病原微生物实验室的消毒与灭菌
病原微生物实验室的消毒与灭菌
消毒和灭菌是保护人员和环境不被病原微生物感染和污染的重要环节。含有病原微生物的废物必须经过灭菌才能作为普通废物处理；对操作中可能产生的迸溅或泄漏，必须通过消毒达到对病原微生物的杀灭，对操作人员进行保护，对环境保护。消毒和灭菌的基本常识对于实验室生物安全是至关重要的。
消毒是通过物理或化学手段杀灭或清除病原微生物，但不一定能杀死所有细菌芽孢的方法。灭菌是杀灭物体上的所有微生物，包括病原性和非病原性微生物、细菌繁殖体和芽孢的一切方法[1]。消毒与灭菌的方法可分为物理方法和化学方法两大类：①物理消毒灭菌法：包括热力法、射线法和过滤法三种。超声波、干燥、冷冻也能杀菌抑菌。热力灭菌法是利用热能去变性蛋白质或核酸、破坏细胞膜或胞膜来实现杀死微生物。分干热灭菌和湿热灭菌两大类。②化学消毒灭菌法：消毒剂在常用的浓度下，只对细胞的繁殖体有效，对其芽孢则需要提高消毒剂的浓度和延长作用时间[2]。
1 物理消毒灭菌法
1.1热力灭菌法
1.1.1干热灭菌法常用的干热灭菌法有：干烤、烧灼、焚烧。焚烧常用于可废弃的污染物及人或动物的尸体的灭菌；烧灼用于微生物实验室内接种微生物所用器材的灭菌，也可用于外科手术器材的应急处理。干烤灭菌可用于耐高温的玻璃制品、金属制品、糖瓷制品、油劑等的灭菌。干烤灭菌是在干烤箱内进行的。使用烤箱灭菌时，要求器械和用品应洗净、凉干或擦干，物品包装不易过大，粉剂和油剂厚度不宜超过1.3cm，箱内装载物品不宜超过烤箱高度的2/3，物品间应留有空隙。灭菌时间应从温度升高到要求时算起，一般170℃时需60 min，160℃时需120 min。
1.1.2常用的湿热灭菌方法煮沸、流通蒸汽、低热消毒（巴氏消毒）、间歇灭菌（廷德氏灭菌）、高压蒸汽灭菌等方法。高压蒸汽灭菌法可杀灭包括芽孢在内的所有微生物，是灭菌效果最好、应用最广的灭菌方法。本实验室使用的是全自动立式高压灭菌器，在103.4KPa蒸汽压下，温度达到121.3℃，维持15～20 min。适用于普通培养基、生理盐水、手术器戒、玻璃容器及注射器、敷料等物品的灭菌。
1.2射线灭菌法实验室常用的射线是紫外线，杀菌作用最强的波段是250～260 nm。当微生物被紫外线照射可引起细胞内成分，特别是核酸、原浆蛋白与酶的化学变化，从而使之死亡。紫外线可以杀灭各种微生物。紫外线灯的实际应用是对空气的消毒，用紫外线消毒空气是一种简单、方便、廉价、效果可靠的方法，可用于病房、手术室、微生物实验室、无菌车间等场所的空气消毒。本实验室每次微生物实验课后都要用紫外线灯照射30 min，杀菌效果非常好。紫外线可损伤皮肤和角膜，应注意防护。
微生物实验报告(微生物形态观察,分布,灭菌消毒)
微生物实验 微生物实验 细菌形态观察 细菌分布 消毒灭菌
细菌形态观察 一、实验目的 1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护 2.掌握细菌的三种形态 3.掌握临床常见细菌的形态及染色 4.掌握细菌的特殊结构 5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点 二、实验原理 1. 普通光学显微镜（油镜）的使用 1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头 2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时 停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰 3. 根据需要调节显微镜亮度 2. 普通光学显微镜的维护 1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前 2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最 后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头 3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内 4.做好使用记录 3．微生物知识 1．细菌按形态分类： 球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等） 杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等） 螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等） 2．细菌的基本结构 细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体 3．细菌的特殊结构 荚膜：如肺炎双球菌 鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。如：变形杆菌为周毛菌 菌毛 芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌 4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。 原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体 真核类：真菌、原生动物、显微藻类 非细胞类：病毒、亚病毒 5．真菌 单细胞：圆形、芽生孢子。如：酵母菌
3细菌的分布与消毒灭菌带答案2016.10.30
