植物组培技术原理之生根培养
植物组培技术原理之生根培养
当材料增殖到一定数量后，就要使部分培养物分流到生根培养阶段。若不能及时将培养物转到生根培养基上去，就会使久不转移的苗子发黄老化，或因过分拥挤而使无效苗增多造成抛弃浪费。根培养是使无根苗生根的过程，这个过程目的是使生出的不定根浓密而粗壮。生根培养可采用1／2或者1/4MS培养基，全部去掉细胞分裂素，并加入适量的生长素(NAA、IBA等)。
诱导生根方法
①将新梢基部浸入50或100×10-6I IBA溶液中处理4—8h；②在含有生长素的培养基中培养4-6d；③直接移入含有生长素的生根培养基中。上述三种方法均能诱导新梢生根，但前二种方法对新生根的生长发育则更为有利。而第三种对幼根的生长有抑制作用。其原因是当根原始体形成后较高浓度生长素的继续存在，则不利于幼根的生长发育。不过这种方法比较可行。
另外也可采用下列方法就可生根：①延长在增殖培养基中的培养时间；②有意降低一些增殖倍率，减少细胞分裂素的用量(即将增殖与生根合并为一步)；③切割粗壮的嫩枝在营养钵中直接生根，此方法则没有生根阶段。可以省去一次培养基制作，切割下的插穗可用生长素溶液浸蘸处理，但这种方法只适于一些容易生根的作物。
另外少数植物生根比较困难时，则需要在培养基中放置滤纸桥，使其略高于液面，靠滤纸的吸水性供应水和营养，从而诱发生根。从胚状体发育成的小苗，常常有原先已分化的根，这种根可以不经诱导生根阶段而生长。但因经胚状体途径发育的苗数特别多，并且个体较小，所以也常需要一个低浓度或没有植物激素的培养基培养的阶段，以便壮苗生根。
试管内生根壮苗的阶段，为了成功地将苗移植到试管外的环境中，以使试管苗适应外界的环境条件。通常不同植物的适宜驯化温度不同。如菊花，以18～20℃为宜。实践证明植物生长的温度过高不但会牵涉到蒸腾加强。而且还牵涉到菌类易滋生的问题。温度过低使幼苗生长迟缓，或不易成活。春季低温时苗床可加设电热线，使墓质温度略高于气温2～3℃，这不但有利于生根和促进根系发达，而且还有利于提前成活。
移植到试管外的植物苗光强度应比移植前培养有所提高，并可适应强度较高的漫射光，(约4000h左右)，以维持光合作用所需光照强度。但光线过强刺激蒸腾加强，会使水分平衡的矛盾更尖锐。
植物组织培养的基本步骤
植物组织培养的基本步骤 成熟细胞离体——（脱分化）——分生细胞——（分裂）——愈伤组织——（再分化）——形态建成————完整植株。 培养基的主要成分 【水分】 【无机盐】1.大量元素：N，P，K，Ca，Mg，S（由相关的无机盐提供） 2.微量元素：Fe，B，Cu，Mn，Mn，Zn，Co 【有机营养成分】1.糖类 2.维生素 3.氨基酸 4.肌醇 5.天然有机物【植物生长调节剂】1.生长素 2.细胞分裂素 3.其他生长调节剂 【凝固剂】琼脂 【其他物质】1.活性炭 2.抗生素 3.抗氧化物质 4.硝酸银 培养基和组织培养用具的灭菌方式 【培养基，无菌水】高压蒸汽灭菌，0.105MPa灭菌15~30分钟 【移栽基质】曝晒，甲醛熏蒸或高压蒸汽灭菌0.14MMPa灭菌1~2h 【接种室，缓冲室】紫外线灯照射30min，或气雾消毒剂 【超净工作台】紫外线灯30min，之后打开风机过滤除菌 【外植体】不同的化学消毒剂浸泡消毒 【接种工具】70%乙醇浸泡或擦拭，之后用火焰灼烧灭菌 【培养室】3%来苏尔喷雾，或甲醛，气雾消毒熏蒸 【皮肤】先用肥皂洗手，接种前用70%乙醇擦拭 【瓶口，管口】70%乙醇擦拭，用火焰封口
【培养瓶表面】70%乙醇擦拭 【台面，桌面】70%乙醇擦拭或喷雾消毒 植物外植体的灭菌方式 【茎尖，茎段，叶片】1. 用70%乙醇浸泡30秒，再用无菌水冲洗1次。 2.用2%次氯酸钠浸泡15min或0.1%升汞浸泡5~10min。 3.若材料有绒毛，最好在消毒液中加入几滴吐温。 4.消毒时要不断震荡，使植物材料与消毒剂充分接触。 5.最后用无菌水冲洗3~5次。 【果实】1.用乙醇迅速漂洗一下，再用无菌水冲。 2.用2%次氯酸钠浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。 【种子】用10%次氯酸钠浸泡20~30min，或0.1%升汞消毒5~10min，然后再用无菌水冲洗3~5次。 【花蕾】1.用70%乙醇浸泡10~15秒，无菌水冲洗一次。 2.在漂白粉中浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。 【根及地下部器官】用0.1%升汞浸泡5~10min 或用次氯酸钠浸泡10~15min，再用无菌水冲洗3~5次。 【消毒后的外植体应及时按照无菌操作技术接种在适宜的培养基上】
组培苗的炼苗方法
试管苗的炼苗和移栽 一、目的要求 熟练掌握组培苗移栽驯化技术。 二、用品 1、材料：生根组培苗； 2、器具用品：镊子；水盆；蛭石、珍珠岩、草木灰；育苗盘；喷雾器；竹签等。 三、方法与步骤 （一）练苗将生根的组培苗从培养室取出，将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行强光闭瓶练苗5~20天左右，遮阴度宜为50%~70%。然后打开瓶口，再放置3~7天。 （二）基质灭菌将蛭石、珍珠岩和草木灰分别用聚丙烯塑料袋装好，在高压灭菌锅中灭菌20分钟，或者采用高温干热灭菌法灭菌，灭菌后冷却备用。 （三）育苗盘准备取干净的育苗盘，将蛭石和珍珠岩按1：1混合，然后倒入育苗盘中，用木板刮平。将育苗盘放入1－2cm深的水槽中，使水分浸透基质，然后取出备用。（四）试管苗脱瓶用镊子将试管苗轻轻取出，放入清水盆中，小心洗去根部琼脂，然后涝出，放入干净的小盆中。 （五）移栽用竹签在基质上打孔，将小苗栽入育苗穴盘中，轻轻覆盖、压实。待整个穴盘栽满后用喷雾器喷水浇平。最后将育苗盘摆入到驯化室中，正常管理。 四、作业 记录试管苗移栽驯化步骤，统计移栽成活率。 