动物试验规范

动物试验规范

根据实验动物微生物控制标准，可将实验动物分为四级：

一级普通动物（CV），系指微生物不受特殊控制的一般动物。要求排除人兽共患病的病原体和积少数的实验动物烈性传染病的病原体。为防止传染病，在实验动物饲养和繁殖时，要采取一定的措施，应保证其用于测试的结果具有反应的重现性（即无论不同的操作人员，在不同的时间，用同一品系的动物按规定的实验规程所做的实验，都能获得几乎相同的结果）。

二级清洁动物（CL），要求排除人兽共患病及动物主要传染病的病原体。

三级无特殊病原体动物（SPF），要求到二级外，还要排除一些规定的病原体。其除菌与灭菌的方法，可使用高效空气过滤器除菌法、紫外线灭菌法、三甘醇蒸气喷雾法及氯化锂水溶液喷雾法。

四级无菌动物（GF）或悉生动物（GN）。无菌动物要求不带有任何用现有方法可检出的微生物。悉生动物要求在无菌动物体上植入一种或数种已知的微生物。

在病理学检查上，四类实验动物也有不同的病理检查标准。

一级外观健康，主要器官不应有病灶。

二级除一级指标外，显微镜检查无二级微生物病原的病变。

三级无特殊病原体动物。无二、三级微生物病原的病变。

四级不含二、三级微生物病原的病变，脾、淋巴结是无菌动物组织

学结构。

综合上述，对不同级别的实验动物在动物房设计上和管理上则有不同的要求。

无菌、已知菌以及无特殊病原体动物都需要在无菌或尽可能无菌的环境里饲养，这种环境，目前国际上通用称为屏障环境，即用一道屏障把动物与周围污染的环境隔开，就如胎鼠在母鼠子宫内一样。这种环境从控制微生物的角度分为隔离系统、屏障系统、半屏障系统、开放系统和层流架系统等五大类。

A隔离系统是在带有操作手套的容器中饲养动物的系统，用于饲养无菌动物和栖生动物。内部保持按微生物要求的100级的洁净度，但其设置的房间及操作人员不必按无菌室考虑。

B屏障系统把10000~100000级左右的无菌洁净室作为饲养室，主要用于无特殊病原体动物的长期饲养和繁殖。入室施行严格管理，如淋浴、换贴身衣服等。

C半屏障系统放宽对屏障系统中人及物出入房间时的管理，平面组成大致与屏障系统相同。

D层流架系统笼具放在洁净的水平层流空气中。常用于小规模饲养，但在一般房间进行饲养、操作和处理时有被污染的危险性。可用于半屏障的补充。

E开放系统是对人、物、空气等进出房间均不施行消除污染的系统，但通常要进行某种程度的清洁管理。

根据GMP的要求，药品必需经过严格的质量检验才能上市。不少药品在检验项中有动物检验条目，动物实验按《药品非临床研究质量管理规范》（1999年10月14日国家药品监督管理局第14号令）的要求必须在符合国家有关规定的动物实验室中进行。因此许多药品生产企业修建丁符合要求的动物实验室，改变了过去露养或棚养的简陋现象。检验药品使用的动物应符合《实验动物质量管理办法》（国科发财字[1997]593号文），动物繁殖、饲养、实验环境符合（GB14925-94）《实验动物环境及设施》的要求，在建设中根据使用动物的具体情况按上叙规定进行设施配备。根据已经建设的动物实验室进行总结，在建设中就以下问题应该加以注意：

1 动物实验室规模确定

不同的药品检验所需要的动物品种和数量不一样，动物的品种和数量对规模设置影响很大，由于动物的品种和级别的差异，所要求的试验和饲养环境也不同，需要的动物数量又是根据试验的内容所定，因此各企业的动物实验室规模应根据产品、生产量明确提出实验需要的品种、数量及动物实验的内容而定。

目前常用的动物主要有兔子、豚鼠、小鼠、大鼠、猫、狗等。

例如；某制药企业的产品质量检验需要做热原和异常毒性动物检测，每天有六个批次的产品检测量，观设定动物实验室的规模。

按药典规定的检测方法：使用兔子检测热原，使用小鼠检测异常毒性。在正常情况下，每批产品检测需要兔子3只、小鼠5只，遇到异常情况进行复试时，一批产品需增加兔子5只。小鼠10只。这两种动物中，使用过的免于经观察2日能符合相关要求的可复用，但是重复使用不得超过10次，而小鼠则不可复用。若确定动物实验室的规模以一个月实验动物的周转量计，那么兔子的常用量技3d计算即可，小鼠则按批次计算，另外增加5％-10％的复试使用量。本动物实验室的规模可定为月提供实验兔子60-65只、实验小鼠700-730只。

按国家标准动物实验室的设施要求配备的实验室应与所用动物的微生物学级别相一致，并应与饲养繁殖系统分开设置。由于小规模的动物繁育成本很高，企业的动物实验室通常可不考虑动物繁殖。我国许多大城市都有实验动物饲养基地，能提供常规的实验动物，保证实验动物的质量，建议企业建设的动物实验室不设置动物的繁殖室，只需根据药品检验项要求的动物，采用外购内养形式，满足产品检验的需要。

2 动物实验室洁净级别确定

我国对实验动物的环境及设施有国家标准，其标准规定了实验动物环境及设施的技术要求、建筑设施、设施分类、设施区域的设置、垫料、饮水和笼具的要求及实验方法等，适用于实验动物的饲育、实

验、和生产。

标准实验动物的分四类：普通级、清洁级、SPF 级、GF级。相应的设施分类是开放系统、亚屏障系统、屏障系统、隔离系统。

对应上述系统的洁净室净化级别分别为300 000级、100 000级。10 000级和100级（或10 000 级区的局部100级处理人目前SPF级和GF级动物主要用于科研、药理动物实验等，对于一个制药企业仅以药品生产质量检测为目的的动物实验室常用动物以普通级、清洁级和SPF级为主，普通级的动物主要有兔子、豚鼠、猫、狗等，清洁级的动物有大、小鼠等，SPF级的动物根据具体情况确定。

随着产品市场的开拓，许多药品进入国际市场，有专家认为：要提高产品质量的可信度，有必要将药品质量检测的动物实验级别相应提高。国际上随着生命科学研究的进一步发展，人类愈来愈注重动物质量的提高及实验结果的准确性、科学性和重复性。主要表现在：由追求数量向追求质量的提高方面转化；实验动物品种、品系的增加，呈现出资源的多样化；实验动物替代材料的应用和替代方法的研究发展加快，基于我国药品生产的检测方法和实验动物供应现状，仍以上述常用动物为主。由于实验动物的级别与种源有关，若没有相应大量的种源提供，那么提高动物实验级别存在一定困难，所以现在企业仍然采用普通级和清洁级的动物，但是应做好提级或增加检测方法的准备工作。不论是采用普遍级和清洁级的动物，还是清洁级和SPF级的动物，动物实验室都存在两个净化级别，建议企业可按现有的条件

建设动物实验室，以开放系统和亚屏障系统为主，并将不同的净化级别分别设置，有利于日后净化系统的调整和升级。