全自动菌落计数仪的污水微生物检测应用
全自动菌落计数仪的污水微生物检测应用
一般水体和废水以及污水处理中常见的微生物有：细菌Bacteria，真菌 Fungi，藻类Aglae，原生动物 Protozoa，轮虫 Rotifers, 甲壳纲动物Crustaceans，虫类 Worms (线虫Nematodes与扁虫Flatworms)。
主要的检测项目有细菌总数、酵母菌总数、霉菌总数、大肠杆菌总数等。
1.细菌总数测定
1.1生化池水样稀释103倍、104倍、105倍、106倍和107倍后，分别取各稀释液1mL接种
于培养皿中，倒平板，于37℃生化培养箱中培养24h后，选取菌落数在30～300个之间的培养物进行计数，每个稀释倍数做5个平行样。
1.2取100mL水样水浴至残留少量水后，于105℃烘箱中烘至恒重，称量水样中活性污泥的
干重，计算生化池水样中每克干污泥的细菌总数。
2.酵母菌总数测定
2.1生化池水样稀释102倍、103倍、104倍和105倍后，分别取各稀释液1mL接种于培养
皿中，倒平板，于30℃生化培养箱中培养48h后，选取菌落数在30～300个之间的培养物进行计数，每个稀释倍数做5个平行样。
2.2取100mL水样水浴至残留少量水后，于105℃烘箱中烘至恒重，称量水样中活性污泥的
干重，计算生化池水样中每克干污泥的酵母菌总数。
3.霉菌总数测定
3.1生化池水样稀释102倍、103倍、104倍和105倍后，分别取各稀释液1mL接种于培养
皿中，倒平板，于30℃生化培养箱中培养72h后，选取菌落数在30～300个之间的培养物进行计数，每个稀释倍数做5个平行样。
3.2取100mL水样水浴至残留少量水后，于105℃烘箱中烘至恒重，称量水样中活性污泥的
干重，计算生化池水样中每克干污泥的霉菌总数。
4.大肠菌群总数测定
4.1初发酵试验：以无菌操作将各盛有3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液5毫升的5支发酵管内，
各接种污水样10毫升，将各盛有单料乳糖蛋白胨培养液约10毫升5支的发酵管内，各接种污水样1毫升，再将各盛有单料乳糖蛋白脏培养液约10毫升的5支发酵管内，各接种1∶10稀释的污水样1毫升（相当于原污水样0.1毫升）。将此15支管已接种的发酵管置于37℃恒温箱内，培养24小时。
4.2平板分离：经培养24小时后，将产酸产气及只产酸不产气的发酵管，分别接种于伊红
美兰培养基或品红亚硫酸钠培养基上，置37℃恒温箱培养18～24小时，挑选符合下列特征的菌落，取菌落的一小部分，进行涂片、革兰氏染色、镜检。
菌落总数检验工作中会遇到各种实验平板的菌落计数工作，如倾注法平板，螺旋接种平板，3M菌落总数测试纸片，滤膜法平板等。而且人工计数既消耗时间又耗人力，统计随着人的疲劳度而加大，有的工作人员甚至为了减轻工作量草草了事。
迅数全自动菌落计数仪具有着不同类型平皿的精确统计功能，能够保存平皿图像和数据库，方面查看验证，迅数菌落分析仪器采用了菌落放大图象拍摄，高分辨率的1000万像素CCD数字成像技术和Colonfast菌落智能识别技术。
1.针对细菌总数测定
在菌落自动计数方面，仪器可以快速完成包含细菌、霉菌、酵母菌等样品的各类倾注法平板、涂布法平板、滤膜法平板、空气沉降法平板、螺旋接种平板、3M纸片的菌落自动计数和浓度计算。自动计数菌落的速度高于500个菌落/秒，最小可以分辨的菌落直径可达
0.01mm；可构建专用计数模板以适应复杂实验室环境，计数误差控制在10%以内。
2.针对酵母菌和霉菌
迅数菌落分析仪器内置特殊算法，支持对包含霉菌和酵母菌样品的各类倾注法平板、涂布法平板、滤膜法平板、螺旋接种平板的菌落自动计数和浓度计算。
3.针对大肠杆菌
迅数仪器的自动菌落计数能力可帮助实验人员快速准确选取“菌落数在30到150的VRBA平板”；利用彩色高像素CCD成像及Colonfast图象智能识别软件，迅数菌落仪能迅速识别“紫红色，有沉淀环，且直径不小于0.5毫米”的大肠菌群菌落，只需1秒就计算出大肠菌群典型菌落的菌落数。
4.些特殊的污水中还存在着高致病性病原微生物，比如枯草芽胞杆菌黑色变种芽孢。
检测方法：
1）取适量枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢悬液，混入收集罐，使污水中菌液终浓度达到（2～8）×104/mL
2）按照污水处理程序依次进行化学消毒和物理消毒。
3）将滤膜在蒸馏水中煮沸消毒3次，每次15min；滤器用压力蒸汽灭菌（121℃，20min）。
4）检测采样：消毒处理完毕后，用分度吸量管从污水收集罐的采样口吸取100mL待排放的污水,在无菌的条件下用微孔滤膜过滤。
5）滤膜用50mL PB缓冲液洗涤，除去残留消毒剂。
6）收集洗涤液，在无菌的条件下用微孔滤膜过滤。
7）将微孔滤膜在无菌条件下移放置胰大豆琼脂平皿上进行细菌培养。滤膜应与培养基完全紧贴，当中不得留有气泡。
8）采样平皿倒置于温箱中35±0.5℃培养24±2 h后，进行枯草杆菌菌落计数。
对于滤膜、3M纸片等菌落计数，迅数的Colonfast菌落智能识别技术能够精确识别菌落特征，实现快速自动计数。
杭州迅数科技有限公司是专业从事微生物分析测试技术研究与仪器装备生产的高科技公司。
目前主要生产自动菌落计数仪、螺旋接种微生物菌落分析仪、抑菌圈测量仪、β_内酰胺测定仪、抗生素效价分析仪、藻类计数仪、藻类辅助鉴定系统、浮游动物计数仪、生物显微分析系统等产品。产品广泛应用于科学研究、检验检疫、质量监督、环境监测、疾控中心、药品与生物制品检定、食品药品日化生产、以及钢铁石化化工电力等领域。
目前公司产品已成为中国科学院、中国农业科学院、中国检验检疫科学院、中国药品生物制品检定所、中国动物卫生与流行病学中心、国家水产品质量监督检验中心、国家海洋局、以及上海宝钢、兰州石化等国内数千家企事业单位的首选产品。并成功服务于澳大利亚AMS实验室的耐药监测、法国威立雅水务集团的水质检测、荷兰皇家帝斯曼集团的菌种耐药分析、美国药明康德的毒理中心试验、美国辉瑞药业的抑菌圈（抗生素效价）自动检测等场合。公司产品及优良的售后服务，受到国内外广泛好评和欢迎。(迅数科技：https://www.360docs.net/doc/a114903960.html,)
AlgaeC型浮游生物(藻类,浮游动物)智能鉴定计数仪
