人绒毛膜促性腺激素(hCG)测定(免疫金标法)
人绒毛膜促性腺激素(hCG)测定(免疫金标法)
1 检查目的
人绒毛膜促性腺激素（HCG）为胎盘分泌的一种糖蛋白激素。健康未怀孕妇女的尿中不含有或含有少量的人绒毛膜促性腺激素。女性怀孕后，子宫内胎盘的滋养层细胞产生大量的人绒毛膜促性腺激素，通过血液循环排入尿中。利用孕妇尿中存在人绒毛膜促性腺激素进行检测，提供妊娠依据，以及帮助诊断某些疾病，如：葡萄胎、绒毛膜癌、睾丸畸胎瘤等。
2 检测原理
两个抗人β- hCG 单克隆抗体，一个抗体吸附于硝酸纤维素薄膜（NC膜）上，另一个抗体结合于金溶胶颗粒表面，尿液中hCG先与NC膜上的抗体结合，然后再与金标单抗溶液反应，于是形成抗体-hCG-金标抗体的夹心式复合物，呈现出红色的金斑点。
3 标本采集
3.1 标本要求用无污染的新鲜尿液。
3.2 将尿液置于干燥洁净度容器内送检，白带多的妇女可取中断尿液送检。
4 设备与试剂
4.1 本试验不需要特殊仪器。
4.2 一次性洁净的尿杯。
4.3 市售金标早早孕检测试剂盒：薄膜渗滤法或试带法。
5 操作步骤
5.1 嘱病人用一次性干燥洁净的尿杯留取新鲜尿液。
5.2 将测试纸条有箭头的一端插入尿液标本容器中，至少5秒钟后取出平放，5分钟内观察结果。
5.3 测试纸条插入尿液是不可超过MAX标志线。
6 结果判定
6.1 阳性：在检测线位置及对照线位置各出现一条红色反应线。
6.2 阴性：仅在对照线位置出现一条红色反应线。
6.3 无效：在检测线和对照线中均无红色反应线出现，或只在检测线位置出现红色反应线，而在对照线不出现，说明试验无效或测试纸条失效，请用新测试纸条重试。
7 质量控制措施
无。
8 干扰因素
7.1 试纸条应置于4- 30℃避光密封干燥储存，切勿冰冻，使用前恢复室温（20-30℃）。
7.2 如停经超过40天者，应将尿液作1：5倍稀释后再测定。
7.3 尿液标本应收集在干燥洁净的一次性尿杯中，尿液应新鲜。
9 结果计算及测量不确定度
人绒毛膜促性腺激素（HCG）检查无结果计算及测量不确定度。
10 生物参考区间
免疫金标试带法非怀孕妇女：阴性；
怀孕妇女：阳性；
11 实验室解释
11.1 本试验主要用于妊娠的诊断，用敏感的方法在受孕2-6天即呈阳性。
11.2 用于与妊娠相关疾病和肿瘤的诊断及鉴别诊断，如葡萄胎、宫外孕、绒毛膜癌等。
11.3 过期流产或不完全流产，子宫内仍有活胎盘组织时，此试验仍呈阳性。
11.4 宫外孕时，hCG 含量低于正常妊娠，仅有60%阳性。
12 异常结果处理
本试验结果异常需与临床诊断相符合，不符合的结果应复查。
13 报告时间与标本保存
hCG试验检测标本当日出报告。急诊标本30分钟发出报告，病房患者检验结果报告单在当日下午发回科室。检查过的标本不保存。
14 操作性能
14.1 本试验为一个定性试验，需较好的性能指标，应做血清β-人绒毛膜促性腺激素（β-hCG）含量测定。
20 参孝文献
1 叶应妩, 王毓三主编. 全国临床检验操作规程. 中华人民共和国卫生部医政司. 南京. 第二版. 1997.
2严忠浩、金筠春主编. 新编检验检查诊断手册. 上海科技教育出版社. 2003.11 .
