各级菌种制作方法

1,母种:又叫一级种,用直径18-22cm的试管制备.常用配方:去皮马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂10-20克,水1000毫升,先把土豆去皮称重,切成小块煮至熟而不烂,过滤加水至1000毫升,再把琼脂剪成小段,放入锅内,边搅边煮,待琼脂溶化后加入葡萄糖,由于琼脂质量各有不同加入份量要看情况而定，装管前取一小勺浮在凉水中冷却观察其硬度适合然后分袋试管,用棉花塞塞住试管口,放入小高压锅内灭菌,当压力表达到1.5个压力时,再灭菌30分钟,取出试管放成斜面,放置2-3 天后,无杂菌感染再放入接种箱内接种,接了种的试管放入培养室内进行培养,温度要求25℃左右,相对湿度75%以下.

2,原种:二级种,一般采用原种瓶和罐头瓶.培养料不要装的太满,装至瓶肩.原种的制备多采用谷粒种,锯沫种和棉子壳种.

①谷料种:用玉米,小麦为原料,精选后煮沸,使种子变软即成,不要煮的太熟,开花.熟后离火泡5分钟（不开盖而能吸足水份）而后装瓶,用小型或中型高压锅灭菌,放至温度25℃左右接入母种,放培养室内培养.一般25-30天即成.

②木屑种:木屑78%,麦麸20%,石膏1%,糖1%,料:水=1:1.3,拌匀装瓶,灭菌,接种培养.一般25-30天即成.

③棉子皮:因棉子皮各种营养丰富,一般不需要加其它物质,只加1%的糖和石膏,用料1.3-1.5倍的水拌匀即可,而后装瓶,灭菌,接种,培养即可.

推荐通用配方：木屑（或秸秆粉或棉籽壳）：80斤糠夫：6斤糖：0.5斤菇耳壮：1.6两石膏：1斤

3,生产种:三级种可用木屑,玉米,棉籽皮,菌草,麦秸等为原料,根据所栽培的品种,采用不同的配方,用聚乙烯或聚丙烯,直径15-28cm塑料袋装料,然后用常压灭菌锅灭菌,达到100℃后,再维持100℃8-10小时.待袋稍凉后出锅,使栽培袋温度降至25℃左右再用原种接种,而后放到培养室的培养架上培养.

推荐配方：

■地栽木耳配方锯沫（或秸秆粉或棉籽壳）：80斤

糠夫：5斤

豆粉：2斤

菇耳壮：1.4 两

白灰：1斤

■平菇猴头香菇金针菇配方

锯沫（或秸秆粉或棉籽壳）：80斤菇耳壮：1.4 两

糠夫：5斤

白灰：1斤

自制EM菌制作方法

自制EM菌制作方法一：【操作方法】将1公斤白糖（红糖更好,最高用量2.5公斤，用量越大，浓度越高）倒入洗干净的塑料容器中（容量大于12公斤，因为需要预留产储气空间），倒入8公斤30-40℃的冷开水，倒入本品一包（500克），简单搅拌使本品溶解，然后密封放在室温25-40℃的环境下进行培养，每天开盖放气与搅拌1-2次，3-10 天完成培养即可使用（低于25℃时间会延长，产气大的阶段正是培养作用的高峰期，产气连续2-3天感觉没有增加或下降时表示已经完成培养）。在2个月内使用效果最好，每次取出后一定要密封保存，发现塑料桶胀气特别严重时要放气，放气时切忌注意安全，防止桶盖冲开击伤人等情况发生。【使用方法】生产完成的EM活菌使用方法与市场上销售的基本无差异，与等量的红糖（白糖、葡萄糖也可）加适量的40℃温水激活1小时以上后使用效果最佳；自产1个月内的也可以不添加糖，直接加温水稀释后使用。二：种制作菌液的方法：（以一瓶为例） 1、先烧开10公斤的水，加一公斤的红糖，把红糖融化开，把红糖里面的有害菌消除。 2、然后把上述融化后的红糖水冷却到30~40度情况下加1瓶菌种 3、然后把10公斤的菌水整体装进一个大塑料壶或者其他的容器中，要密封发酵，不能漏气。不要装的太满，要预留10-15%的缓冲空间，在发酵过程中会产生气体，装满容易涨破塑料壶。 4、发酵7-12天天左右，温度低要多发酵几天，打开瓶口，有气体产生。闻到酸甜闻到就证明发酵成功。（低于15度不能发酵；15-20度发酵20-15天；20-30度，发酵15-10天；30-40度发酵6-10天） 5、发酵成功后的菌液如果一次不能大量的使用完，就用小瓶子分装密封保存。使用一瓶打开一瓶。技术很简单，三：EM菌液制作方法，em菌种发酵方法，EM使用方法 EM菌种制作EM菌液的方法以制作50公斤菌液为例子原料准备：能够密封的塑料桶（容量50公斤）红糖（5公斤）菌种（5瓶）无菌干净的水（深井水，凉开水，或者放置2天的自来水）

菌种培养

第一章无菌操作技术第一节灭菌技术一、干热灭菌 1.1、灼烧灭菌【总操作程序】主要分两个步骤：点燃火源灼烧2～3次。具体操作如下： ①点燃火源一般使用酒精灯或煤气灯，点燃酒精灯或煤气灯。 ②灼烧2～3次一般右手持待灭菌的器具，在火焰的外焰上来回灼烧2～3次。【达标标准】灭菌后的器具干燥，所有的微生物被杀死。【注意事项】 ①正确使用火源，防止失火。使用酒精灯时，先要检查灯芯，如果灯芯顶端不平或已烧焦，需要剪去少使其平整，然后检查灯里有无酒精，灯里酒精的体积应大于酒精灯容积的1/4，少于2/3。在使用酒精灯时，应注意，绝对禁止用酒精灯引烧另一盏酒精灯，而应用燃着的火柴或木条来引燃；用完酒精灯，必须用灯帽盖灭，不可用嘴去吹灭，否则可能将火焰沿灯颈压入灯内，引起着火或爆炸。不要碰倒酒精灯，万一洒出的酒精在桌上燃烧起来，不要惊慌，应立即用湿抹布扑盖。灼烧时应用火焰的外焰 ②主要用于实验室接种针、接种环、试管口和玻璃棒等的灭菌。涂布平板用的玻璃棒也可在蘸有乙醇后进行灼烧灭菌。【相关知识】干热灭菌的原理：热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 1.2、干热灭菌【总操作程序】主要分五个步骤：装入待灭菌物品升温恒温降温开箱取物。具体操作如下： ①装入待灭菌物品将包好的待灭菌物品（培养皿、试管、吸管等）放入电热干燥箱内，关好箱门。 ②升温接通电源，拨动开关，打开电热干燥箱排气孔，旋动恒温调节器至绿灯亮，让温度逐渐上升，当温度上升到100℃时，关闭排气孔，在升温过程中，如果红灯熄灭，绿灯亮，表示箱内停止加温；此时如果还未达到所需的160～170℃,则需转动调节器使红灯再亮，如此反复调节，知道达到所需温度。 ③恒温当温度升到160～170℃时，借恒温调节器的自动控制，恒温2h。 ④降温切断电源，自动降温。 ⑤开箱取物