国家高新技术企业——杭州万深检测科技有限公司 一、用途： 浮游生物（浮游植物、浮游动物）的快速计数、辅助鉴定，以及显微分析等，用于水质等的一体化监测评价。 二、主要配置： 1）、专业级2000万像素彩色CMOS相机（索尼1”大芯片）、三目显微镜标准C接口 2）、AlgaeCTM浮游生物计数分析智能鉴定系统软件（含显微分析软件） 1套3）、品牌电脑（酷睿i5 CPU/4G内存/500G硬盘/19.5"彩显/无线网卡，专业版Windows 7或10操作系统下使用）1台 三、主要性能指标： 1）显微成像：实现手动与自动拍摄。可人工控制显微图片的观察、拍摄、存储并自动拍摄多达200张图片；在自动模式下可实现连续自动等间隔图片拍摄。★具有实时预览饱和警告、自动背景矫正特性。 2）★中文、拉丁文双语显示的浮游生物专家图库：a、浮游藻类类群：蓝藻、绿藻、硅藻、裸藻、黄藻、褐藻、甲藻、隐藻、金藻、红藻、轮藻、灰色藻、定鞭藻、原绿藻、针胞藻共15个门、1588个属、14107个种的藻类；b、浮游动物类群：原生动物鞭毛虫类、原生动物肉足虫类、原生动物纤毛虫类、轮虫类、枝角类、桡足类、腔肠动物、被囊动物、毛颚动物等共24大类、1933个属、9423个种的浮游动物。内
国家高新技术企业——杭州万深检测科技有限公司容包括浮游生物形态文字介绍、手绘图、显微照片。各图库属种和内容可自行扩充（已有有效图片量已达24.3687万张）。 3）★浮游生物计数：a、浮游生物分类标记：采用不同颜色、不同大小的色圈标 记各种浮游生物，并对200张所拍摄图片内的各种浮游生物，按类点击、自动累积计 数（可合并不同倍率计数结果、多个样品计数结果）；b、优势种自动排序、按门（类）排序、优势群落组成百分比分析；c、可自动计算香农-威纳指数、均匀性指数、藻密 度自动换算、浮游动物丰度自动换算；d、按大量形状模型来辅助计算浮游生物的生物量（内置34种几何模型，通过测量少量参数即可计算个体/细胞体积）。内置常见淡 水藻、常见海洋藻等计数表，并可自行编辑、导出、导入计数表。数据管理：自动保 存每批显微照片、统计标识和统计数据；提供报告编写模板、文本输入、打印预览。 微囊藻分析模块能自动学习与分析团状微囊藻群体含细胞数，实现颗粒或单细胞 微藻自动计数。 4）★藻类、浮游动物智能鉴定：具有按相似度自动比对浮游生物图像的图像式智能搜索特性。通过形态学搜索、关键词搜索、常见浮游生物搜索、分类学搜索，经图像、文字对比，快速鉴定浮游生物。能自动索引浮游生物的用户计数表成所在流域小 图库，使【以图搜图】更快捷。 5）浮游生物形态测量功能：a、视野面积、藻群体面积、浮游动物个体面积测量； b、细胞直径、藻丝、鞭毛长度、浮游动物体长及触角测量； c、枝角分枝角度测量等。
平板菌落计数法操作步骤
平板菌落计数法 一、目的要求 学习平板菌落计数的基本原理和方法。 二、基本原理 平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2~3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。现在常使用菌落形成单位。 该计数法的缺点是操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是这种计数方法最大的优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验，以及食品、饮料和水等含菌指数或污染度的检测。 三、器材 大肠杆菌悬液，LB琼脂培养基，1mL、5mL无菌吸管，无菌平皿，无菌水，无菌试管，试管架和记号笔等。 四、操作步骤 1、编号 取无菌平皿9套，分别标明为10-4、10-5、10-6各三套，另取6支无菌试管分别标记为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。 2、稀释 用1mL无菌吸管吸取1mL已充分混匀的大肠杆菌菌悬液，精确地放0.5mL至10-1的试管中，此即为10倍稀释，将多余的菌液放回原菌液中。 将10-1试管充分振荡、混匀。另取一支1ml吸管插入10-1试管中来回吹吸菌液三次，进一步将菌体分散、混匀。动作不要太猛太快，吸时插入，吹时提出，再用此吸管吸取10-1菌液1mL，精确地放0.5mL至10-2试管中，此即为100倍稀释，依次类推， 3、取样
菌落总数检测操作规程(国标word版)
山西梁汾醋业有限公司 文件类别及编号：LF-GC-01 版次共页第页 菌落总数测定的标准操作规程 1. 目的 规范山西老陈醋菌落总数测定的操作规程，保证山西老陈醋产品的质量。 2. 适用范围 酿造食醋和配制食醋菌落总数的测定。 3. 仪器设备 恒温培养箱，冰箱，恒温水浴箱，天平（0.1g）,均质器，振荡器；无菌吸管1ml(0.01刻度)、10ml(0.1ml刻度)或微量移液器及吸头；无菌锥型瓶，250ml/500ml; 无菌培养皿：直径90mm；PH计或精密PH试纸；放大镜或菌落计数器 4.培养基和试剂 4.1平板计数琼脂培养基， 成分： 胰蛋白胨 5.0g 酵母浸膏 2.5g 葡萄糖 1.0g 琼脂15.0g 蒸馏水1000ml PH7.0±0.2 制法：将上述加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节PH。分装试管或锥型瓶，121℃高压灭菌15min。 4.2磷酸盐缓冲液
成分： 磷酸二氢钾（KH 2PO 4 ） 34.0g 蒸馏水500ml PH 7.2 制法： 贮存液：称取34.0g磷酸二氢钾溶于500ml蒸馏水中，用大约175ml的1mol/L 氢氧化钠溶液调节PH,蒸馏水稀释至1000ml存于冰箱。 稀释液：取贮存液1.25ml,用蒸馏水稀释至1000ml,分装于适宜容器中，121摄氏度高压灭菌15分钟。 4.3无菌生理盐水 成分： 氯化钠8.5g 蒸馏水1000ml 制法：8.5克氯化钠溶于100ml蒸馏水中121摄氏度高压灭菌15分钟。 5 检验程序
6操作步骤 6.1样品的稀释 6.1.1固体和半固体样品：称取25 g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质1min～2min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10的样品匀液。 6.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）
菌落计数器XK97-A
