硒标准储备液1.0mL，定容100mL，摇匀备用。 硼氢化钠溶液（8g/L）制备：称取8.0g硼氢化钠（NaBH4），溶于氢氧化钠溶液（5g/L）中，然后定容至1000mL。 铁氰化钾溶液（100g/L）制备：称取10.0g铁氰化钾（K3Fe(CN)6），溶于100mL容量 瓶中，摇匀。 载流溶液：5%盐酸水溶液。
实验40 微波消解-原子荧光光谱法分析测定电池中汞
原子荧光分析法测定电池中的汞 实验目的 (1).了解原子荧光光谱法测定汞的基本原理和实验方法 (2).掌握原子荧光光度计的基本构造和操作 实验原理 在酸性介质中,用强还原剂硼氢化纳将试样中的汞离子还原为汞原子,其反应方程式为Hg(NO3)2+3NaBH4+HNO3+6H2O → Hg+3HBO2+3NaNO3+11H2 由于汞的挥发性,用氩气将汞蒸气带入原子化器进行测定. 汞空心阴极灯发射出特征光束,照射在汞蒸气上,使汞原子激发而发射荧光.在合理条件下,荧光强度与汞原子浓度呈线性关系. 仪器试剂 仪器 AF2-2202a行双道原子荧光光度计（北京）25mL比色管 试剂 (1).汞标准储备液（1.0mg/mL) (2).中间液（含Hg2+10μg/mL):吸取0.50mL储备液于50mL容量瓶中，用５％HNO3稀释至刻度，摇匀． (3).使用液(含Hg2+ 0.01 μg/mL):吸取中间液0.25mL 于25容量瓶中，用5%HNO3稀释至刻度，摇匀．然后吸取此溶液2.5 mL于２５mL容量瓶中，用５％HNO3稀释至刻度，摇匀．(４).１％NaBH4 (５). ５％HNO3 仪器工作条件 AF2-2202a行双道原子荧光光度计仪器测量参数
仪器条件 元素光电倍增 管负高压 /V 原子化器 温度/℃ 原子化器 高度/mm 灯电流/mA 载气流量 /ml.min-1 屏蔽气流 量ml.min-1 Hg 300 200 8 30 400 1000 测量条件 读数时间/s 10 标准校正点 1 延迟时间/s 0.5 标准频率 0 注入量/mL 0.5 测量方式 Std.Cure 重复次数 1 读数方式 Peak area 空白判别值 10 分析液单位 mg.L-1 (μg.mL-1) 断流程序 步骤时间/s 泵转速/rpm 读数 1 6 0 No 2 10 100 No 3 6 0 No 4 16 130 Yes 实验步骤 (1).分析校准曲线制作：分别吸取1.0mL、 1.5mL、 2.0mL、 2.5mL汞标准使用液于４个２５mL的比色管中,用５％HNO3稀释至刻度，摇匀．按前表中的参数进行测量，以荧光强度对浓度作图制作分析校准曲线． (２).样品测定：在与分析校准曲线相同条件下分别测定试剂空白和样品的荧光强度．
荧光光度分析法测定维生素B2的含量
荧光光度分析法测定维生素B 2的含量 引言 荧光分光光度法简介 有些物质，当用紫外光照射时，它吸收某种波长之后还会发射出各种颜色和强度不同的光；而当紫外光停止照射后，这种光线也随之消失，这种光线称为荧光。荧光的波长比吸收的紫外光波长要长。 由于物质分子结构不同，所吸收的紫外光波长和发射的荧光波长也有所不同。利用物质的这个特性，可以对物质进行定性分析。同一种分子结构的物质，用同一种波长的紫外光照射，可发射相同波长的荧光；若该物质的浓度不同，所发射的荧光强度也不同，利用这个性质可以对物质进行定量分析。这种定量方法称为荧光分析法，简称荧光法。测量荧光的仪器有滤光片荧光计，滤光片—单色器荧光计和荧光分光光度计。荧光法的选择性好，灵敏度比紫外-可见分光光度法高2~3数量级，检出限低，可以达到10~12g ／m1，线性范围宽。现在主要应用的是荧光分光光度计。 【实验目的】 1. 学习荧光光度法测定维生素B 2的含量的基本原理和方法。 2. 熟悉荧光光度计的结构及使用方法。 【实验原理】 在经过紫外光或波长较短的可见光照射后，一些物质会发射出比入射光波长更长的荧光。在稀溶液中，荧光强度IF 与物质的浓度c 有以下关系： bc I 303.2I 0F εφ= 当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系： Kc I F = 这种以测量荧光的强度和波长为基础的分析方法叫做荧光光度分析法。荧光强度与激发光强度成正比，提高激发光强度，可成倍提高荧光强度。同时，提高仪器灵敏度，可提高荧光光度法的灵敏度。而吸收光度法，无论是提高激发光强度还是提高仪器灵敏度，入射光和出射光同时增大，其灵敏度不变。因此，荧光光度法比吸收光度法灵敏度高。
