手工免疫检验项目标准操作程序

SOP_13-6 手工免疫检验项目标准操作程序

一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。 二、适用范围：免疫学检验项目。 三、操作人员：检验科授权工作人员。 四、项目内容：

抗链球菌溶血素“O ”(ASO) 类风湿因子(RF) 梅毒（TP ）

抗链球菌溶血素“O ”(ASO)

【方法】快速胶乳法。

【用途】血清中ASO 的测定，用于链球菌感染的诊断。

【原理】高滴度的病人血清被适量的溶血素中和了正常水平的抗体后还有多余ASO ，这些多余的抗体即与ASO 胶乳试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。ASO 胶乳试剂系羚化聚苯乙烯胶乳与溶血素“O ”共价交联的产物。

【试剂】以1g ／L 叠氮钠防腐。

1．溶血素“0”溶液2瓶：每瓶可测定100人次，用时摇匀。 2．ASO 胶乳试剂2瓶：每瓶可测定100人次，用时摇匀。 3．阳性控制血清1瓶：已稀释灭活，可直接使用。 4．阴性控制血清1瓶：已稀释灭活，可直接使用。 【操作】

1．血清标本用生理盐水1：15稀释(血清0．1ml+生理盐水1．4m1)。

2．在反应板(和妊娠诊断胶乳试剂使用的相同)各格子上分别滴加稀释待检血清1滴(约50 l)以及阳性和阴性控制血清1滴，再各滴加溶血素“0”溶液

1滴，轻轻摇动1分钟，使其充分混匀，均匀分布于方格内。

3．每格各滴加ASO 胶乳试剂1滴，轻轻摇动3分钟(室温为18～20℃)，将反应板平放在实验桌上，有清晰凝集者为阳性，不出现清晰凝集者为阴性，阴性者的ASO ≤250IU ／ml 。

4．阳性者的1：15稀释血清，进一步稀释为1：30和1：60，再重复步骤2和3，出现凝集的血清稀释度和ASO 滴度问的关系大致如下：

【附注】

1．ASO胶乳加入后，轻轻摇动到本说明指定的时间时应立即记录结果，超过规定时间后再出现的凝集不列为阳性。阳性控制血清应在本说明指定的时间内出现清晰凝集，但不能将阳性控制血清出现凝集的时间视为判断结果的时间界限。

2．溶血、脂血、高胆红素血症、高胆固醇血症、类风湿因子阳性以及标本被细菌轻度污染都不会影响本试验的结果。

3．胶乳试剂不可冰冻，放置在4℃冰箱保存有效期可达1年，用前应该摇匀。

4．室温降低IO℃，在胶乳试剂加人后应延长反应时间1分钟；室温升高10℃，应缩短反应时间1分钟。

5．所用的滴管口径以及装胶乳试剂的塑料瓶的口径应同样大小，保证液滴大小一致。

6．本试剂盒以丹麦Copenhagen斟立血清研究所的世界卫生组织标准品标定。国际权威机构德国Heidelberg大学等系统鉴定本试剂后的评价报告指出：“此试剂的质量相同于欧洲市场上同类产品质量，能半定量测定血清中的ASO”。

对所有阳性血清应进行半定量测定，才能对临床医生的判断有更大的帮助。

类风湿因子(RF)

【方法】免疫胶乳凝集法。

【原理】类风湿因子(RF)是一种抗“自身IgG”的抗体(亦称抗球蛋白抗休)。它具有与人变性免疫球货白结合的能力。利用人IgG致敏的胶乳与病人血清反应，根据产生凝集与否，可以测定RF及其滴度。

【特点】本试验具有操作简单，结果清晰，比曙红胶乳试验更准确、敏感的特点，根据RF的滴度可用于类风湿疾病的诊断。

【试剂】

1．胶乳试剂。

2．阳性控制血清(可直接使用)。

3．阴性控制血清(可直接使用)。

【试验方法】血清用生理盐水作1：20稀释，加l滴稀释血清(约0．05m1)和l滴本胶乳试剂于玻璃板的小方格内，立即持续转摇均匀。在1～3分钟内出现均匀凝集颗粒着为阳性，无凝集者为阴性。操作程序如下图：

阳 性 阴 性 阳 性 阴 性 【注意事项】

1、阳性控制血清是用来考核胶乳抗原质量的，在本说明指定时间内出现清晰的凝集，但不能将阳性控制血清出现凝集的时间视为判断结果的时间界限，也不能将阳性控制血清出现的凝集程度作为区分阳性和阴性的界限，不必每次测定都使用控制血清，有需要时使用。

2、胶乳试剂不可冰冻，放置在4℃冰箱保存，有效期可达一年，用前应该摇匀，并预温到室温。

3、本试验用的滴管口径和装胶乳试剂的塑料瓶的口径应同样大小，保证液滴大小一致。

梅毒甲苯胺红不加热血清试验

【原理】

梅毒患者血清中存在着能与VDRL 抗原发生凝集的反应素，本试剂利用这一原理，将VDRL 抗原重悬于含有特制的甲苯胺红溶液中制成。当待测血清或血浆中存在反应素，即与其发生凝集反应，出现肉眼可见的红色凝块。 【试剂盒组成】上海荣盛生物药业有限公司 1．TRUST 试剂 2.5m l ×1瓶 2．梅毒阳性对照 1ml ×1瓶 3．梅毒阴性对照 1ml ×1瓶 4．纸卡 15张

5．专用滴管、针头、橡皮头 1套 6．说明书 1份

【测定】

1.分别吸取50微升梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加在纸卡的两个圆圈中。

2.取待检血清或血浆50微升均匀铺加在纸卡的另一圆圈中。

3.用盒中的专用针头、滴管吸取TRUST试剂，分别垂直滴加1滴于上述血清中。

4.用RPR旋转仪水平摇动纸卡8分钟，100转/分钟，然后3分钟内在光线充足处判断结果。【结果判断】

1阴性反应（—）：可见均匀的抗原颗粒而无凝集物。

2弱阳性反应（+~++）：可见较小的红色凝集物。

3阳性反应：（+++~++++）：可见中等或较大的红色凝块，溶液清亮。

【注意事项】

1.试验条件：23-29℃的环境下进行。

2.TRUST试剂在使用前应充分摇匀。

3.血清中加入试剂后充分振荡使其均匀。

4.定性试验呈弱阳性或阳性者必须做定量试验才能了解患者血清中的抗体滴度，具体方法如

下：将待检血清用生理盐水作倍比稀释（原血清1:2、1:4、1:8、1:16、1:32），然后对每个稀释度的血清按定性试验方法再进行测定并判断结果。

5.定性试验呈弱阳性或阳性反应者，需结合临床进行综合分析判断，同时再做螺旋体试验加以

确诊。因为本试验是梅毒非特异性反应素试验，麻风等患者可出现生物学假阳性反应。

6.试剂盒中的专用滴管、针头只能用来吸取TRUST试剂，不能用来吸取血清或作他用。

7.本试试盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。

8.贮藏条件：试剂盒应置2-8℃中避光保存，有效期一年。