第三章细菌分布与消毒灭菌 一、单5选1 1.杀灭物体上所有微生物的方法称为: A.消毒 B.灭菌 C.无菌 D.防腐 E.无菌操作 2.杀灭物体上病原微生物的方法称为: A.消毒 B.灭菌 C.无菌 D.防腐 E.无菌操作 3.微生物学实验过程中防止污染与感染的方法称为: A.消毒 B.灭菌 C.无菌 D.防腐 E.无菌操作 4.消毒的含义是: A.杀灭物体上所有的微生物 B.杀死物体上的病原微生物 C.使物体上无活菌存在 D.杀死含芽胞的细菌 E.抑制微生物生长繁殖 5.灭菌的概念是: A.杀灭物体上所有微生物 B.杀死物体上的病原微生物 C.抑制微生物生长繁殖的方法 D.杀死细菌繁殖体 E.使物体不含活菌 6.防腐的概念是: A.杀灭物体上所有的微生物 B.杀死物体上的病原微生物 C.使物体上无活菌存在 D.杀死含芽胞的细菌 E.抑制微生物生长繁殖 7.无菌是指: A.杀灭物体上的所有微生物 B.杀死物体上的病原微生物 C.物体上无活的微生物存在 D.杀死含芽胞的细菌 E.抑制微生物生长繁殖 8.下列哪项可经巴氏消毒法灭活: A.牛奶 B.空气 C.手术器械 D.基础培养基 E.物体表面 9.巴氏消毒法的温度和时间是:
A.100℃ 10分钟 B.121℃ 15分钟 C.80℃ 10分钟 D.62℃ 30分钟 E.71.7℃ 30分钟 10.高压蒸汽灭菌法的参数为： A.100℃10～20分钟 B.121.3℃15～20分钟 C.80 ℃ 5～10分钟 D.62℃30分钟 E.71.7℃15～30分钟 11.正常微生物群是指: A.广泛存在于正常人体内脏的微生物群 B.存在于正常人体所有腔道的微生物群 C.正常时对人体无害也无利的微生物群 D.存在于出生前后的正常人群体表的微生物群 E.存在于正常人体体表的微生物群 12.条件致病微生物的致病条件不包括: A．寄居部位的改变 B．免疫功能降低 C．微生物群分布失调D．长期大量应用广谱抗菌药，正常微生物群被抑制 E．使用有关的微生态制剂 13.正常微生物群对人体的生理作用不包括: A．生物拮抗 B．营养作用 C．抗炎症作用 D．免疫作用 E．抗衰老作用 14.大肠杆菌通常寄生于正常人体的: A．皮肤 B．口腔 C．外耳道 D．肠道 E．尿道 15.幽门螺杆菌常寄生于人体的部位是： A．胃 B．口腔 C．皮肤 D．外耳道 E．尿道 16.因长期大量使用抗生素引起的腹泻属于: A．外源性感染 B．微生物失调 C．交叉感染 D．环境污染感染 E．潜伏感染 17.治疗微生物群失调症可使用: A．维生素 B．纤维素 C．抗生素 D.类毒素 E.微生物制剂 18.*随着年龄的增长，肠道内明显减少的细菌是: A.双岐杆菌 B．乳酸杆菌 C．大肠杆菌 D．葡萄球菌 E．肠球菌
实验室灭菌指南
实验室灭菌指南 消毒灭菌方法 目前常用的消毒灭菌方法多采用物理方法(如干热灭菌法、湿热灭菌法、过滤除菌法、射线杀菌法等)和化学方法(消毒剂、抗生素)两大类。 1干热灭菌法 是利用恒温干燥箱内120oC～150oC的高热，并保持90～120分钟，杀死细菌和芽孢，达到灭菌目的的一种方法。 主要适用于不便在压力蒸汽灭菌器中进行灭菌，且不易被高温损坏的玻璃器皿、金属器械以及不能和蒸汽接触的物品的灭菌。用此方法灭菌的物品干燥，易于贮存。 酒精灯火焰烧灼灭菌法也是属于干热灭菌的方法之一，在进行动物细胞体外培养工作时，常须利用工作台面上的酒精灯火焰对金属器具及玻璃器皿口缘进行补充灭菌。 2湿热灭菌法 压力蒸汽湿热灭菌法是目前最常用的一种灭菌方法。它利用高压蒸汽以及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的穿透力，使菌体蛋白质凝固变性而使微生物死亡。 适合于布类工作衣、各种器皿、金属器械、胶塞、蒸馏水、棉塞、纸和某些培养液的灭菌。高压蒸汽灭菌器的蒸汽压力一般调整为1.0～1.1kg/cm2，维持20～30min即可达到灭菌效果。 3射线灭菌法 利用紫外线灯进行照射灭菌的方法。紫外线是一种低能量的电磁辐射，可以杀灭多种微生物。紫外线的作用机制是通过对微生物的核酸及蛋白质等的破坏作用而使其灭活。 适合于实验室空气、地面、操作台面灭菌。灭菌时间为30min。用紫外线杀菌时应注意，不能边照射边进行实验操作，因为紫外线不仅对人体皮肤有伤害，而且对培养物及一些试剂等也会产生不良影响。 4过滤除菌法 是将液体或气体通过有微孔的滤膜过滤，使大于滤膜孔径的细菌等微生物颗粒阻留，从而达到除菌的方法。过滤除菌法大多用于遇热易发生分解、变性而失效的试剂、酶液、血清、培养液等。
最新实验室消毒规程
实验室消毒技术规范 一. 适用范围： 本规范适用于实验室器材、检验单、废弃标本及相关人员的消毒。检验科的工作场所分为清洁区、半污染区和污染区。清洁区包括办公室、会议室、休息室、储藏室、培养基室和试剂室；半污染区指卫生通道、更衣室、缓冲间；污染区包括标本收集、存放、处理室、检测室。 二. 消毒原则： 清洁区、半污染区和污染区应分别进行常规清洁、消毒处理。清洁区和污染区的消毒要求、方法和重点有所不同，若清洁区和污染区无明显界限，按污染区处理。 清洁区若无明显污染，应每天开窗通风换气数次，湿式清洁台面、地面1次；污染区在每天开始工作前及结束工作后，台面、地面应用含有效氯250mg/L的含氯消毒液各擦拭1次，空气选用循环风动态消毒法消毒处理，废弃标本应分类进行消毒处理后排放。半污染区环境消毒同污染区，工作衣、帽每周换洗2次，拖鞋每天用含有效溴或有效氯250mg/L的二溴海因或含氯消毒剂浸泡或擦拭1次。所以清洁消毒器材（抹布、拖把、容器）不得与污染区或半污染区共用。工作人员每次下班前应用肥皂流水洗手1min-2min。结核病专业检验室工作人员，每次连续佩戴口罩不得超过4h，工作衣若有明显致病菌污染或从事烈性菌标本检验后，应随时更换，及时进行消毒灭菌。 三. 检验单的消毒： 污染检验单送出前用便携式高强度紫外线消毒器距检验单面不高于 3.0cm缓慢移动，照射3s-5s，必须两面照射；也可用经卫生部批准的专用甲醛消毒器薰蒸消毒。 四. 空气的消毒： 对污染区内明显产生传染性气溶胶的操作（搅拌、研磨、离心等），特别是可通过呼吸道传播又含有高度传染性微生物（炭疽杆菌、分枝杆菌、球孢子菌、组织胞浆菌、军团菌、流行性感冒病毒等）的操作，应在生物安全柜（负压）内进行，使空气经细菌滤器或热力杀菌通道排出室外，柜内形成负压。要求严格无菌的操作如倾倒培养基、菌种转种和细胞转瓶等，应在生物安全柜内进行，
化学消毒灭菌法