解释： 1、闭瓶强光练苗。当生根后或根系得到基本发育后，将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行强光闭瓶练苗5~20天左右，遮阴度宜为50%~70%。 2、开瓶强光练苗。将培养容器的盖子或塞打开，在自然光下进行开瓶练苗3~7天，正午强光或南方光照较强地区要注意采取措施如用阴蓬或温室避免灼伤小苗。如果在开盖容器中培养不超过1周，一般不会引起含蔗糖培养基的污染问题。开瓶炼苗可以分阶段进行，即首先松盖（或塞）一两天，然后部分开盖一两天，最后完全揭去盖。这种方法在相对湿度十分低的屋内特别有好处。培养容器的开口大小也影响开盖的速度，开口大的瓶盖应比开口小的瓶盖除去的速度慢一些。 3、试管苗的移栽。试管苗移栽是组织培养过程的重要环节，这个工作环节做不好，就会造成前功尽弃。试管苗从琼脂培养基中移出时要用长镊子小心取出，彻底清洗干净根部
植物组织培养技术
植物组织培养技术 植物组织培养是指将植物体的一部分接种在合成培养基上，使其按照预定目标生 长发育成新植株。近年来，花卉组织培养及快繁脱毒技术越来越多地应用于花卉种苗 繁殖生产中。 一、组织培养在花卉产业中的应用 1.快速、大量繁殖优良品种组织培养技术已成为种苗生产的主要技术之一。经组织 培养，可增加繁殖系数，加快繁殖速度，可生产出种性纯、品质好、产花量高的生产 性用苗。在花卉育种过程中，不断的杂交、选种极大地扩展了花卉的花形与颜色，使 得花卉在各方面都越来越接近人们的需求。但在同时，也造成了花卉基因类型的高度 异质化———子代不易有均一表现。而组培苗是在母株器官、组织或细胞的基础上发展起来的，可以保持母株的全部特性（花形、花色、株形、开花习性、抗逆性等）， 因而可以根据需要来选择集多种优良性状于一体的植株加以分生，从而得到大量与母 株一模一样的植株。 2.培育脱毒苗木采用组织培养技术，利用植株的分生组织不易感染病毒的原理，可 以对花卉植株的分生组织进行组织培养来繁殖苗木，防止亲代植株的病害传递给子代，从而达到脱毒的目的。 病毒病对长期应用营养繁殖（分株、扦插等）的观赏植物及其生产的危害相当严重。由于观赏植物多采用营养繁殖，如嫁接、分株、压条等方法繁殖时，病毒（及类 病毒）则通过营养体及刀具、土壤传递给后代，大大加速了病毒病的传播与积累，导 致病毒病的危害越来越严重。据统计，观赏植物的病毒已多达100多种，并且逐年有 新增病毒的报道。观赏植物因病毒病大大影响其观赏价值，表现在康乃馨、菊花、百合、风信子等的鳞茎、球茎与宿根类花卉及兰科植物等严重退化，花少且小，花朵畸形、变色，大大影响观赏价值，严重者甚至导致某些品种的灭绝，严重制约观赏植物 生产的发展，这也是我国切花品种跨不出国门的原因之一。组培快繁技术已应用到蝴蝶兰的栽培中非洲菊也可以通过组培快繁技术进行繁殖 植物组织培养脱毒的原理主要是利用茎尖分生组织不带毒或少带毒。感病植株体内的病毒分布不均匀，其数量随植株部位和年龄而异，越靠近茎尖顶端的区域，病毒 的浓度也越低。分生区域无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分 裂和活跃的生长速度，因此生长点含有病毒的数量极少，几乎检测不出病毒。因此， 茎尖培养时，切取茎尖的大小对脱毒效果有很大影响，茎尖越小效果越佳，但太小时 不易成活，过大则不能保证完全除去病毒。不同种类的植物和不同种类的病毒在茎尖
康乃馨植物组织培养
《植物组培快繁技术》 康乃馨植物组织培养 实 验 设 计 小组成员：陈梅20141641044 郑莉20141641002 雷雨田20141641043
康乃馨植物组织培养 一、实验目的 掌握植物离体快速繁育原理、方法和完整过程。 二、实验原理 香石竹（学名Dianthuscaryophyllus）又名康乃馨，花色艳丽，开花时间长，装饰效果好，是世界上最畅销的切花之一，具有较高经济价值。由于病毒病侵害，常使植株矮化，花朵变小，花色产生斑点，退色甚至不开花，影响切花产量和质量。通过茎尖分生组织培养，能够获得“无病毒”的健康植株，对于引进的少而新的脱毒种苗，再进行一次茎尖培养，进一步降低基础苗中的病毒含量，并通过组织培养的方法快速繁殖，在短期内，就可以获得大量的脱毒试管苗，使引入材料迅速在生产上推广应用，取得明显的经济效益。 三、实验仪器与材料 仪器：超净工作台、酒精灯、电炉、烧杯、玻璃棒、镊子、解剖刀、接种盘、纱布、记号笔、标签纸 试剂：75%乙醇、0.1%升汞、无菌水、MS培养基、IAA0.1mg/L、BA0.5mg/L、pH5.8-6.0、蔗糖、琼脂 材料：康乃馨带芽外植体材料 四、实验步骤 （一）培养基的配方 1、康乃馨的生芽培养基 MS+IAA(0.1mg/L)+BA(2.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖30g/L+琼脂(8g/L) pH5.8-6.0,配制300ml,用培养瓶分装10~15瓶。另外需要制备无菌水10瓶，培养
