PDF版 淋巴细胞亚群和流式细胞术

淋巴细胞亚群(详细资料)

机体免疫状态是衡量机体是否患病的重要指标，目前多采用流式细胞术来监测机体的免疫状态，其中最重要的指标是检测T、B和NK淋巴细胞的水平。 T细胞主要包括T辅助细胞（Th）和T抑制细胞（Ts）细胞亚群。CD3+细胞代表外周血中总的成熟T细胞，理论上应约等于CD4+细胞和CD8+细胞的总和，但往往出现CD4+加CD8+细胞之和大于CD3+，这是因为CD4+细胞包括CD3+/CD4+细胞（真正Th细胞）和CD3-CD4+细胞（非Ts细胞），而后者包括CD3-CD8+CD16+56+细胞（一部分NK细胞）和CD3-CD8+CD16+56-（未知细胞）。由此可见，真正的TH细胞是CD3+CD4+细胞，真正Ts细胞是CD3+CD8+细胞。尤其当患者NK细胞明显增加时，会使CD4细胞和CD8细胞的总和远大于CD3+细胞，因此，用三色荧光标记才能分析真正的辅助性T细胞和抑制性T细胞。 首先在淋巴细胞中识别出CD3细胞，然后在CD3细胞中再区分CD4+和CD8+细胞。NK细胞的表面无T细胞和B细胞表面标志，但有CD16和CD56等标志，用CD16+56抗体能鉴定出NK细胞（一定是CD3阴性），CD3-CD16+56+细胞才是真正的NK细胞。根据是否表达CD8，又可将NK细胞分为CD3-CD8+CD16+56+细胞（所占比例小，不影响CD8比例）和CD3-CD8-CD16+56+细胞（主要成分）。 B细胞的表面标志是CD19，理论上CD3-CD19+细胞才是真正的B淋巴细胞。但 CD3+CD19+细胞很少，可忽略不计，所以CD19+细胞就是B淋巴细胞。 在抗肿瘤效应中，CD4和CD8分别是T淋巴细胞的辅助／诱导细胞亚群与抑制/细胞毒细胞亚群，CD4细胞的主要功能是通过其分泌的淋巴因子，增强和扩大免疫应答过程，辅助诱导其它免疫细胞如杀伤性T细胞，B细胞等共同发挥抗肿瘤作用，CD4细胞的减少，导致免疫功能低下。CD4/CD8比值是重要的免疫状态监测指标，其比例的降低与免疫系统损害的程度相关。 CD4降低见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷症、艾滋病、应用免疫抑制剂者；CD8降低见于自身免疫性疾病或变态反应性疾病；CD4/CD8比值升高见于恶性肿瘤、自身免疫性疾病、变态反应、病毒感染等；CD4/CD8比值降低见于艾滋病(常小于0.5)。监测器官移植排斥反应时，CD4/CD8比值升高预示可能发生排斥反应。

流式细胞术原理及功能介绍

流式细胞术详解 一. 流式细胞术概述 流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术 ,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析, 在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞,分选纯度＞95%。在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。 国内使用的流式细胞仪主要由美国的两个厂家生产:BECKMAN- COULTER公司和Becton-Dickinson公司(简称B-D公司)。流式细胞仪主要有两型:临床型（又称小型机、台式机）和综合型（又称大型机、分析型）。BECKMAN-COULTER公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL, B- D公司最新产品为FACS Vantage和FACS Calibur。EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是临床型;EPICS ALTRA和 FACS Vantage是综合型，除具备检测分析功能外,还具有细胞分选功能 ,多用于科学研究。 二.流式细胞仪主要技术指标 1．流式细胞仪的分析速度： 一般流式细胞仪每秒检测1000～ 5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。 2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分子,两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。 3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～０.5μm。 4．流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，,一般流式细胞仪能够达到<2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。 5．流式细胞仪的分选速度：一般流式细胞仪分选速度＞1000个/秒，分选细胞纯度可达99%以上。 三.流式细胞仪主要构造和工作原理 流动室及液流驱动系统 流式细胞仪主要由以下五部分构成:①流动室及液流驱动系统②激光光源及光束形成系统③光学系统④信 号检测与存储、显示、分析系统⑤细胞分选系统。 流动室（Flow Cell或Flow Chamber）是流式细胞仪的核心部件，流动室由石英玻璃制成，单细胞悬液在细胞流动室里被鞘流液包绕通过流动室内的一定孔径的孔,检测区在该孔的中心，细胞在此与激光垂直相交，在鞘流液约束下细胞成单行排列依次通过激光检测区。流动室里的鞘液流是一种稳定流动，控制鞘液流的装置是在流体力学理论的指导下由一系列压力系统、压力感受器组成，只要调整好鞘液压力和标本管压力, 鞘液流包绕样品流并使样品流保持在液流的轴线方向，能够保证每个细胞通过激光照射区的时间相等，从而使激光激发的荧光信息准确无误。见图12.1流动室示意图。流动室孔径有60μm、100μm、150μm 、250μm等多种，供研究者选择。小型仪器一般固定装置了一定孔径的流动室。 图12.1流动室示意图(采自Coulter Training Guide) 四. 流式细胞仪主要构造和工作原理 激光光源及光束形成系统