护理专业知识备考材料：化学消毒灭菌法 在日常生活中，我们每天遵照“饭前、便后要洗手”等等关于如何讲卫生的好习惯，目的就是减少进入人体的病原微生物，从而降低感染发生率。同样的工作其实每天都在医院进行着，但是要求却更严格，使用范围也更广，包括操作方法、使用要求、所用制剂都极大不同，这也是医院内感染预防和控制的重点任务。这一内容也是考试中的重点和高频考点。所以小编今天就带领大家一起学习医院内化学消毒灭菌法的相关知识点。 首先在学习之前我们要明确关于清洁、消毒与灭菌的概念，只有这样才能更好的理解接下来的内容。 一、概念 1.清洁：是指用物理方法清除物体表面的污垢、尘埃和有机物，其目的是去除和减少微生物，并非杀灭微生物。 2.消毒：是指用物理、化学或生物的方法清除或杀灭环境中和媒介物上除细菌芽孢以外的所有病原微生物，使其达到无害化。 3.灭菌：是指用物理、化学方法消除或杀灭环境中和传播媒介物上的所有微生物，包括致病的和非致病的，也包括细菌的芽孢。 二、化学消毒灭菌法 1.化学消毒剂的种类 (1)灭菌剂：可杀灭一切微生物，包括细菌芽孢，使物品达到灭菌要求的制剂。如戊二醛、环氧乙烷等。 (2)高效消毒剂：可杀灭一切细菌繁殖体，对细菌芽孢有显著杀灭作用的制剂。如过氧化氢、过氧乙酸、部分含氯消毒剂等。 (3)中效消毒剂：仅可杀灭分枝杆菌、细菌繁殖体、真菌、病毒等微生物，达到消毒要求的制剂。如醇类(乙醇最适宜杀菌的浓度是70%～75%)、碘类、部分含氯消毒剂等。 (4)低效消毒剂：仅可杀灭细菌繁殖体和亲脂病毒，达到消毒要求的制剂。如酚类、胍类、季铵盐类消毒剂等。 2.常用化学消毒剂
(1)2%戊二醛：浸泡精密仪器如纤维内镜，使用前加入0.5%亚硝酸钠，可防锈。 (2)环氧乙烷：医疗器械、书本、棉橡胶制品及一次性使用的医疗用品等。 (3)含氯消毒剂：①0.2%浸泡被乙肝病毒、结核杆菌污染的物品;②擦拭桌椅、墙壁、地面;③排泄物的消毒：排泄物5份加含氯消毒剂1份搅拌，放置2～6小时。 (4)过氧化氢：冲洗外科伤口、漱口。 (5)0.01%～0.1%氯己定：又名洗必泰，冲洗阴道、膀胱及伤口黏膜创面。 (6)苯扎溴铵：属于阳离子表面活性剂，可用于手、皮肤、黏膜、环境及物品消毒，常采用浸泡、擦拭、喷洒等方式。 3.化学消毒剂的使用原则 (1)合理使用，必须用时尽量少用，能采用物理方法消毒灭菌的，尽量不使用化学消毒灭菌法。 (2)根据物品的性能和各种微生物的特性选择合适的消毒剂。 (3)严格掌握消毒剂的有效浓度、消毒时间及使用方法。 (4)消毒剂要定期更换、定期检测，调整浓度，易挥发的要加盖。 (5)待消毒物品必须先洗净、擦干。 (6)消毒剂中不能放入纱布、棉花等物，以防降低消毒效力。 (7)消毒后的物品使用前必须先用无菌生理盐水冲净，以免消毒剂刺激人体组织。 (8)熟悉掌握消毒剂的毒副作用，工作人员做好防护。 4.化学消毒剂的常用方法 (1)浸泡法：注意浸泡前要打开物品的轴节或套盖，管腔内要灌满消毒液。不放置纱布、棉花等物，以免因吸附消毒剂而降低消毒效力。 (2)喷雾法：用于空气、地面、墙壁和物品表面的消毒。 (3)擦拭法：用于物品表面或皮肤、黏膜的消毒。 (4)熏蒸法：常用于室内空气消毒，如纯乳酸(每立方米0.12ml)。 好啦，我们知识点总结就到这里啦，大家一定要掌握上述内容，希望我们总结的知识点能够更好的帮助到大家，祝大家顺利通过考试。
细菌的分布与消毒灭菌
第2章细菌的分布与消毒灭菌 学习要点 一、细菌的分布 1. 土壤 主要存在一些自营菌和腐物寄生菌，在自然界物质循环中起重要作用。 土壤中也有一些随着人及动物的分泌物、排泄物及尸体、残骸进入土壤的致病菌，但只有能形成芽胞的致病菌，如破伤风梭菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌、炭疽芽胞杆菌等可长时间存活。 处理被泥土污染的创伤时要特别注意防止破伤风梭菌、产气荚膜梭菌等的感染。 2．水 如被人和动物粪便污染，就可能带上伤寒沙门菌、痢疾志贺菌、霍乱弧菌、致病性大肠埃希菌、钩端螺旋体等。通过水源易引起各种感染，特别是消化道传染病的暴发流行。 3．空气 空气中的细菌是吸附在尘埃微粒上，常见的致病菌有结核分支杆菌、白喉棒状杆菌、百日咳鲍特菌、金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、脑膜炎奈瑟菌、军团菌等，可引起呼吸道传染病或伤口感染。 4．有生命物体的表面和与外界相通的腔道中 这些部位能为细菌生长繁殖提供条件，存在着复杂的细菌群及其它微生物，包括致病菌和非致病菌。 5．无生命物体的表面和与外界相通的内表面 其细菌均来源于土壤、水、空气以及人和动物的污染。 二、消毒与灭菌 是指用物理或化学方法来抑制或杀死外环境中及机体体表的微生物，以防止微生物污染或病原微生物传播的方法。 以下术语常用来表示物理或化学方法对微生物的杀灭程度。 消毒指杀死物体上病原微生物的方法，并不一定能杀灭芽胞或某些非
病原微生物。用以消毒的药品称为消毒剂（disinfectant）。 灭菌指杀灭物体上所有微生物的方法。包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。经过灭菌的物品称“无菌”物品。需进入人体内部的医用器材要求绝对无菌。 防腐防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。细菌一般不死亡。 无菌不存在活菌的意思。防止细菌进入人体或其它物品的操作技术，称为无菌操作。 清洁是指通过除去尘埃和一切污秽以减少微生物数量的过程。是物品消毒、灭菌前必须经过的处理过程，有利于提高消毒、灭菌的效果。1．物理消毒灭菌法 热力灭菌法 高温对细菌具有明显的致死作用。但细菌芽胞对温度的抵抗力较繁殖体强。 (1) 干热消毒灭菌法 ①焚烧：直接点燃或在焚烧炉内焚烧。适用于废弃物品或动物尸体等。 ②烧灼：直接用火焰灭菌，适用于微生物学实验室的接种环、试管口等的灭菌。 ③干烤：利用干烤箱灭菌，一般加热至160℃～170℃经2 h。适用于高温下不变质、不损坏、不蒸发的物品。 (2) 湿热消毒灭菌法 ①巴氏消毒法：用较低温度杀灭液体中的病原菌或特定微生物，以保持食物中不耐热成分不被破坏的消毒方法。今广泛采用加热至71.7℃持续15～30s。 ②煮沸法：一般细菌的繁殖体5min能被杀死。此法常用于消毒食具、刀剪、注射器等。 ③高压蒸汽灭菌法：是一种最有效的灭菌方法。当蒸汽压力达到103.4 kPa(1.05kg/cm2)，温度为121.3℃，如维持15～20min，可杀灭包括细菌芽胞在内的所有微生物。此法常用于培养基、生理盐水、手术器械和敷料等耐高温、耐湿热物品的灭菌，是医院使用最广的灭菌方法。