平菇几种常用培养料的配制

几种常用培养料的配制 1、棉籽壳料的配制棉籽壳培养料是目前生料栽培的最佳原料，单以100%的棉籽壳栽培，生物转化率可达100—150%。常用配方如下：配方一：棉籽壳92%，豆饼1%，麸皮5%，过磷酸钙1%，石灰1%。配方二：棉籽壳90%，麸皮5%，草木灰3%，过磷酸钙1%，石灰1%。配方三：棉籽壳45%，玉米芯45%，过磷酸钙1%，米糠7%，石灰2%。以上配方含水量均为60—65%。 2、玉米芯配制（1）玉米芯粉碎料55%，豆秸粉40%，过磷酸钙3%，石膏2%，另加多菌灵0.1—0.2%，PH8.5 （2）玉米芯70%，棉籽壳25%，过磷酸钙3%，石膏2%，另加多菌灵0.1—0.2%，PH8.5。 3、麦秸料配制麦秸料是北方各省的主要农作物的下脚料。一般多采用切段（2—5cm）栽培，适于栽培中高温品种。配方一：粉碎料73%，玉米粉5%或米糠20%，糖1%，石膏粉2%，PH7.5。配方二：切碎麦草发酵料86%，玉米粉10%，过磷酸钙2%，石膏1%，石灰1%，尿素0.3%，高锰酸钾0.05%，多菌灵0.1—0.2%。先把麦秸、玉米粉、石灰等物混合均匀，再把高锰酸钾、尿素、多菌灵配成浓缩液，然后等

量加到水中，喷洒到混合料中，边喷边拌，使麦秸吸足水分，堆制盖膜发酵。（三）培养料的配制培养料是平菇栽培优质高的基础，其优劣决定着栽培的成败和产量的高低，尤其以生料栽培更重要。栽培平菇的原料主要有：棉籽壳、玉米芯、麦秸、稻草、豆秸等，其中以棉籽壳是好。辅料有麦麸、米糠、石膏、过磷酸钙、尿素、玉米粉等。培养料配制时要求各环节严格消毒，预防杂菌污染，注意做到：1、所用工具、场地要清理干净，进行消毒。一般用生石灰粉撒地面，用2%石灰水喷洒墙四周，用0.1%高锰酸钾溶液消毒工具。 2、原料要新鲜，旧料要做到消毒处理。一般料用前要曝晒2—3天，晒时要勤翻，使其晒均晒透。 3、严格掌握料水比。一般要求配好的料含水量在60—65%，即用手握紧料，以指缝见水珠，而不下滴为宜。加水量的多少，依原料干湿程度和季节而定。一般夏季高温时，加水原则是宁少不多。例如棉籽壳料，料水比为1：1.2—1.3（夏季）或1：1.3—1.4（冬季），含棉绒多则多加水，含的少就少加水。 4、拌料后闷料30—60分，待料吃透水后分装，切忌堆久。（四）装袋和接种。常采用聚乙烯塑料袋，规格（宽×长）为25—30厘米×45—50厘米，可装干棉籽壳1.5—2公斤。装袋前，先将袋的一端用绳捆好。培养料装入袋内2厘米厚时加入菌种一层，约一

EM菌液制作方法与配方

E M菌液制作方法与配方 Prepared on 24 November 2020

EM菌液制作方法与配方信息来源：广宇生物加入日期：2009-2-13点出：384 一、【ＥＭ原液发酵方法】：制作ＥＭ菌种发酵液——EM原液 EM菌液（100公斤）=12支EM菌种+70公斤水+15公斤红糖+食盐2汤勺+100公斤能够密封的水桶+前6天不要打开注意：不要用自来水。红糖食盐用温水化开，最后加菌种，搅拌均匀，夏天3-6天，冬天10-15天左右，密封即可。二、【水产养殖水肥配方】 1、有机肥：（发酵动物粪便40%，桔杆或草粉10%，泥碳土20%、活性小肽%） 2、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）10% 3、活菌制剂：（EM原液）1% 4、复合氨基酸1%，复合维生素1%，多糖%，核酸%，腐植酸1%，蛋白酶%，淀

粉酶（共5%） 5、微量元素10%（N=%、P=4%、K=4%、Ca、Na、Mg、Cu、Fe、Zn、Mn、B、Si）三、【高效种植微生物肥料配方】 1、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）4% 2、活菌制剂：EM菌原液1% 3、动物粪便：80% 4、微量元素%、N=%、P=5%、K=5%（合计15%）四、【种植叶面微生物肥料配方】 1、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）12% 2、活菌制剂：（EM原液）80% 3、复合氨基酸1%，复合多维生素1%，多糖%，核酸%，腐植酸1%，蛋白酶%，淀粉酶%（合计4%） 4、微量元素%、N=%、P=1%、K=1%（合计4%）

五、【微生物饲料—全价料配方】玉米小麦麸大豆粕棉籽粕菜籽粕微生物发酵秸秆粉复合酶复合微量元素复合维生素皮毛营养调控剂无氟磷酸氢钙

污水处理培养菌种方法

培菌方法： 1、所谓活性污泥培养，就是为活性污泥的微生物提供一定的生长繁殖条件，即营养物，溶解氧，适宜温度和酸碱度。（1）营养物：即水中碳、氮、磷之比应保持100∶5∶1。（2）溶解氧：就好氧微生物而言，环境溶解氧大于0.3mg/l，正常代谢活动已经足够。但因污泥以絮体形式存在于曝气池中，以直径500μm活性污泥絮粒而言，周围溶解氧浓度2mg/l时，絮粒中心已低于0.1mg/l，抑制了好氧菌生长，所以曝气池溶解氧浓度常需高于3－5mg/l，常按5－10mg/l控制。调试一般认为，曝气池出口处溶解氧控制在2mg/l较为适宜。（3）温度：任何一种细菌都有一个最适生长温度，随温度上升，细菌生长加速，但有一个最低和最高生长温度范围，一般为10－45oC，适宜温度为15－35oC，此范围内温度变化对运行影响不大。（4）酸碱度：一般PH为6－9。特殊时，进水最高可为PH 9－10.5，超过上述规定值时，应加酸碱调节。 2、培菌法：（1）生活污水培菌法：在温暖季节，先使曝气池充满生活污水，闷曝（即曝气而不进污水）数十小时后，即可开始进水。引进水量由小到大逐渐调节，连续运行数天即可见活性污泥出现，并逐渐增多。为加快培养进程，在培菌初期投加一些浓质粪便水或米泔水等，以提高营养物浓度。特别注意，培菌时期（尤其初期）由于污泥尚未大量形成，污泥浓度低，故应控制曝气量，应大大低于正常期曝气量。（2）干泥接种培菌法：最好取水质相同已正常运行的污水系统脱水后的干

