全国临床检验操作规程

全国临床检验操作规程（第3版）

精液检查

一．标本收集

1.在3个月内检查2次至数次，二次之间间隔应>7天，但不超过3周。

2.采样前至少禁欲3天，但不超过7天。

3.采样后1h内送到检验科。

4.用清洁干燥广口塑料或玻璃小瓶收集精液，不宜采用避孕套内的精液。某些塑料容器具有杀精子作用，但是否合适应事先做实验。

5.应将射精精液全部送检。

6.传送时温度应在20~40℃。

7.容器必须注明患者姓名和（或）识别号（标本号或条码），标本采集日期和时间。

8.和所有体液一样，精液也必须按照潜在生物危害物质处理，因为精液内可能含有肝炎病毒、人类免疫缺陷（病毒）和疱疹病毒等。

二．一般性状检查

一般性状检查包括记录精液量、颜色、透明度、粘稠度和是否液化。

1.外观正常精液呈灰白色或乳白色，不透明。棕色或红色提示出血。黄色可能服用某种药物。精子浓度低时精液略显透明。

正常精液是一种均匀黏稠的液体，射精后立即凝固，30 min后开始液化。若液化时间超过60 min考虑为异常，应记录这种情况。正常精液可含有不液化的胶冻状颗粒。

2.量用刻度量筒或移液管测定。正常一次全部

射精精液量约2~5 ml。精液量过多或过少是不育的原因之一。

3.黏稠度在精液全部液化后，用Pasteur滴管吸入精液，然后让精液依靠重力滴落，并观察拉丝长度。正常精液呈水样，形成不连续小滴。黏稠度异常时，形成丝状或线状液滴（长度大于2 cm）。也可使用玻璃棒或注射器测定黏稠度。

4.酸碱度用精密试带检查。正常人pH为7.2~8.0，平均7.8。

三．精子存活率

精子存活率（motility）用活精子比例来反映。

1.伊红染色法

【试剂】

5 g/L伊红Y染色液：伊红Y 0.5 g，加生理盐水

至100 ml。

【操作】

（1）在载玻片上加新鲜精液和伊红溶液各1

滴，混匀后，加上盖玻片，30 s后在高

倍镜下观察，活精子不着色。死精子染

成红色。

（2）计数200个精子，计算未着色（活精子）的百分率。

2.伊红-苯胺黑染色法

【试剂】

（1）10 g/L伊红Y染色液：伊红1 g，加蒸馏水

至100 ml。

（2）100 g/L苯胺黑染色液：苯胺黑10 g，加蒸

馏水至100 ml。

【操作】

（1）取小试管，加新鲜精液和伊红溶液各1滴，混匀。

（2）30 s后，加苯胺黑溶液3滴，混匀。（3）30 s后，在载玻片上，加精液-伊红-苯胺黑混合液1滴，制成涂片，待干。

（4）油镜下观察，活精子为白色，死精子染成红色，背景呈黑色，计数200个精子，

计算未着色活精子的百分率。

3.精子低渗膨胀试验（HOS）

【试剂】

膨胀液：枸橼酸钠0.735 g，果糖1.351 g，加蒸馏水至100 ml。分装，- 20℃冷冻保存，使用前解冻，并充分混匀。

【操作】

（1）取小试管，加1 ml膨胀液，37℃预温5 min。

（2）加0.1 ml液化精液，轻轻搅匀，在37℃孵育至少30 min。

（3）在相差显微镜下观察精子，膨胀精子为尾部形状发生变化的精子，即活精子。

计数200个精子，计算膨胀精子的百分

率。

【参考区间】

在排精30~60 min内，约有70%以上精子应为活动精子。精子低渗膨胀试验应有60%以上精子出现尾部膨胀。

【附注】

（1）如室温低于10℃时，应将标本先放入37℃温育5~10 min后镜检。

（2）某些标本试验前就有尾部卷曲的精子，在HOS试验前，计算未处理标本中尾部

卷曲精子的百分数，实际HOS试验结果

百分率就等于测定值减去未处理标本中

尾部卷曲精子百分率。

（3）HOS也是精子尾部膜功能试验。

四．精子活力

WHO推荐一种无需复杂设备而能进行简单精子活力（activity）分级的方法。

【操作】

取10 μl标本涂片，连续观察至少5个视野，对200个精子进行分级，首先计数a级和b级精子，随后在同一视野内计数c级和d级精子。【结果判断】

根据下述标准把精子活力分为a、b、c、d四级。a级：快速前向运动：37℃时速度≥25 μm/s，或20℃时速度≥20 μm/s（25 μm大约相当于精子5个头部的长度，或半个尾部的长度）。