医院常用消毒与灭菌方法
医院常用消毒与灭菌方法 拖把： 应有明显标识，严格分区使用。 1）一般办公室、病室、治疗室、换药室走廊每次使用后用清水冲洗，悬挂晾干备用。 2）病室、治疗室、换药室等地面有分泌物、血液、排泄物时，先用1000mg/L有效氯适量到在污染地面30min后，用拖把拖干净，再用500mg/L有效氯消毒剂浸泡30min后，清洗干净，晾干备用。 3）传染病区，使用后先消毒，用1000mg/L有效氯消毒液浸泡30分钟，再用水清洗干净，然后用500mg/L有效氯消毒液浸泡30分钟，悬挂晾干备用。 针灸针： 高压蒸汽消毒；一定要消毒彻底，以免交叉感染！ 体温表消毒方法： 1．每周浸泡用肥皂水清洗两次（周一、周四），用75%酒精浸泡,不填加，每周更换两次。 2．遇有传染病人用过的体温表，需用0.05％有效氯消毒半小时，然后用清水洗净晾干，放入酒精浸泡。 3．病人处不可放置体温表，随用随取，及时消毒。 4．每月监测体温表检测，并登记。方法如下：将体温表中的汞柱甩至35℃以下，放入36℃以上、42℃以下水温中浸泡3分钟，取出后体温表中汞柱误差在0.2之间为合格。 血压计终末消毒方法： 1．污染的血压计袖带使用0.05％有效氯即刻消毒，消毒半小时后用清水洗净晾干备用。污染的血压计用0.05％有效氯擦拭消
毒。 2．无法撤掉的要关闭阀门后，再进行消毒。 3．传染病人固定专用血压计，定时每周消毒一次。 4．血压计袖带每周清洁消毒一次，方法如下：用清水或肥皂水清洗后晾干，再用紫外线双面消毒半小时。 简易呼吸器消毒： 1. 接口与面罩用酒精擦拭，球囊污染用肥皂水清洗。 2. 人工呼吸器使用后消毒，避污保存。 3. 气管插管导丝使用后灭菌保存。 呼吸机冷凝水终末消毒： 1．配制0.1%有效氯装在密闭容器中，积水器中冷凝水达1/2满时倾倒，将冷凝水倒入容器中，半小时后倒入卫生间污水系统。 2．呼吸机管路积水瓶处于直立状态，避免冷凝水倒灌 公用水杯、痰杯、拖鞋： 用后使用0.05％有效氯消毒。 便器消毒： 1. 浸泡便器消毒液每日更换，配置成0.1％有效氯完全浸泡再消 毒液中，一小时后清洗晾干备用。 2. 公用便器每次用后消毒，消毒后及时晾干备用。 3. 自备便器每周集中消毒一次。 止血带消毒： 止血带消毒液每日更换，配置成0.05％有效氯，每次使用后完全浸泡在消毒液中，半小时后清洗晾干备用。 雾化器消毒： 1. 使用后用0.05％有效氯擦拭，管道每次使用后用 0.05％效 氯消毒半小时后清洗晾干备用。 2. 一次性雾化管道每次使用后清洁，需60℃以上热水冲洗，面 罩避污保存。
物理消毒灭菌的方法
物理消毒灭菌法 （一）物理消毒灭菌法 1.热力消毒灭菌法：利用热力作用破坏微生物的蛋白质、核酸、细胞壁、细胞膜，导致其死亡，可分为 干热法和湿热法。 （1）燃烧法：属于干热法，是一种简单、迅速、彻底的灭菌方法。 1)用途：①无保留价值的污染物品②金属器械及搪瓷类物品急用，或无条件消毒时，锐利刀剪 除外，以免锋刃变钝。 2)方法：①金属器械可在火焰上烧20秒②搪瓷类容器可倒入少量95%乙醇 (2)干烤法：利用特制的烤箱，热力通过空气对流和介质传导进行灭菌，效果可靠。 （3）煮沸消毒法：属于湿热法，用于耐湿、耐高温的搪瓷、金属、玻璃，橡胶类物品，不能用于外科手术器械的灭菌。从水煮开始计时，5-10分钟可杀灭繁殖体，15分钟可将多数细菌芽胞杀灭，如破伤风杆菌芽胞需煮60分钟才可杀灭，在水中加入碳酸氢钠，配成浓度为1%-2%的溶液时，沸点可达105度，即可增强杀菌作用，又可去除防锈。 注意事项：①物品需全部侵入在水中，物品盖子打开，轴节打开，空腔导管预先灌水，各种大小及形状相同的容器不能重叠②玻璃类物品需用纱布包裹，并在冷水或温水中放入③橡胶类物品需用纱布包好，水沸后放入④如中途加入其它物品，需等再次水沸后开始计时⑤高原地区气压低，沸点低，需适当延长煮沸时间，一般海拔每增高300m，煮沸时间延长2分钟。 （4）压力蒸汽灭菌法：属于湿热法，是一种临床上应用最广泛，效果最为可靠的首选灭菌方法 2.光照消毒法（又称辐射消毒）主要是通过紫外线的杀菌作用，使菌体蛋白发生光解、变性，导致细菌死亡。 （1）日光暴晒法：利用日光的热、干燥、紫外线的作用来杀菌，将床垫、毛毯、书籍、衣服等放在阳光下直射，暴晒6小时可达到消毒效果，中间要定时翻动。 （2）紫外线灯管消毒法：紫外线属于电磁波辐射，常用于空气、物品表面的消毒，杀菌最强的波长范围250-270nm从灯亮5-7分钟开始计时。①空气消毒：有效距离不超过2m，照射时间20-30分钟②物品消毒：有效距离不超过25-60cm，照射时间20-30分钟。 3)注意事项：①保持室内清洁、干燥，室内温度20-40度，相对湿度40%-60%时，紫外线消毒最为宜 ②保持紫外线灯管清洁，一般每2周用无水乙醇擦拭1次，发现有污洉应随时擦拭③保护眼睛和皮肤：紫外线对眼睛和皮肤有刺激作用，易引起眼炎、皮炎且臭氧对人体不利，因此一般不在有人的环境中使用，必须使用时应带防护镜，穿防护衣，或用被单遮盖肢体④紫外线穿透力较差，消毒时物品应摊开或挂起，且定时翻动及保证各表面均受到直接照射⑤如需再次开启，应间隔3-4分钟⑥定期检测紫外线灯管照射强度，一般每隔3-6个月1次，或建立登记卡，使用时间超过1000小时应予以更换⑦定期做空气培养检测消毒效果 (3)臭氧灭菌消毒法：利用臭氧强大的氧化作用进行杀菌。 1)用途：主要用于空气、医院污水、诊疗用水、物品表面的消毒。 2)方法:使用时应关闭门窗，人员离开房间，消毒结束后30分钟方可进入。 3．电离辐射灭菌法(又称冷灭菌)适用于不耐热的物品消毒，如橡胶、塑料、高分子聚合物(一次性注射器、输液输血器等)、紧密医疗仪器、生物医学制品、节育用具及金属等。 4．微波消毒灭菌法微波可杀灭细菌繁殖体、真菌、病毒、细菌芽胞、真菌孢子等各种微生物。常用于食品、餐具的处理，化验单据、票证的消毒，医疗药品、耐热非金属材料及器械的消毒灭菌。不能用于金属物品的消毒。 化学消毒灭菌法 化学消毒灭菌法是利用液体或气体的化学药物渗透到菌体内，使菌体蛋白凝固变性，细菌酶失去活性，导致微生物代谢障碍而死亡，或破坏细胞膜结构，改变其通透性，导致细胞膜破裂、溶解，以达到消毒灭菌的目的。