产品说明 一、概述 XK97-A型菌落计数器是一种数字显示式半自动细菌检验仪器。由计数器、探笔、计数池等部分组成。计数器采用CMOS集成电路设计制造。黑色纵深背景式记数池内，采用节能环形荧光灯侧射照明，菌落对比清楚。按照细菌计数检验规程规定，仪器显示器设计为三位数，当一只培养皿中菌落生长数超过300个时，应将检验样品稀释重作，以保证计数的准确性。本仪器可减轻实验人员的劳动强度,提高工效和工作质量。产品广泛用于食品、饮料、药品、生物制品、卫生用品、饮用水、工业废水、临床标本中细菌数的检验。是各级卫生防疫站、环境监测站、食品卫生监督检验所、医院、生物制品所、药检所、食品厂、日化厂及大专院校、科研单位实验室的必备仪器。 二、主要参数 ·计数器容量：0～999 ·光源灯功率：16W ·总功耗：＜20W ·电源电压：220V±10％，50Hz ·体积：280×230×90 ·重量：1.4kg 三、使用方法 a .接通电源，拨动开关计数池内灯亮，显示屏显示“001”，将探笔插头插入仪器的插孔内，按下“复位”键调零使仪器进入工作状态。 b.放入待检培养皿。 c.用探笔在培养皿底面对所有的菌落逐个点数。每点一个应听到“嘟”声才说明有效，否则应重点。此时，点到的菌落被标上颜色，显示数字自动累加。 d.用放大镜仔细检查，确认点数无遗漏，计数即已完毕。 e.显示屏内的数字即为该培养皿的菌落数。 f.记录数字后取出培养皿。按“复位”键，显示屏进入初始状态。 四、注意事项 a.仪器应放置在平整牢固的台面上使用。 b.点数菌落时，探笔不要过于倾斜,轻轻点下至有弹跳感时，数字即被输入。 c.仪器应防潮、防剧烈震动、防直接日光曝晒、防酸碱侵蚀,用后应加防尘罩。 d.注意防止细菌培养物污染计数池。 e.仪器及探笔均不能随意拆卸。若发现故障，应请有经验的技术人员检修。
(完整版)稀释平板计数法
实验十一稀释平板计数法 实验目的 学习稀释平板菌落计数的基本原理和方法。 实验内容 用稀释平板菌落计数法对菌悬液进行计数。 实验原理 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。 平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。 实验器材 酿酒酵母菌悬液 马铃薯培养基 1m1吸管，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。 实验步骤 1．无菌器材的准备 (1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。 (2) 无菌移液管的准备：取1m1移液管，在后部管口处用铁丝塞入棉花少许（长约1~1.5cm ），以防将菌液吸出，同时也可避免将外面的微生物吹入。棉花要塞得松紧适宜吹时能通气但不使棉花滑下为准。然后将移液管尖端放在4~5cm宽的长纸条一端呈45o角折叠纸条包住尖端，用左手捏住管身，右手将吸管压紧，在桌面上向前滚动，以螺旋式包扎起来，上端剩余纸条折叠打结后干热灭菌。 (3) 无菌水：取6支试管，分别装入4.5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。 2．样品稀释液的制备 (1) 编号 取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。另取6支盛有4.5m1无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
细菌总数测定操作规程
细菌总数检测操作规程 1 原理 试样经过处理，稀释至适当浓度，在一定条件（如使用特定的培养基，在温度30℃±1℃培养72h±3h等）下培养后，所得1g（mL）试样中所含细菌总数。 2 试剂与仪器 2.1 所用器具 三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针、移液器 2.2 仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅 2.3 所用试剂和培养基 营养琼脂 取营养琼脂32.0g，加入蒸馏水1L，搅拌加热至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。 3、操作步骤 3.1配制0.85%生理盐水。 称取氯化钠8.5g溶于1000mL蒸馏水中。 3.2三角烧瓶加入生理盐水90mL和玻璃珠，试管中加入生理盐水9mL，121℃灭菌30min。（三角烧瓶个数与样品数量一致，试管数量与稀释次数相关） 3.3将1000μL枪头、培养皿、5mL枪头、称量勺，121℃灭菌30min。（注意计算数量）3.4将枪头、培养皿置于烘箱103℃烘干。（1-3步需提前一天完成） 3.5对称量房间进行紫外灭菌30分钟，关灯静置60 min。以无菌操作取样品10g于含90mL 生理盐水三角烧瓶中，于振荡器上振荡30min，制成1:10的均匀稀释液。 3.6用1000μL枪头吸取1:10稀释液1mL，沿管壁慢慢注入含有灭菌生理盐水9mL的试管中，于振荡器上混合均匀，制成1:100的均匀稀释液。 3.7另去一只1mL灭菌吸管，按照上述操作方法，作10倍递增稀释，如此每递增稀释一次，即更换一支灭菌吸头。 3.8选择2个~3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个培养皿。 3.9稀释液移入培养皿后，及时将凉至46℃±1℃的培养基（可放置46℃±1℃水浴锅内保温）注入培养皿约15mL，小心转动培养皿使试样与培养基充分混匀（从稀释试样到倾注培.
HICC-A全自动菌落计数仪
国家高新技术企业——杭州万深检测科技有限公司HiCC-A型全自动菌落计数仪及分析系统采用800万像素拍摄仪成像，其显著优点是：准确、简便，可以1机2用（自动菌落计数、显微镜成像图计数分析）。 一、用途： 用于全自动菌落计数分析等、也可用于显微图像中的颗粒物自动计数分析 二、主要性能参数指标： 1 ★成像装置 1）自动对焦的大景深800万像素（3264x2448像素）彩色拍摄仪，具有微距拍摄特性，悬浮暗视野、背光可切换的2平皿同时成像超薄工作台板 2）适应培养皿：50～180mm及A4幅面内的矩形平板，同时测定2个90mm平皿（倾注、涂布、膜滤、螺旋平皿、3M纸片）
