基因工程5章基因与载体的连接课件

基因工程部分复习题

第一章绪论 1、什么是基因工程？其理论依据如何？ 基因工程是指按照人们的意愿，依据严密的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，有目的地改造生物物种特性，创造出更符合人们需求的新的生物类型的过程。 2、简述基因工程的基本技术路线？ 3、简述基因工程的基本过程。 基因工程的整个过程由上游技术和下游技术两大部分组成。 上游技术指的是外源基因重组、克隆和表达的设计与构建。 下游技术则涉及到含有重组外源基因的生物细胞（基因工程菌或细胞）的大规模培养以及外源基因表达产物的分离纯化过程。 4、基因工程研究的主要内容？ （1）基因工程工具 （2）基因克隆技术 （3）目的基因 （4）基因工程产品 5、如何看待基因工程的安全性问题？ 主要有以下几个方面： 第一，对环境的影响---- 重新组合一种在自然见尚未发现的的生物性状有可能给现有的生态环境带来不良影响； 第二，新型病毒的出现----制造带有抗生素抗性基因或有产生病毒能力的基因的新型微生物有可能在人类或其它生物体内传播。 第三，癌症扩散----将肿瘤病毒或其它动物病毒的DNA引入细菌有可能扩大癌症的发生范围。 第四，人造生物扩散----新组成的重组DNA生物体的意外扩散可能会出现不同程度的潜在危险 第五，基因工程被用于军事目的，用来制造生物武器，有可能危及大批生命或遗留严重的后遗症。 第二章核酸的制备 1、名词解释： 脱氧核糖核酸， 核糖核酸，

DNA变性：在某些理化因素作用下，溶液中的DNA双链氢键解开成两条单链的过程。 DNA复性：高温变性的DNA逐渐冷却时，分开的两条单链又可重新结合成双链。 PCR：一个在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸、DNA聚合酶、Mg2+等存在的情况下，DNA聚合酶依赖的酶促聚合反应，扩增特异性取决于引物与模板DNA的特异结合。 2、目前常用的从细胞裂解液中分离和提取DNA的方法有哪些？并解释各种方法的依 据。 ①苯酚抽提法：苯酚是蛋白质变性剂，酸性条件下，蛋白质-酚形成复合物，氯仿同样可 以使蛋白变性沉淀，同时苯酚有抑制DNase对DNA的降解作用。 ②CsCl密度梯度离心：细胞裂解液通过CsCl密度梯度离心，待提取的DNA样品就会 按一定的沉降系数在CsCl一定密度的区域聚集成带。 3、在RNA制备时应如何消除RNA酶的污染？ ①容器用0.1％焦碳酸二乙酯（DEPC）处理。然后经过高温处理。 DEPC能使蛋白质乙基化而破坏RNase活性； ②加入强变性剂（如胍盐：可使所有蛋白质变性）使RNase失活； ③在RNA的反应体系内加入RNase的抑制剂。 4、用于检测核酸样品浓度和纯度的方法有哪些？ ①紫外吸收法②EB-琼脂糖凝胶电泳 5、Sanger双脱氧联末端终止法测序的基本原理？ 利用2’，3’-双脱氧核苷三磷酸（ddNTP)来终止DNA的复制反应。 第三章基因工程的酶学基础 1、限制性核酸内切酶定义、基本特性。 是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链的核苷酸内切酶。 特性：识别双链DNA分子中的特定序列 2、名词： 粘性末端：切口一般错开2个或4个核苷酸，产生的片段在末端有一条链伸出。 平末端：限制性内切酶将DNA-链仅在识别序列的中间切开。 同尾酶：来源不同，识别的靶序列也各不相同，但都能产生相同的粘性末端，特称为同尾酶。 3、末端核苷酸转移酶、碱性磷酸酶、反转录酶、DNA连接酶、DNA聚合酶Ｉ的Klenow 大片断酶的性质。 4、了解用同聚物加尾法、衔接物连接法、DNA接头连接法进行的DNA体外连接方式。