原子荧光法测定食品中的硒
【摘要】采用原子荧光法测定食品中的硒，硒的相对标准偏差为 1.2％，检出限为0.40mg/ml。线性范围为0～400μg/L，相关系数为0.9999.回收率为95.1%～103.8％。【关键词】硒；原子荧光；食品硒是人体必需的微量元素，但是摄入过多对人体健康造成危害。近年来，在食品加工方面有任意在一些食品中强化硒的倾向。为了保障人体健康，因此要加强硒在食品、水中含量的监测力度。常用方法有荧光法、原子吸收法和比色法等，荧光法虽然准确但繁琐，并且所用试剂DAN毒性大且需进口。原子吸收法火焰法灵敏度低，石墨炉法有严重的基体干扰，比色法简便、灵敏度低。原子荧光法测定硒克服以上方法的缺点，是一种简便、灵敏度高的方法。 1 实验部分 1.1 试剂与仪器单光道原子荧光分光光度计（北京瑞利分析仪器公司ＡＦ-610），配有计算机处理系统，硒空心阴极灯：北京真空电子技术研究所，硝酸（优级纯），高氯酸（优级纯），盐酸（优级纯），混合酸：硝酸＋高氯酸（4+1），氢氧化钾（分析纯），硼氢化钾溶液（15g/L）称取2g KOH溶于约200ml纯水中，加入15g硼氢化钾并使之溶解后，用脱脂棉过滤，用纯水稀释至1000ml，摇匀。宜现配现用。铁氰化钾（100g/L)：称取10.0g铁氰化钾（K3Fe(CN)6)溶于100ml蒸馏水中，混匀。硒标准贮备液：国家标准物质GBW（E）080215 100μg/ml，硒标准应用液：取100μg/ml 硒标准贮备液1ml，定容至100ml，此应用液浓度为1μg/ml。载流：20%（V/V）HCl本方法中，除特殊规定外，所用试剂分析纯，实验用水为去离子水。 1.2 仪器工作条件ＰＭＴ电压：340V，ＨＣl主阴极电流：100mA。HCl辅助阴极电流：0mA；原子化器温度：室温（档）。原子化器高度：7mm。载气流量：600ml/min。测量方式：标准曲线法，进样体积：0.5ml。分析信号：峰面积，读数延时：1.0ｓｅｃ。读数时间：12.0ｓｅｃ。流动程序方式：断续流动。采样泵速：100ｒ/ｍｉｎ，采样时间：5sｅｃ，停泵时间：4sec，注入泵速：100r/min，注入时间：16sｅｃ，停泵时间：5sｅｃ。 1.3 样品处理及消化粮食：样品用水洗3次，60℃烘干，用不锈钢磨粉碎，储于塑料瓶内，备用。蔬菜及其他植物性食物：取可食部分用水洗净后用纱布吸去水滴，打成匀浆后备用。称取0.5～2.0g样品于150ml 高筒烧杯内，加10ml混合酸及几粒玻璃珠，盖上表面器冷消化过夜。次日于电热板上加热，并及时补加混合酸。当溶液变为清亮无色并伴有白烟时，再继续加热至剩余体积2ml左右，切不可蒸干。冷却，再加5ml 6mol/L盐酸，继续加热至溶液变为清亮无色并伴有白烟出现，以完全将六价硒还原成四价硒。冷却，转移定容至50ml容量瓶中，同时做空白实验。吸取10ml样品有消化液于15ml离心管中，加浓盐酸2ml，铁氰化钾溶液1ml，混匀待测。 1.4 标准曲线制作分别取0.0，0.5，1.0，2.0，4.0，5.0ml标准应用液于50ml比色管中，再分别加浓盐酸5ml，铁氰化钾1ml，混匀，用去离子水定容至50ml制成标准工作曲线。[!--empirenews.page--] 1.5 测定［1］开机，预热20～30ｍｉｎ，输入必要的参数：样品量（g或ｍｌ）、稀释体积（ｍｌ）、进样体积（ｍｌ）、结果的浓度单位、测定点重复测量次数、标准系列点数及各点的浓度值。先测定空白溶液，然后转入标准系列测量，绘制标准曲线后，再测定两个空白溶液的空白值。随后测定样品，测定完毕，打印出测定结果。2结果与讨论 2.1 标准曲线线性范围及回归方程测定0～100μg/L的标准曲线，相关系数为0.9999，回归方程Y=33.807-24.515X。