显微镜简易使用手册

显微镜使用说明

显微镜使用前的注意事项

1安装完成后,确认显微镜的高度,建议购买可调节高度的坐椅,使得观察者和显微镜高度保持一致.

2放置显微镜的桌子下方,应尽量为空置的位置,方便将腿放入.显微镜应尽量向前摆放,这样观察时腰和颈椎可以保持垂直状态,降低因为长时间观察导致的身体疲劳,并可以有效降低腰和颈椎疾病的发生概率.

3使用者应当明白基本的光学原理,知道如何调节科勒照明,孔径光阑,相差,DIC,荧光等

4使用者应会使用照相软件,知道如何调节至最佳状态.

使用时的注意事项

1 低档显微镜开关时卤素灯电压一般应调至最低。

2 转换物镜时，应旋转物镜架，不要用手直接转物镜。

3 荧光光源汞灯由于使用寿命短(大约200小时) ,为保证尽可能的延长使用时间和

安全，汞灯电源开 /关之间的隔时间必须大于三十分钟。

4 显微镜的各光学部件应调节到位（如， DIC 插件，荧光滤片，物镜等），以免影

响显微镜的正常工作。如果不到位 ,那么观察时通常会看到月牙形阴影 .

5 使用油镜时应使用专业用油，不要用其它介质（如香柏油），以免损伤镜头。每

次使用完油镜后，需将油镜擦拭干净（物镜及玻片）。（正置显微镜，油滴在样品上。倒置显微镜，油直接滴在物镜上。）

6 不要用手直接触摸光学部件的表面（如物镜，荧光模块，目镜等），以免留下手指

印在上面，影响观察效果。

7 在拆卸全自动显微镜的聚光镜，荧光滤片盒（倒置显微镜）等部件时，应在断电的

情况下进行操作。

8 因为各款显微镜的有效工作距离/特性等各有不同，使用前应充分了解所用仪器

的特性及观测范围，以免因不恰当的操作，对显微镜及其配件造成损害。

9 调焦首先应该是让物镜向远离样品的方向调节，这样可以充分保证物镜的安全

提示：1，观测样品时（特别是金相样品），切不可将物镜撞及样品，以免将物镜镜头压碎。

2，移动显微镜时，应做到小心轻放，以免因震动而对光学部件及光路造成损害，影响显微镜的使用。（建议移动显微镜时，先将各光学部件拆除，移位

后，再重新安装。）

显微镜使用前的调节

为了观察和拍摄好图像，需要对显微镜和 CCD以及 CCD软件都

要求进行调节。

在进行显微观察和摄影前，首先要做的就是对显微镜进行调节。调节项目包括柯勒照明、相差环调节、荧光中心调节等。其中后两项一般在安装是已经调节好，一般情况下就不需要再调节了

柯勒照明调节方法如下：

1放一张你即将观察的样本(最好是染色的切片类样品)，使用10X物镜,明场照明状态（聚光镜转轮选择H或BF，荧光滤镜轮选择空位，DIC 附件全部拉出光路，照相光路转换到观察状态,通过粗调和微调将样品调节到样本能观察到的最清楚的状态。然后不要再动调焦螺旋。

2，将视场光栏调到最小的状态，如果显微镜的调节状态正确的话，此时在视野中应该可以看到一个边缘清楚的多边形(如下图)。

如果看到的是圆形的光斑而不是一个边缘清楚的多边形，则说明光路中的聚光镜上下位置不准确，此时通过调节聚光镜左手侧的上下调节旋钮使得视场中形成一个边缘清晰的多边形，此时的聚光镜位置就是Z轴上最佳位置，以后的调节或观察的时候都不要再移动其位置了。

3，视野中的多边形的正确位置应该是在视野的正中心，如果不在说明聚光镜在XY 水平面上有偏移，需要调节柯勒照明光路调节旋钮（聚光器对中螺钉,位于聚光镜前部,银色的调节旋钮）,通过调节聚光镜上的柯勒照明光路调节旋钮（两个银色的旋钮）使多边形在视野的中心。