淋巴细胞亚群分析与临床---陈建林

一、流式淋巴细胞亚群检测的临床意义 1.了解不同情况下机体免疫功能状态 肿瘤（手术、放化疗患者的免疫功能检测） 感染（脓毒血症、重症监护患者等） 自身免疫病、免疫缺陷病等 不孕不育 某些血液系统疾病 其他：慢性肾病、骨髓移植恢复期等 2.辅助临床疾病的诊断 3.探索疾病的发病机理、病程及预后 4.观察监测疗效，指导临床建立治疗方案 二、淋巴细胞的分类及功能 B细胞(CD19+)：体液免疫 辅助/诱导T细胞(Th):介导和增强免疫应答 (CD4+) 淋巴细胞T细胞(CD3+）细胞毒性(Tc) /抑制性T细胞(Ts): 抗病毒、抗肿瘤 (CD8+) 调节性T 细胞(Treg):抑制免疫应答、维持免疫耐受 (CD4+CD25+) NK细胞：抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节 (CD16+/CD56+) 三、流式淋巴细胞亚群检测的临床应用 淋巴细胞亚群检测与儿科疾病 （一）评估机体免疫功能状态 多种小儿疾病原发或继发疾病均存在T细胞异常，观察T细胞变化，对小儿疾病病因、发病机制以及协助临床诊断与治疗等具有重要价值。 类型指标CD3+ CD4+CD8+CD4+/CD8+细菌性肺炎↓↓↓↓↑↓↓ 支原体肺炎↓↓↓↓↓↓↓↓ 病毒性肺炎↓↓↓↓↓↓↓↓ 传单增多症↑↑↓↓↑↑↓↓ 支气管哮喘↑↓↑

T 细胞CD4、CD8、CD3 检测介入时间-----结合退热、消咳、肺罗音消失时间观察T 细胞变化，特别针对儿科患者可合理调节抗生素使用，改善预后，避免药物损伤. （二）原发性免疫缺陷病的早期识别和干预 1.流式细胞仪分析T细胞亚群(包括CD3+、CD4+和CD8+)、B细胞(CD19+) 和NK细 胞(CD16+/CD56+)比例等主要检查项目,可对大多数原发性免疫缺陷病患儿作出诊断。 2.评估免疫接种前机体免疫状态 案例：T/B细胞联合免疫缺陷患 儿，未评价免疫系统功能，直接 接种灭活疫苗，造成严重感染T 细胞CD4、CD8、CD3 检测介入时间-----结合患儿科反复感染的临床症状及时检测； 在疫苗接种前2-3天作出评估。 淋巴细胞亚群检测在肿瘤临床的应用 恶性肿瘤的发生、发展、转移与人体免疫功能下降密切相关。人体的抗肿瘤免疫以细胞 免疫为主，体内发挥抗肿瘤免疫作用主要由CD4和CD8细胞完成。 （一）评价肿瘤患者的整体免疫功能 1．肿瘤患者处免疫抑制状态，T淋巴细胞降低。 2．肿瘤患者T淋巴细胞与病程相关，随病程逐渐降低。 CD3、CD4、CD4/CD8细胞数下降程度：Ⅳ期> Ⅲ期> Ⅱ期>Ⅰ期3．肿瘤患者T淋巴细胞持续低下，转移率高、易复发

淋巴细胞亚群检测方案

目和相对比例都在一定的范围内。那么临床常见的淋巴细胞亚群包括哪些项 目？ 一、淋巴细胞亚群 二、抗体组合方案

联合CD45的三色方案主要是有四种不同的试剂。 1.CD45/CD3/CD4 这个抗体组合主要用来检测T3细胞和T4细胞。 2.CD45/CD3/CD8 用来检测T3细胞和T8细胞。 3.CD45/CD3/CD19 用来检测T3细胞和B细胞。 4.CD45/CD3/CD16和/或CD56 用来检测T3细胞和NK细胞。 （三）双色方案 如果实验室在边远的地区，条件不足，只能做双色方案，但是在双色方案中建议要把CD3加进来，因为CD45能很好地将白细胞和其他的干扰细胞，尤其是红细胞进行区分。如果不能用CD45，最好能用到 CD3，CD3可以特异的标记T淋巴细胞，T淋巴细胞和CD4做双标可以克服单一的CD4抗体。为此，双色方案中也分为四管，每管当中建议都包含有CD3。 1.CD3/CD4 用来检测T3细胞和T4细胞。 2.CD3/CD8 用来检测T3细胞和T8细胞。 3.CD3/CD19 用来检测T3细胞和B细胞。 4.CD3/CD16和/或CD56 用来检测T3细胞和NK细胞。 尽管检测条件不允许做四色或三色的分析，但也至少要用CD3和其他的直标抗体进行双免疫荧光染色方案，不建议采用单色方案进行淋巴细胞亚群分析。 （四）7-氨基放线菌素D(7-AAD)联合CD45方案 1．目的 对于超过24小时的标本或肉眼观察发现已经变质的标本，需使用7-氨基放线菌素D（7-AAD）结合 CD45（评估淋巴细胞、单核细胞和粒细胞死亡）复染评估细胞活力。 2.判定 7-AAD荧光染料主要染活细胞，主要用来鉴定细胞活性。 （1）7-AAD阴性者是活细胞群。

T淋巴细胞亚群检测操作程序

一、目的： 保证流式细胞仪检测外周血中T淋巴细胞亚群检验的工作质量，旨在保证正确的T淋巴细胞亚群检测标准操作程序和控制检测结果的精确度与准确度。 二、修改程序： 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任），方可改动。 三、适用范围： 外周血中T淋巴细胞亚群的绝对计数检测。 四、实验原理： 人的T淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达可分为二大类：辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。辅助/诱导T淋巴细胞表达CD3和CD4；抑制/细胞毒T细胞表达CD3和CD8。利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料以及绝对计数管，即可以把T淋巴细胞区分为两种亚型，进面得到各亚群的绝对值。 六、主要试剂： CD4-FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45-PC7 (美国BCs公司；CAT:IM3548)， 七、实验操作： 1、标本采集：使用EDTA-K2抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。 2、染色和固定细胞： （1）标本管编号A，取一只流式专用管A1。 （2）A1管加入CD4-FITC／CD8-PE／CD3-APC／CD45-PC7 20ul。 （3）A1管中再加入全血100ul，混均。 （4）置室温，避光孵育15min。