污泥作菌种源进行接种培养。一般按曝气池总溶积1％的干泥量，加适量水捣碎，然后再加适量工业废水和浓粪便水。按上述的方法培菌，污泥即可很快形成并增加至所需浓度（3）数级扩大培菌法：根据微生物生长繁殖快的特点，仿照发酵工业中菌种→种子罐→发酵罐数级扩大培菌工艺，分级扩大培菌。如某工程设计为三级曝气池，此时可先在一个池中培菌，在少量接种条件下，在一个曝气池内培菌，成功后直接扩大至二三级。（4）工业废水直接培菌法：某些工业废水，如罐头食品、豆制品、肉类加工废水，可直接培菌；另一类工业废水，营养成分尚全，但浓度不够，需补充营养物，以加快培养进程。所加营养物品常有：淀粉浆料、食堂米泔水、面汤水（碳源）；或尿素、硫氨、氨水（氮源）等，具体情况应按不同水质而定。（5）有毒或难降解工业废水培菌：有毒或难降解工业废水，只能先以生活污水培菌，然后再将工业废水逐步引入，逐步驯化的方式进行。（6）直接引进种菌种培菌：有些特殊水质菌种难于培养，还可利用当地科研力量，利用专业的工业微生物研究所培养菌种后再接种培养，如PVA（聚乙烯醇）好氧消化即有专门好氧菌。此法，投资大，周期长，只有特殊情况才用。 3、驯化：在培菌阶段后期，将生活污水和外加营养物量，逐渐减少，工业废水比例逐渐增加，最后全部转为受纳工业废水，这个过程称为驯化。理论上讲，细菌对有机物分解必须有酶参与，而且每种酶都要有足够数量。驯化时，每变化一次配比时，需要保持数天，待运行稳定后（指污泥浓度未减少，处理效果正常），才可再次变动配比，直至驯化结束。

食用菌液体菌种生产方法

食用菌液体菌种的生产方法（发酵罐法) 传统菌种生产工艺，一般是由试管母种扩繁成二级种、三级种，生产周期长、污染率高、成本高、需大量人工、管理困难。液体菌种生产具有纯度高、活力强、繁殖快的特点，接种到培养料内有流动性好、萌发点多，发菌迅速等特种点。应用于生产与固体菌种相比有以下优点： 1．菌种生产周期短。固体种一般需25—40天，而液体种仅需3—7天。 2．接种后，萌发点多萌发点多、发菌快、出菇周期短。接种24小时菌丝布满料面，3—15天长满菌袋，一般品种10天左右可出菇。 3．接种方便、成本低。用液体菌种接种一般每袋成本是1—3分，每人每小时可接800袋以上，提高效益4—5倍。 4．适宜工厂化生产。可直接用于栽培料进行出菇，大批量生产菌袋。为食用菌集约化、标准化生产创造了条件。因此，适宜我国国情的液体菌种设备的出现，必将在食用菌生产领域引发一场新的革命。液体菌种具有固体（颗粒）菌种无可比拟的优势，但是液体菌种生产设备是近几年刚发展起来并逐渐成熟的，因此很多人对此很陌生。在这里我们对此进行简单介绍一、液体菌种设备基本原理任何一种食用菌自身的生长必须满足其对温度、湿度、需氧量、养分等的需要，同时必须避免杂菌感染。在深层发酵技术上称之为选择性发酵技术，如啤酒生产技术当属此例，而白酒生产则是生物菌群发酵技术。液体菌种发酵设备（包括四大系统，温控系统由控制器、电热管等组成；供气系统由空气压缩机、输送管道、空气过滤器等组成；冷却系统由热交换器、进出水管道组成；搅拌系统由射流器、提升管等组成。二、液体菌种生产的关键技术 1、溶氧量液体菌种生产中最关键的是培养液中氧的溶解量，因为在菌丝生长过程中，必须不断的吸收溶解其中的氧气来维持自身的新陈代谢，氧气在液体（水）中的溶解量与压力、温度有关，同时与培养液的接触面积、渗透压有很大的关系。因此我们设计发酵设备时有效地解决了这些问题，如安装射流器使气泡细碎度增加等。 2、空气过滤技术的关键就是保证进入的空气无菌度高，因此必须选择孔径小、材料先进的过滤膜。一般细菌直径在0.5-5um,酵母菌在1-10um，病毒一般在20-400mu，所以选择过滤膜时应综合考虑以上因素。当然如果选的太小，成本将大幅度提高。另外环境对于空气影响很大,在空气压缩机房、制种车间必须保持环境清洁。 3、培养液培养液是菌丝生长发育的营养源，要求营养全面均衡。不同的菌种对营养要求偏重不同。配制原料有糖、麸皮、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素、蛋白胨、土豆汁、酵母浸膏等。配置培养液时，先将土豆片、麸皮一起煮熟，将汁液滤出，后加入其它辅料混匀即可。 4、接种培养器上端有接种口，也是装料口，将母种并瓶后加入抑菌剂，而后必须在火焰圈的保护下倒入罐体内，要求动作快、操作准确。