国家高新技术企业——杭州万深检测科技有限公司 2 菌落计数分析 1）★自动识别统计：SmartdownTM菌落智能识别技术，自动识别大规模团状、 链状粘连的长形杆菌（显微形态大片粘连的大肠杆菌、病菌孢子）及平皿上的各类菌 落（含金色葡萄球菌计数（GB4789.10-2016）、大肠菌群测定（GB4789.3-2016）等等）。可自动形成批处理向导，实现一键式自动计数 2）自动计数精度≥96.5%，最多监视修正3.5%，即达全部正确。分析统计速度：150～800个菌落/s，2个平皿分析时每个平皿成像+计数总耗时≤5秒 3）★菌落粘连分割：自动分割相互成片粘连的长形、圆形等菌落目标，用户可选择分割或不分割。还可手动分割、合并菌落目标图像 4）★颜色形状识别：具有快速水平集提取技术，可按20类分类识别计数特定颜色、形状的菌落数量，并可类别转换修正。可同时选择6个目标区自动分别分析，并 自由增减或编辑分析目标区 5）菌落形态分析：自动获得各菌落面积、等效直径、长轴、短轴、长宽比、圆度、周长、形状系数等。可按形态指标过滤查询。 6）★鼠标点击修正，无痕剔除网格及文字，自动剔除杂质，有效支持复杂微生物统计，符合GB4789.2-2016的参数自动换算特性。 3 导出查询与升级：分析图像与数据结果可保存，自动形成Excel或PDF文档报告。具有在线升级特性★。
菌落计数器计数方法详解
菌落计数器计数方法详解 菌落计数器由计数器、探笔、计数池等部分组成，计数器采用CMOS集成电路精心设计，LED数码管显示，字高13mm，清晰明亮，配合专用探笔，计数灵敏准确，菌落对比清楚。便于观察。可广泛用于食品、饮料、药品、生物制品、化妆品、卫生用品、饮用水、生活污水、工业废水、临床标本中细菌数的检验。那么菌落计数器都是怎样进行计数的呢？上海巴玖来为您详细讲解菌落计数器的计数方法。 1.计数器测定法 即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出结果（本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数）。 2.电子计数器计数法 电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。 该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何碎片。 3.活细胞计数法 常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。 广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是常用的活菌计数法。 4.比浊法 比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定
实验六 细菌计数法
实验六细菌计数法 菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。 目录 菌落总数介绍 检验方法 说明（一）样品的处理和稀释： （二）倾注培养 （三）计数和报告 菌落总数介绍 菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。 检验方法 菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。检验方法参见：GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定》SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品菌落计数》 说明 （一）样品的处理和稀释： 1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。2．无菌操作：操作中
药品微生物限度检验方法标准操作规程
标准操作规程 目的：建立一个药品微生物限度检验标准操作规程。 范围：适用于本企业生产的所有品种，本企业所有洁净生产区域，QC微生物限度检查室，洁净工作室等。 责任者：QC主任、化验员。 规程： 本规程引至《中国药典》2000年版。 1. 概述：微生物限度检查系指非规定灭菌制剂及其原辅料受到微生物污染程度的一种检查方法，包括染菌量及控制菌的检查。我公司QC设无菌操作室，用于微生物限度检查。无菌操作室的管理及使用制度见本文附录一。 2. 抽样：供试品应按批号随即抽样，一般抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍。抽样时，凡发现有异常可疑的样品，应缺陷选用疑问的样品，但因机构损伤明显破裂的包装不得作为样品，凡已能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出长螨、长霉、虫蛀及变质的药品，可直接判为不合格，无需要再抽样检验。 3. 供试品的保存：供试品在检验之前，应保存在阴凉干燥处，以防供试品中的污染菌因保藏条件所引起致死、损伤或繁殖。供试品在检验之前，应该保持原有包装状态，严禁开启，包装已开启的样品不得作为供试品。 4. 检查： . 使用设备：电热恒温培养箱、电热恒温水温箱、试管、刻度吸管、量筒、三角瓶、培养皿、试管架、注射器、针头、注射器盒、研钵、75％酒精棉球、紫外灯（365nm波长）。 . 检查的全过程应严格遵守无菌操作，严防再污染。使用设备、仪器、人员及无菌操作室常用的消毒、灭菌方法见本文附录二。除另有规定外，供试品制备成供试液后，均在均匀状态取样。制成供试液后，应该在60分钟内注皿操作完毕。 标准操作规程 . 培养：除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30－35℃，霉菌、酵母菌培养温
菌落计数器的计数方法
菌落计数器的计数方法 菌落计数器由计数器、探笔、计数池等部分组成，计数器采用CMOS集成电路精心设计，LED数码管显示，字高13mm，清晰明亮，配合专用探笔，计数灵敏准确，菌落对比清楚。便于观察。可广泛用于食品、饮料、药品、生物制品、化妆品、卫生用品、饮用水、生活污水、工业废水、临床标本中细菌数的检验。那么菌落计数器都是怎样进行计数的呢？上海巴玖来为您详细讲解菌落计数器的计数方法。 1.计数器测定法 即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出结果（本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数）。 2.电子计数器计数法 电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。 该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何碎片。 3.活细胞计数法 常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。 广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是常用的活菌计数法。 4.比浊法
