各种缓冲液的配制方法-60244

各种缓冲液的配制方法

Na2HPO4-柠檬酸钠缓冲液

24。2

柠檬酸. H2O，分子量=210.14 0.1mol/L溶液含21.01g/L

2

柠檬酸钠. 2H2O，分子量=294.12；0.1mol/L溶液含29.4 g/L

2

（1）醋酸盐溶液的配制：

醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.6)

取醋酸钠5.1g,加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml,即得。

醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.7)

取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml，即得。

醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.8)

取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液0.5ml,再加水稀释至1000ml，即得。

醋酸－醋酸钠缓冲液(pH4.5)

取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml,即得。

醋酸－醋酸钠缓冲液(pH4.6)

取醋酸钠5.4g,加水50ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至4.6，再加水稀释至100ml，即得。

醋酸－醋酸钠缓冲液(pH6.0)

取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml，即得。

用醋酸和醋酸钠配制的缓冲溶液的PH=PKa+lg[C(NaAc)/C(HAc)]（在此，C(HAc)指醋酸的浓度，C(NaAc)指醋酸钠的浓度,Ka是醋酸的解离常数=1.8*10-5（1.8乘10的-5次方），PKa=-lgKa=4.75，将PH=5.5代入，可得C(NaAc)/C(HAc)=5.6 通常我们配制时会使C(HAc)=0.1mol/L，或是C(HAc)=0.2mol/L等。若是配制C(HAc)=0.1mol/L，则C(NaAc)=0.56mol/L 称量醋酸钠固体质量为82*0.56=46克量取冰醋酸体积为0.1*1000/17.5=5.7mL。将称好的醋酸钠和量好的冰醋酸加入1000mL水中溶解、搅拌均匀即可。当然若想配制其它的浓度，也可照公式计算即可，通常缓冲溶液不能配的太稀，否则缓冲能力要下降，太浓的话又浪费试剂。

于水中，稀释至500ml。

242

NaH2PO4 . 2 H2O ,分子量=156.03，0.2mol/L溶液含31.21g/L

NaH2PO4 . H2O,分子量=138.03，0.2mol/L溶液含27.6g/L

Na2HPO4 .12 H2O,,分子量=358.22，0.2mol/L溶液含71.64g/L

磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法

0.01M PBS

PBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4，pH 7.2)

PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L

称7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4)和1.8g K2HPO4，溶于800 ml 蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1 L。保存于4℃冰箱中即可。需要注意的是，通常所说的浓度0.01 M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。

母液的配制：

0.2M Na2HPO4：称取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水

0.2M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水

各种浓度PB(pH=7.4)的配制：

先配0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4，81ml 0.2mol/L 的Na2HPO4, 即可。

然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：

0.1M PB（PH=7.4）：取500ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。

0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。

0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至1000ml 即可。

若需要NaCl的话，加入NaCl 至0.9%（g/100ml）即可。

另：其它各种另PH值的0.2M PB（100ml)配方：

pH 0.2M NaH2PO4（ml）0.2M Na2HPO4（ml）

5.7 93.5

6.5

5.8 92 8

5.9 90 10

6.0 8

7.7 12.3

6.1 85 15

6.2 81.5 18.5

6.3 7

7.5 22.5

6.4 73.5 26.5

6.5 68.5 31.5

6.6 62.5 3

7.5

6.7 56.5 43.5

6.8 51 49

6.9 45 55

7.0 38 62

7.1 33 67

7.2 28 72

7.3 23 77

7.4 19ml 81ml

7.5 16 84

7.6 13 87

7.7 10.5 90.5

7.8 8.5 91.5

7.9 7 93

8.0 5.3 94.7

0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法

称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4℃冰箱中。

需要注意的是，通常所说的浓度0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。PH 7.6 7.4 7.2 7.0

H2O 1000 1000 1000 1000

NaCl 8.5 8.5 8.5 8.5

Na2HPO4 2.2 2.2 2.2 2.2

NaH2PO4 0.1 0.2 0.3 0.4

根据经验来看，新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间，可是在温度的影响下，尤其在夏天，其电离常数发生了改变，在经过昼夜的时间后，PH值会明显改变（我亲自测过偏酸）。所以做实验的同学可要注意了，PH值可能会影响实验结果，甚至可能导致阴性。所以务必记得这个时候和天气，要加强实验条件控制问题。每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS，如果发生偏酸或偏碱，注意重新换新液。

PBS缓冲液

称取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。

PBST缓冲液

取300μl Tween-20 加入PBS 100ml中，混匀后即刻使用。现用现配。

如果是把所有固体加大十倍，配置为浓缩液，工作时候十倍稀释，那么，在刚配好浓缩液时，PH在6.5左右，明显偏酸。不能用盐酸调。虽然可以用氢氧化钠颗粒调，但是有更方便的方法。

十倍稀释以后，PH自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取少量试一试，配好之后再测一次~

PH8.0的PBS配方详细

1. NaCl 137mmol/L，KCl

2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 滴加浓盐酸将pH值调节至8.0，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。

4. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

0.05mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution，PBS)的配制：

甲液：0.05mol/L Na2HPO4溶液：称取磷酸氢二钠9.465g 7.099g,加蒸馏水至1000ml ;

乙液：0.05mol/L KH2P04溶液: 称取磷酸二氢钾, 9.07g 6.803g,加蒸馏水至1000m1。

将甲乙液分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:

pH 甲液ml 乙液mI

5.29 2.5 97.5

5.59 5.0 95.0

5.91 10.0 90.0

6.24 20.0 80.0

6.47 30.0 70.0

6.64 40.0 60.0

6.81 50.0 50.0

6.98 60.0 40.0

7.17 70.0 30.0

7.38 80.0 20.0

7.73 90.0 10.0

8.04 95.0 5.0

你要配制pH=6.8的PBS，可用甲、乙液各50ml混合即可。

2472

硼酸，分子量=61.84,0.2mol/L溶液含12.37g/L

硼砂易失去结晶水，必须在带塞得瓶中保存；硼砂溶液也可以用半中和的硼酸溶液代替

溶于水中，稀释至500ml