香菇菌种生产的方法与步骤

香菇菌种生产的方法与步骤 (一)母种生产培养基的配方选择一是马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基(PDA)：去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂16~23克，水1 000毫升。氢离子浓度1 000~10000纳摩／升(pH5~6)，用于分离、培养菌种。二是PDA改良培养基(甲)：马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾(KH2PO4)2克，硫酸镁(MgSO4)0．5克，维生素B110毫克，琼脂20克，水1000毫升，灭菌后氢离子浓度3163～10000纳摩／升(pH5．0～5．5)，用于培养、分离菌种。三是PDA改良培养基(乙)：马铃薯(去皮)200克，麸皮或米糠50克，硫酸镁0.5克，维生素B110毫克，琼脂20克，灭菌后氢离子浓度3163～3981纳摩／升(pH5．4～5．5)。四是PDA改良培养基(丙)：心材木200克，细米糠(或麸皮)100克，硫酸铵1克，麦芽糖(或葡萄糖)20克，琼脂20克，水1 000毫升，灭菌后氢离子浓度3163～10000纳摩／升 (pH5.0～5.5)，用于分离菌种。五是麦芽浸膏、酵母浸膏、琼脂培养基(MYD)：麦芽浸膏3克，葡萄糖10克，酵母浸膏3克，琼脂20克，蛋白胨5克，水1 000毫升(用于菌种培养)。六是麦芽浸膏、蛋白胨培养基(MPA)：麦芽浸膏20～25克，蛋白胨10克，琼脂20克，水1 000毫升(用于分离、培养、保存菌种)。上述6个培养基配方中，马铃薯、葡萄糖、琼脂(PDA)配方应用最普遍。在此着重介绍PDA培养基的配制方法与步骤： 1．制备培养基的操作程序选择优质马铃薯，去皮或挖去发芽眼，削去发青皮，切成薄片，称取200克，置于钢精锅，加水1 000毫升，煮沸后小火保持30分钟，趁热用8层纱布过滤后放人有1 000毫升刻度的量杯(或量筒)中，补充水到1 000毫升，倒回钢精锅，加琼脂继续加热，待琼脂溶化后，再加葡萄糖，再补水至1000毫升，用玻璃棒搅均匀，趁热分装试管，或装入三角瓶备用。 2．分装试管将配制好的PDA培养基，趁热(60℃)倒人事先准备好的量杯或玻璃漏斗，分装试管。每支试管装培养基为管长的1／4，培养液不可贴附管口内壁，如有沾附物必须揩拭干净。 3．做棉塞取适量棉花做成较紧实的棉塞，塞入试管约2厘米左右，外留1厘米，紧贴试管内壁，松紧度

液体菌种培训教材(四)液体菌种的制作过程及方法

液体菌种培训教材(节选四) 2010年4月10日三、液体菌种的制作过程及方法（一）试管种的生产：液体菌种对试管的纯度要求很高。所以要自己会做试管种。试管种的制作其实很简单，在我们要用种的前三个月，到市场上去看哪个菇符合要求，就买回来（也可以用自己保存的试管种均可）。在接种箱内进行常规气雾（最好是高锰酸钾和甲醛）消毒，30分钟后，开始分离。分离时先将用具消毒，然后用手把菇体分开，用镊子夹一小块菇肉（不同的菇取种位置不同），放到试管里。塞上棉塞就行了。这样的成功率一般在80%以上。在菌丝生长阶段，要经常观察菌丝的生长情况。对菌丝生长不整齐的，有污染的，全部淘汰。只留下没什么问题的，长满试管后，再取特定部位进行转管（见实操）。菌丝长到**cm时，从菌丝生长的尖端提取一小块，一般地认为，取****大小就可以了，不过从试验上看，提得**效果越好。平菇一般提二次就可以了，提到五次，基本上与脱毒菌种效果差不多。别的品种要多些，最多不超过五次，都可以达到提纯的目的。（二）三角瓶专用母种生产：专用母种分固体和液体两种。从生产技术上看，液体专用母种要难一些，是用电磁搅拌器或摇瓶机进行生产。整个过程要4-7天时间，生产的液体种稍经加工就可以直接使用。

液体菌种专用母种的配方就是用PDA加富配方去掉琼脂。用三角瓶盛装，在高压锅里121℃保持30分钟就行了。待三角瓶的温度降到30℃以下时，在超净工作台或接种箱内进行接种。马上就可以进行搅拌或摇瓶了。固体种生产时间要长些，保存的时间也长，而且方便运输。固体专用母种一般污染要严重一些，有的人污染率要达到20-30左右。固体专用母种我们现在一般不用，污染率太高，而且不好发现，最糟糕的是容易堵枪。配方是把木屑过20-40目的筛，用去掉琼脂的PDA配方拌料，在121℃高压下灭菌2小时，待温度下降到30度以下时，在超净工作台或接种箱内进行常规接种。一般20多天可以长好。具有运输和贮存方便等特点。搅拌器是应用磁性材料N、S极的异性吸引，同性相斥的原理制成的。工作时，机械的磁转子转动时，瓶内的磁转子在瓶内跟着转，带动液体旋转，为液体供氧。液体菌种培养基本条件是有一定的氧气、菌丝、水份和营养，几个因素溶合才能使菌丝快速繁殖。由于转子的高速旋转，产生的菌丝被剪切成菌丝片段。摇瓶机就是通过摇动液体，使空气与水溶合，增加液体中的氧气含量。通过摇动，液体在瓶内翻滚，使菌丝滚动成菌球。我们用液体专用母种。（三）发酵罐生产生产时要先进行培养料的配制。配料时先将土豆去皮切片，与麸

EM菌液制作方法

一、EM菌液制作方法( 细菌生长繁殖的条件) 1、液体EM菌种的制作方法：按EM固体原菌种10克：红糖0.1公斤：水1公斤（100度白开水放凉到40度时的无菌水）的比例混合均匀，密闭保温（人体温度35-37度）发酵，每1-2天摇动一次，5-7天即成，其间，因产生气体容器鼓起时，要及时松动盖子放气，并立即盖紧，到气体不再产生，能闻到酸甜香味时，表明发酵成功。保持密闭、放置阴凉干燥处，通常可保存18个月。可以作为液体菌种使用。请参考( 细菌生长繁殖的条件) 2、液体菌种扩陪成EM原液：按液体菌种1公斤：红糖1公斤：水10公斤（100度白开水放凉到40度时的无菌水）的比例混合均匀，密闭保温（人体温度35-37度）发酵，每1-2天摇动一次，5-7天即成，其间，因产生气体容器鼓起时，要及时松动盖子放气，并立即盖紧，到气体不再产生，能闻到酸甜香味时，表明发酵成功。保持密闭、放置阴凉干燥处，通常可保存18个月。用时按照说明书稀释比例稀释。请参考( 细菌生长繁殖的条件) 3、用EM菌液制做植物防虫、杀菌液请参考( 细菌生长繁殖的条件) EM菌种、红糖、30℃以上白酒、清水按1：8：1：100的比例备料。将等量的EM发酵液、红糖与酒及100倍的清水混合，搅匀盖紧，发酵5-10天左右，其间，因产生气体容器鼓起时，要及时松动盖子放气，并立即盖紧，到气体不再产生，能闻到酸甜香味时，表明发酵成功。保持密闭置阴凉干燥处通常可保存6－18个月。