(整理)全自动菌落计数器
全自动菌落计数器RTAC-1型 RTAC-1型全自动菌落计数器是瑞韬科技根据多年技术积累产品经验，专为基层实验室设计的一款经济实用型菌落计数器，能轻松胜任大多数场合的基本计数：高精度的CCD镜头、全封闭自动定位样品仓、高效准确的菌落分析软件,性价比突出。 1200万像素CCD镜头，全封闭LED冷光源自动样品仓 全新设计的全封闭自动样品箱。辅以平板光源、带状光源和自动进出仓装置，彻底解决了因外界光线对玻璃培养皿折射光斑的干扰而影响统计精度的技术难题。 AutoCount TM菌落智能识别技术，使计数更方便快捷，统计结果更准确。自动菌落计数准确与否的关键是算法，本产品采用“瑞韬科技”专利的AutoCount TM菌落智能识别技术，无论是透明琼脂平板还是深色有色培养基都能轻松处理，且能对纸片进行有效的计数。 快速高效，极大地提高实验效率 “RTAC-1”型全自动菌落计数器采用真彩动态 CCD 和高速图像传输接口，常规平皿统计只需3秒。当原始样品菌浓较高，未做梯度稀释，直接培养形成的数千菌落，也可在5秒内自动计算出。 强大的区域选择功能
当培养皿中有局部片状菌落生长，而其他区域又分布均匀时，可通过区域选择工具，排除污染区域的菌落数。通过平皿直径和稀释度数据，迅速换算为全皿菌落总数。 仪器主要功能与技术指标 ▲培养皿类型：50-160mm ▲成像 ○ CCD规格：1200万像素，32位真彩 ○分辨率：0.04mm（更符合人工检测实际效果避免过度检测） ○图像拍摄：焦距、白平衡、色温可调 ▲光源 ○拍摄箱：全封闭、无日光干扰、自动居中、暗箱拍摄 ○光源：LED双冷光源拍摄系统 ▲统计功能 ○菌落识别技术：AutoCount TM菌落智能识别技术。 ○平皿类型：倾注、涂布、膜滤平皿、3M纸片。 ○菌落统计速度：300个菌落约3秒。 ○全皿菌落统计：菌落总数统计，并按多档尺寸分类显示。 ○区域选择统计：可选择任意圆形圈定区域进行统计。 ○鼠标点击统计：快速标记、添加菌落，适合培养皿边缘菌落的计数。 ○人工辅助修正：删除任意区域内的误选菌落。 ○统计效果调整：可人为调整菌落分析的精度。 ○直径分类统计：设置直径范围，统计特定大小的菌落。 ○颜色识别统计：根据色度、亮度、饱和度筛选特定菌落。 ○统计数据处理：培养样本稀释度输入实现自动换算。 ○大肠菌群计数：根据国家标准GB/T4789.3-2008大肠菌群平板计数和Petrifilm测试片法，实现大肠菌群自动计数。 ○大肠杆菌计数：根据国家标准GB/T4789.38-2008大肠杆菌Petrifilm测试片计数法，实现大肠杆菌自动计数。 ○金黄色葡萄球菌计数：根据国家标准GB/T4789.37-2008 Baird-Parker 平板计数和金黄色葡萄球菌Petrifilm测试片法，实现金黄色葡萄球菌自动计数。
沉降菌检测标准操作规程ok
执行编写部门：文件编号：替代版本： 编写人签名：年月日 审核人签名：年月日 批准人签名：年月日 分发部门：执行日期： 沉降菌检验标准操作规程 1.目的 本文件规定了洁净室（区）中沉降菌检验的操作方法，保证检验人员操作规范化、标准化，确保洁净室洁净度。 2.范围 标准规定了医药工业洁净区中沉降菌的测试条件、测试方法。本标准适用于医药工业洁净室（区），无菌室（区）（包括洁净工作台）的沉降菌测定。本公司规定对万级净化实验室沉降菌检测项目进行一星期/次的检验。 3．职责 QC操作人员、QC管理人员严格按照此规程执行；相关使用人员做好洁净室清洁维护工作。 4.内容 4.1. 定义 4.1.1.洁净室（区） 对尘埃及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑结构、装备及其 使用均具有减少对区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。 4.1.2.洁净工作台 一种工作台或者与之类似的一个封闭围档工作区。其特点是自身能够供给经过过 滤的空气或气体，垂直层流罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作、水平层流洁净 工作台、自净器等。 4.1.3.洁净度 洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。 4.1.4.菌落 细菌培养后，由一个或几个细菌系列而形成的一细菌集落，简称CFU。通常用个
数表示。 4.1. 5.沉降菌 用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长 条件下繁殖到可见菌落数。 4.1.6.静态测试 洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净室（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。 4.1.7.动态测试 洁净室（区）已处于正常状态下进行的测试。 4.2. 测试方法 4.2.1.方法概述 采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若 干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌 落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。4.2.2.测试仪器和设备 高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、培养皿。 4.2.3.培养基 营养琼脂培养基：培养基的准备及灭菌依照培养基配制及灵敏度测试标准操作规程准备。 4.2.4.测试步骤 4.2.4.1.采样 将已制备好的培养皿按5.3.4.1.3的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面 暴露于空气中0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。 4.2.4.2.培养 全部采样结束后，将培养皿倒置于在30～35℃生化培养箱中培养48h。每批 培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作 对照培养。 4.2.4.3.菌落计数 4.2.4.3.1用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5-10倍放大镜检