瓶每人3~4瓶。纱布、碟子若干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。 2、康乃馨的继代培养基 MS+BA(0.3mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖30g/L+琼脂(8g/L)，pH5.8-6.0,配制 300ml,用培养瓶分装10-15瓶。另外需要制备无菌水10瓶，培养瓶每人3-4瓶。纱布、碟子若干后二者分别用报纸包好一同灭菌。 3、康乃馨的生根培养基 MS+生根培养基为1/2MS+NAA(0.075mg/L)+蔗糖(30g/L)+琼脂(8g/L)， pH5.8-6.0,配制0.3L，用培养瓶分装10-15瓶。另外，需要制备无菌水10瓶，每人3-4培养瓶、纱布、碟子若干后二者分别用报纸包好一同灭菌。 （二）康乃馨的生芽培养 1、无菌操作准备 将培养基、无菌水、及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯照射消毒20-30min,开送风开关，关紫外灯，通风10min后，打开照明日光灯。洗手、换鞋，换实验服，戴口罩，进入接种室，开启超净工作台。用纱布吸取75%酒精擦手、擦拭超净台、擦拭培养基和无菌水瓶，点燃酒精灯，镊子、解剖刀、剪刀等接种工具放入灭菌锅灭菌，待冷却后使用。 2、外植体消毒 选取康乃馨叶腋间生出的侧芽为外殖体，用自来水冲洗半小时，将材料上的泥土和灰尘及杂质冲洗干净，用解剖刀切取所需组织放入大烧杯中，用75%的酒精浸泡消毒30s，用无菌水冲洗3次，再将材料移入0.1%升汞溶液浸泡10分钟,然后在超净台内用无菌水冲洗6次。材料消毒完成。 3、外植体的制备 将消毒好的材料用无菌滤纸吸去多余的水份,然后在无菌超净工作台上的接
国内外植物组织培养技术的差距
国内外植物组织培养技术的差距 姓名：*** 学号：********* 指导教师：*** 专业班级：生物工程2009级1班 完成日期：2012-06-05
摘要 植物组织培养技术是农业生物技术中最早实现产业化并取得显著经济效益和社会效益的领域，在理论研究和生产实践中具有广泛的应用价值。通过对国内外植物组培的发展概况以及技术差距的分析，指出了我国植物组织培养技术的发展现状、目前存在的主要问题和应采取的措施，并对植物组织培养技术的发展作了展望。 关键词：组织培养概况差距展望 Abstract The plant tissue culture technology is agricultural biotechnology as the first realized industrialization and get a remarkable economic and social benefits of the field, in the theoretical research and production practice has wide application value. Through the domestic and international plant tissue and the development situation of the technology gap analysis, and pointed out the plant tissue culture technology's development present situation, the existing problems and the measures should be taken, and the development of plant tissue culture technology are discussed. Key words：Tissue culture situation gap looking
蓝莓组培苗瓶外生根技术
蓝莓育苗方式有生长季嫩枝扦插、秋冬季硬枝扦插、嫁接育苗、组织培养育苗。蓝莓组织培养育苗经过脱毒，种苗整齐健壮，但蓝莓组织培养苗瓶内生根时间长，一般要三个月以上，多采用在瓶内用50天时间培养出无根苗，出瓶后用微型扦插技术培养“苔藓苗”（有根），“苔藓苗”仅需30天时间就能培养健壮根系壮苗，大大提高蓝莓组培育苗效率、降低成本。
蓝莓组培瓶苗 瓶外扦插前处理 瓶外生根前，将在继代培养室培养50天左右的继代芽苗(此时丛生芽分化基本完成)移到 温室准备室，以自然散射光为光源，光照强度为3000-4000lx，温度控制在15-25℃，培养7- 8天后，打开瓶盖，在原炼苗室继续炼苗1-2天(依季节不同而调整，以培养基不滋生菌为准)，完成丛生继代芽苗的炼苗。扦插前取出放入清水中，将沾带的培养基清洗干净待用。扦插时，用剪刀将芽苗茎低端用剪刀剪断，选用生长旺盛、粗壮的继代芽苗，把剪口端3厘米左右茎 段快速浸蘸配制好的激素溶液，然后扦插到准备好的基质中。
栽培基质 珍珠岩、蛭石、苔藓按1：1：1的比例，珍珠岩先装入塑料穴盘(每个穴盘72个穴)下层，用0.1%的高锰酸钾消毒基质，覆盖薄膜24小时后即可使用。
生根调节剂 有条件的可用NAA（萘乙酸）、IBA（吲哚乙酸）1000mg/L的浓度配制生根调节剂。如果没有配制条件，也可直接购买ABT生根粉按规定浓度配制溶液用于速蘸枝条，也可达到90％以上的成苗率。 扦插后培养条件控制 芽苗移栽后，加强大棚(瓶外生根环境)内水分、光照、温度、湿度、通风透气等培养条件
的控制，营建适宜于芽苗生根诱导的培养条件是提高瓶外生根率的基本保障。 大棚内最高温度控制在30℃以下，最低温不低于18℃，适当的温差有利于根的诱导，蓝莓组培苗不喜强光直射，需用透光率50%的遮阳网以覆盖薄膜上部，如遇阴雨天及时揭去遮阳网，以保持棚内的光照，可通过喷雾调控温室温度。 全光照嫩枝扦插技术的关键是在整个扦插期保证叶片上有层水膜保护扦插枝条，可根据光照、温度、风力和白昼调节喷水量和喷水间隔时间。
组培苗的炼苗方法
组培苗的炼苗方法 Document serial number【KK89K-LLS98YT-SS8CB-SSUT-SST108】