胶体金免疫层析试纸条在临床诊断中的 研究进展
Hans Journal of Nanotechnology纳米技术, 2019, 9(2), 55-59 Published Online May 2019 in Hans. https://www.360docs.net/doc/b12492338.html,/journal/nat https://https://www.360docs.net/doc/b12492338.html,/10.12677/nat.2019.92006 Colloidal Gold Immunochromatography Strip Technique and Its Application in Clinical Diagnosis Ping Meng Laboratory of Nephrology, Huadu District People’s Hospital of Guangzhou, Huadu Hospital of Southern Medical University, Guangzhou Guangdong Received: Apr. 9th, 2019; accepted: Apr. 23rd, 2019; published: May 6th, 2019 Abstract Colloidal gold immunochromatography strip (CGIS) is a new immunoassay technique in clinic. It combines the visualization of colloidal gold technique and the specificity of immunochromatography. It has been extensively applied in clinic, laboratory and family with its excellent features at present. It has good prospects for development especially in infectious diseases and autoimmune diseases. This paper will introduce and summarize the development of CGIS technique in the disease diagno-sis. Research and development of CGIS will be in the direction of more sensitive specificity and mul-tiplexed detection in the future. Keywords Colloidal, Colloidal Gold Immunochromatography Strip, Disease Diagnosis 胶体金免疫层析试纸条在临床诊断中的 研究进展 孟萍 南方医科大学附属花都医院，广州市花都区人民医院肾病实验室，广东广州 收稿日期：2019年4月9日；录用日期：2019年4月23日；发布日期：2019年5月6日 摘要 胶体金免疫层析试纸条技术(colloidal gold immunochromatography strip, CGIS)作为近年来临床上兴
血HCG检测的临床意义
人绒毛膜促性腺激素（HCG）检测临床意义 血HCG不仅灵敏度髙，而且还因为是“量化”的数据，故而可以结合临床来准确的判断。 妊娠期间血HCG水平 HCG是由两个非共价键相连的肽链组成的糖蛋白激素。其单个亚基不具有生物活性，当连接成完整化合物时始具活性，分子量约为 4.7万。HCGα亚单位的氨基酸排列与黄体生成素（LH）α亚单位相似，故用完整的抗HCG分子的抗体测定HCG时与LH间有免疫交叉反应。但它们的β亚单位各不相同。因此为避免交叉反应，目前均采用抗β-HCG单克隆抗体进持特异的HCG检查，近年来还有报道采用抗β- HCG羧基末端肽单克隆抗体以进一步提高检测的敏感性和特异性。HCG的临床意义 HCG的检查对早期妊娠诊断有重要意义，对与妊娠相关疾病、滋养细胞肿瘤等疾病的诊断、鉴别和病程观察等有一定价值。 1．诊断早期妊娠： 孕后35-50天HCG可升至大于2500IU/L。60-70天可达8万IU/L，多胎妊娠者尿HCG常高于一胎妊娠。 