平板菌落计数法
平板菌落计数法 （一）目的要求 学习平板菌落计数的基本原理和方法。 （二）基本原理 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。 平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、饮料和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。
（三）器材 1．菌种大肠杆菌菌悬液。 2．培养基牛肉膏蛋白陈培养基。 3．仪器或其他用具1mL无菌吸管，无菌平皿，盛有4.5ml无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。 （四）操作步骤 l．编号 取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6。(稀释度)各3套。另取6支盛有4.5mL无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。 2．稀释 用lmL无菌吸管吸取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品)，精确地放0.5mL至10-1的试管中，此即为10倍稀释。将多余的菌液放回原菌液中。 将10-1试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀。另取一支lml吸管插入10 1试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸管伸人管底，吹时离开液面，以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢。用此吸管吸取10-1菌液lmL，精确地放0.5mL至10-2试管中，此即为100倍
细菌平板计数法
操作步骤 l．编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6。(稀释度)各3套。另取6支盛有4.5mL无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。 2．稀释用lmL无菌吸管吸取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品)，精确地放0.5ml 至10-1的试管中，此即为10倍稀释。将多余的菌液放回原菌液中。将10-1试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀。另取一支lml吸管插入10- 1试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸管伸人管底，吹时离开液面，以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢。用此吸管吸取10-1菌液lmL，精确地放0.5mL至10-2试管中，此即为100倍稀释。……其余依次类推。放菌液时吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接触一个稀释度的菌悬液，否则稀释不精确，结果误差较大。 3.取样用三支1mL无菌吸管分别吸取10-4、10-5和10-6的稀释菌悬液各lmL，对号放入编好号的无菌平皿中，每个平皿放0.2mL。不要用lmL吸管每次只靠吸管尖部吸0.2mL稀释菌液放入平皿臼，这样容易加大同一稀释度几个重复平板间的操作误差。 4．倒平板．尽快向上述盛有不同稀释度菌液的平皿中倒入融化后冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培养基约15毫升/平皿，置水平位置迅速旋动平皿，使培养基与菌液混合均匀，而又不使培养基荡出平皿或溅到平皿盖上。由于细菌易吸附到玻璃器皿表面，所以菌液加入到培养皿后，应尽快倒入融化并于已冷却至45℃左右的培养基，立即摇匀，否则细菌将不易分散或长成的菌落连在一起，影响计数。待培养基凝固后，将平板倒置于37℃恒温培养箱中培养。 5．计数培养48h后，取出培养平板，算出同一稀释度三个平板上的菌落平均数，并按下列公式进行计算，每毫升中菌落形成单位(cfu)=同一稀释度三次重复的平均菌落数×稀释倍数×5。一般选择每个平板上长有30~300个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较为合适。同一稀释度的三个重复对照的菌落数不应相差很大，否则表示试验不精确。实际工作中同一稀释度重复对照平板不能少于三个，这样便于数据统计，减少误差。 由10-4、10-5、10-6三个稀释度计算出的每毫升菌液中菌落形成单位数也不应相差太大。平板菌落计数法，所选择倒平板的稀释度是很重要的。一般以三个连续稀释度中的第二个稀释度倒平板培养后所出现的平均菌落数在50个左右为好，否则要适当增加或减少稀释度加以调整。 平板菌落计数法的操作除上述倾注倒平板的方式以外，还可以用涂布平板的方式进行。二者操作基本相同，所不同的是后者先将牛肉膏蛋白胨培养基融化后倒平板，待凝固后编号，并于37℃左右的温箱中烘烤30min，或在超静工作台上适当吹干，然后用无菌吸管吸取稀释好的菌液对号接种于不同稀释度编号的平板上，并尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布均匀，平放于实验台上20～30min，使菌液渗入培养基表层内，然后倒置37℃的恒温箱中培养24～48h。涂布平板用的菌悬液量一般以0.1ml较为适宜，如果过少菌液不易涂布开，过多则在涂布完后或在培养时菌液仍会在平板表面流动，不易形成单菌落。五、实验报告1．结果2．将培养后菌落计数结果填入下表2．思考题(1)为什么融化后的培养基要冷却至45℃左右才能倒平板? (2)要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键?为什么? (3)试比较平板菌落计数法和显微镜下直接计数法的优缺点及应用。(4)当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中在一起时，你认为问题出在哪里? (5)用倒平板法和涂布法计数，其平板上长出的菌落有何不同?为什么要培养较长时间(48h)后观察结果?