（5）加入FACSLysing溶血液2.0ml，置室温，避光孵育10min。 （6）300g离心5min，弃上清液。 （7）PBS洗涤细胞两次，300g离心5min，弃上清液。 3、上机检测；分析结果；打印实验报告。 八、参考值： 总T细胞（CD3+）：59.4-84.6 辅助/诱导T细胞(CD3+CD4+): 28.5-60.5 抑制/细胞毒T细胞(CD3+CD8+): 11.1-38.3 Th/Ts: 0.9-3.6 九、临床意义： T淋巴细胞可以分为辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。测定CD4和CD8可用于化疗、自身免疫病的免疫监视。在造血干细胞移植患者中，CD4+细胞恢复晚于CD8+细胞，导致Th/Ts比例显著下降。HIV及某些病毒感染（EB病毒、SARS病毒等）患者Th/Ts比例也下降显著。 十、质量控制： 1、先用标准微球调整仪器，正确设置电压、补偿。 2、健康人CD4+细胞加CD8+细胞总数应大约等于CD3总数；免疫病、淋 巴瘤可能有较大差异。 3、收集细胞太少（少于500个）、碎片污染太多（超过10%）、门中淋巴细 胞不纯（小于90%）可能引起实验结果不正确。 4、建议使用逻辑设门方法（CD45-SSC设门与FSC-SSC设门）减少杂质的 干干扰。

淋巴细胞亚群检测的临床意义

淋巴细胞亚群与临床 人体外周血的淋巴细胞是机体重要的免疫细胞，主要包括三种：T淋巴细胞（TC）、B淋巴细胞（BC）、自然杀伤细胞（NK）。TC主要表达CD3+，约占正常人外周血淋巴细胞总数的60--80%；BC主要表达CD19+，约占正常人外周血淋巴细胞总数的15--20%；自然杀伤细胞（NK）主要表达CD3--CD16+CD56+，约占正常人外周血淋巴细胞总数的10--20%。 通过T淋巴细胞亚群的监测可以了解在不同疾病状态下患者的细胞免疫功能状态，已经广泛在肿瘤、自体免疫、感染性疾病中, 辅助临床诊断、帮助了解发病机理、判断预后和指导临床治疗。T淋巴细胞亚群检测的内容为总T细胞（CD3+）及其亚群（辅助性T淋巴细胞，CD4+；抑制性或细胞毒T淋巴细胞，CD8+）的数量和比例。 在某些自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎、自体免疫性溶血性贫血患者中CD3+/CD4+细胞的比值升高。在病毒感染（上感，AIDS等）、恶性肿瘤、再生障碍性贫血等疾病中，患者CD4+/CD8+比值降低，三种淋巴细胞的数量和比例均可能有相应的改变。T细胞亚群已被用来监测器官移植病人的免疫状态，协助发现和使其避免受到GVHD的攻击。由于在感染性、肿瘤性疾病、自体免疫性疾病和器官移植中患者的免疫功能和预后之间有着密切的关系，对其给予密切注意并及时采取适当措施、调节患者的免疫状态以改善预后就成为现代医学的一个重要内容。 常见疾病T淋巴细胞的改变（参考） 疾病 T细胞亚群 CD4+/CD8+ CD4+（辅助T） CD8+（抑制T） 类风关↑（活动期）↑↑ SLE --或↓（活动期）↑↓↑ 胰岛素依赖性糖尿病↑ 多发性硬化症↓↓↑ 乙型肝炎↑ 自身免疫溶血性贫血↑↑ 上呼吸道感染↓↓↓ 结核↓ AIDS ↓↓↑ CD4+/CD8+ CD3+ （总T） CD4+（辅助T） CD8+（抑制T）恶性肿瘤（白血病）↓↓↓↓↑↑↑↑ 再障及粒细胞减少症↓↑↓ CMV感染↓↑↓ 血小板减少↓↓↓↓↓↓ CD19为全部B细胞共有的表面标志，增高见于B细胞系统的恶性肿瘤，减低见于体液免疫缺陷病。BC主要介导抗感染等体液免疫，故不作为肿瘤患者的检测指标。 NK细胞主要表达CD3--CD16+CD56+ ，约占淋巴细胞的10--15%左右。NK细胞能非特异性杀伤肿瘤细胞，是机体第一道肿瘤防线，其杀伤活性可被IL-2等细胞因子诱导而显著增强。 通常在肿瘤患者外周血中， CD3+、CD4+、NK细胞减少，而CD8+细胞增加，CD4+/ CD8+的比值降低，。说明肿瘤病人的细胞免疫功能处于免疫抑制状态，识别和杀伤突变细胞的能力下降，形成了肿瘤的生长与转移。因此，淋巴细胞亚群的检测对了解肿瘤发病机制、了解某些药物或治疗方法对机体免疫功能的影响，了解患者自身免疫功能状态的变化，指导临床治疗和科研应用等，都有着极其重要的理论意义和应用意义。

免疫功能淋巴细胞亚群检测的临床意义

免疫功能（淋巴细胞亚群）检测的临床意义外周血淋巴细胞根据生物学功能和细胞表面抗原表达分为3个群：T淋巴细胞（CD3+）、B淋巴细胞（CD19+）和NK淋巴细胞【自然杀伤细胞（natural killer)，CD3-CD16+和/或CD56+】。T细胞又分为辅助T细胞（CD3+CD4+）和抑制T细胞（CD3+CD8+)。淋巴细胞亚群分析是检测细胞免疫和体液免疫功能的重要指标，它总体反应机体当前的免疫免疫功能、状态和平衡水平，并可以辅助诊断某些疾病，如自身免疫病、免疫缺陷病、恶性肿瘤、血液病、变态反应性疾病等，分析发病机制，观察疗效及检测预后有重要意义。T淋巴细胞百分率或计数绝对值可用于区别和监测某些免疫缺陷病 和自身免疫性疾病。辅助T淋巴细胞减少：见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷病、艾滋病、应用免疫抑制患者。抑制T淋巴细胞增多：见于自身免疫性疾病，如SLE、艾滋病初期、慢性活动性肝炎、肿瘤及病毒感染等。抑制T细胞百分率在一些免疫性疾病表现出超出正常参考范围，在许多先天性或获得性免疫缺陷病人中升高（如重症综合性免疫缺陷SCID,AIDS）。 CD4+/CD8+>2.5 表明细胞免疫功能处于“过度活跃”状态，容易出现自身免疫反应，见于类风湿性关节炎、I型糖尿病等。CD4+/CD8+ 在肿瘤病人外周血中T淋巴细胞亚群数值都有异常，其特征是患者体内CD3+细胞、CD4+细胞明显减少，而CD8+细胞明显增加，CD4+/CD8+比值显著降低，说明肿瘤患者的细胞免疫功能处于免疫抑制状态，患者对识别和杀伤突变细胞的能力下降，形成了肿瘤的生长转移。骨髓造血