标准曲线线性范围0～400μg/L。 2.2 干扰及消除经实验1000倍Al3+、Fe2+、Fe3+、Ca2+、Mg2+、K+及Cl-、F-、NO3-、SO42-、PO43-不干扰测定。氢化物发生原子吸收法中观察到Sn对Se测定的严重干扰，而氢化物原子荧光法中未发现。对于基体成分复杂，而Se的含量较低的样品，可采用萃取、疏基棉吸附、离子交换等分离高集方法来消除干扰［2］。 2.3 相对标准偏差和检出限对40ng/ml的硒进行11次测定得相对标准偏差1.2%。连续测定11次空白荧光值11次。空白值的标准偏差ＳＤ。根据工作曲线的斜率K和检出限Ｄ＝3δ/K。算出硒的检出限0.4ng/ml。按分析方法测定高中低浓度样品，各测定6次得平均值及相对标准偏差。平均值分别为0.013、0.156、0.456mg/kg，其相对标准偏差分别为5.0、4.2、3.2%。 2.4 方法准确度用
荧光分光光度法
荧光分光光度法测定维生素B6的含量
荧光分光光度法测定维生素B6的含量 荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定, 不但可以做一般的定量分析, 而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化, 从而阐明分子结构与功能之间的关系。荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是190-650nm，发射波长扫描范围是200-800nm。可用于液体、固体样品（如凝胶条）的光谱扫描。 荧光分光光度计的工作原理：物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出，从而产生荧光． 不同物质由于分子结构的不同,其激发态能级的分布具有各自不同的 特征，这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱；，因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。 在溶液中，当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。 荧光分光光度计基本结构：①光源：为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm 范围内强度几乎相等，故较常用。
②激发单色器：置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的激发光谱。③发射单色器：置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光栅为单色器。筛选出特定的发射光谱。④样品室：通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。测量液体时，光源与检测器成直角安排；测量固体时，光源与检测器成锐角安排。⑤检测器：一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号。 荧光分光光度计是用于电子扫描液相荧光标志物所拍发的荧光光谱的一种摄谱仪。应用于科学研究、化工、医疗药品、生化、环保和临床检验、食物检验、讲授实验等领域。 本次实验所用样品维生素B 6（vitamin B 6 ），又称吡哆素。是一种水溶性维 生素，遇光或碱易破坏，不耐高温。一种含吡哆醇或吡哆醛或吡哆胺的B族维生 素。1936年定名为维生素B 6。维生素B 6 为无色晶体，易溶于水及乙醇，在酸液 中稳定，在碱液中易破坏，吡哆醇耐热，吡哆醛和吡哆胺不耐高温。维生素B 6 在酵母菌、肝脏、谷粒、肉、鱼、蛋、豆类及花生中含量较多。维生素B 6 为人体内某些辅酶的组成成分，参与多种代谢反应，尤其是和氨基酸代谢有密切关系。 临床上应用维生素B 6 制剂防治妊娠呕吐和放射病呕吐。 维生素B 6 及其辅酶的结构式 1 实验仪器与试剂 1.1 仪器 荧光分光光度计（RF-5301PC,日本岛津）、电子天平（AL204，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司METTLER TOLEDO）、微孔滤膜（尺寸25mm，孔径