在妊娠最初3个月，HCG水平每（2.2±0.5）天约升高一倍， 2．异常妊娠与胎盘功能的判断： ①异位妊娠：如宫外孕时，本试验只有60%的阳性率，在子宫出血3天后，HCG 仍可为阳性，。312-625IU/L常为HCG检查可作为与其它腹症的鉴别。HCG故．如果用HCG难以确认，还可用血孕酮来做辅助性诊断。宫外孕患者的血孕酮水平低，这是公认的。故可作为早期诊断方法之一。临界值为63nmol/L. 异位妊娠引起腹腔内出血时，腹腔血β-HCG均大于正常值，且明显高于静脉血β-HCG。 妇女受孕后，从第９－11天起即可测出血中β－HCG升高，以后每两天β－HCG 的量可升高２倍（就算有先兆流产，HCG的增加比率不会变）。比如今天是234，如果后天测出来是450左右就就可认为是正常宫内早孕。 异位妊娠时, 由于输卵管肌层菲薄、滋养细胞发育不良, 血供差, 合体滋养细胞合成hCG量显着减少, 每天升高幅度也减少 如果连续两次增加速度缓慢，表明宫外孕或者胚胎不正常发育迟缓。比如今天是10，后天是15，再2天才17，这样的HCG值肯定不正常，保胎的成功率极低。如果HCG值持续而明显的下降，就算B超测到胎心也最好做清宫手术，表明胎儿其实已经脑死亡。 CA - 125是一种来源于体腔上皮、生殖道粘膜和卵巢上皮细胞表面的衍生肿瘤相关抗原 ,胎儿绒毛膜羊水和母体脱膜中均有大量的CA -125 。? 有资料表明异位妊娠流产患者血清CA - 125水平显着高于异位妊娠成活组; 相
HCG的解读及各期胚胎B超下情况
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尿HCG
妊娠试验又名尿绒毛膜促性腺激素试验（urine hCG test）。人绒毛膜促性腺激素（hCG）是由胎盘绒毛膜滋养层细胞所合成，具有促进性腺发育的糖蛋白激素，分子量约在37000D左右，由237个氨基酸残基和糖组成，有两个非共价键结合糖蛋白亚单位，称之为α和β亚单位。α亚单位的氨基酸排列顺序和黄体生成素（LH）、促卵泡成熟激素（FSH）、促甲状腺激素（TSH）的α亚单位大体相同，故相互之间可发生交叉反应。而β亚单位则不同，结构特意，不存在于其他糖蛋白激素中。根据这一特点可制取β-hCG单克隆抗体，从而将上述激素之间的交叉反应降低到最低值，提高了试验的特异性及灵敏度，能更精确的反应hCG 在尿液中的浓度。 金标抗体测定与酶标抗体测定在原理上基本相似，只是金标抗体反应后直接呈现（金的）红色，适用于床旁或即时检验。 【原理】金标抗体检测法：两个抗人β-hCG单克隆抗体，一个抗体吸附于硝酸纤维素薄膜（NC）膜上，另一个抗体结合于金溶胶颗粒表面（即金标抗体）。尿液中hCG先与NC膜上的抗体结合，然后再与金标单抗溶液反应，最终形成“抗体-hCG-金标抗体”夹心式复合物，显红色金斑点。 【操作】 1.见试剂盒说明书。 2.结果判断 （1）阳性反应：质控点（线）和测定点（线）均呈红色。 （2）阴性反应：仅质控点（线）呈红色。 （3）无效反应：质控点（线）和测定点（线）均不显色。 【注意事项】 1.质控点（线）和测定点（线）均不呈红色，表示试剂失效。 2.金标早早孕检测试剂盒有薄膜渗滤法（呈现两个红色斑点）和试带法（呈现两条红杠）。因操作简便，可作家庭监测受孕应用。 3.本法灵敏度0.8～2.0ng/L。 4.在滴加金标抗体溶液前，应上下颠倒试剂瓶混匀溶液。 【临床意义】 1.早起妊娠诊断：受孕2～6天即呈现阳性。 2.妊娠与相关疾病和肿瘤：诊断及鉴别诊断。 3.过期流产或不完全流产：本试验呈阳性，提示子宫内仍有活胎盘组织。 4.人工流产后：本试验仍呈阳性，提示宫内尚有残存胚胎组织。 5.宫外孕：hCG低于正常妊娠，仅有60%阳性。
免疫层析实验