细胞的增殖和分化障碍也与T细胞亚群异常有关。如在再生障碍性贫血与粒细胞减少症中，患者的外周血CD4+细胞数减少，CD8+细胞数增多，CD4+/CD8+比值明显下降。 NK细胞介导某些肿瘤和病毒感染细胞的细胞毒性反应。 B淋巴细胞为体液免疫的重要指标。

淋巴细胞亚群研究分析与临床---陈建林

淋巴细胞亚群分析与临床---陈建林

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、流式淋巴细胞亚群检测的临床意义 1.了解不同情况下机体免疫功能状态 肿瘤(手术、放化疗患者的免疫功能检测) 感染(脓毒血症、重症监护患者等) 自身免疫病、免疫缺陷病等 不孕不育 某些血液系统疾病 其他：慢性肾病、骨髓移植恢复期等 2.辅助临床疾病的诊断 3.探索疾病的发病机理、病程及预后 4.观察监测疗效，指导临床建立治疗方案 、淋巴细胞的分类及功能 B细胞(CD19+): 体液免疫 辅助/诱导T细胞(Th):介导和增强免疫应答 (CD4+) 细胞毒性(Tc) /抑制性T细胞(Ts):抗病毒、抗肿瘤淋巴细胞T 细胞(CD3+) (CD8+) 、调节性T细胞(Treg):抑制免疫应答、维持免疫耐受 V (CD4+CD25+) NK细胞：抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节 (CD16+/CD56+) 三、流式淋巴细胞亚群检测的临床应用 淋巴细胞亚群检测与儿科疾病 (一)评估机体免疫功能状态 多种小儿疾病原发或继发疾病均存在T细胞异常，观察T细胞变化，对小儿疾病病因、 发病机制以及协助临床诊断与治疗等具有重要价值。 类型指标CD3+CD4 +CD8+CD 4+ /CD 8+ 细菌性肺炎T JJ 支原体肺炎JJ 病毒性肺炎JJ 传单增多症TT JJ

细胞变化，特别针对儿科患者可合理调节抗生素使用，改善预后，避免药物损伤 （二）原发性免疫缺陷病的早期识别和干预 1.流式细胞仪分析 T 细胞亚群（包括CD3+、CD4+和CD8+）、B 细胞（CD19+）和NK 细 在疫苗接种前2-3天作出评估。 淋巴细胞亚群检测在肿瘤临床的应用 恶性肿瘤的发生、发展、转移与人体免疫功能下降密切相关。人体的抗肿瘤免疫以细胞 2 .肿瘤患者T 淋巴细胞与病程相关，随病程逐渐降低。 3 .肿瘤患者T 淋巴细胞持续低下，转移率高、易复发 T 细胞 CD4、CD8、CD3检测介入时间 结合退热、消咳、肺罗音消失时间观察 胞（CD16+/CD56+） 比例等主要检查项目 ，可对大多数原发性免疫缺陷病患儿作出诊断。 ■A CI ' ■ ■ Pe ■上珂.；弓* 直胞 直接 免疫为主，体内发挥抗肿瘤免疫作用主要由 CD4和CD8细胞完成。 琳旦细胞亚群分析 利1?屮|?耳1 I MK 血 CO3 , CD56 + 如施如雎[T a 1 co3+cr?a+ 调书?tt.T 细 Jl6.(TrGA) [SD4fC 口 35+CQ1.2 丁 lcw/\ 恤^^抑删，比如 普怦 IW ■痫 CP 切cos A 1.5 = （一）评价肿瘤患者的整体免疫功能 1 .肿瘤患者处免疫抑制状态, T 淋巴细胞降低。 CD4 CD3、CD4、CD4/CD8细胞数下降程度: 川期＞ n 期＞ I 期 Ft- 儿卜"価《种心?? 和 MiM 曝 mH 结合患儿科反复感染的I 临床） T 细胞 CD4、CD8、CD3 检测介入时间 2.评估免疫接种前机体免疫状态 i￥f -* . r PM - i TM 轧 9M - *.* ' ■ # K ：寸詁■贮 t ? rgp, 畔 h- ■. WT 赳：' "■ HuEWJ*， h 亡*七 '■■ ■■匕 _、. T 卡斗得—忙 U ?: hE i 瞬邑细J9包 吕性?■MT X T 如胞 CDSXU. /* * ** A 可《 4, J*.- B 加曲 CO 19. CD2O

淋巴细胞亚群检测

淋巴细胞亚群检测 检测对象 原则：免疫功能受损者均应常规评估淋巴细胞亚群 免疫功能包括： 免疫防御功能 免疫自稳和耐受功能 免疫监视功能 免疫防御功能受损 易发生感染 反复感染 严重感染 多种病原与特殊病原感染 常规治疗效果不佳的感染 除了宿主免疫防御受损容易造成上述少见感染状况之外，感染本身也可造成继发性免疫防御受损，因此免疫评估应注意原发和继发两方面的问题。 免疫自稳和耐受功能受损 过敏性疾病：并非所有这类患者都需要进行淋巴细胞亚群的检测。对于一些严重的过敏患者应考虑淋巴细胞亚群的检测。