试验室消毒措施
. 实验室消毒措施 一、工作人员进入工作区须穿工作服，戴工作帽，戴口罩、手套，严格实行实验室操作规程。 二、严格执行无菌技术操作规程，必须做到一人一管一针一巾一带，每接触一个病人前后做好手卫生工作（洗手或快速手消），止血带用后用用后送供应室消毒。 三、无菌物品与非无菌物品分开存放，灭菌包外有消毒指示胶带，注明灭菌日期、有效期、灭菌包名称、操作人员。无菌物品如棉球在有效期内使用，开启后不得超过24小时。 四、检验科工作场所的保洁和消毒 检验科的工作场所分清洁区、半污染区和污染区。清洁区包括办公室、会议室、休息室、和库房；半污染区指卫生通道、更衣室、缓冲间；污染区包括标本的收集、存放、处理室、检测室。清洁区、半污染区和污染区应分别进行常规清洁、1. 清洁区若无明显污染，应每天开窗通风换气数次，湿式清洁台面、地面1次；所有清洁消毒器材（抹布、拖把、容器）不得与污染区或半污染区共用。 2. 半污染区环境消毒同污染区，每天用有效氯2000mg/L含氯消毒液拖把拖地。 3. 污染区在每天开始工作前几结束工作后，台面、地面应用
有效氯2000mg/L含氯消毒剂擦拭1次。当受到明显污染时，先用吸湿材料去除可见的污染物，然后再消毒处理。 . . 五、空气的消毒 1. 标本开闭盖应在生物安全柜（负压）内进行，使空气经细菌滤器或热力杀菌通道排出室外，柜内形成负压。不允许标本开盖离心。 2. 生物安全柜必须保持清洁，每天清洁消毒2次。生物安全柜的紫外线灯每日消毒时间进行登记；紫外线灯管两周用95%酒精擦拭一次；紫外线灯管每半年监测有效强度一次，并按要求记录。 六、器材消毒 除已知无传染性器材外，凡直接接触或间接接触过临床检验标本的器材均视为有传染性，应进行消毒处理。 1. 金属器材 （1）小的金属器材如接种环，用酒精灯烧灼灭菌。当接种 环上有较多污染物时，应先在火焰上方，把接种环烤干后再缓慢伸入火焰烧灼，以免发生爆裂或溅泼而污染环境。 （2）较大的金属器材或锐利到刀剪受污染后不宜烧灼灭菌，可用2%碱性/中性戊二醛溶液浸泡2小时后，水冲洗、沥干，再用干热或压力蒸汽灭菌。
实验室常用灭菌方法
实验室常用灭菌方法 Document number：PBGCG-0857-BTDO-0089-PTT1998
实验室常用灭菌方法 1.高压蒸汽灭菌 为湿热灭菌方法的一种。是微生物培养中最重要的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水在煮沸时所形成的蒸汽不能扩散到外面去，而聚集在密封的容器中，在密闭的情况下，随着水的煮沸，蒸汽压力升高，温度也相应增高。(PV=nRT) 高压蒸汽是最有效的灭菌法，能迅速地达到完全彻底灭菌。一般在15磅/英寸2压力下（℃），15～30分钟，所有微生物包括芽孢在内都可杀死。它适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌。 进行高压蒸汽灭菌的容器是高压蒸汽灭菌锅。高压蒸汽灭菌锅是一个能耐压又可以密闭的金属锅，有立式与卧式两种。 可以用电热、煤气、蒸汽等。锅上装有压力表，有的还装有温度计，能及时了解锅内压力及温度。锅上还设有排气口，其作用是在密闭之前，利用蒸汽将锅内的冷空气排净，另外还装有安全活门，如果压力超过一定限度，活门即可自动打开，放出过多的蒸汽。 2.干热灭菌 微生物培养中常用的干热灭菌是指热空气灭菌。一般在电烘箱中进行。干热灭菌所需温度较湿热灭菌高，时间也较湿热灭菌长。这是因为蛋白质在干燥无水的情况下不容易凝固。一般须在160℃左右保持恒温3～4小时，方能达到灭菌的目的。 干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，凡带有橡胶的物品和培养基，都不能进行干热灭菌。 3.间歇灭菌 各种微生物的营养体在100℃温度下半小时即可被杀死。而其芽孢和孢子在这种条件下却不会失去生活力。间歇灭菌就是根据这一原理进行的。 间歇灭菌的方法是用100℃、30分钟杀死培养基内杂菌的营养体，然后将这种含有芽孢和孢子的培养基在温箱内或室温下放置24小时，使芽孢和孢子萌发成为营养体。这时再以100℃处理半小时，再放置24小时。如此连续灭菌3次，即可达到完全灭菌的目的。 间歇灭菌通常在流动蒸汽的灭菌锅中进行，也可用普通铝锅代替。这种灭菌方法多用于明胶、牛乳等物质的灭菌，这类物质在100℃以上的温度下处理较长时间，会被破坏，而用间歇灭菌法就既起到了杀菌作用，又使被处理的物质免遭破坏。 4.紫外线灭菌
实验室消毒技术规范
实验室消毒技术规范 一.适用范围： 本规范适用于实验室器材、检验单、废弃标本及相关人员的消毒。检验科的工作场所分为清洁区、半污染区和污染区。清洁区包括办公室、会议室、休息室、储藏室、培养基室和试剂室；半污染区指卫生通道、更衣室、缓冲间；污染区包括标本收集、存放、处理室、检测室。 二.消毒原则： 清洁区、半污染区和污染区应分别进行常规清洁、消毒处理。清洁区和污染区的消毒要求、方法和重点有所不同，若清洁区和污染区无明显界限，按污染区处理。 清洁区若无明显污染，应每天开窗通风换气数次，湿式清洁台面、地面1次；污染区在每天开始工作前及结束工作后，台面、地面应用含有效氯500mg/L的含氯消毒液各擦拭1次，空气选用循环风动态消毒法消毒处理，废弃标本应分类进行消毒处理后排放。半污染区环境消毒同污染区，工作衣、帽每周换洗2次，拖鞋每天用含有效溴或有效氯500mg/L的二溴海因或含氯消毒剂浸泡或擦拭1次。所以清洁消毒器材（抹布、拖把、容器）不得与污染区或半污染区共用。工作人员每次下班前应用肥皂流水洗手1min- 2min。结核病专业检验室工作人员，每次连续佩戴口罩不得超过4h,工作衣若有明显致病菌污染或从事烈性菌标本检验后，应随时更换，及时进行消毒灭菌。 三.检验单的消毒： 污染检验单送出前用便携式高强度紫外线消毒器距检验单面不高于 3.0cm缓慢移动，照射3s-5s，必须两面照射；也可用经卫生部批准的专用甲醛消毒器薰蒸消毒。 四.空气的消毒：