免疫层析实验 1．原理 金免疫层析试验（dot immunogold chromatographic assay，DICA）是用胶体金标记技术和蛋白质层析技术结合的以微孔滤膜为载体的快速的固相膜免疫分析技术。本项技是将各种反应试剂分点固定在试纸条上，检测标本加在试纸条的一端，通过毛细血管作用使样品溶液在层析材料上泳动，样本中的待测物与层析材料中的反应试剂发生特异性结合反应，形成的复合物被富集或固定在层析条上的特定区域（检测线），通过标记免疫技术显色。本项技术的特点是可进行单份标本检测且简便、快速、不需任何仪器设备，因此，发展非常迅速。 DICA也是GICA（goldimmunochromatography assay）GICA试剂为试纸条形式。在以塑料条上依次黏贴上以下几种组分，1--吸水纸，2--破璃纤维膜，抹上固定着干燥的金标抗体，3--硝酸纤维素膜，膜上包被着线条状抗体，4--吸水纸。 因为1，4都是吸水纸，由于吸水作用， 一，使样品液从1端向4端移动 二，当样品液达到2时，金标抗体被溶解，同时与标本中的抗原反应形成复合物 三，样品液继续移动至3 时，金标记的抗体复合物与膜上的抗体结合，呈现红色的线条 四，多余的金条抗体继续前移到4， 1 2 3 4 2.方法学类型 DICA多用于检测抗原，但亦可用于检测抗体。常见方法学类型有： 1)双抗体夹心法测抗原： 若图-2所示，G处为金标抗体(免疫金)，T处包被抗体，C处包被抗金标抗体，B处为吸水纸。测试时A端滴加待测标本，通过层析作用，待测标本向B端移动，流经G处时将金标抗体复溶，若待测标本中含待测抗原，即形成金标抗体-抗原复合物，移至T区时，形成金标抗体-抗原-抗体复合物，金标抗体被固定下来，在T区显示红色线条，呈阳性反应，多余的金标记抗体移至C区被抗金标抗体捕获，呈现红色质控线条。 图-2免疫层析试验双抗体夹心法测大分子抗原 2）竞争法测小分子抗原： 若图1-3所示,G处为金标抗体，T处包被标准抗原，C处包被抗免疫金抗体，测试时待测标本加于A端，若待测标本中含有待测抗原，流经G处时结合金标抗体，当混合物移至T 处时，因无足够游离的金标抗体与膜上标准抗原结合，T处无棕红色线条出现，实验结果为阳性，游离金标抗体或金标抗体复合物流经C处，与该处的抗金标抗体结合出现棕红色的质控带，若标本中不含待测抗原，金标抗体则与T处膜上的标准抗原结合，在T处出现棕
尿hcg多长时间能测出来【健康小知识】
尿hcg多长时间能测出来 文章导读 很多女性对怀孕这个事情是非常的关注，尤其是在备孕阶段的女性，更是时 刻注意自己是不是已经怀孕了，现在可以检测出女性是不是已经怀孕的方法有很多种，在 这些方法中，目前公认的最准确的方法就是hcg值检测，测hcg值有人分为血hcg和尿hcg两种方法。因为当女性怀孕之后体内的hcg值就会有变化，当然很多人都比较喜欢使 用尿hcg检测的方法，这个方法在家里就可以进行，该方法可以很有效的判断出女性是不 是已经怀孕，，现在就说说尿hcg多长时间能测出来这个问题。 1.情况一虽然许多种早孕试纸上都表明女性在错过正常经期 1天之后便可做怀孕自测，但实际上不是所有怀孕女性排放HCG激素的速度时间都是一样的。一般受孕6天后 才有合体滋养细胞分泌致尿中HCG激素升高。因此如果平素月经规律，要确定怀孕建议 在明显停经7天以上检测。 2.情况二尿hcg就是人体尿液 中的人绒毛膜促性腺激素，女人怀孕后，血液和尿液中的人绒毛膜促性腺激素会大量增加。检测尿hcg，如果结果是阳性，则应该怀孕了，结果呈阴性则没有怀孕。有些检验结果会 有数值参考。一般非孕妇女的尿hcg<25IU/L，孕40天>5000IU/L，孕60-70天 >(8- 32)×104IU/L。 3.情况三女性在家里做怀孕自我测试多会使用早孕试纸，早孕试纸主要检测的是尿中的HCG激素。早孕试纸的检测正确率还是会存 在不少误差的。在没有专业指导的情况下进行的，一般检测结果只能达到75%的精确率。如果在医生的指导下进行检测，能够确保早孕试纸正确的使用，检测准确率最会更高。 4.情况四如果您在家用试纸检测怀孕的话，建议最好使用晨尿，因为早起的尿液 一般有最高的HCG值，这个是早早孕试纸一天中进行测试的最佳时间，一般来说，用早 起第一次排出的尿液会测出最准确的结果。如果您还是不放心的话，也可以来医院进行检查。
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食品中呋喃唑酮的免疫层析试纸条快速检测方法研究 呋喃唑酮作为一种广谱抗生素被广泛地用于治疗大肠埃希菌和沙门氏菌属引起的胃肠道感染,并作为牛,猪和家禽的生长促进剂。然而,有研究表明该药物的代谢物对人体有潜在的致癌、致畸和致突变等副作用。欧盟,美国,中国等已经先后禁止此类药物的使用。但是由于这种药物抗菌谱广,价格低廉,仍经常被不法分子滥用。因此,建立一种灵敏度高的现场快速检测方法来监测这种现象具有很重要的现实意义。呋喃唑酮半衰期短,在动物体内排泄快速,而其代谢产物3-氨基-2-恶唑酮（AOZ）却可以与动物组织中蛋白质紧密结合而长期存在于机体内,因此通过检测AOZ来监测其原药的滥用。