EM防虫液能增强植物新陈代谢，强化叶片保护膜的角质层，防止病原菌进入，它的酯成分在草食害虫体内不分解，产生生理障碍致死，对线虫等多种害虫有显着效果，但应及早使用，虫害大面积发生时使用效果甚微。使用时的标准稀释倍数为1000-500，雾状喷施，叶片的正反两面都喷到。二、【生产水产养殖水肥配方】请参考( 细菌生长繁殖的条件) 1、有机肥：（发酵动物粪便40%，桔杆或草粉10%，泥碳土20%、活性小肽%） 2、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）10% 3、活菌制剂：（EM原液）1% 4、复合氨基酸1%，复合维生素1%，多糖%，核酸%，腐植酸1%，蛋白酶%，淀粉酶（共5%） 5、微量元素10%（N=%、P=4%、K=4%、Ca、Na、Mg、Cu、Fe、Zn、Mn、B、Si）三、【生产高效种植微生物肥料配方】请参考( 细菌生长繁殖的条件) 1、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）4% 2、活菌制剂：EM菌原液1% 3、动物粪便：80% 4、微量元素%、N=%、P=5%、K=5%（合计15%）

菌种保存方法

菌种保藏方法中国工业微生物菌种保藏管理中心微生物菌种保藏对于微生物菌种的研究和利用至关重要。以下是中国工业微生物菌种保藏管理中心整理的目前国际国内常用的菌种保藏方法，包括：定期移植法、液体石蜡法、沙土管法、真空冷冻干燥法、80℃冰箱冻结法、液氮超低温冻结法，各种菌种保藏方法都有详细的步骤说明。定期移植法亦称传代培养保藏法，包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。是指将菌种接种于适宜的培养基中，最适条件下培养，待生长充分后，于4～6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。操作步骤如下： 1 培养基制备 1.1 器皿准备培养基制备过程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、试管、培养皿、烧杯、吸管等，经洗涤、干燥、包装、灭菌后使用。 1.2 溶解培养基配料先在烧杯中放适量水，按培养基配方称取各项材料，依次将缓冲化合物、主要元素、微量元素、维生素等材料加入水中溶解，最后加足水量，搅拌均匀。 1.3 调pH值配料溶解后将培养基冷却至室温，根据要求加稀酸（0.1mol/L盐酸）或稀碱(10%氢氧化钠)调pH值。加酸或碱液时要缓慢、少量、多次搅拌，防止局部过碱或过酸而导致测量不准确和营养成分被破坏。 1.4 加凝固剂配制固体培养基时需加凝固剂，如琼脂、明胶等。将凝固剂加入液体培养基中，加热并不断

搅拌至融解，再补足所蒸发水分。 1.5 过滤分装在二层纱布中间夹入脱脂棉，将配好的培养基趁热过滤并分装。斜面培养基分装量约为试管高度的四分之一(4～5mL)，穿刺培养基分装量以试管高度的二分之一为宜。分装过程中勿使培养基沾污管口，以免弄湿棉塞造成污染。 1.6 包扎标记将试管加棉塞，外面包扎一层牛皮纸或铝箔并注明培养基名称及配制日期。 1.7 灭菌根据要求将培养基灭菌，通常蒸汽灭菌为121℃，15～20min。 1.8 斜面摆放灭菌后及时摆放斜面，斜面长度不超过试管管长的二分之一为宜。 1.9 无菌检查将灭菌的培养基放入培养箱中作无菌检验，通常30℃培养1～3天。无菌检查合格后将其保存于4℃下备用。 2接种 2.1 斜面接种 2.1.1 点接把菌种点接在斜面中部偏下方处。适用于扩散型生长及绒毛状气生菌丝类霉菌（如毛霉、根霉等）。 2.1.2 中央划线从斜面中央自下而上划一直线。适用于细菌和酵母菌等。 2.1.3 稀波状蜿蜒划线法从斜面底部自下而上划“之”字形线。适用于易扩散的细菌，也适用于部分真菌。2.1.4 密波状蜿蜒划线法

食用菌液体菌种生产方法(发酵罐法)

食用菌液体菌种生产方法（发酵罐法）传统菌种生产工艺，一般是由试管母种扩繁成二级种、三级种，生产周期长、污染率高、成本高、需大量人工、管理困难。液体菌种生产具有纯度高、活力强、繁殖快的特点，接种到培养料内有流动性好、萌发点多，发菌迅速等特种点。应用于生产与固体菌种相比有以下优点： 1．菌种生产周期短。固体种一般需25—40天，而液体种仅需3—7天。 2．接种后，萌发点多萌发点多、发菌快、出菇周期短。接种24小时菌丝布满料面，3—15天长满菌袋，一般品种10天左右可出菇。 3．接种方便、成本低。用液体菌种接种一般每袋成本是1—3分，每人每小时可接800袋以上，提高效益4—5倍。 4．适宜工厂化生产。可直接用于栽培料进行出菇，大批量生产菌袋。为食用菌集约化、标准化生产创造了条件。因此，适宜我国国情的液体菌种设备的出现，必将在食用菌生产领域引发一场新的革命。液体菌种具有固体（颗粒）菌种无可比拟的优势，但是液体菌种生产设备是近几年刚发展起来并逐渐成熟的，因此很多人对此很陌生。在这里我们对此进行简单介绍一、液体菌种设备基本原理任何一种食用菌自身的生长必须满足其对温度、湿度、需氧量、养分等的需要，同时必须避免杂菌感染。在深层发酵技术上称之为选

择性发酵技术，如啤酒生产技术当属此例，而白酒生产则是生物菌群发酵技术。液体菌种发酵设备（包括四大系统，温控系统由控制器、电热管等组成；供气系统由空气压缩机、输送管道、空气过滤器等组成；冷却系统由热交换器、进出水管道组成；搅拌系统由射流器、提升管等组成。二、液体菌种生产的关键技术 1、溶氧量液体菌种生产中最关键的是培养液中氧的溶解量，因为在菌丝生长过程中，必须不断的吸收溶解其中的氧气来维持自身的新陈代谢，氧气在液体（水）中的溶解量与压力、温度有关，同时与培养液的接触面积、渗透压有很大的关系。因此我们设计发酵设备时有效地解决了这些问题，如安装射流器使气泡细碎度增加等。 2、空气过滤技术的关键就是保证进入的空气无菌度高，因此必须选择孔径小、材料先进的过滤膜。一般细菌直径在0.5-5um,酵母菌在1-10um，病毒一般在20-400mu，所以选择过滤膜时应综合考虑以上因素。当然如果选的太小，成本将大幅度提高。另外环境对于空气影响很大,在空气压缩机房、制种车间必须保持环境清洁。 3、培养液培养液是菌丝生长发育的营养源，要求营养全面均衡。不同的菌种对营养要求偏重不同。配制原料有糖、麸皮、磷酸二氢钾、硫酸镁、