①婴幼儿时期全身严重湿疹样表现。 ②嗜酸性粒细胞显著增多 ③血清IgE水平明显增高（IgE>1000IU/L） ④伴有反复、严重感染的患者 自身免疫和自身炎症性疾病 ①存在难以控制的自身免疫反应情况及出现明显的自身免疫性淋巴增殖情况 ②合并反复感染的患者 ③存在自身炎症反应 ④长期免疫抑制药物、生物制剂使用前后 免疫监视功能受损 主要引起肿瘤 血液系统肿瘤：儿童时期最为多见的是血液系统肿瘤 其他肿瘤及实体瘤：其他系统肿瘤患者也应酌情进行淋巴细胞亚群的检测，既可能存在原发性淋巴细胞亚群的异常，也可能出现继发性改变，尤其是进行各种化疗时，淋巴细胞亚群大多会受到影响 其他特殊情况 血常规中淋巴细胞明显异常 家族成员中有免疫缺陷病史

长期使用免疫抑制剂者 淋巴细胞亚群分析结果判读，应对淋巴细胞亚群的相对计数和绝对计数分别进行判别。 结果分析 (一)基本数据判断 1．相对计数的3个基本公式： FCM检测淋巴细胞亚群结果应首先根据下述3个公式进行评估[15]。公式1: CD3＋%＋CD19＋%＋CD16＋/CD56＋%＝100%±5% 公式2：CD4＋%＋CD8＋%＝CD3＋%±5% 公式3：CD4＋/CD8＋比值>1.0(1.5～2.0，新生儿期可达4.0) 2．相对计数基本公式意义： (1) CD3＋%＋CD19＋%＋CD16＋/CD56＋%明显大于或小于100%±5%，提示检测系统异常或存在明显淋巴细胞亚群异常。(2) CD4＋%＋CD8＋%之和明显大于或小于CD3＋%±5%，提示存在双阳性(CD4＋CD8＋)或双阴性(CD4-CD8-)T淋巴细胞。(3)一般情况CD4＋/CD8＋比值>1，年龄越小CD4＋/CD8＋比值越大。CD4＋/CD8＋比值<1，提示T淋巴细胞亚群存在异常。 3.绝对计数的判断： 绝对数标准不同仪器和年龄段及人群存在差别。个体间变化也比较大。各个实验室所采用的标准有所不同。应根据实验室的参考范围进