4，将视场光栏慢慢放大，当多边形正好外切于视场的时候(既看不到多边形的边缘)就是

视场光栏的最佳工作位置。在此过程中其他位置的调节不可以再动。

5，保持聚光镜，视场光栏和聚光器对中螺钉的位置，以后不要再调节其位置。

调节完成后,就可以进行正常的观察了

明场任何染色的片子

拍摄明场图像主要就是考虑白平衡和平场问题。因此显微镜的调节也要围绕这两个方面来调节。显微镜可能需要设置主要有以下部分：（先调节好柯勒照明,详见前文）

1，将荧光滤镜轮转到空位，聚光镜转轮位置也放在空位（H）一定不要使用阿拉伯数字1,2,3 或D

2，透射光滤光片除了GIF（绿色）外建议均使用〔NCB（日光平衡片）一定要使用〕，这样就不用提高电压也可以提高色温，使得背景光为白色。

3，放入需要观察的片子，调节调焦装置，使得图像最清楚。

4，调节聚光镜孔径光栏的位置,使之于物镜的数值孔径一一对应. (经验值是数值孔径数值X 0.8)，这样观察的图像的对比度才是最佳的效果。记住每换一个物镜都要改变其位置。

5，使用相机拍摄一张图片，看看是否偏色和光场不匀。如果偏色那么就使用相机带的白平衡设置软件来进行白平衡设置。如果光场不匀那么使用相机软件中的平场校正来校正

相差没有染色的活细胞等

拍摄相差图片主要考虑的就是相差环和物镜的配合。显微镜主要状态设置如下：

1，荧光滤镜轮转到空位

2，聚光镜转轮要根据物镜来选择使用哪一个，10X,20X一般使用PH1，40X 使用PH2，100X 使用PH3。这些都写在物镜上。

3，透射光滤光片除了GIF（绿色）外均可使用〔NCB（日光平衡片）一定要使用〕，这样就提高色温，使得背景颜色更白一些。

4, 拍摄相差图像时就可以直接拍摄黑白图像。因此可以使用相机的黑白模式来拍摄。

5，使用相机拍摄一张图片，看看是否光场不匀，如果光场不匀那么使用相机软件中的平场校正来校正

荧光观察

打开荧光光源和shutter(RL),关闭透射光shutter,根据所染的荧光染料选择使用相应的荧光模块,即可正常观察.

DIC 观察

DIC 作为一种更高级的观察活细胞方法，其使用方法较为复杂。主要的DIC 附

件包括四部分（起偏器，检偏器，两个DIC 棱镜），观察时都要使用，缺少任何一件，都将对观察效果产生很大的影响。具体使用步骤如下：

1、透射光照明，尽量使用较强的光强，荧光滤镜轮转到空位（有的显微镜转到DIC 位

置），聚光镜转到DICⅠ或Ⅱ或Ⅲ（根据物镜下DIC 棱镜上的标记选择，这两个棱镜是配套使用的）

2、将起偏器，检偏器放入观察光路，调节调焦机构，直至观察到样品。

3、此时的观察效果可能不是最好的。我们可以一边观察，一边调节物镜根部的DIC 棱镜孔径光栏：

其主要作用是调节观察样品的对比度，这个对于观察和拍摄图片来说都是很重要的。它同时还控制图像的分辨率、亮度、景深等要素。它们不能各自独立的进行调节,因此每个物镜会对应一个最佳位置。

孔径光栏的调节是要和物镜上的数值孔径一一对应的，经验值是数值孔径数值X 0.8（如10X 物镜的数值孔径是0.30，那么对应的孔径光栏的调节位置就应该是

0.3X0.8＝0.24）

相差环的调节方法如下：

工具：调中望远镜.由安装工程师调节

相差显微镜安装完成后，先调节柯勒照明，然后将目镜取下，换上调中望远镜（或使用目镜筒中集成的伯兰特透镜），将物镜和其对应的相差环放入光路，调节调中望远镜的高低，直至可以清楚的看到一个黑色的圆环和一个亮的圆环。调节的目的就是将这两个环重合。调节是通过调节聚光镜上的相差环上的调节螺丝来完成的

显微镜的清洁与保管

无论是显微观察还是显微照相，检查并保持光路系统的清洁是特别重要的。

A，可能需要清除尘埃的部位：出光口,聚光镜，物镜，目镜等（其他位置非ZEISS工程师不允许拆卸清洗）。

清洁时先用一个吹风球或软毛刷去掉附着在表面的灰尘和其他异物，然后再做擦拭。

B，擦拭各镜头时有以下注意事项：

1 擦拭液选用乙醚酒精混合液（乙醚：无水酒精＝7：3）

2 擦拭时一定要采用专用镜头纸或长纤维的脱脂棉签。

3 蘸取擦镜液后用力甩一下，保证擦拭棉签处于半干状态（擦镜液不能

多，以保证挥发快速）

5擦拭工具和方法如下图