对污染区内明显产生传染性气溶胶的操作（搅拌、研磨、离心等），特别是可通过呼吸道传播又含有高度传染性微生物（炭疽杆菌、分枝杆菌、球孢子菌、组织胞浆菌、军团菌、流行性感冒病毒等）的操作，应在生物安全柜（负压）内进行，使空气经细菌滤器或热力杀菌通道排出室外，柜内形成负压。要求严格无菌的操作如倾倒培养基、菌种转种和细胞转瓶等，应在100级洁净间或100 级生物安全柜内进行，使空气经初效、中效及高效滤器进入室（柜）内，形成正压，极大限度地减少污染。但应注意及时更换滤器，定时检测滤效。 五. 器材消毒： 除已知无传染性器材外，凡直接接触或间接接触过临床检验标本的器材均视为具有传染性，应进行消毒处理。 1. 金属器材 ①小的金属器材如接种环，用酒精灯烧灼灭菌。当接种环上有较多污染物时，应先在火焰上方，把接种环烤干后再缓慢伸入火焰灼烧，以免发生爆裂或溅泼而污染环境； ②较大的金属器材或锐利的刀剪受污染后不宜烧灼灭菌，可用2%碱性/中性戊二醛溶液浸泡2h 后，洁净水冲洗、沥干，再用干热或压力蒸汽灭菌。 2. 玻璃器材 ①采集标本的器材如玻片、吸管、玻瓶要做到一人一份一用一消毒。污染的吸管、试管、滴管、离心管、玻片、玻棒、玻瓶、平皿等，应立即浸入含有效氯1000mg/L含氯消毒剂中浸泡4h，再清洗干净、烘干。也可浸入洗涤剂或肥皂液中煮沸1 5min-30 min ，反复洗刷，沥干，37C-60 C烘干；
清洁消毒和灭菌
一、清洁、消毒与灭菌 （一）概念 1.清洁指用物理方法清除物体表面得污垢、尘埃与有机物。 2.消毒指用物理或化学方法清除或杀灭除芽胞外得所有病原微生物, 使其数量减少达到无害化、 3.灭菌指用物理或化学方法杀灭所有微生物,包括致病得与非致病得, 以及细菌得芽胞。 （二）消毒、灭菌得方法 1、物理消毒灭菌法 热力消毒灭菌法:利用热力作用破坏微生物得蛋白质、核酸、细胞壁、细胞膜、导致其死亡,可分为干热法与湿热法,干热法就是通过空气传导热力,导热较慢,因此干热灭菌所需得温度较高,时间较长;湿热法就是通过水、水蒸气及空气传导热力,导热较快,穿透力较强,因此湿热灭菌所需温度较低,时间较短。 燃烧法:属于干热法,就是一种简单、迅速、彻底得灭菌方法。 ①用途:a无保留价值得污染物品,如污染得纸张,破伤风、气性坏疽等感染得敷料等; b、金属器械及搪瓷类物品急用且无条件用其她方法消毒时,锐利刀剪除外,以免锋刃变钝。
②方法:a。金属器械可在火焰上烧灼２0秒;b、搪瓷类容器可倒入少量95%乙醇,慢慢转动使之分布均匀,点火燃烧至熄灭。注意燃烧时不可中途添加乙醇,同时远离易燃易爆物品。 2)干烤法:利用特制得烤箱,热力通过空气对流与介质传导进行灭菌,效果可靠。 ①用途:用于油剂,粉剂,玻璃器皿,金属制品,陶瓷制品等在高温下不变质,不损坏,不蒸发得物品。 ②方法:a,消毒:箱温１20-140℃,时间10-20分钟。b。灭菌:箱温16０℃,时间2小时;箱温170℃,时间1小时;箱温１８0℃,时间30分钟。 3)煮沸消毒法:属于湿热法。 ①用途:用于耐湿,耐高温得搪瓷,金属,玻璃,橡胶类物品,不能用于外科手术器械得灭菌。 ②方法:先将物品刷洗干净,再将其全部浸没水中,然后加热煮沸,水沸开始计时,5－1０分钟可杀灭细菌繁殖体,15分钟可将多数细菌芽胞杀灭,热抗力极强得需要更长时间(如破伤风杆菌芽胞需煮沸60分钟才可以杀灭)、在水中加入碳酸氢钠,配成浓度为1%-2％得溶液时,沸点可达105℃,既可增强杀菌作用,又可去污防锈。 注意事项:①物品需全部浸没水中,物品盖子打开,轴结打开,空腔导管预先灌水,各种大小及形状相同得容器不能重叠;②玻璃类物品需用纱布包裹,并在冷水或温水中放入;③橡胶类物品需用纱布包好,水沸后放入;④如中
实验室消毒规程
实验室消毒规程 1 .目的 规范实验的消毒工作，避免或减少实验室内感染性或潜在感染性生物因子对实验室工作人员、环境和公众造成危害。 2.适用范围 适用于从事病原微生物实验活动的实验室的消毒。 3.定义 3.1.消毒 杀灭或消除实验室内污染的病原微生物及其有害微生物，达到无害化。 3.2 .灭茵 杀灭一切微生物。 3.3.清洁 通过刷、吸、干擦、洗涤或用浸泡肥皂水或清洁剂的湿布拖擦等方法去除污垢、有机物和污渍。 4.职责 4.1.科室负责人负责本科室病原微生物实验室消毒和生物安全事故后污染环境消毒效果评价工作的组织实施。 4.2.生物安全监督员负责消毒工作的监督检查，参与生物安全事故后污染环境消毒效果评价工作。 4.3.专职消毒部门或人员负责责任范围内的集中消毒和一重大生物安全事故的环境消毒工作。 4.4 .实验室人员负责责任范围的常规消毒和意外事件、生物安全事故的紧急消毒工作。 5.消毒要求 5.1.基本要求 5.1.1.所有直接或间接接触病原微生物的仪器、设备、器具、器皿、包装物、运输工具、实验环境均视为被污染，必须进行及时、彻底、有效的消毒处理。 5.1.2 所有被污染的仪器、设备、器具、器皿、包装物、运输工具在清洗、储存或丢弃之前必须经过适当的消毒或灭茵。 5.1.3 根据病原微生物危害和污染程度选择适宜的消毒、灭菌方法。 5.1.4 根据需要应对消毒工作进行记录，记录内容应包括消毒对象、消毒时间、消毒方法、消毒操作人员等。