为检测不同食品体系中AOZ的残留,本研究以其衍生物CPAOZ为目标物,构建了三种免疫层析快速检测方法,实现了多种食品样品中AOZ的高灵敏检测。本论文的研究内容及结果如下:（1）抗CPAOZ单克隆抗体的制备及性能鉴定:采用对小鼠腹腔注射的方法制备抗CPAOZ单克隆抗体腹水,纯化可得抗CPAOZ单克隆抗体,结果表明抗体纯度高,效价为 1:128000,与抗原亲和力强,IC50为2 ng·mL-1,灵敏度高。（2）基于纳米金双标记信号放大的CPAOZ免疫层析快速检测试纸条的构建及性能鉴定:首先制备了传统的免疫层析快速检测试纸条,以纳米金为抗体标记材料,确定了金标抗体的最佳制备条件,试纸条对CPAOZ的肉眼检测灵敏度为5 ng·mL-1。利用抗体和二抗的识别作用,合成了金标抗体和金标二抗两种复合物,以金标抗体作为检测探针,金标二抗作为信
血HCG检测的临床意义
人绒毛膜促性腺激素（HCG）检测临床意 义 血HCG不仅灵敏度髙，而且还因为是“量化”的数据，故而可以结合临床来准确的判断。 妊娠期间血HCG水平 HCG是由两个非共价键相连的肽链组成的糖蛋白激素。其单个亚基不具有生物活性，当连接成完整化合物时始具活性，分子量约为 4.7万。HCGα亚单位的氨基酸排列与黄体生成素（LH）α亚单位相似，故用完整的抗HCG分子的抗体测定HCG时与LH间有免疫交叉反应。但它们的β亚单位各不相同。因此为避免交叉反应，目前均采用抗β-HCG单克隆抗体进持特异的HCG检查，近年来还有报道采用抗β- HCG羧基末端肽单克隆抗体以进一步提高检测的敏感性和特异性。HCG的临床意义 HCG的检查对早期妊娠诊断有重要意义，对与妊娠相关疾病、滋养细胞肿瘤等疾病的诊断、鉴别和病程观察等有一定价值。 1．诊断早期妊娠： 孕后35-50天HCG可升至大于2500IU/L。60-70天可达8万IU/L，多胎妊娠者尿HCG常高于一胎妊娠。 在妊娠最初3个月，HCG水平每（2.2±0.5）天约升高一倍， 2．异常妊娠与胎盘功能的判断： ①异位妊娠：如宫外孕时，本试验只有60%的阳性率，在子宫出血3天后，HCG 仍可为阳性，故HCG检查可作为与其它腹症的鉴别。HCG常为312-625IU/L。 如果用HCG难以确认，还可用血孕酮来做辅助性诊断。宫外孕患者的血孕酮水平低，这是公认的。故可作为早期诊断方法之一。临界值为63nmol/L. 异位妊娠引起腹腔内出血时，腹腔血β-HCG均大于正常值，且明显高于静脉血β-HCG。
妇女受孕后，从第９－11天起即可测出血中β－HCG升高，以后每两天β－HCG 的量可升高２倍（就算有先兆流产，HCG的增加比率不会变）。比如今天是234，如果后天测出来是450左右就就可认为是正常宫内早孕。 异位妊娠时, 由于输卵管肌层菲薄、滋养细胞发育不良, 血供差, 合体滋养细胞合成hCG量显著减少, 每天升高幅度也减少 如果连续两次增加速度缓慢，表明宫外孕或者胚胎不正常发育迟缓。比如今天是10，后天是15，再2天才17，这样的HCG值肯定不正常，保胎的成功率极低。如果HCG值持续而明显的下降，就算B超测到胎心也最好做清宫手术，表明胎儿其实已经脑死亡。 CA - 125是一种来源于体腔上皮、生殖道粘膜和卵巢上皮细胞表面的衍生肿瘤相关抗原 ,胎儿绒毛膜羊水和母体脱膜中均有大量的CA -125 。 有资料表明异位妊娠流产患者血清CA - 125水平显著高于异位妊娠成活组; 相反, βhCG水平显著低于异位妊娠成活组; 并且血清CA - 125水平有随着β- hCG水平的降低而增高的趋势, 认为CA - 125水平升高是对β- hCG降低的一种补偿, 并有助于鉴别异位妊娠流产和成活性异位妊娠;但血清CA - 125与β- hCG 之间无统计学相关性。 对于流产型异位妊娠患者可在血清CA125和连续β- hCG监测条件下采用期待疗法或药物治疗。 ②流产诊断与治疗：不完全流产如子宫内尚有胎盘组织残存，HCG检查仍可呈阳性；完全流产或死胎时HCG由阳性转阴性，因此可作为保胎或吸宫治疗的参考依据。 ③先兆流产：如尿中HCG 仍维持高水平多不会发生难免流产。如HCG在2500IU/L 以下，并逐渐下降，则有流产的或死胎的可能，当降至600IU/L 则难免流产。在保胎治疗中，如HCG仍继续下降说明保胎无效，如HCG不断上升，说明保胎成功 ④在产后4天或人工流产术后13天，血清HCG应低于 1000IU/L，产后9天或人工流产术后25天，血清HCG应恢复正常。如不符合这一情况，则应考虑有异常可能。