b级：慢速或者呆滞的前向运动。

c级：非前向运动（＜5 μm/s）。

d级：不动。

【参考区间】

正常精液采集后60 min内，a级+b级精子达50%以上。

五．精子计数

【试剂】

精子稀释液：碳酸氢钠5 g，40%甲醛溶液1 ml，

蒸馏水100 ml，待完全溶解过滤后使用。

【操作】

1.于小试管内加精子稀释液0.38 ml，吸液化精

液20μl，加入稀释液内摇匀。

2.充分摇匀后，滴入改良Neubauer血细胞计数

池内，静置1~2 min，待精子下沉后，以精

子头部作为基准进行计数。

3.如每个中央方格内精子少于10个，应计数所

有25个中方格内的精子数。

4.如每个中央方格内精子在10~40个，应计数

10个中方格内的精子数。

5.如每个中央方格内精子多于40个，应计数5

个中方格内的精子数。

【结果判断】

精子数= 计数结果* 25 * 1 * 20 * 103/ml 计数中方格数计数池高度

= 计数结果* 1 * 5 * 105/ml

计数中方格数计数池高度

【参考区间】

正常男性≥20 * 106/ml

【附注】

1.收集精液前避免性生活3~7天。收集精液标

本后应在1 h内检验，冬季应注意保温。

2.出现一次异常结果，应隔1周后复查，反复

查2~3次方能得出比较正确的结果。

3.如低倍镜、高倍镜检查均无精子，应将精液

离心沉淀后再涂片检查，如两次均无精子，

报告“无精子”。

六．精子形态观察

【试剂】

改良巴氏染色液、Shorr染色液、Diff-Quik快速染色液：商品化染色液一般质量均佳，但实验室也可自行配制。

【操作】

1.在载玻片上滴1滴精液，约5~20μl，采用

压拉涂片法或推片法制片。

2.待干后，巴氏染色法用等量95%乙醇和乙醚

混合液固定5~15 min；Shorr染色法用75%乙醇固定1 min；Diff-Quik快速染色法用甲醇固定15 s。

3.作改良巴氏、Shorr或Diff-Quik染色，然后

在油镜下观察。

4.精子头部顶体染成淡蓝色，顶体后区域染成

深蓝色，中段染成淡红色，尾部染成蓝色或淡红色，细胞质小滴位于头部后面或中段周围，巴氏染色染成绿色。

【结果判断】

评估精子正常形态时应采用严格标准，只有头、颈、中段和尾部都正常的精子才正常。精子头的形状必须是椭圆形，巴氏染色精子头部长4.0~5.0μm，宽 2.5~3.5μm，长宽之比应在1.50~1.75，顶体的界限清晰，约占头部的40%~70%。中段细，宽度<1μm，约为头部长度的1.5倍，且在轴线上紧贴头部，细胞质小滴应小于正常头部大小的一半。尾部应是直的、均一

的，比中段细，非卷曲，其长约为45μm。

所有形态学处于临界状态的精子均列为异常。异常精子可有：①头部缺陷：大头、小头、锥形头、梨形头、圆头、无定形头、有空泡头、顶体过小头、双头等；②颈段和中段缺陷：颈部弯曲、中段非对称地接在头部、粗的或不规则中段、异常细的中段等；③尾部缺陷：短尾、多尾、发卡形尾、尾部断裂、尾部弯曲、尾部宽度不规则、尾部卷曲等。

【参考区间】

正常人精液中正常形态者≥30%（异常精子应少于20%，如超过20%为不正常）。

七．精子凝集

精子凝集是活动精子以各种方式，如头对头，尾对尾或头对尾等彼此粘在一起。以分级方式报告，从“-”（没有凝集）~“3+”（所有可动的精子凝集到一起）。凝集的存在，提示可能为免疫因素引起不育。

八．非精子细胞

精液含有的非精子细胞成分，成为“圆细胞”，这些细胞包括泌尿生殖道上皮细胞、前列腺细胞、生精细胞和白细胞。正常人精液中：圆细胞<5*106/ml。

正常精液中白细胞，主要是中性粒细胞，数量不应超过1*106/ml。过多提示感染，为白细胞精子症。

九．其他成分

精液中可以有结晶体、卵磷脂小体、淀粉样

体、脂滴、脱落上皮细胞等。

十．临床意义

1．正常精液呈灰白色，久未排精者可呈淡黄色；离体30 min后，完全液化。根据精液检查结果，临床上常用于诊断男子不育症及观察输精管结扎术后的效果。

2．正常精子活力一般在a级≥25%。如活力a 级<25%；a级+b级<50%可成为男性不育的原因。3．精索静脉曲张症患者精液中常出现形态不正常的精子。

4．血液中有毒性代谢产物、接触铅等污染物、应用大剂量放射线及细胞毒药物等可使精子形态异常。

前列腺液检查

一．标本收集

临床医师作前列腺按摩术后，采集标本于清洁玻片上，立即送检。

二．检查内容

记录液体颜色、是否混有血液、有无脓块等。湿片镜检，高倍镜下观察白细胞、红细胞、卵磷脂小体，其次为上皮细胞、精子、淀粉样体等。革兰染色后检查细菌。

三．报告方式

1．卵磷脂小体报告在高倍视野中分布数量。2．白细胞、红细胞报告方式与尿液相同。

3．如找到精子、上皮细胞应报告。

【参考区间】

正常人卵磷脂小体为多量或满视野；白细胞<10个/HP；红细胞<5个/HP。

【临床意义】

前列腺炎时，白细胞增多，可找到细菌，卵磷脂小体常减少。前列腺癌时，可有血性液体，镜检见多量红细胞，细胞学检查可见癌细胞。前列腺患滴虫感染者亦可找到滴虫。