培养基配方

https://www.360docs.net/doc/7d17517213.html,/experiment/plant2/159568.shtml 11. Glucose Asparagine （葡萄糖、天门冬素琼脂） Glucose （葡萄糖）10g Asparagine （天门冬素）0.5g K2HPO4 0.5g Water （水）1000ml pH 7.2-7.4 适用范围：刺孢小单孢菌绛红变种、紫色小单孢菌（绛红小单孢菌） 12. Gause′s Synthetic Agar （高氏合成一号琼脂） KNO3 1g Soluble starch（可溶性淀粉）20g K2HPO4 0.5g MgSO4.7H2O 0.5g NaCl 0.5g FeSO4 0.01g Agar （琼脂）20g water （水）1000ml pH 7.2-7.4 适用范围：刺孢小单孢菌绛红变种、紫色小单孢菌（绛红小单孢菌）、白黄链霉菌、白色链霉菌、抗生链霉菌、双重轮丝链霉菌、产色链霉菌、烬灰链霉菌、天蓝色链霉菌、灭蚊链霉菌、红霉素链霉菌、青色链霉菌、球孢链霉菌、浅灰链霉菌、灰色链霉菌、吸水链霉菌、淡紫灰链霉菌、黄色长孢链霉菌、藤黄色链霉菌、细黄链霉菌、黑化链霉菌、玫瑰色链霉菌、华美链霉菌、嗜热链霉菌、委内瑞拉链霉菌、紫色直丝链霉菌、紫色链霉菌、绿色链霉菌 13. Wort Agar （麦芽汁琼脂） Dilute the world (without hop) to 12 Brix. Add 15g agar into 1000ml of the diluted word..Melt the agar by heating, then distribute the medium into tubes. Autoclave at 110 for 30 minutes. (将发酵啤酒的原料（未加酒花），稀释至12柏林，加琼脂15克，溶化后分装。15磅灭菌30分钟。) 适用范围：克鲁斯假丝酵母、郎比可假丝酵母、解脂假丝酵母、马其顿假丝酵母、拟热带假丝酵母、粗壮假丝酵母、皱褶假丝酵母、热带假丝酵母、产朊假丝酵母、阿舒假囊酵母、白地霉、果香地霉、地霉属、异常汉逊酵母、异常汉逊酵母变种、阿拉伯糖醇汉逊酵母、施氏汉逊酵母、菅囊酵母、伯顿毕赤酵母、膜醭毕赤酵母、粘红酵母、小红酵母、胶红酵母、深红酵母、卡尔斯伯酵母、酿酒酵母、椰园酿酒酵母、发酵性酵母、洛格酵母、罗斯酵母、鲁氏酵母多形鲁氏酵母、威尔酵母、酵母、路德类酵母、栗酒裂殖酵母、掷抱酵母、贝雷丝孢酵母、皮状丝孢酵母、糙孢曲霉、无壳曲霉、鲜橙曲霉、红曲霉、紫红曲霉、红色红曲霉、红曲霉菌 14. Potato Dextrose Agar PDA (马铃薯、葡萄糖琼脂) Potato extract (马铃薯汁) 1000ml Dextrose(glucose) (葡萄糖) 20g Agar (琼脂) 20g [Note]: Potato extract: Slice potatoes thin. Add 1000ml of water, immediately to prevent Oxidtion of juice and boil until soft. (approximately 30min.). Filter through cotton-cloth. Autoclave at 115℃for 20 minutes.（注：取去皮马铃薯200克，切成小块，加水1000毫升煮沸30分钟，滤去马铃薯块，将滤液补足至1000

em菌液制作发酵床的步骤

em菌液制作发酵床的方法：材料准备：锯末、稻壳、盐、土、农盛乐em菌液（也可使用发酵床菌种，比较经济划算）。（没有锯末或者稻壳也可以用玉米芯和秸秆代替，最好用锯末（锯末耐腐烂性比较好，用的时间会比较长））材料比例：锯末60%左右，稻壳30%左右，土10%，盐0.3%，农盛乐EM菌液2L/m3。材料打碎：物料粗细大小标准是2mm以上5mm以下。垫料太粗没有截口，微生物难以侵入，发酵效果不理想或者根本不发酵。物料太细其碳化速度太快，没等到发酵，就已经白白浪费掉了。水分调节：水分的控制要根据垫料的干湿程度来决定加水的多少，要求垫料混合后水分应在50%左右。（即手抓成团，不滴水，手上留有水印，放下一触能散即可）发酵方法： ①将所有准备好的物料（物料可以因地制宜，自由搭配）按比例混合均匀。 ②将农盛乐EM菌液加水稀释（稀释倍数根据物料水分来定），均匀喷洒在物料上，边喷洒，边翻堆，直至拌均匀，水分调节在50%左右，水分不足时可另外加水单独喷洒（注，不要一次性把计算好的水全部加入，最好分次加，这样才能更好的控制水分，不至于水分过大而影响发酵质量）。农盛乐提供发酵床专用菌种，可以制作养猪养鸡养羊养牛养鸭养鹅发酵床，另外提供发酵床技术支持，保证成功。农盛乐发酵床菌种一瓶30元，可以制作10平米的发酵床。农盛乐em菌液主要是由放线菌、乳酸菌、芽孢杆菌、枯草杆菌、光合细菌、酵母菌等七大类微生物中的10属80种有益微生物复合而成，有效活菌数≥200亿cfu/ml（%）。我们提供发酵床制作技术支持，量大的可以上门指导。发酵床垫料发酵成功的标准：刚发酵好的垫料手感松软，略带酸香或清香味，有时会见到白色的菌丝，温度在20～40℃左右（这个和发酵所处外界温度有关系）。（15-20度发酵15-10天；20-30度，发酵10-7天；30-40度发酵7-4天，发酵时间越长效果越好）发酵床垫料的更换：牲畜每批次转栏或出栏后，应对圈舍进行全面立体的消毒处理，然后补充部分新鲜木屑或秸秆粉及适量农盛乐EM原液，调节水分至50%左右，将垫料在圈栏中堆积起来进行发酵处理，温度上升到50℃以上高温24小时后，即可作为发酵床垫料重新使用。

不同食用菌种类的液体菌种发酵种配方

不同食用菌种类的液体菌种发酵种配方（1）平菇配方：马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸30克，蛋白胨1.5克，磷酸二氢钾1.5克，硫酸镁0.75克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH 值自然；（2）金针菇配方：马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2. 0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH 值自然；（3）白灵菇配方：马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2. 0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH 值自然；（4）香菇配方：马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH 值自然；（5）杏鲍菇配方：马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2. 0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH 值自然；（6）榆黄蘑配方：马铃薯100克，红糖12克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2. 0克，磷酸二氢钾1.5克，硫酸镁0.75克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，p H值自然；（7）茶新菇配方：马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸50克，蛋白胨2. 5克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH 值自然；（8）鲍鱼菇配方：马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2. 0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH 值自然；（9）鸡腿菇配方：马铃薯100克，红糖12克，葡萄糖12克，麦麸40克，蛋白胨2. 0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH 值自然；