Han原子荧光测硒2015-11-7
氢化物原子荧光测硒实验方案 1. 主要仪器和试剂： 1.1主要仪器：A FS-922 型氢化物发生双道原子荧光光谱仪（北京吉天仪器有限公司）；硒空心阴极灯(北京真空电子技术研究所)、SH220石墨消解仪（型号SH220；济南海能仪器有限公司）、优普超纯水机、电子天平（赛多利斯；Sartorious BS2245）、数显鼓风干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）、25ml容量瓶、消解管、小烧杯、漏斗、移液枪、离心管等常用实验仪器。 1.2主要试剂：盐酸（优级纯；武汉市中天化工有限公司）、硝酸（优级纯；国药集团化学试剂有限公司）、30%过氧化氢（优级纯；天津市光复科技发展有限公司）；氢氧化钾（优级纯）、硼氢化钾（优级纯）；硒标准储备液（100ug/ml）(GSB07 – 1253)(由国家环境保护总局标准样品研究所研制)。实验用水为超纯水。 1.3仪器工作条件（仪器设置及药品） B道硒灯； 光电倍增管负高压：300V; 原子化器高度：10mm; 灯电流：80mA 载气流量：400ml/min 屏蔽气流量：8000mL/min 分析信号：峰面积 读数时间：12s 延迟时间：1.2s 注入量：1.5ml 测定次数：3次 载流：5%HCl；还原剂：1%硼氢化钾（钠）
2、实验步骤：本次实验共有7个样品，14分血样，一份空白对照，分别做两个重复。分1次消解定容，每次消解16个。 2.1. 药品准备（注意：配制药品所用到的所有器皿均需要用1：1的硝酸浸泡过夜，第二天，将侵泡好了的仪器用清水冲洗，再用超纯水润洗三遍，烘干备用。）所需器皿：1000ml容量瓶1个，烧杯，离心管，25ml容量瓶，枪头，500ml容量瓶，移液管，玻璃棒，量筒，集气瓶） 2.1.1配制6ml/L的盐酸溶液200ml。 配方：量取50ml盐酸缓慢加入40ml水中，冷却后定容至100ml。（配制200ml）（※注意：盐酸的配制循序，先加水，再加盐酸，防止盐酸溅出受伤） 2.1.2 配制5%盐酸溶液 配方：50ml定容至1000ml（配2L） 2.1.3 配制标准硒溶液（硒标准溶液最好手工配制，其剃度为40ug/L、20 ug/L、10 ug/L、5 ug/L、2.5 ug/L） 配方：吸取0.025ml 40ug/mL 硒标准溶液，以5%盐酸溶液定容至25mL。制成20ug/L 储备液。再吸取12.25ml硒标准溶液，以5%盐酸溶液定容至25mL，同理配制10 ug/L、5 ug/L、2.5 ug/L硒标准溶液。（仪器可测定的最高浓度为20-30ug/L） 2.1.4配制1%硼氰化钾溶液 配方：将1.0g KBH4(优级纯)溶于100ml 0.5% KOH（优级纯）溶液中，混匀。该溶液易失效，所以需用前配制，放冰箱内可保存10天。（配200ml） 2.2样品处理 2.2.1取20支消解管、20个10ml容量瓶，20个15ml离心管，置于1：1的硝酸液中侵泡(至少一夜)。第二天，将侵泡好了的仪器用清水冲洗，再用超纯水润洗三遍，烘干备用。 2.2.2微波消解 ⑴浸酸：取5ml鳝鱼鲜血于消解管中，加8mL的浓硝酸，2mL的双氧水，浸酸一小时，每个土洋做两个个重复，分别记为A1、A2、并做一组对照 ⑵消解：至微波消解仪中，按下列表格设置好程序，
著作一：荧光分析法 (第三版)许金钩 王尊本 主编