流式细胞术检测体液T淋巴细胞亚群的临床应用

?５０?垦竖垫墼堕堂垄查！！！！生！旦箜！！鲞箜！塑丛』！坐！！型！』竺！！！型垫！！！ｙ堕：！！：垒坠！ ?临床研究?流式细胞术检测体液Ｔ淋巴细胞亚群的临床应用 莫扬１，许小东２ （华中科技大学同济医学院附属裹樊医院检验科，湖北襄樊４４１０２１；２．卫生部北京医院流式细胞仪室１００７３０） 【摘要】目的探讨胸水、腹水、肺泡灌洗液Ｔ淋巴细胞亚群的榆测方法及临床价值。方法采用流式细胞术检测良、恶性疾病患者的５０例胸水、４６例腹水、４７例肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中Ｔ淋巴细胞亚群的水平并分组进行比较。结果１）胸水：结核性胸膜炎组胸水Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（２７．３６±６．４１）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（６７．９８±７．４１）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为２．６０±０．６４，肺部恶性肿瘤组胸水Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（６７．９７士４．２０）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（３７．６１±４．８０）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为０．４７－４－０．１０，与结核性胸膜炎组比较，恶性组Ｔｈ、Ｔｈ／Ｔｓ比值显著Ｆ降（Ｐ＜０．０１）而Ｔｓ显著升高（Ｐ＜０．０１）；２）肺泡灌洗液：肺良性疾病组肺泡灌洗液Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（４４．５４－４－９．５６）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（４９．２８－＋４－１２．８８）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为１．１３±０．２９，肺部恶性肿瘤组肺泡灌洗液Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（６５．１１±７．７７）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（３４．５７±６．６５）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为０．５４－４－０．１９，与良性病变组比较，恶性组Ｔｈ卜．降（Ｐ＜ｏ．０５），Ｔｈ／Ｔｓ比值显著卜．降（Ｐ＜０．０１），而Ｔｓ显著升高（Ｐ＜０．０１）。３）腹水：结核性腹膜炎组腹水Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（３３．１１±３．３４）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（６６．６９±３．７８）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为２．０３士０．２８，恶性组腹水Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（５６．６４±９．３４）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（３５．８６士３．３０）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为０．６５±０．１０，与结核性腹膜炎组比较，恶性组Ｔｈ、Ｔｈ／Ｔｓ比值显著Ｆ降（Ｐ＜０．０１），而Ｔｓ显著升高（Ｐ＜ｏ．０１）。结论胸腹水、肺泡灌洗液Ｔ淋巴细胞亚群检测可用于分析性质并有助于评估患者局部免疫功能状态。 【关键词】支气管肺泡灌洗液；流式细胞术；Ｔ淋巴细胞哑群 中图分类号：Ｒ４４６．６１文献标识码：Ａ文章编号：１６７３—４１３０（２０１０）０１—００５０—０２ ＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓｉｎｆｌｕｉｄｏｆｔｈｅｐａｔｉｅｎｔｓｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ＭＯＹａｎｋｌ，ＸＵＸｉａｏ－ｄｏｎｇ２ （１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＡｆＪ’ｉｌｉａｔｅｄｘｉａｎｇＪａｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴＤ竹ｇＪｉ ＭｅｄｉｃｉｎｅＣｏｌｌｅｇｅ， ＨｕａｚｈｏｎｇＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉａｎｇｆａｎ，Ｈｕｂｅｉ４４１０２１，Ｃｈｉｎａ）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｆｌｏｗｅｙｔｏｍｅｔｒｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓｉｎｂｏｄｙｆｌｕｉｄｏｆｔｈｅｐａ—ｔｉｅｎｔｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＩｎｏｖｄｅｒｔｏｇｅｔＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｂｙ３－ｃｏｌｏｕｒｓｔａｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｕｔｉｌｉｚｉｎｇＳＳＣ／ＣＤ３Ｐｅｒｃｐａｎｔｉｂｏｄｙ，４７ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄａｎｄ５０ｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｅｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ１）ＴｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（６７．９８±７．４１）％，Ｔｓ（２７．３６士６．４１）％ａｎｄＴｈ／Ｔｓ（２．６０±０．６４）ｉｎＢＡＩ。Ｆｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ。ａｎｄｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（３７．６１士４．８）％，Ｔｓ（６７．９７±４．２０）％，ａｎｄＴｈ／Ｔｓ（０．４７士０．１０）ｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ。ａｎｄｔｈｅＴｈｃｅｌｌｓｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｗｅｒｅｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ（Ｐ＜０．０５）。ａｎｄｔｈｅＴｈ／ＴｓｒａｔｉｏｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｗｈｉｌｅｔｈｅＴｓｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎＢＡＬＦｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ（Ｐ＜０．０１），ｅｏｍｐａｒｉｅｄｗｉｔｈｔｈｅｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ；２）ＴｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（３５．７６＋－７．７１）％ａｎｄＴｓ（６４．３１士７．３７）％ａｎｄＴｈ／Ｔｓ（０．５７土０．１８）ｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ，ａｎｄｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（４９．２７土１２．８８）％，Ｔｓ（４４．５４士９．５６）ｏＡ，ａｎｄＴｈ／Ｔｓｉｓ（１．１３±０．２９）ｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ．ＴｈｅＴｈｃｅｌｌｓｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｗａｓｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ（Ｐ＜０．０５），ｔｈｅＴｈ／ＴｓｒａｔｉｏｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒａｎｄｔｈｅＴｓｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎＢＡＬＦｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ（Ｐ＜０．０１）ｃｏｍｐａｒｉｅｄｗｉｔｈｔｈｅｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ；３）ＴｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（３５．７６士７．７１）％，Ｔｓｉｓ（６４．３１±７．３７）％ａｎｄＴｈ／Ｔｓａｒｅ（０．５７士０．１８）ｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ，ａｎｄｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（４９．２７土１２．８８）％，Ｔｓｉｓ（４４．５４±９．５６）％，ａｎｄＴｈ／Ｔｓｉｓ（１．１３±０．２９）ｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ．Ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｔｈｅＴｈｃｅｌｌｓｉｎ ＢＡＬＦｗｉｔｈｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒｗｅｒｅｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎ ｔｈｅｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ（Ｐ＜０．０５），ｔｈｅＴｈ／Ｔｓｒａｔｉｏｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗ— ｅｒａｎｄｔｈｅＴｓｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎＢＡＬＦｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ（Ｐ＜０．０１）ｃｏｍｐａｒｉｅｄｗｉｔｈｔｈｅｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ．Ｃｏｎ‘ｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｉｍｍｕｎｉｔｙｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｔｈｅｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ．ＦｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｉｅａｐｐｒｏａｃｈｉｓｖａｌｕａｂｌｅｉｎａｎａｌｙｚｉｎｇＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓｉｎＢＡＩ。Ｆ． ［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］Ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄ；Ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓ 恶性浆膜腔积液确诊的金标准是在积液巾找到肿瘤细胞。然而在临床上，常有高度怀疑为恶性积液但未能找到肿瘤细胞的情况，从而影响到诊断的最终判断。笔者通过对患者胸水、腹水、肺泡灌洗液Ｔ淋巴细胞亚群的分析判断其性质，为临床恶性积液的诊断提供了一种检测指标，现报道如下。 资料与方法 １．标本来源病例为２００６年６月至２００７年１２月在襄樊市巾心医院及卫生部北京医院呼吸科、消化科、肿瘤科住院治疗的相应疾病患者。１）胸水来源：肺癌２０例（均经病理最终证实），年龄３１～６９岁，男１７例，女３例。组织学分型：鳞癌１４例。腺癌４例，小细胞癌２例；结核性胸膜炎３０例，年龄２６～６８岁，男１８例，女１２例。刷检见结核杆菌（抗酸染色阳性）确诊。２）肺泡灌洗液来源：肺癌组２５例（男１５例、女１０例），均经病理证实，年龄３９～７１岁；肺部良性疾病组２２例（男１５例、女７例），年龄２８～７０岁，其中肺结核８例、肺炎ｌｌ例、肺结节病３