试管苗的炼苗和移栽 一、目的要求 熟练掌握组培苗移栽驯化技术。 二、用品 1、材料：生根组培苗； 2、器具用品：镊子；水盆；蛭石、珍珠岩、草木灰；育苗盘；喷雾器；竹签等。 三、方法与步骤 （一）练苗将生根的组培苗从培养室取出，将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行强光闭瓶练苗5~20天左右，遮阴度宜为50%~70%。然后打开瓶口，再放置3~7天。 （二）基质灭菌将蛭石、珍珠岩和草木灰分别用聚丙烯塑料袋装好，在高压灭菌锅中灭菌20分钟，或者采用高温干热灭菌法灭菌，灭菌后冷却备用。 （三）育苗盘准备取干净的育苗盘，将蛭石和珍珠岩按1：1混合，然后倒入育苗盘中，用木板刮平。将育苗盘放入1－2cm深的水槽中，使水分浸透基质，然后取出备用。 （四）试管苗脱瓶用镊子将试管苗轻轻取出，放入清水盆中，小心洗去根部琼脂，然后涝出，放入干净的小盆中。 （五）移栽用竹签在基质上打孔，将小苗栽入育苗穴盘中，轻轻覆盖、压实。待整个穴盘栽满后用喷雾器喷水浇平。最后将育苗盘摆入到驯化室中，正常管理。 四、作业 记录试管苗移栽驯化步骤，统计移栽成活率。 解释： 1、闭瓶强光练苗。当生根后或根系得到基本发育后，将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行强光闭瓶练苗5~20天左右，遮阴度宜为50%~70%。 2、开瓶强光练苗。将培养容器的盖子或塞打开，在自然光下进行开瓶练苗3~7天，正午强光或南方光照较强地区要注意采取措施如用阴蓬或温室避免灼伤小苗。如果在开盖容器中培养不超过1周，一般不会引起含蔗糖培养基的污染问题。开瓶炼苗可以分阶段进行，即首先松盖（或塞）一两天，然后部分开盖一两天，最后完全揭去盖。这种方法在相对湿度十分低的屋内特别有好处。培养容器的开口大小也影响开盖的速度，开口大的瓶盖应比开口小的瓶盖除去的速度慢一些。 3、试管苗的移栽。试管苗移栽是组织培养过程的重要环节，这个工作环节做不好，就会造成前功尽弃。试管苗从琼脂培养基中移出时要用长镊子小心取出，彻底清洗干净根部（因为残留的蔗糖和营养会成为潜在的致病微生物的生长培养基，洗不净容易引起移栽苗烂根死亡），并且避免损坏根系。之后直接移栽或使用0.1%~0.3%的高锰酸钾或多菌灵等杀菌剂溶液中清洗，然后用清水清洗后移入苗床或盆钵，也可用水清洗后用多菌灵溶液浸泡10~30分钟后移栽，栽后淋足定
植物组织培养技术
第2章植物组织培养技术 第二节植物组织培养概述 一、授课章节 第二节植物组织培养概述。 二、学时安排 2学时。 三、教学目标 1．掌握植物组织培养的含义。 2．了解植物组织培养的类型划分。 3．理解植物组织培养的应用原理。 4．掌握植物组织培养的特点和应用。 四、教学重点、难点分析 重点： 植物组织培养的含义、特点和应用。 难点： 植物组织培养的应用原理。 五、教具 电化教学设备，植物组织培养试管苗。 六、教学方法 讲授法，多媒体课件。 七、教学过程 Ⅰ.导入 前面我们学习了有关植物育种的一些知识，今天，请看我给同学们看一样东西(教师拿出试管苗)，问同学们这是什么呢？这就是我们要学的植物组织培养。 II.新课
一、植物组织培养的含义 植物组织培养是指在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体培养在人工培养基上，给予适宜的培养条件，使其长成完整植株的过程。由于培养物脱离母株在试管内培养，故又称离体培养、试管培养。 二、植物组织培养的类型 植物组织培养由于分类依据不同可划分为不同的类型。 三、植物组织培养的应用原理 （一）植物细胞全能性 植物细胞全能性，是指植物体上每个具有完整细胞核的植物细胞，都具有该植物体的全部遗传信息和产生完整植株的能力。植物的体细胞一旦脱离所在器官或组织的束缚成为离体状态时，在一定的营养、激素和外界条件作用下，就可能表现出全能性，而生长发育成为完整的植株。
（二）细胞的分化和形态建成 （三）植物的再生功能 四、植物组织培养的特点 （一）研究材料来源单一，无性系遗传信息相同 （二）试验经济，管理方便，工作效率高 （三）培养条件人为控制，可周年连续进行试验或生产 （四）生长快，周期短，繁殖率高 五、植物组织培养的应用 （一）优良品种的快速繁殖 （二）脱毒及脱毒苗的再繁育 （三）植物新品种的培育 （四）种质资源的保存和交换 （五）有用次生代谢产物的生产 III.作业 1.简述植物组织培养的概念和培养类型。 2.植物组织培养技术有哪些特点？ 3.植物组织培养在生产上有哪些方面的应用？ 4.通过学习，你对植物组织培养技术是怎样理解的？ 第二节植物组织培养厂房的设计与构建一、授课章节 第二节植物组织培养厂房的设计与构建。 二、学时安排 2学时。
最新植物组织培养知识点归纳
第一章 1、植物组织培养：是指在离体条件下，利用人工培养基对植物的器官、组织、细胞、原 生质体等进行培养，使其长成完整植株 2、外植体：在植物组织培养中，由活体（in vivo）植物上提取下来的、接种在培养基上的 无菌细胞、组织、器官等均称为外植体。 3、愈伤组织：指在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。 4、应用 一、农业上的应用 1. 种苗快速繁殖(rapid propagation) 2.无病毒苗(virus free)的培养 3.在育种上的应用(breeding) （1）倍性育种，缩短育种年限，杂种优势明显； （2）克服远缘杂交的不亲合性和不孕性（胚培养）； （3）保存种质 （4）创造变异 二、在遗传学、分子生物学、细胞生物学、组织学、胚胎学、基因工程、生物工程等方面的应用。用于基因工程技术创造植物新种质。用于植物生长发育理论研究，包括生理学、病理学、胚胎学和细胞与分子生物学等。 三、利用组织培养材料作为植物生物反应器 第二章 1、细胞全能性（Totipotency）：指任何具有完整的细胞核的植物细胞都拥有形成一个完整植 株所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。 2、细胞分化（cell differentiation）：指导致细胞形成不同结构，引起功能或潜在的发育方式 改变的过程。 3、脱分化（Dedifferentiation）：指离体条件下生长的细胞、组织或器官逐渐失去原来的结构 和功能而恢复分生状态，形成无组织结构细胞团或愈伤组织 的过程。 4、再分化（Redifferentiation）：指脱分化的细胞重新恢复分化能力，形成具有特定结构和功 能的细胞、组织、器官甚至植株的过程。 5、植物组织培养中常遇到的问题以及解决措施 一、污染及防治： 1、真菌污染后，如果已形成孢子，则必须经高压灭菌后扔掉。但若是细菌污染，只 要及时发现，将材料上部未感菌的部分剪下转接，材料仍可使用。 2、用抗生素等杀菌药剂的处理，会影响植物材料正常生长。 二、褐变及防止 （1）选择合适的外植体