有机化学 1.David A. Evans,* Daniel Seidel, Magnus Rueping, Hon Wai Lam, Jared T. Shaw, and C. Wade Downey, A New Copper Acetate-Bis(oxazoline)-Catalyzed, Enantioselective Henry Reaction, J. AM. CHEM. SOC. 2003, 125, 12692-12693. 2. Brian D. Dangel and Robin Pol,Catalysis by Amino Acid-Derived Tetracoordinate Complexes: Enantioselective Addition of Dialkylzincs to Aliphatic and Aromatic Aldehydes, Org. Lett. 2007, 2, 300 3. 3. Benjamin List, Proline-catalyzed asymmetric reactions, Tetrahedron, 2002, 58, 5573. 4. Vishnu Maya, Monika Raj, and Vinod K. Singh, Highly Enantioselective Organocatalytic Direct Aldol Reaction in an Aqueous Medium, Org. Lett. 2007, 9, 2593. 5. Sanzhong Luo, Jiuyuan Li, Hui Xu, Long Zhang, and Jin-Pei Cheng, Chiral Amine-Polyoxometalate Hybrids as Highly Efficient and Recoverable Asymmetric Enamine Catalysts, Org. Lett. 2007, 9, 3675. 6. Xiao-Ying Xu, Yan-Zhao Wang, and Liu-Zhu Gong, Design of Organocatalysts for Asymmetric Direct Syn-Aldol Reactions, Org. Lett. 2007, 9, 424 7. 7. Jung Woon Yang, Maria T. Hechavarria Fonseca, Nicola Vignola, and Benjamin List, Metal-Free, Organocatalytic Asymmetric Transfer Hydrogenation of a,b-Unsaturated Aldehydes, Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44, 108–110. 8. Giuseppe Bartoli, Massimo Bartolacci, Marcella Bosco, et. al., The Michael Addition of Indoles to r,a-Unsaturated Ketones Catalyzed by CeCl3a7H2O-NaI Combination Supported on Silica Gel, J. Org. Chem. 2003, 68, 4594-4597. 9. Jayasree Seayad, Abdul Majeed Seayad, and Benjamin List, Catalytic Asymmetric Pictet-Spengler Reaction, J. AM. CHEM. SOC. 2006, 128, 1086-1087. 10. Jingjun Yin, Matthew P. Rainka, Xiao-Xiang Zhang, and Stephen L. Buchwald, A Highly Active Suzuki Catalyst for the Synthesis of Sterically Hindered Biaryls: Novel Ligand Coordination, J. AM. CHEM. SOC. 9 VOL. 124, NO. 7, 2002 1162. 11. Ulf M. Lindstro¨m, Stereoselective Organic Reactions in Water, Chem. Rev. 2002, 102, 2751-2772 .