淋巴细胞亚群定稿版

淋巴细胞亚群精编 W O R D版 IBM system office room 【A0816H-A0912AAAHH-GX8Q8-GNTHHJ8】

机体免疫状态是衡量机体是否患病的重要指标，目前多采用流式细胞术来监测机体的免疫状态，其中最重要的指标是检测T、B和N K淋巴细胞的水平。 T细胞主要包括T辅助细胞（Th）和T抑制细胞（Ts）细胞亚群。CD3+细胞代表外周血中总的成熟T细胞，理论上应约等于CD4+细胞和CD8+细胞的总和，但往往出现CD4+加CD8+细胞之和大于CD3+，这是因为CD4+细胞包括CD3+/CD4+细胞（真正Th细胞）和CD3-CD4+细胞（非Ts细胞），而后者包括CD3-CD8+CD16+56+细胞（一部分NK细胞）和CD3-CD8+CD16+56-（未知细胞）。由此可见，真正的TH细胞是CD3+CD4+细胞，真正Ts细胞是CD3+CD8+细胞。尤其当患者NK细胞明显增加时，会使CD4细胞和CD8细胞的总和远大于CD3+细胞，因此，用三色荧光标记才能分析真正的辅助性T细胞和抑制性T细胞。 首先在淋巴细胞中识别出CD3细胞，然后在CD3细胞中再区分CD4+和CD8+细胞。NK细胞的表面无T细胞和B细胞表面标志，但有CD16和CD56等标志，用CD16+56抗体能鉴定出NK细胞（一定是CD3阴性），CD3-CD16+56+细胞才是真正的NK细胞。根据是否表达CD8，又可将NK细胞分为CD3-CD8+CD16+56+细胞（所占比例小，不影响CD8比例）和 CD3-CD8-CD16+56+细胞（主要成分）。 B细胞的表面标志是CD19，理论上CD3-CD19+细胞才是真正的B淋巴细胞。但CD3+CD19+细胞很少，可忽略不计，所以CD19+细胞就是B淋巴细胞。 在抗肿瘤效应中，CD4和CD8分别是T淋巴细胞的辅助／诱导细胞亚群与抑制/细胞毒细胞亚群，CD4细胞的主要功能是通过其分泌的淋巴因子，增强和扩大免疫应答过程，辅助诱导其它免疫细胞如杀伤性T细胞，B细胞等共同发挥抗肿瘤作用，CD4细胞的减少，导致免疫功能低下。CD4/CD8比值是重要的免疫状态监测指标，其比例的降低与免疫系统损害的程度相关。 CD4降低见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷症、艾滋病、应用免疫抑制剂者；CD8降低见于自身免疫性疾病或变态反应性疾病；CD4/CD8比值升高见于恶性肿瘤、自身免疫性疾病、变态反应、病毒感染等；CD4/CD8比值降低见于艾滋病(常小于0.5)。监测器官移植排斥反应时，CD4/CD8比值升高预示可能发生排斥反应。 淋巴细胞担负着免疫的主要功能。淋巴细胞亚群的测定有助于了解机体免疫状况及一些疾病的监测。利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面的抗原结合，再配合多色荧光染料，通过

淋巴细胞亚群分析与临床---陈建林

、流式淋巴细胞亚群检测的临床意义 1. 了解不同情况下机体免疫功能状态 肿瘤(手术、放化疗患者的免疫功能检测) 感染(脓毒血症、重症监护患者等) 自身免疫病、免疫缺陷病等 不孕不育 某些血液系统疾病 其他：慢性肾病、骨髓移植恢复期等 2. 辅助临床疾病的诊断 3. 探索疾病的发病机理、病程及预后 4. 观察监测疗效，指导临床建立治疗方案 二、淋巴细胞的分类及功能 B细胞(CD19+): 体液免疫 辅助/诱导T细胞(Th):介导和增强免疫应答 (CD4+) 细胞毒性(Tc) /抑制性T细胞(Ts):抗病毒、抗肿瘤淋巴细胞T 细胞(CD3+) (CD8+) 1-调节性T细胞(Treg):抑制免疫应答、维持免疫耐受 L (CD4+CD25+) NK细胞：抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节 (CD16+/CD56+) 三、流式淋巴细胞亚群检测的临床应用 淋巴细胞亚群检测与儿科疾病 (一)评估机体免疫功能状态 多种小儿疾病原发或继发疾病均存在T细胞异常，观察T细胞变化，对小儿疾病病因、 发病机制以及协助临床诊断与治疗等具有重要价值。 类型指标CD3 +CD4 +CD8+CD4+/CD 8+细菌性肺炎 支原体肺炎 病毒性肺炎 传单增多症 支气管哮喘

细胞变化，特别针对儿科患者可合理调节抗生素使用，改善预后，避免药物损伤 （二）原发性免疫缺陷病的早期识别和干预 1. 流式细胞仪分析 T 细胞亚群（包括CD3+、CD4+和CD8+）、B 细胞（CD19+） 和NK 细 胞（CD16+/CD56+） 比例等主要检查项目，可对大多数原发性免疫缺陷病患儿作出诊断。 淋巴细胞亚群检测在肿瘤临床的应用 恶性肿瘤的发生、发展、转移与人体免疫功能下降密切相关。人体的抗肿瘤免疫以细胞 免疫为主，体内发挥抗肿瘤免疫作用主要由 CD4和CD8细胞完成。 3 ?肿瘤患者T 淋巴细胞持续低下，转移率高、易复发 T 细胞 CD4、CD8、CD3检测介入时间 结合退热、消咳、肺罗音消失时间观察 （一）评价肿瘤患者的整体免疫功能 1 ?肿瘤患者处免疫抑制状态， T 淋巴细胞降低。 2 ?肿瘤患者T 淋巴细胞与病程相关，随病程逐渐降低。 CD3、CD4、CD4/CD8细胞数下降程度: "期 ＞ 川期＞ □期＞ I 期 2.评估免疫接种前机体免疫状态 T 细胞CD4、CD8、CD3检测介入时间-----结合患儿科反复感染的临床症状及时检测; 在疫苗接种 前2-3天作出评估。 琳已细胞亚群分析 潘呂细殖 1"如应(Th) CDJ + CD2&+CD12 7I E >W / CfM/coa--. o.&ai 霸ft 和癇 CDA/COR A ， 过沽袄 GD5*CCX1 + 幻4虺_4亠电**M 也(T s ) CO1 + CQS+