微生物限度检查操作规程中国药典四部通则样本
—、范围：本标准规定了微生物限度的检查方法和操作要求；适用于检品 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、控制菌的检查。 二、 引用标准：《中国药典》( 通则1105-1106) 三、 目录1.微生物限度标准 2.设备.仪器及用具 3?消毒液、稀释剂.试液及培养基 4. 检查总则(通则1105:非无菌产品微生物限度检查：微生 物计数法，通则1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法) 5. 微生物计数法检查 6. 控制菌检查法 7. 实验技术 &附件 1. 微生物限度标准 非无菌药用原料及辅料的微生物限度标准 *未做统一规定。 L1成品微生物限度标准
(1).” 一”为不得检出。 (2).目测霉变者以不合格论。 (3).”无”为标准依据或无相应规定。 1.2工艺用水微生物限度标准 1.3内包装材料微生物限度标准 说明：1?”一”为每100 cm2中不得检出。2.目测霉变者以不合格论。3.”无”为标准依据或无相应规定。 2.设施、仪器及用具
2.1、设施： 2丄1?微生物限度检查室及相关设施：微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区域、工作台直及环境应定期进行监测。 2.12其它设备：高压蒸汽灭菌器；细菌培养箱（30?35?）;霉菌培养箱（25-280 ；电炉（或其它适宜的加热装置）；恒温水浴；电热干燥箱（250~300匕）；电冰箱。生化试剂储存箱。 2.2仪器及器mi 2.2.1.菌落计数器；显微镜（1500X）;电子天平或药物天平（感量O.lg）; pH系列比色计。 222?玻璃器皿：锥形瓶（250?300ml,内装玻璃珠若干）.研钵（玻璃或陶瓷制,f 10?12cm）、培养皿（f 9cm）.量筒（100ml）.试管（18x 180mm）及塞、吸管（lml分度0.01, 10ml分度0.1）、载玻片、盖玻片、玻璃消毒缸（带盖）。 2.2.3新购的玻璃器皿的清洁：先用流水冲洗，浸泡于1%?2%盐酸（工业用）液中约2?6小时，除去游离碱质，再用流水冲洗。用于化学分析的玻璃仪器，需用重洛酸钾清洁液浸泡数分钟后，再用流水冲洗，最后以纯化水涮洗2?3次，晾干备用。 2.3用过的玻璃器皿： 231未被病原微生物污染的器皿：可随时洗涤。用清水冲洗（或浸泡），除容量仪器外， 可用毛刷和肥皂粉，内外刷洗，再用清水涮洗干净，晾干备 用。容量仪器宜用清洁液浸泡或涮洗，再用流水冲洗，最后以纯化水涮洗 2~3 次。
菌落计数及报告方法
菌落计数及报告方法 1、目的 建立微生物实验中菌落计数及报告规范，从实际生长的菌落数中计算出较为科学的结果 2、方法说明本文件采用平板计数法，产品中污染的细菌种类不同，每种细菌都有它一定的生理特性，培养时对营养要求，培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等均有所不同。在实际工作中，不可能做到满足所有菌的要求，因此所测定的结果，只包括在本方法所使用的条件下生长的微生物总数。 3、参考文件GB7918.2-1987化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定 4、菌落计数方法先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5～10倍的放大镜检查，以防遗漏。记下各平皿的菌落数后。求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数。若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。 5菌落计数及报告方法 5.1 首先选取平均菌落数在30～300之间的平皿，作为菌落总数侧定的范围。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数(见表中例1) , 5.2 若有两个稀释度，其平均菌落数均在30～300个之间，则应求出两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于或等于2 ，应报告其平均数，若大于2则报告其中较小的菌落数( 见表中例2及例3), 5.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300 个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例4)， 5.4 若所有稀释度的平均菌落数均少于30个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例5), 5.5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300个之间，其中一个稀释度大于300个，而相邻的另一稀释度小于30个时，则以接近30 或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例6), 5.6 若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每克或每毫升小于10 个。
实验四 微生物平板菌落计数法