导致尿HCG假阳性的原因分析修订版
导致尿H C G假阳性的原 因分析 Document number：PBGCG-0857-BTDO-0089-PTT1998
导致尿HCG假阳性的原因分析 应以血HCG检查为准。尿妊娠试验有时候受其他的因素影响，比如其他的一些激素，比如LH激素有时就可与试纸反应，导致假阳性;还有甲状腺系列的激素也有可能对它有影响。有时候无法确定到底是什么干扰因素导致的假阳性。总之尿试纸条检测的干扰因素要比血B-HCG要多一些。 HCG是胎盘绒毛膜滋养层细胞产生的一种具有促性腺发育的蛋白类激素，由α和β两个肽链（或亚基）组成。其中α-肽链与LH、FSH和TSH的α链相似，β-肽链则是特异的。通常情况下，我们做HCG的检测都是应用在妊娠诊断方面和滋养细胞诊疗方面。在应用HCG检测试验时需注意区别两种情况：其一，应用HCG检查时，须注意交叉反应性物质的存在。多种胎盘绒毛膜激素其化学结构相似，都是糖蛋白复合物，均由α和β两个肽链亚基所组成。而且α肽链结构上也极相似，二者在化学、生物学、免疫学等方面具有相同特性，常用的HCG检测方法几乎不能将LH排除在外，但LH在正常尿中含量很少，在一般检测HCG的方法中不显阳性，故对妊娠诊断的影响不大。可是更年期妇女，妇女的排卵期以及双侧卵巢切除的病人等，其量增加，有时可达到240-480IU/L，对葡萄胎和绒毛膜癌随访病例在上述情况下则可能引起误诊。其二，某些其它病理改变也能使HCG含量增高。据报道，脑垂体疾病、甲亢、卵巢囊肿、子宫内膜增生、子宫癌等也可导致检测HCG的试验出现阳性反应。还有人报告在某些肿瘤病例中发现一种能产生HCG物质的细菌。对这些情况，只能用有关的临床和实验室方法去加以鉴定。另外如果抗体的纯度不够也会产生一些交叉反应，需结合临床鉴别。 抽血检查HCG是最准确的检查早孕的方法，试纸有一定的参考意义，但是也是误差的情况，所以最好是血检为准。 胶体金检测有时会有比较弱的假阳性结果，原因可能比较多，具体因素尚不明确，只是出这种报告应该会非常小心，结果出阴性但是加上一条建议：请做血HCG检查和B超，并仔细询问病人情况，再次复查。
免疫层析技术
层析法概念 层析法(chromatography)的原理是利用混合物中各组分的物理性质之差(如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等)而建立来的一种分离技术。 层析系统是由固定相(stationary phase) 和流动(Mobile Phase)相组成。固定相是固体物质或固定于固体物质上的成分。流动相是可以流动的物质，如水或各种溶剂。 层析过程：当待分离混合物随流动相通过固定相时，由于混合物各组分的理化性质的差异，与固定相相互作用弱的组分随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移的速度快；与固定相相互作用强的组分向前移动的速度慢。从而实现混合物中各组分的分离。 免疫层析法概念 免疫层析法(immunochromatography)是近几年来国外兴起的一种快速诊断技术，其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品（尿液或血清）后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。 免疫层析技术是建立在层析技术和抗原一抗体特异性免疫反应基础上的一项新兴免疫检测技术。 免疫层析技术以固定有检测线和控制线的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，通过毛细管作用使待测物在层析条上移动。 待测物在T线处发生特异性免疫反应。游离物在C线处发生免疫反应。 分类 检测方法标记物质 TRFIA技术镧系稀土元素螯合物 上转换发光技术上转磷光材料（UCP） 荧光乳胶层析技术荧光胶乳颗粒 荧光微球免疫层析技术荧光微球 荧光QDS层析技术量子点 IMB层析技术免疫磁珠 新型胶体金技术纳米磁性微粒、核酸适配体
幽门螺杆菌IgG抗体胶体金免疫层析快速诊断试纸条的研制
