生产菌种的制备与保藏演示文稿

第一节 生产菌种的制备过程
1.3 种子制备的过程
一、实验室种子的制备
1）孢子的制备
细胞孢子的制备：细胞的斜面培养基多采用碳源限量而氮源丰 富的配方，培养温度一般为37℃，时间为1-2 d，产芽胞的则需 5-10 d。
霉菌孢子的制备：一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天 然产品为培养基，培养温度一般为25-28℃，时间为4-14 d。
B：种子级数太少，接种量小，发酵时间延长，降低发酵罐的 生产率，增加染菌的机会。
C：虽然种子罐级数随产物的品种及生产规模而定，但也与所 选出用工艺条件有关。如改变种子罐的培养条件，加速了孢 子发芽及菌体的繁殖，也可相应地减少种子罐的级数。
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第一节 生产菌种的制备过程
1.4 发酵工业种子培养方法
酵母生长比细菌慢，比霉菌和放线菌快，通常用 3 级种子。如 啤2酒020酵/10/母28 的扩大培养 ，扩大倍数一般第 1 级到第 2 级为 8 ~ 10 倍，第 2 级到第 3 级为 4 ~ 6 倍。
第一节 生产菌种的制备过程
二、生产车间种子制备
3）确定种子罐级数需注意的问题
A：种子级数越少越好，可简化工艺和控制，减少染菌机会。
培养基配制
种子扩大培养来自百度文库
空气除菌 发酵设备
培养基灭菌
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产品
发酵生产 下游处理
废弃物资 源化、无 害化
课程导入
5 L小试
摇瓶-小试-中试 发酵工程实验室
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5 L-50 L二级发酵装置
本节课的重点和难点
本节课的重点 1、 种子制备过程 2、种子质量的控制措施
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第一节 生产菌种的制备过程
1.2 菌种扩大培养的任务
其任务：要为每只发酵罐的投料提供相当数量的代谢 旺盛的种子。
对于不同产品的发酵过程来说，必须根据菌种生长繁 殖速度快慢决定种子扩大培养的级数。抗生素类产品的生 产采用放线菌，一般采用三级或四级种子扩大培养；谷氨 酸等氨基酸产品，以及部分酶制剂类产品生产，采用细菌， 采用二级种子扩大培养。
生产菌种的制备 与保藏演示文稿
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优选生产菌种的制备与保藏
第五章 生产菌种的制备与保藏
第一节 生产菌种的制备过程 第二节 生产菌种的质量保证 第三节 生产菌种的保藏
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http://211.84.144.22/jing/C76/zcr-1.htm
课程导入
发酵工程的工艺流程
厌氧培养：对于酵母菌 (啤酒、葡萄酒、清酒等）
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试管
三角烧瓶
卡式罐
种子罐。
例：啤酒酵母(P120)
4℃保存于麦芽琼脂或MYPG培养基菌种
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10 mL麦芽汁的500-1000 mL三角瓶
25℃，2-3 d
250-500 mL麦芽汁的500-1000 mL三角瓶
25℃，2 d，定时摇动或通气
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第一节 生产菌种的制备过程
1.1 种子扩大培养的概念
发酵工业生产过程中的种子必须满足的条件 1) 菌体的纯种培养物总量适宜，以保证在发酵罐中有适当的
接种量； 2）微生物菌种的生命力旺盛，移接到发酵罐中后能够迅速
生长，利于缩短延滞期，提高设备的利用率； 3）菌种能保持稳定的生产性能，生理状态稳定； 4）无杂菌和噬菌体的污染。
霉菌生长较慢，如青霉菌，可用 3 级发酵，即：孢子悬浮液 → 1 级种子罐（ 27 ℃ ，40 h 孢子发芽，产生菌丝 ）→ 2 级种 子罐（ 27 ℃ ，10 ～ 24 h ，菌体迅速繁殖，粗壮菌丝体 ）→ 发 酵罐。
放线菌的细胞生长繁殖缓慢，如抗生素类产品，一般采用 3 级 或 4 级种子扩大培养。
本节课的难点 影响种子质量的因素
第一节 生产菌种的制备过程
1 种子扩大培养的概念 2 菌种扩大培养的任务 3 种子制备的过程 4 发酵工业种子培养方法
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第一节 生产菌种的制备过程
1.1 种子扩大培养的概念
指保存在砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状 态的生产菌种接入固体试管斜面活化后，再经过 摇瓶或静置培养，以及种子罐逐级扩大培养而获 得发酵产量高、生产性能稳定、数量充足、不被 杂菌和噬菌体污染的生产菌种的纯种制备过程。 该纯种培养物称为种子。
放线菌孢子的制备：一般采用琼脂斜面培养基，培养基中含有 一些适合产孢子的营养成分，培养温度一般为28℃，时间为5120420d/10。/28
第一节 生产菌种的制备过程
1.3 种子制备的过程
一、实验室种子的制备 2）液体种子的制备
好氧培养：对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种 试管 三角烧瓶 摇床 种子罐。
1）种子扩大培养的方法：表面培养法、固体培养法（曲法 培养）、液体深层培养法、载体培养法。
2）深层培养法的基本操作控制点：灭菌、温度控制、通气 与搅拌。
3）常用的液体深层培养法：放大法、两步法、控制培养法、 分批培养法（间歇发酵法）、连续培养法（连续发酵法）、 补料分批培养法（流加法）。
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第一节 生产菌种的制备过程
1.3 种子制备的过程(P118)
砂土管孢子 冷冻干燥孢子
斜面培养
摇瓶液体培养 茄子瓶斜面培养 固体培养基培养
一级种子罐培养
实验室种子培养阶段
生产车间种子制备阶段
发酵罐
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（四级种子罐培养） （三级种子罐培养） 二级种子罐培养
种子扩大培养的工艺流程
2）种子罐级数的确定
种子罐级数是指制备种子需逐级扩大培养的次数，主 要取决于两方面：① 菌种生长特性、孢子发芽及菌体 2繁020/1殖0/28速度；② 所采用发酵罐的容积。
第一节 生产菌种的制备过程
1.3 种子制备的过程
二、生产车间种子制备
2）种子罐级数的确定
细菌生长快，种子用量比例少，级数也较少，如谷氨酸等氨基 酸类产品以及部分酶制剂类产品可用 2 级发酵，即：茄子瓶 → 种 子罐 → 发酵罐。
5-10 L麦芽汁的卡式罐
15-20℃，3-5 d
100 L麦芽汁的发酵罐
http://211.84.144.22/jing/C76/zcr-1.htm
第一节 生产菌种的制备过程
1.3 种子制备的过程
二、生产车间种子制备
1）种子罐的作用
便孢子发芽，生长繁殖成菌丝体，接入发酵罐能 迅速生长，达到一定菌体量，以利于产物的合成。