Cell Quest Pro双色淋巴细胞亚群分析样本制备

Cell Quest Pro双色淋巴细胞亚群分析样本制备 【实验目的】：使用双色组合标记抗体对人外周血中淋巴细胞亚群进行检测，了解人的免疫状态。从而指导临床诊断和治疗。 【实验原理】：利用荧光技术，在不同的鼠抗人的抗体上标上荧光素，此荧光抗体就同人淋巴细胞表面的CD分子特异性的结合；然后用流式细 胞仪检测，结合分析软件的自动分析,便可以得出各亚群细胞的百 分比。 【主要试剂】：1、流式细胞仪（FACSCalibur）、台式离心机、涡旋震荡器，微量移液器（1000μl、200μl、20μl，流式细胞专用试管、鞘液；PBS （加0.1%叠氮钠） 2、双色检测试剂： ①Isotype Control(MouseIgG1/IgG2a) ②CD3-FITC /CD19-PE ③CD3-FITC /CD4-PE ④CD3 FITC /CD8-PE ⑤CD3-FITC /CD16+CD56-PE 3、FACS Lysing Solution红细胞裂解液。（10×,使用前用蒸馏水 稀释成1×）。 4、1%的多聚甲醛配制方法： 称1.0克多聚甲醛加少量PBS放入56℃水浴箱中使之溶解，用1N NaOH溶液和1N的HCl调整PH值在6.9~7.0，然后加入100ml 容量瓶中定容；最后用0.45um的滤膜过滤。 【实验步骤】：1、取5支流式试管，编号为1、2、3、4、5，分别取100μl抗凝全血加入每支试管中，不要碰到管壁。 2、轻轻混匀，依次加入20μl双标Isotype Control (Mouse IgG1/ IgG2a)、CD3/CD19、CD3/CD4、CD3/CD8、CD3/CD16+CD56 荧光抗体。室温避光保存20分钟。 3、取出试管，每管加入10倍稀释了的1×FACS Lysing Solution 2ml，涡旋混匀，避光〈10分钟。待管内液体透亮。然后300g 离心5min，弃去上清液。 4、每管加入2ml的PBS ，涡旋混匀，300g离心5min，弃去上清

免疫功能(淋巴细胞亚群)检测的临床意义

免疫功能（淋巴细胞亚群）检测的临床意义 外周血淋巴细胞根据生物学功能和细胞表面抗原表达 分为3个群：T淋巴细胞（CD3+）、B淋巴细胞（CD19+）和NK淋巴细胞【自然杀伤细胞（natural killer)，CD3-CD16+和/或CD56+】。T细胞又分为辅助T细胞（CD3+CD4+）和抑制T细胞（CD3+CD8+)。淋巴细胞亚群分析是检测细胞免疫和体液免疫功能的重要指标，它总体反应机体当前的免疫免疫功能、状态和平衡水平，并可以辅助诊断某些疾病，如自身免疫病、免疫缺陷病、恶性肿瘤、血液病、变态反应性疾病等，分析发病机制，观察疗效及检测预后有重要意义。T淋巴细胞百分率或计数绝对值可用于区别和监测某些免疫缺陷病和自身免疫性疾病。辅助T淋巴细胞减少：见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷病、艾滋病、应用免疫抑制患者。抑制T淋巴细胞增多：见于自身免疫性疾病，如SLE、艾滋病初期、慢性活动性肝炎、肿瘤及病毒感染等。抑制T细胞百分率在一些免疫性疾病表现出超出正常参考范围，在许多先天性或获得性免疫缺陷病人中升高（如重症综合性免疫缺陷SCID,AIDS）。 CD4+/CD8+>2.5表明细胞免疫功能处于“过度活跃”状态，容易出现自身免疫反应，见于类风湿性关节炎、I型糖尿病等。CD4+/CD8+ 在肿瘤病人外周血中T淋巴细胞亚

群数值都有异常，其特征是患者体内CD3+细胞、CD4+细胞明显减少，而CD8+细胞明显增加，CD4+/CD8+比值显著降低，说明肿瘤患者的细胞免疫功能处于免疫抑制状态，患者对识别和杀伤突变细胞的能力下降，形成了肿瘤的生长转移。骨髓造血细胞的增殖和分化障碍也与T细胞亚群异常有关。如在再生障碍性贫血与粒细胞减少症中，患者的外周血CD4+细胞数减少，CD8+细胞数增多，CD4+/CD8+比值明显下降。NK细胞介导某些肿瘤和病毒感染细胞的细胞毒性反应。B淋巴细胞为体液免疫的重要指标。

流式细胞术检测淋巴细胞亚群操作规程

流式细胞术检测淋巴细胞亚群操作规程 一、编号：JS0604 二、标题：流式细胞术检测淋巴细胞亚群操作规程 三、关键词：流式细胞术淋巴细胞操作规程 四、目的：规范流式细胞术检测淋巴细胞亚群的实验操作 五、背景知识：T细胞亚群变化的临床意义主要表现在肿瘤、自身免疫性疾病中。在感染性疾病中，因为CD4+ T细胞是辅助、诱导T细胞的标志，CD4+ T 细胞下降常见于某些病毒感染性疾病，如AIDS、巨细胞病毒感染、瘤型麻风。而CD4+ T细胞长期低于正常水平，常提示患者易于被病毒等微生物侵袭。CD8+是抑制、杀伤T细胞的标志，在传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、慢性乙型肝炎等感染性疾病中，CD8+ T细胞常升高。CD4+／CD8+细胞比值下降，除肿瘤等疾病外，常见于AIDS、瘤型麻风、传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、血吸虫病等。 六、原理：利用不同荧光物质标记的抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体，与待测成分作用，然后上流式细胞仪检测待测细胞。待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列，一个个迅速通过激光聚焦区，激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物质发出的信号，利用这些信号，可计算出CD3+、CD4+、CD8+的相对含量，从而得出各细胞群的相对比值。 七、仪器设备和材料：肝素抗凝静脉血1ml，不同荧光素标记的抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体，同型阴性对照荧光物，溶血剂，固定剂，流式细胞仪。 八、操作步骤 1、100μ1抗凝血加20μl荧光单克隆抗体，同时做阴性对照。 2、避光室温作用20min，溶去红细胞后，固定剂固定。 3、上流式细胞仪测定，以阴性对照测出本底参数，调节荧光补偿，设定阳性参数值，软件将计算出阳性表达细胞比例。 九、注意事项 1、为保证所得结果的可靠性，每次试验前应以标准荧光微球检测仪器的变异系数。