5.1.5 必要时在工作台面铺用消毒剂浸泡过的消毒巾。当有感染性或潜在感染性材料溢出或溅出时，把消毒剂倒在消毒巾上面以及可能污染的区域内，至少作用30分钟，然后把消毒巾移走，并用另一块消毒巾把污染区擦干净。用过的消毒巾应作为实验废弃物处理。所有操作应戴手套或双层手套进行。 5.1.6 对操作环境进行消毒时应避免对环境造成化学性污染。 5.1.7 对消毒、灭菌后的物品必须妥善保存，确保在使用之前不被污染，否则应重新消毒。 5.1.8 带出二级生物安全防护实验室的物品应进行密闭包装，外包装必须保持清洁，必要时对外包装进行彻底的消毒处理。 5.1.9 因发生生物安全事故被封闭的实验环境（包括运输工具等）在消毒后必须通过消毒效果评价，确认达到相应要求后方可重新投入使用，消毒效果评价报告应包括评价工作的方法、时间、参加人员、评价意见等。 5.2 消毒剂及消毒方法的选择 5.2.1 根据消毒对象和病原微生物的类别选择适宜的消毒剂和消毒方法。 5.2.2 必须使用合格的消毒器械或消毒剂。严格按照规定的作用浓度（或强度）、作用时间和作用方法进行消毒操作，并在有效期内使用。 5.2.3 浸泡消毒时要保证被消毒物品全部浸泡没在消毒剂中；擦拭消毒时要保证所有需要消毒的表面都被均匀的擦拭，不留死角。 5.2.4 对存在较多有机物或微生物污染特别严重物品进行消毒时，应适当增加消毒剂的使用浓度、适当延长消毒作用时间。 5.2.5 表面消毒时，应考虑表面性质。可用消毒剂擦拭、喷洒、喷雾消毒。光滑表面还可选择紫外线近距离照射消毒，照射距离≤1米。 5.2. 6.消毒、灭菌设备应定期进行消毒或灭菌效果评价。大型消毒、灭菌设备在正式使用前和大修后经监测达到合格标准后方可使用。 5.2.7.为确保压力蒸汽灭菌效果，应遵照下列原则进行操作。 5.2.7.1 压力蒸汽灭菌设备的操作和日常维护应由获得相应资质的人员负责。 5.2.7.2 压力蒸汽灭菌温度与时间 134℃、灭菌时间≥4分钟； ●121℃、灭菌时间≥20分钟； ●115℃、灭菌时间≥45分钟； 5.2.7.3 必须按照正确的操作方法使用压力蒸汽灭菌器。
生物实验室灭菌方式
生物实验室里常用的灭菌方法汇总 微生物实验室常用的器材一般包括玻璃器材、金属器械、橡胶制品及塑料制品等，每类器材的处理及消毒措施都有不同。严格的消毒灭菌工作极为重要，直接影响着整个实验能否顺利进行。 1.消毒灭菌方法 目前，常用的消毒灭菌方法多采用物理方法(如，干热灭菌法、湿热灭菌法、过滤除菌法、射线杀菌法等)和化学方法(消毒剂、抗生素)两大类。 1.干热灭菌法 是利用恒温干燥箱内120℃-150℃的高热，并保持90-120分钟，杀死细菌和芽孢，达到灭菌目的的一种方法。主要适用于不便在压力蒸汽灭菌器中进行灭菌，且不易被高温损坏的玻璃器皿、金属器械以及不能和蒸汽接触的物品的灭菌。用此方法灭菌的物品干燥，易于贮存。酒精灯火焰烧灼灭菌法也是属于干热灭菌的方法之一，在进行动物细胞体外培养工作时，常须利用工作台面上的酒精灯火焰对金属器具及玻璃器皿口缘进行补充灭菌。 2.湿热灭菌法 压力蒸汽湿热灭菌法是目前最常用的一种灭菌方法。它利用高压蒸汽以及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的穿透力，使菌体蛋白质凝固变性而使微生物死亡。适合于布类工作衣、各种器皿、金属器械、胶塞、蒸馏水、棉塞、纸和某些培养液的灭菌。高压蒸汽灭菌器的蒸汽压力一般调整为1.0-1.1 kg/cm2，维持20-30min即可达到灭菌效果。 3.射线灭菌法 利用紫外线灯进行照射灭菌的方法。紫外线是一种低能量的电磁辐射，可以杀灭多种微生物。紫外线的作用机制是通过对微生物的核酸及蛋白质等的破坏作用而使其灭活。适合于实验室空气、地面、操作台面灭菌。灭菌时间为30min。用紫外线杀菌时应注意，不能边照射边进行实验操作，因为紫外线不仅对人体皮肤有伤害，而且对培养物及一些试剂等也会产生不良影响。 4.过滤除菌法 是将液体或气体通过有微孔的滤膜过滤，使大于滤膜孔径的细菌等微生物颗粒阻留，从而达到除菌的方法。过滤除菌法大多用于遇热易发生分解、变性而失效的试剂、酶液、血清、培养液等。 目前，常用微孔滤膜金属滤器或塑料滤器正压过滤除菌，或用玻璃细菌滤器、滤球负压过滤除菌。滤膜孔径应在0.22-0.45μm范围内或用更小的细菌滤膜，溶液通过滤膜后，细菌和孢子等因大于滤膜孔径而被阻，并利用滤膜的吸附作用，阻制小于滤膜孔径的细菌透过。 5.化学消毒剂消毒法
消毒和灭菌的区别
按照GB15980规定： 消毒：用物理或化学方法杀灭或清除传播媒介上的病原微生物，使其达到无害化。 灭菌：用物理或化学方法杀灭传播媒介上所有的微生物，使其达到无菌。 清洁、消毒、灭菌是预防和控制医院感染的一个重要环节。它包括医院病室内外环境的清洁、消毒、诊疗用具、器械、药物的消毒、灭菌，以及接触传染病患者的消毒隔离和终末消毒等措施。 一、概念 （一）消毒是指杀灭或清除传播媒介上的病原微生物，使之达到无害化的处理。根据有无已知的传染源可分预防性消毒和疫源性消毒；根据消毒的时间可分为随时消毒和终末消毒。（二）灭菌是指杀灭或清除传播媒介上的所有微生物（包括芽胞），使之达到无菌程度。经过灭菌的物品称“无菌物品”。用于需进入人体内部，包括进入血液、组织、体腔的医用器材，如手术器械、注射用具、一切置入体腔的引流管等，要求绝对无菌。 消毒与灭菌是两个不同的要领。灭菌可包括消毒，而消毒却不能代替灭菌。消毒多用于卫生防疫方面，灭菌则主要用于医疗护理。 二、消毒、灭菌的原则 （一）明确消毒的主要对象应具体分析引起感染的途径、涉及的媒介物及病原微生物的种类，有针对性地使用消毒剂。 （二）采取适当的消毒方法根据消毒对象选择简便、有效、不损坏物品、来源丰富、价格适中的消毒方法。 医院诊疗器械按污染后可造成的危害程度和在人体接触部位不同分为三类： 1．高度危险的器材穿过皮肤、粘膜而进入无菌的组织或器官内部，或与破损的皮肤粘膜密切接触的器材，如手术器械、注射器、心脏起搏器等。必须选用高效消毒法（灭菌）。 2．中度危险的器材仅与皮肤、粘膜密切接触，而不进入无菌组织内，如内窥镜、体温计、氧气管、呼吸机及所属器械、麻醉器械等。应选用中效消毒法，杀灭除芽胞以外的各 种微生物。 3．低度危险器材和物品不进入人体组织，不接触粘膜，仅直接或间接地与健康无损的皮肤接触，如果没有足够数量的病原微生物污染，一般并无危害，如口罩、衣被、药杯 等，应选用低效消毒法或只作一般卫生处理。只要求去除一般细菌繁殖体和亲脂病毒。（三）控制影响消毒效果的因素许多因素会影响消毒剂的作用，而且各种消毒剂对这些因素的
实验室消毒规程