分子荧光分析法基本原理
分子荧光分析法基本原理 一. 分子荧光的发生过程 （一）分子的激发态——单线激发态和三线激发态 大多数分子含有偶数电子，在基态时，这些电子成对地存在于各个原子或分子轨道中，成对自旋，方向相反，电子净自旋等于零：S=?+(-?)=0，其多重性M=2S+1=1 (M 为磁量子数)，因此，分子是抗（反）磁性的，其能级不受外界磁场影响而分裂，称“单线态”； 图1 单线基态（A）、单线激发态（B）和三线激发态（C） 当基态分子的一个成对电子吸收光辐射后，被激发跃迁到能量较高的轨道上，通常它的自旋方向不改变，即 ?S=0，则激发态仍是单线态，即“单线(重)激发态”； 如果电子在跃迁过程中，还伴随着自旋方向的改变，这时便具有两个自旋不配对的电子，电子净自旋不等于零，而等于1： S=1/2+1/2=1 其多重性： M=2S+1=3 即分子在磁场中受到影响而产生能级分裂，这种受激态称为“三线(重)激发态”； “三线激发态” 比“单线激发态” 能量稍低。但由于电子自旋方向的改变在光谱学上一般是禁阻的，即跃迁几率非常小，只相当于单线态→单线态过程的 10-6~10-7。 （二）分子去活化过程及荧光的发生： （一个分子的外层电子能级包括S0（基态）和各激发态S1，S2，…..，T1…..，每个电子能级又包括一系列能量非常接近的振动能级） 处于激发态的分子不稳定，在较短的时间内可通过不同途径释放多余的能量（辐射或非辐射跃迁）回到激态，这个过程称为“去活化过程”，这些途径为： 1. 振动弛豫：在溶液中，处于激发态的溶质分子与溶剂分子间发生碰撞，把一部分能量以热的形式迅速传递给溶剂分子（环境），在10-11~10-13 秒时间回到同一电子激发态的最低振动能级，这一过程称为振动弛豫。
荧光分光光度法测定荧光素钠的含量
荧光分光光度法测定荧光素钠的含量 一、实验目的 1.学习荧光分光光度法测定荧光素钠的分析原理。 2.掌握荧光分光光度计的操作技术和测定荧光素钠的方法。 二、实验原理 荧光分析法，是以溶液中物质分子对光的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。 常温下，处于基态的分子吸收一定的紫外可见光的辐射能成为激发态分子，激发态分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级，再以辐射跃迁的形式回到基态，发出比吸收光波长长的光而产生荧光。 在稀溶液中，荧光强度I F 与物质的浓度c 有以下的关系： 当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系： 这是荧光光谱法定量分析的理论依据。 三、仪器及试剂 1．仪器 960荧光分光光度计； LC-UV 紫外检测器； 微量进样器 2．试剂 ① 二氯荧光素（分析纯）； ② 荧光素钠 四、操作步骤 1.标准溶液配制 准确称取0.05g 二氯荧光素标样，配制成2500ml 溶液，则此溶液浓度为0.05μm/mL ，分别移取此溶液2.0ml 、4.0ml 、6.0ml 、8.0ml ，于25ml 容量瓶中，bc I I F εφ0303.2=Kc I F =
并用蒸馏水稀释至刻度，摇匀后，待测定各标准溶液的荧光强度。 2.荧光强度测定 (1)荧光光度计操作 开启220V稳压电源至220V； 打开主机电源开关。 检查氙灯电是否开启。 (2)二氯荧光素发光谱的绘制，参数设置如下： ①设定纵坐标 ②设定灵敏度； ③设定扫描速度； ④发射波长EMISSION Wavelength 250.0 nm； ⑤激发波长范围200-350 nm； ⑥将某一浓度的二氯荧光素标液置于试样池中； ⑦扫描得到激发光谱。 (3)标准溶液及样品的测定，参数设置如下： ①设定纵坐标 ②设定灵敏度； ③设定扫描速度； ④设定激发波长EXCITION Wavelength 496.0nm(从激发光谱曲线中)得到； ⑤发射波长范围EMISSION Wavelength 518nm； ⑥将1号标准溶液放入试样池中； ⑦扫描得到荧光光谱。 仪器开始扫描，得到1号标准溶液的荧光强度。其余4各标准溶液和样品液只要重复上述⑥⑦操作，就可以分别得到它们的荧光光谱。按各标液的荧光强度做出I-C工作曲线。 五、数据记录及计算 1.列表