幽门螺杆菌IgG抗体胶体金免疫层析快速诊断试纸条的研制 【摘要】目的建立一种快速检测抗H.pylori IgG抗体的胶体金免疫层析试纸条，并优化制备中各关键步骤的实验条件。方法以柠檬酸三钠还原法制备20nm的胶体金溶液，葡萄球菌A蛋白（SPA），制备免疫胶体金复合物，组装胶体金免疫层析快速诊断试纸条。结果用柠檬酸还原法制备的20nm胶体金溶液呈亮红色。胶体金标记SPA的最低稳定浓度5μg/ml，最适稳定量为6μg/ ml。SPA标记的最适pH为6.0。以此试纸条检测临床血清标本与进口ELISA试剂盒比较，组间阳性率比较差异无显著性。结论胶体金免疫层析试纸条质量稳定性不但与抗原抗体的选择、用量优化、层析材料的选择、胶体金的制备与标记等因素密切相关，而且缓冲系统的优化、辅助添加剂的选择与优化组合也非常重要。 【关键词】幽门螺杆菌；胶体金；免疫层析检测 Research on development of gold immunochromatographic test kit for serum H.pylori antibody IgG 【Abstract】Objective Developing gold immunochromatographic test kit for serum H.pylori antibody IgG and optimize the key experiment conditions.Methods Preparing the colloid gold particles of 20 nm which were coupled with Streptococcus protein A (SPA)，set up the gold immunochromatography test kit for serum H.pylori antibody IgG.Results The spheroidal colloid gold particles of 20nm is shown in color of bright red.The minimal stable concentration (MSC) of gold- SPA is 5μg/ml，and the suitable stable concentration ( SSC) is 6μg/ml.The pH 6.0 is appropriate. 53 sera samples were tested by GICA and ELISA，there is on significant difference between two methods.Conclusion The quality of gold immunochromatography test kit is associated with the factors，such as the quality and quantity of antigen or antibody，colloid gold particles，buffers，etc. 【Key words】helicobacter pylori;colloid gold;gold immunochromatographic assay 在幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）感染的诊断中，细菌培养、组织病理学检查、尿素酶试验、呼气试验等方法或因为给患者造成的侵入性痛苦，或需要一定的条件和技术，或因为需要特殊仪器，或因为费用昂贵等，其临床推广及多次重复追踪复查受到限制。而血清学检测因其非侵入性、快速、准确，可同时处理大量标本，检测不同类型的抗体，在临床检验、基础研究中倍受青睐。20世纪80年代兴起的胶体金免疫层析检测（gold immunochromagraphy assay，GICA），操作简单快捷、结果清晰易于判断、无需复杂的实验技能和特殊设备，特别适于基层卫生单位使用。本研究预采用H.pylori超声全菌体抗原、葡萄球菌A蛋白（SPA）抗原，尝试研制一种根据双抗原夹心法检测原理检测血清、唾液中抗H.pylori的IgG抗体的胶体金免疫层析检测试剂，优化胶体金免疫层析快速诊断试纸条研制各关键步骤的实验条件，为进一步研制和开发奠定实验基础。 1 材料与方法
免疫层析各种方法法原理