实验室消毒规程 1 . 目的规范实验的消毒工作，避免或减少实验室内感染性或潜在感染性生物因子对实验室工作人员、环境和公众造成危害。 2. 适用范围适用于从事病原微生物实验活动的实验室的消毒。 3. 定义 3.1. 消毒杀灭或消除实验室内污染的病原微生物及其有害微生物，达到无害化。 3.2 . 灭茵杀灭一切微生物。 3.3. 清洁通过刷、吸、干擦、洗涤或用浸泡肥皂水或清洁剂的湿布拖擦等方法去除污垢、有机物和污渍。 4. 职责 4.1. 科室负责人负责本科室病原微生物实验室消毒和生物安全事故后污染环境消毒效果评价工作的组织实施。 4.2. 生物安全监督员负责消毒工作的监督检查，参与生物安全事故后污染环境消毒效果评价工作。 4.3. 专职消毒部门或人员负责责任范围内的集中消毒和一重大生物安全事故的环境消毒工作。 4.4 . 实验室人员负责责任范围的常规消毒和意外事件、生物安全事故的紧急消毒工作。 5. 消毒要求 5.1. 基本要求 5.1.1. 所有直接或间接接触病原微生物的仪器、设备、器具、器皿、包装物、运输工具、实验环境均视为被污染，必须进行及时、彻底、有效的消毒处理。 5.1.2 所有被污染的仪器、设备、器具、器皿、包装物、运输工具在清洗、储存或丢弃之前必须经过适当的消毒或灭茵。 5.1.3 根据病原微生物危害和污染程度选择适宜的消毒、灭菌方法。 5.1.4 根据需要应对消毒工作进行记录，记录内容应包括消毒对象、消毒时间、消毒方法、消毒操作人员等。 5.1.5 必要时在工作台面铺用消毒剂浸泡过的消毒巾。当有感染性或潜在感染性材料溢出或溅出时，把消毒剂倒在消毒巾上面以及可能污染的区域内，至少作用30 分钟，然后把消毒巾移走，并用另一块消毒巾把污染区擦干净。用过的消毒巾应作为实验废弃物处理。所有操作应戴手套或双层手套进行。 5.1.6 对操作环境进行消毒时应避免对环境造成化学性污染。 5.1.7 对消毒、灭菌后的物品必须妥善保存，确保在使用之前不被污染，否则应重新消毒。 5.1.8 带出二级生物安全防护实验室的物品应进行密闭包装，外包装必须保持清洁，必要时对外包装进行彻底的消毒处理。 5.1.9 因发生生物安全事故被封闭的实验环境（包括运输工具等）在消毒后必须通过消毒效果评价，确认达到相应要求后方可重新投入使用，消毒效果评价报告应包括评价工作的方法、时间、参加人员、评价意见等。5.2 消毒剂及消毒方法的选择 5.2.1 根据消毒对象和病原微生物的类别选择适宜的消毒剂和消毒方法。 5.2.2 必须使用合格的消毒器械或消毒剂。严格按照规定的作用浓度（或强度）、作用时间和作用方法进行消毒操作，并在有效期内使用。 5.2.3 浸泡消毒时要保证被消毒物品全部浸泡没在消毒剂中；擦拭消毒时要保证所有需要消毒的表面都被均匀的擦拭，不留死角。 5.2.4 对存在较多有机物或微生物污染特别严重物品进行消毒时，应适当增加消毒剂的使用浓度、适当延长消毒作用时间。 5.2.5 表面消毒时，应考虑表面性质。可用消毒剂擦拭、喷洒、喷雾消毒。光滑表面还可选择紫外线近距离照射消毒，照射距离w 1米。 5.2. 6. 消毒、灭菌设备应定期进行消毒或灭菌效果评价。大型消毒、灭菌设备在正式使用前和大修后经监测达到合格标准后方可使用。 5.2.7. 为确保压力蒸汽灭菌效果，应遵照下列原则进行操作。 5.2.7.1 压力蒸汽灭菌设备的操作和日常维护应由获得相应资质的人员负责。 5.2.7.2 压力蒸汽灭菌温度与时间 134 C、灭菌时间》4分钟； ?121 C、灭菌时间》20分钟； ?115 C、灭菌时间》45分钟；
实验室常用灭菌方法完整版
实验室常用灭菌方法 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】
实验室常用灭菌方法 1.高压蒸汽灭菌 为湿热灭菌方法的一种。是微生物培养中最重要的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水在煮沸时所形成的蒸汽不能扩散到外面去，而聚集在密封的容器中，在密闭的情况下，随着水的煮沸，蒸汽压力升高，温度也相应增高。(PV=nRT) 高压蒸汽是最有效的灭菌法，能迅速地达到完全彻底灭菌。一般在15磅/英寸2压力下（℃），15～30分钟，所有微生物包括芽孢在内都可杀死。它适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌。 进行高压蒸汽灭菌的容器是高压蒸汽灭菌锅。高压蒸汽灭菌锅是一个能耐压又可以密闭的金属锅，有立式与卧式两种。 可以用电热、煤气、蒸汽等。锅上装有压力表，有的还装有温度计，能及时了解锅内压力及温度。锅上还设有排气口，其作用是在密闭之前，利用蒸汽将锅内的冷空气排净，另外还装有安全活门，如果压力超过一定限度，活门即可自动打开，放出过多的蒸汽。 2.干热灭菌 微生物培养中常用的干热灭菌是指热空气灭菌。一般在电烘箱中进行。干热灭菌所需温度较湿热灭菌高，时间也较湿热灭菌长。这是因为蛋白质在干燥无水的情况下不容易凝固。一般须在160℃左右保持恒温3～4小时，方能达到灭菌的目的。 干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，凡带有橡胶的物品和培养基，都不能进行干热灭菌。 3.间歇灭菌 各种微生物的营养体在100℃温度下半小时即可被杀死。而其芽孢和孢子在这种条件下却不会失去生活力。间歇灭菌就是根据这一原理进行的。 间歇灭菌的方法是用100℃、30分钟杀死培养基内杂菌的营养体，然后将这种含有芽孢和孢子的培养基在温箱内或室温下放置24小时，使芽孢和孢子萌发成为营养体。这时再以100℃处理半小时，再放置24小时。如此连续灭菌3次，即可达到完全灭菌的目的。 间歇灭菌通常在流动蒸汽的灭菌锅中进行，也可用普通铝锅代替。这种灭菌方法多用于明胶、牛乳等物质的灭菌，这类物质在100℃以上的温度下处理较长时间，会被破坏，而用间歇灭菌法就既起到了杀菌作用，又使被处理的物质免遭破坏。 4.紫外线灭菌 紫外线杀菌力最强的是波长2650～2660?(10-1nm)的部分。无菌室缓冲间和接种箱常用紫外线灯作空气灭菌。无菌室和缓冲间的照射时间为20～50分钟（视房间大小而定），接种箱照射10～15分钟即可。