污水处理菌种培养方法

污水处理菌种培养方法培菌方法： 1、所谓活性污泥培养,就是为活性污泥的微生物提供一定的生长繁殖条件,即营养物，溶解氧,适宜温度和酸碱度。 (1）营养物：即水中碳、氮、磷之比应保持1００∶5∶1。?(２)溶解氧:就好氧微生物而言,环境溶解氧大于0.3mg/ｌ,正常代谢活动已经足够。但因污泥以絮体形式存在于曝气池中，以直径5０0μm活性污泥絮粒而言,周围溶解氧浓度２ｍｇ/l时,絮粒中心已低于0.1mｇ/l,抑制了好氧菌生长,所以曝气池溶解氧浓度常需高于3-５mｇ/ｌ，常按5－10mｇ/ｌ控制。调试一般认为，曝气池出口处溶解氧控制在2mg／ｌ较为适宜。 (３）温度:任何一种细菌都有一个最适生长温度，随温度上升，细菌生长加速,但有一个最低和最高生长温度范围，一般为10-４5oC，适宜温度为15-35oC,此范围内温度变化对运行影响不大。?(4）酸碱度:一般PH为6-9。特殊时,进水最高可为PH 9-１0.5,超过上述规定值时,应加酸碱调节。?2、培菌法:?（1）生活污水培菌法:在温暖季节，先使曝气池充满生活污水，闷曝（即曝气而不进污水）数十小时后，即可开始进水。引进水量由小到大逐渐调节，连续运行数天即可见活性污泥出现,并逐渐增多。为加快培养进程,在培菌初期投加一些浓质粪便水或米泔水等,以提高营养物浓度。特别注意,培菌时期（尤其初期)由于污泥尚未大量形成，污泥浓度低，故应控制曝气量，应大大低于

正常期曝气量。 (2)干泥接种培菌法:最好取水质相同已正常运行的污水系统脱水后的干污泥作菌种源进行接种培养。一般按曝气池总溶积1%的干泥量，加适量水捣碎，然后再加适量工业废水和浓粪便水。按上述的方法培菌，污泥即可很快形成并增加至所需浓度(3）数级扩大培菌法：根据微生物生长繁殖快的特点，仿照发酵工业中菌种→种子罐→发酵罐数级扩大培菌工艺,分级扩大培菌。如某工程设计为三级曝气池，此时可先在一个池中培菌,在少量接种条件下,在一个曝气池内培菌，成功后直接扩大至二三级。?（4)工业废水直接培菌法：某些工业废水，如罐头食品、豆制品、肉类加工废水，可直接培菌;另一类工业废水，营养成分尚全,但浓度不够,需补充营养物,以加快培养进程。所加营养物品常有:淀粉浆料、食堂米泔水、面汤水(碳源);或尿素、硫氨、氨水(氮源）等，具体情况应按不同水质而定。 (5）有毒或难降解工业废水培菌：有毒或难降解工业废水,只能先以生活污水培菌,然后再将工业废水逐步引入，逐步驯化的方式进行。?(6)直接引进种菌种培菌：有些特殊水质菌种难于培养,还可利用当地科研力量,利用专业的工业微生物研究所培养菌种后再接种培养，如PVA(聚乙烯醇）好氧消化即有专门好氧菌。此法,投资大,周期长,只有特殊情况才用。３、驯化:在培菌阶段后期，将生活污水和外加营养物量,逐渐

如何科学制备平菇培养料

如何科学制备平菇培养料 8月上中旬，是早秋栽培平菇的黄金时期，采用发酵料栽培平菇，是提高平菇产量和效益的重要技术措施之一。但不少菇农因培养料制备不科学，导致栽培失败。平菇培养料正确的制备方法是：一、采用合理的配方。平菇对培养料中的C/N有一定的要求，C/N范围为1：30—33，方可确保平菇菌丝的正常生长与出菇。以下几个配方供选择使用： 1：玉米芯1000公斤、麦麸100公斤、尿素4公斤、过磷酸钙10公斤，蘑菇健壮素1公斤；2：玉米芯800公斤、棉籽壳200公斤、麦麸80公斤、尿素3公斤、过磷酸钙10公斤，蘑菇健壮素1公斤。二、科学发酵。首先将培养料翻拌均匀，然后适当添加水份，料水比通常为1：1.3— 1.4，在添加水的过程中要采用分批逐次的方法，切忌一次添加，以防养分流失。待水加够后，要立即进行堆料发酵。将培养料堆制成宽1.2—1.5米，高1—1.2米，长不限的料堆，料堆表面用木棍打若干小眼，并在料堆上插2—3根温度计。待料堆的温度升至65℃以上时，进行第一次翻堆，翻堆时要注意将料的内外翻拌一致，以后每天翻堆一次，连续翻堆3—4次，每次翻堆后，可用低毒杀虫剂喷洒料面，防治蝇蛆等害虫的产生。在发酵时，不少菇农习惯在料堆上覆盖薄膜，但这种方法不可取，因为平菇属好氧性菌类，如果缺氧，就会产生厌氧发酵，导致培养料变酸腐败，造成菌种不能正常萌发生长。三、正确调节水分和使用杀菌剂。培养料经过几天发酵，会使水分散失一部分，造成培养料含水量偏低，在装袋前应适量添加水，使培养料的含水量达到65%左右，标准为：手用力握培养料，手指缝有水滴出现，不快速滴下为准。结合培养料调节水分，使用防治杂菌的杀菌剂，如克霉灵、蘑菇专用多菌灵等，一般的使用量为培养料干中的0.05—0.1%，能有效地抑制杂菌，使平菇菌丝尽快长满出菇。如何进行平菇培养料堆制? 平菇培养料堆制应选择适宜当地平菇栽培的配方配臵好培养料，堆成底宽220厘米、高60-80厘米、上宽60-100厘米的长垄，堆好后用草帘、棚膜等物覆盖，以保持料堆湿度。堆后24-72小时当料温上升时，即可开始翻堆，料堆发至14-16天并加入辅料（石灰、磷二铵、敌白虫），翻堆后当料温升到60度后，棉籽壳维持2-4天，玉米芯维持5-7天，秸杆粉碎料维持7-10天，发酵结束后降温、散发废气。每平方米用40%甲醛10毫升加高锰酸钾5克密闭24小时，然后放气至无味时，即可移入培料场，或用20%过氧乙酸10毫升加水10００毫升洒菇房。平菇培养料加盐可平菇栽培中．用多菌灵防治杂菌污染效果虽好，但菇体残留农药．对人体有害，且成本较高。据试验平菇生料栽培时．每100千克干培养料加1 5千克食盐(事先用适量水溶解l拌匀，能防止杂菌感染．还可提前5～7天出菇。因食盐中含有丰富的钠、钙、镁等平菇生长所需的金属离子，若在子实体分化初期和每潮菇采后．喷洒10％的食盐水．可使菇体无农药残留．品质也有所提高。怎样防平菇培养料酸腐酸败菌在湿热天气离极易滋生，稍不注意就会给平菇生产造成损失。防治平菇培养料酸腐，应抓好以下6个方面： 1.培养料要新鲜所采用的培养料，如稻草、玉米杆、麦秸等应是新鲜且无霉变的，使

