生物学常用试剂配制
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常用试剂
储存注意事项:储存于阴凉、通风的地方;远离火种、热源。避免光照。室温不超过30℃,相对湿度不超过80%。包装必须密封,切勿受潮。应与易(可)燃物、还原剂、碱类、醇类、食用化学品分开存放,切忌混储,储区应备有合适的材料收容泄漏物。
操作注意事项:尽量在通风橱操作,加强通风,避免粉尘扩散。远离易燃、可燃物,
避免与还原剂、碱类、醇类接触,防止包装及容器损坏。
EDTA(PH )
组分浓度: mol/L EDTA(MW:)
配制量: 500ml
配制方法:
1.称取93g Na2EDTA·2H2O置于500ml蓝盖瓶中。
2.加入400ml的去离子水,置于磁力搅拌器上充分搅拌。
3.用NaOH调节调节pH值至(约需加入20g固体NaOH),当pH 接近时, EDTA方可完全溶解,加入去离子水定容至1L。
4.高温高压灭菌后,室温保存半年。
5M NaCl
组份浓度: 5mol/L NaCl (MW:
配制量: 1L
配制方法:
1.准确称取氯化钠,置于1L的蓝盖瓶中。
2.用去离子水溶解并稀释至1L。
3.高温高压灭菌后,常温保存。
CaCl2
组份浓度:L CaCl2 (MW:
配制量: 50ml
配制方法:
1.准确称取氯化钙 g于50ml的conical tube中。
2.用去离子水溶解并稀释至500ml,用μm滤膜过滤除菌滤膜过滤除菌到进口的conical tube。
3.贮存于4℃。
50% 甘油
组分浓度: 50%(V/V) glycerol
配制量: 100ml
配制方法:
1. 量取下列试剂,置于250ml蓝盖瓶中: 100% glycerol 50ml
2.加入50ml去离子水,充分搅拌溶解。
3.高温高压灭菌,4℃保存。
4.使用时,到超净台分装。
Amp-氨苄青霉素(钠盐)
放置:置于4°C冰箱
配方及配法:配成200mg/ml的1000*溶液储存(40g溶于200ml蒸馏水中),溶解
后在超净台用注射器过滤灭菌分装,置于-20°C冰箱第二层,以1*的终浓度(200ug/ml)加入培养基。
Kan-卡那霉素(硫酸根)
放置:置于试剂柜
配方及配法:配成20mg/ml的1000*溶液储存(4g溶于200ml蒸馏水中),溶解后在超净台用注射器过滤灭菌分装,置于-20°C冰箱第二层,以1*的终浓度(20ug/ml)加入培养基。
DTT(二硫苏糖醇)
放置:置于-20°C冰箱顶层
配方及配法: 1M DTT的配制:溶解 IPTG 于50 mL水中,溶解后分装成1。5ml管,置于-20°C冰箱第二层使用浓度为1-10Mm
PMSF(苯甲基磺酰氟)
放置:试剂柜
PMSF的配制:分子量
保存室温保存,配成PMSF溶液后需-20℃保存。
配制溶解的PMSF于足量的异丙醇中,定容到50ml。分成小份贮存于―20℃。工作浓度 1mM
注意:有毒,对呼吸道粘膜、眼睛和皮肤有很强的危害性,配制时请在通风橱进行,并穿实验服及戴一次性手套。
10×TE Buffer(pH )
组份浓度: 100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA
配制量: 1L
配置方法
1. 量取下列溶液,置于1L蓝盖瓶中。
Tris-HCl Buffer() 100mL
EDTA() 20mL
2. 向蓝盖瓶中加入约800mL的去离子水,均匀混合。
3. 将溶液定容至1L,高温高压灭菌。
4. 室温保存半年。
注意:此为贮存液,使用时稀释100倍,用于PCR纯化和质粒提取后产物保存。
PIPES (PH )
配制量:10 ml(MW:)
配制方法:
1. 称取,加入到15 ml塑料离心管内。
2. 加8 ml的水,搅拌溶解。
3. 用5M KOH 调PH至
4. 滤膜过滤,-20℃保存。
Tris-HCl()
组份浓度: mol/L Tris-HCl
配制量: 1L
配制方法:
1.称取的Tris-base(MW:)置于1L蓝盖瓶中。
2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调pH值至。
4. 将溶液定容至1L。
5. 高温高压灭菌后,室温保存半年。
Tris-HCl()
组分浓度: mol/L Tris-HCL
配制量: 1L
配制方法:
1.称取121g的Tris-base(MW:)于1L蓝盖瓶中,
2.加入900ml的去离子水,充分搅拌均匀,
3. 用浓盐酸调pH值至,每升约需40-50ml浓盐酸,用水调整终体积至1L。如需其他PH的Tris,根据所要求的pH(25℃下)加一定量的浓盐酸。
4.高温高压灭菌后,室温保存半年。
注意:测PH时需使用温度补偿电极,因为温度变化对Tris的PH有很大影响。
浓盐酸的体积(ml) 14 21 38 46 56 66 76
pH
10%SDS
组份浓度: 10%(W/V)SDS
配制量: 500mL
配置方法
1.称量50g高纯度的SDS置于500mL蓝盖瓶中,加入约400mL的去离子水,68℃加热溶解。
2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至。
3.将溶液定容至500mL后,室温保存。
注意: SDS为固体粉末状,吸入会对肺造成损害,应在通风橱中称取SDS。溶解时,SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌。
30%APS (过硫酸铵)
组份浓度: 30%(W/V)APS
配制量: 1mL
配制方法:
1.准确称取 APS。
2.加入的去离子水溶解。
3.贮存于4℃。
注意:30%的过硫酸胺溶液在4℃保存时间可使用2周左右,超过期限会失去催化作用。
10×SDS-PAGE Running Buffer
配制量: 1L
配制方法:
1.称量下列试剂,置于1L蓝盖瓶中。 Tris 20g; Glycine 144 g; 10% SDS 100 ml 2.加入约700 ml的去离子水搅拌溶解。
3.定容至1L,混匀,室温保存。
50X TAE Buffer ()
组分浓度:2M Tris-base,100mM EDTA, 1M冰乙酸
配制量: 1L
配制方法:
1、称取下列试剂,置于1L蓝盖瓶中: Tris-base ; EDTA 200ml
2.加入约600ml的去离子水,充分搅拌溶解,再加入的冰乙酸,混合均匀。
3、加去离子水将溶液定容至1L。
4、高温高压灭菌后,室温保存半年。
6X DNA Loading Buffer(Agarose)
组分浓度:%(W/V)溴酚蓝%(W/V)xylene cyanol FF, 60% glycerol, 60mM EDTA 配制量: 50ml
配制方法:
1.称取下列试剂,置于50ml离心管中:溴酚兰