植物组织培养技术的应用以及
植物组织培养技术的应用以及在培养过程中存在的问题 摘要:介绍了植物组织培养技术的应用以及在培养过程中遇到的问题并提出解决的方法。植物组织培养技术的应用范围很广,目前主要用在离体无性系快速繁殖与无毒化、植物育种、遗传物质的保存、植物次生代谢物的生产和植物基因转化等方面。 关键词:植物组织培养;次生代谢物;基因转化;褐化 植物组织培养技术是指在无菌条件下,将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体,在人工配制的环境里培养成完整的植株。植物组织培养的依据是植物细胞“全能性”及植物的“再生作用”。1902年,德国著名植物学家G。Haberlanclt根据细胞学理论,大胆地提出了高等植物的器官和组织可以不断分割,直到单个细胞,即植物体细胞在适当的条件下,具有不断分裂和繁殖,发育成完整植株的潜力的观点。1943年,美国人White在烟草愈伤组织培养中,偶然发现形成一个芽,证实了G。Haberlanclt的论点。自G。Haberlandt提出的细胞全能性理论以来,在许多科学家的努力下,植物组织培养技术得到了迅速发展,其理论和方法逐渐趋于完善和成熟,并广泛应用于农业、林业、园艺、医药等行业,产生了巨大的经济效益和社会效益。 1 植物组织培养技术的应用前景 植物组织培养技术的应用前景很广泛,目前主要用在以下几个方面。 1.1 在植物脱毒和快速繁殖上的应用 植物脱毒和离体快速繁殖是目前植物组织培养应用最多、最有效的一个方面。很多农作物都带有病毒,特别是无性繁殖植物,如马铃薯、甘薯、草莓、大蒜等。但是,感病植株并非每个部位都带有病毒,White早在1943年就发现植物生长点附近的病毒浓度很低甚至无病毒。如果利用组织培养方法,取一定大小的茎尖进行培养,再生的植株有可能不带病毒,从而获得脱病毒苗,再用脱毒苗进行繁殖,则种植的作物就不会或极少发生病毒。此法已在马铃薯、大蒜、草莓、葡萄、康乃馨等多种作物上获得成功,并产生了明显的经济效益。国外40%~80%草莓是通过试管脱毒后繁殖的,意大利每个州都有年产百万草莓无毒种苗的工厂。由于运用组织培养法繁殖植物的明显特点是快速,每年可以数以百万倍的速度繁殖,因此,对一些繁殖系数低、不能用种子繁殖的名、优、特植物品种的繁殖,意义尤为重大。同时组织培养可不受地区、气候的影响,比常规方法快数万倍到数百万倍的速度扩大繁殖,及时提供大量优质种苗。目前,观赏植物、园艺作物、经济林木、无性繁殖作物等部分或大部分都用离体快繁提供苗木,试管苗已出现在国际市场上并形成产业化。 1.2 在植物育种上的应用 植物组织培养技术对培育优良作物品种开辟了新途径。目前,国内外把植物组织培养已普遍应用于作物育种,并在以下几个方面取得了较大进展: 1.2.1 单倍体育种 单倍体植株往往不能结实,在培养中用秋水仙素处理,可使染色体加倍,成为纯合二倍体植株,这种培养技术在育种上的应用称为单倍体育种。单倍体育种具有高速、高效率、基因型一次纯合等优点,因此,通过花药或花粉培养的单倍体育种,已经作为一种崭新的育种手段问世,自从1964年Guha和Maheshwari报道利用花药培养技术由蔓陀罗花药诱导单倍体植株以来,各国科学家致力于花药培养。1974年,我国科学家用单倍体育种法育成世界上第一个作物新品种---单育1号烟草品种,现已有300种植物花药培养成功。其中我国首先培育出来的就有40余种,它们主要是粮食、油料、蔬菜、林木、果树等重要经济作物。据报道,水稻品种
植物组织培养步骤
植物组织培养概念（广义）又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。植物组织培养概念（狭义）指用植物各部分组织，如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。 组织培养的步骤 一、培养基配制 配制培养基有两种方法可以选择，一是购买培养基中所有化学药品，按照需要自己配制；二是购买商品的混合好的培养基基本成分粉剂，如MS、B5等。 自己配制可以节约费用，但浪费时间、人力、且有时由于药品的质量问题，给实验带来麻烦。就目前国内的情况看，大部分还是自己配制。为了方便起见，现以MS培养基为例介绍配置培养基的主要过程。 1、配制几种母液 （1）配制MS大量元素母液 一般将大量元素分别配制成100倍的母液，使用时再分别稀释100倍。 分别称取 NH4NO3 165g KH2PO4 17g KNO3 190g CaCl2·2H2O 44g MgSO4·7H2O 37g 各自配成1L的母液。倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 （2）配制MS微量元素母液 一般将微量元素配制成100倍母液。 依次称取 KI 0.083g Na2MoO4·2H2O 0.025g H3BO3 0.62g CuSO4·5H2O 0.0025g MnSO4·H2O 1.69g CoCl2·6H2O 0.0025g ZnSO4·7H2O 0.86g 配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O 由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调整液。 分别称取 CuSO4·5H2O 0.05g CoCl2·6H2O 0.05g 各自配成100ml的调整液，然后取5ml就还有0.0025g的量。 （3）配制MS有机母液
