血红蛋白含量测定
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血红蛋白含量测定
血红蛋白是红细胞的主要成分,在正常情况下,每个红细胞均含有一
定量的血红蛋白。血红蛋白是由珠蛋白和亚铁血红素组成的结合蛋白质。
血红蛋白除能与氧结合形成氧合血红蛋白外,尚能与某些物质作用形成多
种血红蛋白衍生物。它们具有特定的色泽和吸光谱,在临床上,可用以诊
断某些变性血红蛋白血症和血红蛋白的定量测定。
●仪器型号:
Sysmex KX-21型多项目自动血球计数仪器
Sysmex XE-2100型多项目自动血球分析装置
●检测原理:
一、Sysmex KX-21
在自动检测法中的血红蛋白测量以氰化正铁血红蛋白法或氧合血红
蛋白法为主流。但这种方法血红蛋白转化速度慢,其处理液应进行妥善处
理,以及环境方面的考虑,并不是一种令人满意的测量法。无氰HGB测量
法与氧合血红蛋白法相同,其血液中的血红蛋白转化成氧合血红蛋白,且
不含剧毒物。另外,由于可以测量正铁血红蛋白,如质控血那样的含有正
铁血红蛋白的血液也可正确进行测量。
二、Sysmex XE-2100
集中于氰化高铁血红蛋白测定法和氧化血红蛋白测定法的优点,不使
用毒性物质,使该方法成为自动检测的一个合适的方法。同时,由于该方
法可以用测量氰化高铁血红蛋白,所以该方法也可以准确的测量含有高铁
血红蛋白的血液。
● 试剂:
一、Sysmex KX-21
⑴稀释液
⑵WBC/HGB 用溶血剂
⑶2%EDTA 二钾溶液
二、Sysmex XE-2100
⑴CELLPACK (EPK )
⑵SULFOLYSER (SLS )
● 标本吸入量:
一、Sysmex KX-21: 全血模式50
l μ
二、Sysmex XE-2100:⑴手工模式130l μ
⑵自动进样器模式200l μ
● 静脉血采血方法:
抽取病人静脉血2ml ,于EDTA 三钾抗凝的真空采血管中
(1.5mgEDTA-K
3/ML )24小时室温保存。
● 操作步骤:
一、Sysmex KX-21
⑴仪器在全血模式(WB )下
⑵要在允许空白值内:
WBC RBC HGB
PLT
0.3
⨯109/L 0.02⨯1012/L
1g/L 10⨯109/L
⑶检测质控数值合格。
⑷标本的测量:将待测标本充分混均,然后将吸液管放进待测标本试
管中并按下开始键。蜂鸣器“笛笛”响两声之后,当LCD画面上显示“正
在测量”状态时可将试管取下。
⑸结果显示:标本被吸入后仪器将进行自动测量,约1分钟左右测量
结束,被测标本的结果自动显示出来。同时LCD画面自动切换至“准备测
量”状态,此时可进行下一份标本的测量。
二、Sysmex XE-2100
⑴当机器经过电源接通和一系列自检无误后,在机器左上放状态栏显
示“READY”及确认“READY LED”(准备状态灯)呈绿色时,机器进入
准备测量状态。
⑵要在允许空白值内:
WBC RBC HGB PLT
0.3
⨯109/L0.02⨯1012/L1g/L10⨯109/L
⑶检测质控数值合格。
⑷标本的测量:
手工模式:在准备测量状态下,按下屏幕最上一行
用数字键输入标本的编号,按
后将吸液管放进待测标本试管中并按下开始键。吸液管吸液完毕后听到三
声报警声,将试管移开。
进样器自动模式:在准备测量状态下,按下屏幕最上一行
键,利用数字键输入标本的编号,按
进样器工作台上。机器开始自动混均、吸引和分析标本。
⑸结果显示:标本被吸入后仪器将进行自动测量,被测标本的结果自
动显示出来。同时屏幕切换至“准备测量”状态,此时可进行下一份标本
的测量。
●检测原理:
血红蛋白被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白,再与氰结合成稳定的棕
红色氰化高铁血红蛋白,在规定的波长和液层厚度的条件下,具有一定的
吸光系数,根据吸光度,即可求得细胞蛋白浓度。
●试剂:
氰化高铁血红蛋白转化液:氰化钾0.05g、高铁氰化钾0.2g、无水磷酸
二氢钾0.14g、TritonX-100(或其他非离子型表面活性剂)1.0ml、蒸馏水加至
1000ml。
●末梢血采集方法:
⑴采血部位必须无冻疮、炎症、水肿、充血及循环障碍。成人以无名
指为宜,半岁以上儿童手指为好,半岁以下婴幼儿通常自拇指或足跟两侧
采血。
⑵轻轻按摩采血部位,使其自然充血,用75%乙醇棉球消毒局部皮肤
待干。
⑶紧控刺血部位,用采血针穿刺取血,动作应迅速,深度约2-3mm,
稍加挤压,以血液能流出为宜。
⑷用干棉球擦去第一滴血,毛细吸管吸血120l 于抗凝管中混均,6
小时内测定完毕。
⑸采血完毕,用干棉球压住伤口,血止为止。
● 标本吸入量:末梢血模式20l μ
● 抗凝管的制备:
取上述EDTA 二钾溶液10微升,加入小试管内于70℃以下干燥备用。
● 操作步骤:
取转化液5ml ,加末梢血20l μ,混均后静置5min 。已校正过波长和灵
敏度的分光光度计,波长540±1nm ,光径1.000cm ,谱带宽度<1nm ,20-25℃
杯温等条件,转化液为空白,测定其吸光度。
● 计算:
血红蛋白g/L =
7.367540⨯HiCN
A
男:120~160g/L
女:110~150g/L
新生儿:170~200g/L
血红蛋白增减的临床意义,基本与红细胞增减意义相同。但血红蛋白
能更好地反应贫血程度。而某些贫血,由于单个红细胞血红蛋白的含量不同,
血红蛋白减少与红细胞减少程度不成平衡关系。
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