实验四微生物平板菌落计数法 一、实验目的 学习并掌握平板菌落计数的基本原理和方法。 二、实验原理 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后,其中的微生物充分分散成单个细胞,取一定量的稀释样液接种到平板上,经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数,根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞,所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2~3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低,为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（ｃｆu）而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。 平板菌落计数法虽然操作较繁,结果需要培养一段时间才能取得,而且测定结果易受多种因素的影响,但是该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水(包括水源水）等的含菌指数或污染程度的检测。 三、实验器材 1 . 菌种：酵母菌。 2 ．培养基：ＹEB培养基。 3 ．仪器或其他用具: 1ml 无菌吸管,无菌平皿,盛有４.５ml 无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。 四、实验步骤 1 ．编号 取无菌平皿９套,分别用记号笔标明 10-4、10－5、 1０-6(稀释度）各 2 套， 另取 6 支盛有 4．5ml 无菌水的试管，依次标是１０-1、１０-2、 10-3、 10-4、 １0-5、 10－6。 2 . 稀释 用 1ml 无菌吸管吸取 1ml 已充分混匀的大肠杆菌菌悬液(待测样品)，精确地放 ０.5ml 至 1０-1的试管中，此即为 10 倍稀释。将多余的菌液放回原菌液中。
药品微生物限度检验方法标准操作规程
药品微生物限度检验方法标准操作规 程
标准操作规程 目的：建立一个药品微生物限度检验标准操作规程。 范围：适用于本企业生产的所有品种，本企业所有洁净生产区域，QC微生物限度检查室，洁净工作室等。 责任者：QC主任、化验员。 规程： 本规程引至《中国药典》。 1. 概述：微生物限度检查系指非规定灭菌制剂及其原辅料受到微生物污染程度的一种检查方法，包括染菌量及控制菌的检查。我公司QC设无菌操作室，用于微生物限度检查。无菌操作室的管理及使用制度见本文附录一。 2. 抽样：供试品应按批号随即抽样，一般抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍。抽样时，凡发现有异常可疑的样品，应缺陷选用疑问的样品，但因机构损伤明显破裂的包装不得作为样品，凡已能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出长螨、长霉、虫蛀及变质的药
品，可直接判为不合格，无需要再抽样检验。 3. 供试品的保存：供试品在检验之前，应保存在阴凉干燥处，以防供试品中的污染菌因保藏条件所引起致死、损伤或繁殖。供试品在检验之前，应该保持原有包装状态，严禁开启，包装已开启的样品不得作为供试品。 4. 检查： 4.1. 使用设备：电热恒温培养箱、电热恒温水温箱、试管、刻度吸管、量筒、三角瓶、培养皿、试管架、注射器、针头、注射器盒、研钵、75％酒精棉球、紫外灯（365nm波长）。 4.2. 检查的全过程应严格遵守无菌操作，严防再污染。使用设备、仪器、人员及无菌操作室常见的消毒、灭菌方法见本文附录二。除另有规定外，供试品制备成供试液后，均在均匀状态取样。制成供试液后，应该在60分钟内注皿操作完毕。 标准操作规程 4.3. 培养：除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30－35℃，霉菌、酵母菌培养温度为25－28℃，控制菌培养温度为36±1℃，检验结果的报告以1g、1ml或10cm2为单位。 4.4. 复检
全自动菌落计数仪
国家高新技术企业——杭州万深检测科技有限公司杭州万深检测科技新推出的这款HiCC-B2型全自动菌落计数仪是傻瓜式便捷操作 的免培训款，一键触控拍照+自动计数来搞定菌落计数，就这么简单！由触控平板电脑、自动对焦彩色拍摄仪、自动菌落计数软件、背光成像装置组成。主要用于微生物、菌 落总数的自动计数分析，快速有效替代半自动计数菌落的落后工作方式。 HiCC-B2型沿袭了HiCC-B型全自动菌落计数仪性能卓越、操作傻瓜化、价格低廉的优点，并大幅提高了拍照成像的便捷性和用户体验，受到广泛追捧和欢迎，已成为 千家万户微生物室必备的自动计数通用工具。 功能特点： 1、由≥11.6寸500万像素自动对焦拍照的平板电脑或具有微距拍摄特性自动对焦的大景深800万像素（3264x2448像素）彩色拍摄仪来拍照菌落平皿，软件便自动计数和 输出菌落总数。
国家高新技术企业——杭州万深检测科技有限公司 2、由添加、删除的个别指点修正，可使计数值达100%准确。 3、可查看结果表、导出至EXCEL，以及向指定接收方上传数据。 4、超薄LED背光成像装置使自动计数识别更稳定，可长时间工作。 5、Windows 10系统环境，固态硬盘10秒启动直接进入操作，人性、简洁、智能。 技术参数： 1、配彩色500万像素自动对焦的拍照平板电脑或能微距拍摄的自动对焦大景深800万像素（3264x2448像素）彩色拍摄仪，最高分辨率0.02mm，可识别小至0.05mm 的菌落。 2、悬浮暗视野、背光可切换成像分析的超薄成像装置。 3、适应培养皿直径：50～180mm平皿（倾注、膜滤、3M纸片）。 4、自动分割链状或团状粘连的各类菌落。 5、一键触控拍照自动计数精度≥96.5%，极少修正后可达100%正确。分析速度：50～300个菌落/s。对显色培养基培养出来的大肠杆菌群也能有效自动计数。 6、自动剔除杂质，触屏缩放图像和点击修正等前卫操作，有效支持复杂微生物统计。 7、可存上万张图片及其对应的数据，并无线上网来远程发送图片、结果数据。