植物组织培养技术
植物组织培养技术 植物组织培养是70 年代快速发展并趋成熟的现代生物技术，是在含有营养物质及植物生长调节物质的培养基中离体培养植物组织（器官或细胞）的技术。它的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每一个细胞都有分化成一个完整植株的潜在能力。该技术在品种选育、名特优品种的快速繁殖、自然资源的保护、品种质量的提高、濒危植物种质保存等诸方面都表现出巨大的应用前景，取得了明显的经济效益。 组织培养前景广阔植物组织培养技术一诞生就表现了强大的生命力和美好的前景。它在细胞学、遗传学、农学、生理学、生物化学等学科的基础理论研究中，成了一种常用的生物学技术; 在实际应用中也发挥了巨大作用，取得了显着的经济效益和社会效益。 育种：通过组织培养技术，结合诱变育种技术，成功地培育出许多优良品种。如抗黄化叶病的大麦品种; 培育出脱病毒的马铃薯、甘蔗品种，使马铃薯产量增加十多倍;选育出早熟（比母本提早15 天）、优质（含糖量9.5%）、高产（单果平均重106 克）的京早三号桃（中科院植物所培育）等等，这些例子不胜枚举。 快速繁殖：应用组织培养技术可使某一个优良品种得到快速繁殖，可在一年内从一个芽或一张叶片，培养与繁殖成几十万或上百万株小苗，使得该优良品种很快得以推广。如浙江省金华婺东葡萄良品场，1990年将日本引进的葡萄品种栽培成功后，我们通过快速繁殖，使每月的增殖系数达到6?9,可使一个芽在一年之内产生100 万个芽。快繁技术在花
卉、果树等经济植物的优良品种繁育中，取得了良好的经济效益。 名、特、优、稀植物品种的保存与繁殖：许多名贵植物（如兰花）由于繁殖慢或困难,数量不多; 而众多的野生植物（如花卉、药材）由于人们过度的采伐,变成濒危植物。这些品种的保存与繁殖越来越显得重要与紧迫。应用组织培养技术, 不仅可以在实验室条件下保存种质,还可以进行工业化生产, 大量繁殖来满足人类生活的需求。 无土栽培：现代正在快速推广的无土栽培技术, 就是建立在组织培养的基础理论之上的, 特别是无土栽培中的营养液成分, 与组织培养的培养基配制基本相似。无土栽培以其高产、低成本、低污染与低有害物质的残留而倍受人们的欢迎。 快速繁殖 植物快速繁殖技术自60 年代开始用于兰花生产以来已得到快速发展。开始时主要应用于花卉生产, 现逐渐应用于蔬菜、果树等其他园艺作物, 近年来又应用于造林树种的繁育上。现已有数百种植物可通过组织培养进行快速繁殖, 并进行了商品化的大规模生产。其中包括用于切花生产的香石竹、唐菖蒲、非洲菊、花烛、百合、菊花等; 还有兰花、非洲紫罗兰、大岸桐、杜鹃和某些蕨类植物和观叶植物; 以及草莓、芦笋、香蕉、葡萄、桉树等经济作物。在很多国家已成为一种新兴的产业。 该技术的主要优点有： ①所需要的植物材料少；②繁殖速度快，不管从总体上还是单位面积上，其繁殖速度都大大快于常规方法; ③如结合茎尖培养等脱病毒技术，可改良作物品种。
专题17植物组织培养技术及有效成分提取
专题17植物组织培养技术及有效成分提取 1．对胡萝卜素的提取过程的分析正确的是 A．把新鲜的胡萝卜切成米粒大小的颗粒，置于烘箱中烘干时，温度越高、干燥时间越长，烘干效果越好 B．在萃取过程中在瓶口安装冷凝回流装置，是为了防止加热时有机溶剂的挥发C．在萃取后，没有必要进行过滤 D．将滤液用蒸馏装置进行蒸馏，要收集蒸发出去的液体，蒸发出去的是胡萝卜素，留下的是有机溶剂 2．在玫瑰精油和橘皮精油提取过程中，正确的是 A．玫瑰精油和橘皮精油都可用蒸馏、压榨和萃取的方法提取 B．分离出的玫瑰精油油层还会含有一定的水分，可加入无水Na2SO4吸水 C．新鲜的橘皮中含有大量的果蜡、果胶等，为了提高出油率，需用CaCO3水溶液浸泡D．用于提炼玫瑰精油的玫瑰花应避免在花开的盛期采收，因为此时花朵含油量较低3．如图是利用水中蒸馏法提取玫瑰精油的装置。下列有关该装置的描述，错误的是() A．该装置在安装时需要先固定热源酒精灯，再固定蒸馏瓶，并要注意蒸馏瓶与热源的距离 B．在安装蒸馏头时，要使蒸馏头的横截面与铁架台平行 C．图中冷凝管的进水口、出水口接错，进水口应在下，出水口应在上 D．将温度计固定在蒸馏头上，固定的位置如图所示，使温度计水银球略高于液面4．如图为胡萝卜素的纸层析结果示意图。下列有关说法不正确的是()
A．A、B、C、D 4点中，属于标准样品的样点是A和D，提取样品的样点是B和C B．点样应该快速细致，圆点要小，每次点样时都要保持滤纸干燥 C．图中①和②代表的物质分别是其他色素和杂质、β-胡萝卜素 D．该层析的目的是鉴定提取的β-胡萝卜素粗品 5．如图所示为提取胡萝卜素的装置示意图，下列有关叙述正确的是() A．该装置也可以用于提取柑橘和柠檬中的植物芳香油 B．提取胡萝卜素时，1的作用是防止加热时有机溶剂挥发 C．提取胡萝卜素时，2中可以加入酒精来提取 D．提取胡萝卜素时，为了提高温度，可以不要水浴锅直接用酒精灯加热 6．下列有关植物有效成分提取的顺序的描述，正确的是() ①胡萝卜→粉碎→干燥→萃取→浓缩→过滤→胡萝卜素 ②石灰水浸泡→漂洗→压榨→过滤→静置→再次过滤→静置→橘皮油 ③鲜玫瑰花+清水→水蒸气蒸馏→油水混合物→分离油层→除水→玫瑰油 A．①②③B．①②C．②③D．①③ 7．橘皮精油的提取中，用压榨法得到压榨液，为了使橘皮油易于与水分离，还要分别加入两种物质，并调节pH至7～8，这两种物质是() A．相当于橘皮质量0.25%的小苏打和0.25%的硫酸钠 B．相当于橘皮质量0.25%的小苏打和5%的硫酸钠 C．相当于橘皮质量5%的小苏打和0.25%的硫酸钠 D．相当于橘皮质量5%的小苏打和5%的硫酸钠 8．已知天然胡萝卜素是防癌抗癌食品、保健品和药品。胡萝卜素化学性质较稳定，可以用来治疗某些疾病。有关胡萝卜素及提取的叙述不正确的是 A．根据双键的数目可以将胡萝卜素划分为a、β、γ三类 B．一分子β-胡萝卜素将被水解成两分子的维生素A C．石油醚是萃取胡萝卜素的良好溶剂，水浴加热可以提高萃取效率 D．实验结果将需要对提取的胡萝卜素粗品与标准样品纸层析比较