简述发酵罐连续生产液体菌种工艺(1)

简述发酵罐连续生产液体菌种工艺连续发酵使用的发酵罐一般有电控箱，空气压缩机，煮料罐（带夹层），发酵罐（带夹层），过滤器（两套，四级），降温器，热交换器，接种枪及（空气、蒸汽、过料、出种）管道连接组成，各个管道一般用橡胶管、硅胶管、或不锈钢管连接，发酵罐大小一般为煮料罐的3倍，其使用制种技术过程以杏鲍菇为例介绍如下： 1、空消 1.1、洗罐新购的发酵罐或者使用过的发酵罐，在生产之前，都必须进行彻底的清洗后方可使用。用过的发酵罐在罐体的内壁和管内所有接触液体菌种的管件表面都有可能粘附污物，洗罐的目的就是清除罐内的污垢和菌苔及培养料的残余物，疏通进气口，排料口等。 1.2、利用高温高压蒸汽进行发酵系统灭菌 1.2.1、清洗干净后将其密闭完成向煮料罐加水至总容积的70%-80%，打开电源开关，将温度设定到121度，在发酵罐内加水至总容积的40%，将温度设定到118-120度。 1.2.2、达到设定温度后，关闭进入二级过滤器的空气总阀门，打开蒸汽总阀门，让蒸汽依次进入2、3、4级过滤器，最后进入发酵罐，对过滤器及无菌空气管道等部位进行灭菌，这时每隔五分钟左右排一次过滤器下面的冷凝水。

1.2.3、30分钟后，将煮料罐出料口阀门打开少许将其灭菌。然后，打开进入过料管道的蒸汽总阀门，用蒸汽将过料管道灭菌，40分钟后（总时间）关闭进入二级过滤器的蒸汽阀门，打开空气总阀门，并将发酵罐的进气阀门关闭，打开空气压缩机，通入无菌空气吹干滤芯。 1.2.4、然后，打开接种枪开关，将发酵罐出种口阀门打开少许，对其预热，然后打开进入接种枪管道的蒸汽阀门，用蒸汽对出种管道及接种枪进行灭菌，30分钟后关闭接种枪开关，用75%酒精袋密闭备用，后将灌顶接种口及呼吸器打开少许对其灭菌30分钟后关闭灌顶所有阀门，用75%酒精棉球密封接种口。 1.2.5、最后，将罐内高温高压水从排污口，取样口不少于30分钟排出，当罐内压力低于0.05MPa后，打开进气阀门，通入无菌空气待罐体吹凉后保压备用。 2、液体培养基制作及灭菌 2.1、配方杏鲍菇发酵罐常用配方：黄豆1%，淀粉0.5%，葡萄糖1%，蔗糖2%，蛋白胨0.15%，磷酸二氢钾0.15%，硫酸镁0.075%，消泡剂0.15%。 2.2、配制及灭菌 2.2.1、培养基装量视煮料罐大小装入总容量的70-80%。首先，将煮料罐内加水至淹没加热管3-5厘米后开始加热（水质太差需处理），黄豆提前浸泡后打浆与淀粉其他原料混合在一起，放在不锈钢或铝锅内熬成糊状母液。

菌种活化方法

低温保存管（cryo tube）中之一般菌种临时存放及活化 A. 低温保存管之临时存放及解冻 1. 低温保存管（cryo tube）应存放于－20℃ ~ －80℃之低温条件下。 2. 准备 37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以 37℃水浴取代，应避免水中微生物污染），其中事先安放小试管架（可放置 cryotube 之大小），液面不可高达管塞。 3. 将 cryotube 从低温保存条件中取出，置于 37℃浴槽之小试管架上。 4. 不断轻微摇动 cryotube，液面不可高至管塞，直至结冰完全溶解（约需 2 分钟）。 B. 菌株活化: 在无菌操作下 1. 用无菌微量吸管，从已溶解之 cryotube 吸取 50 ?l（或 1 ~ 2 滴）之菌液，滴入固态指定培养基(培养基编号及温度示于菌株订购单)某一边缘附近，以划线法接种于培养基。 2. 将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。 C. 划线法 1. 手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约 5 公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之前约 10 公分，等待约 10 秒钟，将接种环前端轻触培养基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖 1/3 培养基为止（I 区）。 2. 灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自 I 区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域（II 区）。 3. 重复 2. 的动作完成 III 区与 IV 区。 4. 灼烧接种环，将接种环归位。 D. 图示（1）金属接种环

（2）平板划线法冷冻干燥管之开管说明下列步骤请在无菌环境下操作： 1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加热外管之尖端。 2、滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。 3、取出隔热纤维纸和内管，以灭菌过的镊子取出内管之棉塞。 4、( a ) 适用于细菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液体培养基，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮。 ( b ) 适用于霉菌、酵母菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml无菌水，滴入内管内，待干燥粉末溶解后，以无菌吸管吸取并滴入约含有5ml无菌水之试管内，轻微震荡使其均匀后，静置30至60分钟。 5、取0.1-0.2 ml之菌体悬浮液于指定的平板培养基上，做划线分离培养或做成一系列之稀释，用无菌L型玻棒均匀涂抹，以检验菌种之纯度及活化情形，而剩余的菌体则全部移入指定的液体培养基内，并依指定的温度培养之。 6、某些菌种经过冷冻干燥保存后，迟滞期 ( lag period ) 较长，必须等培养二倍时间后才能长出，且再经过一、二次继代培养 (Subculture) 后才能正常生长。经过以上的努力后仍培养失败，才视为不能活化。 7、若菌种未能活化，或活化之菌落有疑问时，请于收到菌种之一个月内，以问题菌株反应单传真至本中心，即进行处理。