硒 原子荧光法
HZHJSZ00124 水质硒的测定 原子荧光法 HZ-HJ-SZ-0124 水质原子荧光法 1 范围 本方法测硒的最低检出浓度为0.06ìg/L测定上限为10ìg/L μ?3§áò?á3§?ˉ1¤?ˉ·ê3§μè?à??·????D×ü??μ?2a?¨ ?á(III)钴(II)锌(II)各200ìg 铁(III)4mg没有干扰对于铜 此时可容许10ìg铜(II)存在常见阴离子 2 原理 在盐酸和高氯酸溶液中使硒生成硒化氦 硒原子受光辐射后被激发产生电子跃迁 此时产生的荧光谱线与硒无极放电灯发射谱线产生共振 其荧光强度与试样中硒含量成正比 优级纯 优级纯 优级纯 ３．５ １＋１硝酸-高氯酸混合消解液 将300mL浓盐酸加入500mL水中加入50mL浓高氯酸 ３．７ 硼氢化钾碱溶液将4g氢氧化钠溶解于500mL水中搅拌至溶解完全用定性滤纸过滤 ３．８ 硒标准贮备溶液99.9%的金属硒(Se)0.1000g溶于少量浓硝酸中在沸水浴上加热除去硝酸继续加热2min ó?????êí?á±ê??2￠?ì?è于冰箱内保存 3.9 硒标准使用溶液 4 仪器 4.1 无色散原子荧光分析仪 5 试样制备 取适量水样(含硒量加入2.5mL混合消解液 取下冷却后加热微沸3~5minó?3.2mol/L盐酸小心将溶液转入25mL具塞刻度管中 备测 盖上磨口塞打开电磁阀自动加入硼氢化钾碱溶液 于波长196.0nm处测量所发出的荧光强度从校准曲线上查得硒量 1
2 6.2 校谁曲线的绘制 分别吸取0 2.00 4.00和5.00mL 硒标准使用溶液于氢化物发生器中以下操作与样品测定步骤相同 7 结果计算 c 硒 ìg/L m /V 1 m 由校准曲线查得硒量(ng) V 1分取消解试样体积 (mL) 8 精密度和准确度 经四个实验室分析16个工业废水和3个河水样品 表1 测定水中硒的精密度与准确度 水样种类 总硒度范围 相对标准偏差 河水 皮革厂焦化厂废水 硫酸厂电厂废水 电厂废水 (1) 对含有机物质多的复杂样品 较清洁样品进行一次消解即可否则会因加热温度过高造成硒损失 可在瓶口加上一个小漏斗以防试液转移时溅漏 水和废水监测分析方法水和废水监测分析方法 中国环境科学出版社1997
原子荧光光谱仪操作步骤及原理分析2012
氢化物（蒸气）发生 -原子荧光 原子荧光的发展史 ●原子荧光谱法(AFS)是原子光谱法中的一个重要分支。从其发光机理看属于一种原子发 射光谱(AES)，而基态原子的受激过程又与原子吸收(AAS)相同。因此可以认为AFS是AES和AAS两项技术的综合和发展，它兼具AES和AAS的优点。 ●1859年Kirchhoof研究太阳光谱时就开始了原子荧光理论的研究，1902年Wood等首 先观测到了钠的原子荧光，到20世纪20年代，研究原子荧光的人日益增多，发现了许多元素的原子荧光。用锂火焰来激发锂原子的荧光由BOGROS作过介绍，1912年WOOD 年用汞弧灯辐照汞蒸气观测汞的原子荧光。Nichols和Howes用火焰原子化器测到了钠、锂、锶、钡和钙的微弱原子荧光信号，Terenin研究了镉、铊、铅、铋、砷的原子荧光。 1934年Mitchll和Zemansky对早期原子荧光研究进行了概括性总结。1962年在第10次国际光谱学会议上，阿克玛德(Alkemade)介绍了原子荧光量子效率的测量方法，并予言这一方法可能用于元素分析。1964年威博尼尔明确提出火焰原子荧光光谱法可以作为一种化学分析方法，并且导出了原子荧光的基本方程式，进行了汞、锌和镉的原子荧光分析。 ●美国佛罗里达州立大学Winefodner教授研究组和英国伦敦帝国学院West教授研究 小组致力于原子荧光光谱理论和实验研究，完成了许多重要工作。 ● 20世纪70年代，我国一批专家学者致力于原子荧光的理论和应用研究。西北大学杜 文虎、上海冶金研究所、西北有色地质研究院郭小等均作出了贡献。尤其郭小伟致力于氢化物发生(HG)与原子荧光(AFS)的联用技术研究，取得了杰出成就，成为我国原子荧光商品仪器的奠基人，为原子荧光光谱法首先在我国的普及和推广打下了基础。 幻灯片3 国外AFS仪器发展史 ＊1971年Larkins用空心阴极灯作光源，火焰原子化器，采用泸光片分光，光电倍增管检测。测定了A u、B i、Co、H g、M g、N i 等20多种元素； ＊1976年Technicon公司推出了世界上第一台原子荧光光谱仪AFS-6。该仪器采用空心阴极灯作光源，同时测定6个元素，短脉冲供电，计算机作控制和数据处理。由于仪器造价高，灯寿命短，且多数被测元素的灵敏度不如AAS和ICP-AES，该仪器未能成批投产，被称之为短命的AFS-6。 ＊20世纪80年代初，美国Baird公司推出了AFS-2000型ICP-AFS仪器。该仪器采用脉冲空心阴极灯作光源，电感耦合等离子体(ICP)作原子化器，光电倍增管检测，12道同时测量，计算机控制和数据处理。该产品由于没有突出的特点，多道同时测定的折衷条件根本无法满足，性能/价格比差，在激烈的市场竞争中遭到无情的淘汰。 ＊20世纪90年代，英国PSA公司开始生产HG-AFS。
分子荧光光谱法实验报告范文
分子荧光光谱法实验报告范文 一、实验目的 1.掌握荧光光度计的基本原理及使用。 2.了解荧光分光光度计的构造和各组成部分的作用。 3.掌握分子荧光光度计分析物质的特征荧光光谱：激发光谱、发射光谱的测定方法。 4.了解影响荧光产生的几个主要因素。 5.学会运用分子荧光光谱法对物质进行定性和定量分析。 二、实验原理 原子外层电子吸收光子后，由基态跃迁到激发态，再回到较低能级或者基态时，发射出一定波长的辐射，称为原子荧光。对于分子的能级激发态称为分子荧光，平时所说的荧光指分子荧光。 具有不饱和基团的基态分子经光照射后，价电子跃迁产生荧光，是当电子从第一激发单重态S1的最低振动能级回到基态S0各振动能级所产生的光辐射。 (1)激发光谱 是指发光的某一谱线或谱带的强度随激发光波长(或频率)变化的曲线。横坐标为激发光波长，纵坐标为发光相对强度。 激发光谱反映不同波长的光激发材料产生发光的效果。即表示发光的某一谱线或谱带可以被什么波长的光激发、激发的本领是高还是低；也表示用不同波长的光激发材料时，
使材料发出某一波长光的效率。荧光为光致发光，合适的激发光波长需根据激发光谱确定——激发光谱是在固定荧光波长下，测量荧光体的荧光强度随激发波长变化的光谱。获得方法：先把第二单色器的波长固定，使测定的λem不变，改变第一单色器波长，让不同波长的光照在荧光物质上，测定它的荧光强度，以I为纵坐标，λex为横坐标所得图谱即荧光物质的激发光谱，从曲线上找出λex，，实际上选波长较长的高波长峰。 (2)发射光谱 是指发光的能量按波长或频率的分布。通常实验测量的是发光的相对能量。发射光谱中，横坐标为波长（或频率），纵坐标为发光相对强度。 发射光谱常分为带谱和线谱，有时也会出现既有带谱、又有线谱的情况。发射光谱的获得方法：先把第一单色器的波长固定，使激发的λex不变，改变第二单色器波长，让不同波长的光扫描，测定它的发光强度，以I为纵坐标，λem为横坐标得图谱即荧光物质的发射光谱;从曲线上找出最大的λem。 (3)荧光强度与荧光物质浓度的关系 用强度为I0的入射光，照射到液池内的荧光物质时，产生荧光，荧光强度If用仪器测得，在荧光浓度很稀(A0.05)时，荧光物质发射的荧光强度If与浓度有下面的关系：If=KC。 三、实验试剂和仪器