《植物组织培养技术》
《植物组织培养技术》 一、课程性质 本课程是生物技术及应用专业的一门专业核心课程，是一门理论性和实践性较强的应用性科学，是培养基配制工、组培接种工、组培技术研发工和组培室（车间）主管必须的技能课程。 通过本课程的学习，培养生物技术及应用专业四大核心职业能力之一的植物组织培养技术应用能力，使学生具备植物组织培养的基本知识，能准确配制培养基，熟练无菌操作，科学设计培养方案，有效调控培养条件，正确分析解决组培异常问题，保证组培苗质量，获得从事植物组培技术应用岗位工作的职业能力，同时具备组织培养工的职业素养、自主学习能力和持续发展能力，为今后从事苗木组培快繁与脱毒工作奠定基础。 本课程以生物科学基础、应用化学、园艺植物识别等理论和实践课程为基础，同时为名优花卉工厂化生产、园艺作物无土栽培、园艺种苗繁育等其它核心课程提供新技术、新方法支持。 二、课程定位 1、理念定位 校企合作开发课程；以能力为本位，基于岗位与职业能力分析，并结合植物组织培养工
职业工种鉴定要求和行业、企业标准，构建学习领域课程内容的结构与体系；以学生为本，关注学生的职业生涯发展，遵循认知规律和职业能力形成的需要来设计安排教学活动，实施教学做考合一，体现教学目标的针对性、教学内容的实用性与科学性、教学设计的导向性和教学方法的适用性、有效性。 2、服务面向定位 服务组培企业生产一线。 3、目标规格定位 培养适应园艺作物组培生产、管理、组培苗木销售与服务需要的高素质技能型人才。 4、教学模式定位 基于行动导向理论，实施工学结合，理实一体化教学，做中学，培养组培岗位能力。 5、考核评价定位 树立“能力本位”现代高职考试观，坚持多元整体评价观，知识、技能与素质同步考核，充分发挥考试的导学促教作用，促进学生全面发展。 三、课程目标 通过不同项目和具体任务的完成，使学生具备植物组织培养的基本理论知识；能准确配制培养基，熟练无菌操作，培养出组培苗木；能科学设计培养方案，正确分析解决组培异常问题，从而控制组培苗质量；具备组织培养工的职业素质，使学生最终成为适应组培生产、管理、组培苗木销售与服务需要的、具有良好职业道德、较强组培技能和可持续发展能力的高素质技能型人才。具体目标如下： 1.专业能力 ●熟悉组培含义、类型、特点与具体应用。 ●熟悉组培工作程序、组培设施与建造要求，能使用和维护组培仪器设备，会设计组 培室，科学管理组培室。 ●熟练进行培养基制备、外植体选择与灭菌、接种、培养、组培苗驯化移栽等组培的基本操作。 ●会设计与实施组培试验方案、核算组培成本和效益分析。 ●能准确观察组培苗长势、长相，科学分析、解决组培的异常问题，有效控制组培苗质量。
植物组织培养技术的应用
《植物组织培养技术的应用》导学案 学习目标：1.掌握微型繁殖和植物组织培养的联系 2.掌握作物脱毒、人工种子的制备过程和意义 3.了解单倍体育种和突变体的利用 4.了解细胞产物的例子 教学重难点：1.掌握微型繁殖和植物组织培养的联系 2.掌握作物脱毒、人工种子的制备过程和意义 自主学习 （一）植物繁殖的新途径 1.微型繁殖 （1）微型繁殖技术：植物微型繁殖技术又叫—————————是指用于——————的————————技术。（2）特点：①保持优良品种的——————————。 ②高效快速地实现种苗——————————。 （3）实例：20世纪60年代，荷兰的科学家就成功地实现了利用————————来培育兰花。 2.作物脱毒 （1）材料：—————————分生区附近的————————。 （2）脱毒苗：切取————————进行组织培养获得的。（3）优点：使农作物————————————。 3.人工种子 （1）概念：一植物组织培养得到的————————、不定芽、顶芽和——————等为材料，经过——————包装得到的种子。 （2）特点：①后代不会——————————。 ②不受——————、气候和——————限制。（二）作为新品种的培育 1.单倍体育种染色体加倍 （1）方法：花药离体培养单倍体植株纯合子植株。
（2）优点：①后代是纯合子，能——————。 ②明显缩短了————————。 2.突变体的利用 （1）产生原因：在植物的组织培养过程中，易受——————和——————（如射线、化学物质等）的影响而————————。 （2）利用：筛选出对人们有用的——————，进而培育成——————————。 （三）细胞产物的工厂化生产 1.细胞产物种类：——————、脂肪、糖类、——————、香料、生物碱等。 2.技术：植物————————技术。 3.实例：我国利用植物组织培养技术实现了大量生产—————————— 合作探究 1、人们利用植物的微型繁殖技术来进行工厂化种苗生产，这是利用了该项技术的哪些特点？ 2、人工种子之所以神奇，是由于它具有天然种子不可以比拟的特点，想一想它具有哪些结构，具有哪些特点？ 课堂检测 1．植物的微型繁殖技术是指（） A．植物体细胞杂交技术B．嫁接 C．营养繁殖D．植物组织培养 2．科学工作者把胡萝卜的韧皮部细胞分离出来，将单个细胞放入培养基中培养，获得了许多完整的植株，这些植株的特点是（） A．彼此性状相似B．变异频率较高C．单倍体D．都是纯合子 3．用植物组织培养技术，可以培养或生产（） A．食品添加剂B．无病毒植物 C ．人工种子D．前三项都是 4．下列四个选项中没有采取植物组织培养技术的是（）A．花药离体培养得到单倍体植株
