SDS-PAGE胶回收

蛋白胶回收步骤：

（1）制作浓缩胶时，不插梳子（浓缩胶高度适当降低），或只插只有两个泳道的，一个小泳道点蛋白marker（预染，有颜色的），另外大的全部点目的蛋白样品。

（2）待跑完电泳后，除去浓缩胶，用高浓度的金属盐浸泡胶（本人只用过饱和硫酸铜。SDS 和金属离子可以形成沉淀）。15s内，胶即可分为白色和无色部分（会有蓝色本底），将无色部分切下，这个为目的切目的条带，尽量将无关的剔除干净

（3）用EDTA盐浸泡清洗，除去金属离子，直至胶变为无色。

（4）用dd water清洗胶；

（5）用20%乙醇清洗；

液氮研磨即可直接用来免疫。

我换了种方法，锌-咪唑染色方法，效果非常好，你可以试试：硫酸锌75mM ，咪唑75mM，氯化钠200mM，效果很好。

把胶装进透析袋里，封好

扔电泳槽里电泳半小时

反接电源1分钟

再把透析袋里的液体用丙酮沉淀一下就行了

直接把它切下来!

1:你可以把它放入缓冲液后撵碎越碎越好!加热!利用扩散使它出来,胶碾细了可以注射就行了，我还见过连考蓝都没脱掉就去免疫的呢!

2:也可以放在透析袋中,放入水平电泳槽电压100,电泳4-6小时，在停止电泳前反向电泳15分钟。这样蛋白就在透析袋里的缓冲液里，可以通过透析换缓冲液或浓缩

3:六一卖电洗脱估计630元左右也是做这用的!

请参看《蛋白质技术手册》108页

一块10*10的MINI胶，一次也可以回收1mg蛋白或更多，前提是你的目标蛋白不要太杂

电洗脱得收率在70%左右。如果你不要活性，且是包含体（抗原）胶回收不需要复性，跑变性电泳就可以，只要你能跑成一条带就行，实际上粗纯的包涵体可以直接用LOADING BUFFER 煮溶上样

免疫动物的抗原可以用变性的，检测用的抗原自然也可以。

反向电泳我估计是保证蛋白质游离，否则可能都吸附在透析袋上，这是我的猜测，２句话，胶碾细了可以注射就行了！甚至带着胶打！

你如果目的蛋白的量还可以，也可以不考染，金属离子染色法，在坛子里也有！不用脱色也方便。

如果你要保证活性你要跑非变性电泳，方法坛子里也有。

最后你把袋里的溶液浓缩一下ok了!(对了袋子的截流量最好不要大过分子量的1/3)!

SDS-PAGE回收蛋白的方法：

1.先要大量上样，配好分离和浓缩胶后不要插梳子，其他电泳条件同。

2.跑完胶后，将胶放入缓冲液中冲洗，KCl染色液染色后，可以看到一条明显的白色条带，就是你的目的蛋白（无目的蛋白的空白呈透明状），切下谜底带，将其用碾磨棒碾碎，在其中适当（尽量少加，不要超过500 ul/块胶）加入PBS或其他缓冲液，在四度放置过夜或更长时间。

3.蛋白浸出后5000-10000 rpm 离心10 min ，取上清测蛋白浓度，如浓度过高可再稀释，这样也可以直接去免疫。

本方法只适用于10 kd 以上蛋白的切胶回收，太小或表达量底目的蛋白条带无法辨认。经过时间经验证实该方法可行！

kcl染色液配方：1 mM DTT+ 0.25 M KCL+0.01 M 乙酸钠，溶于100 ml 水。