植物组织培养简介及流程图
植物组织培养简介 在无菌条件下，将离体的植物器官(如根尖、茎尖、叶、花、未成熟的果实、种子等)、组织(如形成层、花药组织、胚乳、皮层等)、细胞(如体细胞、生殖细胞等)、胚胎(如成熟和未成熟的胚)、原生质体(如脱壁后仍具有生活力的原生质体)，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，长成完整的植株，统称为植物组织培养。 植物组织培养的原理是细胞全能性。也就是说每个植物细胞里都含有一整套遗传物质，只不过在特定条件下才会表达。 组织培养基于此原理就可以将已处于分化终端或正在分化的植物组织脱分化，诱导形成愈伤组织，再在愈伤组织上形成新的丛生芽。 一个完整的植物组织培养过程一般包括以下几个步骤： （1）准备阶段 查阅相关文献，根据已成功培养的相近植物资料，结合实际制订出切实可行的培养方案。然后根据实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段所需的培养基，并经高压灭菌或过滤除菌后备用。 （2）外植体选择与消毒 选择合适的部位作为外植体，采回后经过适当的预处理，然后进行消毒处理。将消毒后的外植体在无菌条件下切割成一定大小的小块，或剥离出茎尖，挑出花药，接种到初代培养基上。
（3）初代培养 接种后的材料置于培养室或光照培养箱中培养，促使外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤组织，或顶芽、腋芽直接萌发形成芽。然后将愈伤组织转移到分化培养基分化成不同的器官原基或形成胚状体，最后发育形成再生植株。 （4）继代培养 分化形成的芽、原球茎数量有限，采用适当的继代培养基经多次切割转接。当芽苗繁殖到一定数量后，再将一部分用于壮苗生根，另一部分保存或继续扩繁。进行脱毒苗培养的需提前进行病毒检测。（5）生根培养 刚形成的芽苗往往比较弱小，多数无根，此时可降低细胞分裂素浓度或不加，提高生长素浓度，促进小苗生根，提高其健壮度。 （6）炼苗移栽 选择生长健壮的生根苗进行室外炼苗，待苗适应外部环境后，再移栽到疏松透气的基质中，注意保温、保湿、遮荫，防止病虫危害。当组培苗完全成活并生长一定大小后，即可移向大田用于生产。 如：茎尖→表面消毒→接种诱导培养基→茎尖生长→病毒检测鉴定→培养无根小植株→培养生根→完整小植株→炼苗20-25天→移栽成活。
植物组织培养技术所有名词解释
植物组织培养复习材料 一、名词解释。 1、植物组织培养(plant tissue culture)：植物的离体器官、组织或细胞在人工制备的培养基上进行无菌培养，并在人工控制的环境条件下，使其发育成完整植株的科学技术 2、脱分化（dedifferentiation）：指失去分裂能力的细胞回复到分生性状态并进行分裂，形成无分化的细胞即愈伤组织的现象。 3、再分化（redifferentiation）：愈伤组织形成不定芽或不定根或胚状体。 4、外植体(explant)：植物组织培养过程中从活体植株上切去下来的用于离体培养的一切材料。（如器官、组织、细胞、原生质体、种子等） 5、愈伤组织(callus)：原本指植物在受伤后于其伤口表面形成的一团薄壁细胞。在组培中，则指人工培养基上由外植体形成的一团无序生长的薄壁细胞。 6、器官发生：胚胎时期由胚层器官原基发育成器官的过程。包括细胞分化和器官形成。 7、胚状体发生：在植物细胞、组织或器官体外培养过程中，由一个或一些体细胞经过胚胎发生和发育过程，形成的与合子胚相类似的结构。可进一步发育成植株。 8、细胞全能性（cell totipotency）：指植物的每一个细胞都携带有一完整的基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。 9、细胞分化：一个尚未特化的细胞发育出特征性结构和功能的过程。 10、极性：细胞（也可指器官或植株）内的一端与另一端在形态结构和生理生化上的差异。 11、试管苗：通过组织培养产生的植株。 12、看护培养：是指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，使其持续分裂和增殖的一种培养方法。这块愈伤组织被称为看护组织。 13、固相化培养：将细胞或原生质体固着在琼脂糖、藻（月元）酸盐或多聚赖氨酸中，然后将他们放入液体培养基中震荡培养。这种培养方法既利用了振荡培养室营养物质和气体易于交换的优点，有利用了固相化使细胞免受振荡时剪切力的作用。 14、悬浮细胞培养：将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增值的技术。适用于大规模的培养，使细胞工程的基本平台。 15、植板效率=（每个平板中新形成的细胞团数/每个平板中接种的细胞数）*100 16、实验室的组成及功能：1.基本实验室（1）准备室（2）接种室（3）培养室2.辅助实验室（1）细胞学实验室（2）摄影室及暗室（3）生化分析室（无菌操作室、化学实验室、培养室、细胞学观察室、暗室）。 17、植物种质：物亲代通过生殖细胞或体细胞传递给后代的遗传物质，植物种质资源即为携带各种不同遗传物质的植物总称。 18、玻璃化现象：指试管苗的一种生长失调症状，当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。其苗称为玻璃化苗。 19、基本培养基：包括大量元素和微量元素（无机盐类）、维生素和氨基酸，还有糖和水等。 20、完全培养基：在基本培养基基础上，根据各种不同试验要求，添加各种植物生长调节物质以及其他复杂有机附加物，包括有些成分尚不完全清楚的天然提取物。21、外植体褐变：在组织培养过程中，外植体向培养基中释放褐色的物质（醌类）致使培养基逐渐变成褐色，培养材料也随之变成褐色而逐渐死亡的现象。