双抗体夹心法原理 以HCG 为例（检测抗原） 此方法较常用，主要用于较大分子量的蛋白（抗原）的检测。要求两株抗体针对一个抗原的不同位点才可以。也有个别的检测项目（HIV）是双抗原夹心检测抗体的，原理类似。HCG 金标记αHCG 金-αHCG-HCG 金-αHCG-HCG -βHCG 金-αHCG -羊抗鼠IgG(Y3) 金-αHCG-HCG 羊抗鼠IgG （Y3） 显示红色显示红色 金标记αHCG 不显色显示红色 金-αHCG -羊抗鼠IgG 阴性反应 阳性反应 βHCG
以吗啡为例（检测抗原） 此方法主要用于小分子抗原（毒品、农药、肽链等）的检测。由于抗原分子量小不能直接固定于NC 膜上，常常用化学方法把小分子偶联到BSA 等大分子物质上再固定于NC 膜上。此结果与双抗原夹心法相反，阴性CT 两条都是红线，阳性只有C 线一条红线，T 线不显色。 金-吗啡抗体-吗啡吗啡-BSA 金标记吗啡抗体显示红色不显色金-吗啡抗体-吗啡羊抗鼠尿液(含 吗啡)显示红色 显示红色金标记吗啡抗体金-吗啡抗体-羊抗鼠 阴性尿液 抗体-吗阴性反应 阳性反应金标记吗啡抗体-吗啡-BSA
乙肝E 抗体为例 金标记e 抗体e 抗原e 抗体 金标记e 抗体-e 抗原-e 抗体金标记e 抗体-e 抗原-e 抗体-羊抗鼠 不显色显示红色 金标记e 抗体e 抗原金标记e 抗体-e 抗原 金标记e 抗体-e 抗原-e 抗体显示红色显示红色 金标记e 抗体-e 抗原 羊抗鼠 阳性反应 阴性反应
间接法原理检测抗体 此方法主要用于血清中抗体检测，纯化或者重组的抗原固定于NC 膜上，标记多为蛋白A(ProteinA 或叫SPA，与抗体Fc 端结合而与其它蛋白质不结合)或者鼠抗人（如检测为IgM，则标记为鼠抗人IgM）。此方法要求胶体金过量（待测样品往往含有大量多种抗体，所检测抗体所占份额很小），一般来说样品再加入前需要稀释或者加极少量后再加样品缓冲液。 一般斑点免疫渗滤法使用也是间接法。显示红色显示红色 金标记SPA 目的抗体杂抗体阳性反应抗原 杂抗体金标记SPA 抗原不显色显示红色 阴性反应
人绒毛膜促性腺激素(HCG)检测试纸(胶体金免疫层析法)产品技术要求jinwofu
人绒毛膜促性腺激素（HCG）检测试纸（胶体金免疫层析法） 适用范围：用于体外定性检测人尿液中人绒毛膜促性腺激素（HCG）的含量。1.1 产品型号/规格：笔型/卡型/条型。完整最小包装规格1人份。 1.2 主要组成成分：本品系由包被有抗HCG单克隆抗体及抗鼠IgG的固相硝酸纤维膜和 胶体金标记的抗HCG单克隆抗体包被的玻璃纤维膜、样本垫及吸水纸组成。2.1 物理性状 2.1.1 外观：检测HCG试纸应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固。 2.1.2 宽度：检测HCG试纸的宽度应≥2.5mm。 2.1.3 移行速度：液体移动速度应不低于10 mm/min。 2.2 最低检测限 用HCG国家标准品进行检测，应不高于25 mIU/ml。 2.3 特异性： 2.3.1 阴性特异性：分别用含500 mIU/ml人促黄体生成素（hLH）、1000 mIU/ml 人卵泡刺激素（hFSH）和1000 μIU/ml人促甲状腺素（hTSH）的0 mIU/ml人绒毛促性腺激素（HCG）液进行检测，结果应均为阴性。 2.3.2 阳性特异性：分别用含500 mIU/ml hLH、1000 mIU/ml hFSH 和1000 μIU/ml hTSH的25 mIU/ml HCG液中进行检测，结果应均为阳性。 2.4 重复性 取同一批号的HCG试纸10支，以浓度为25 mIU/ml的HCG液测定，反应结果一致，显色度均一。
2.5 批间差 取3个批号的HCG试纸，对重复性进行检测，3个批号HCG试纸的检测结果都应符合2.4项的要求。 2.6 稳定性 试剂盒4～30℃避光保存，有效期为24个月，对到效期后的试剂盒，分别检测2.1～2.4项，结果应符合各项的要求。
血HCG和尿HCG有什么不同
如何知道是否受孕，如今最常用的方式就是早孕试纸、验孕棒等方便的自我测试方法。这一类妊娠 测试的原理都是属于尿HCG的检查方式，除此之外还有血HCG检查，那么两种检查都有什么不同呢？ 一、什么是血HCG检查? 人绒毛膜促性腺激素(HCG)是妇产科医生们最常使用的“妊娠试验”激素，它由α和β二聚体的糖蛋白组成，在女性尿液和血液中都有。女性受孕后从受精日第9~11天起即可测出血中β-HCG升高，在妊娠的前8周激素增值很快，以维持妊娠，在大约孕8周以后人绒毛膜促性腺激素(HCG)逐渐下降，直到大约怀孕20周达到相对稳定。 血HCG检查只需要抽血检查就可以了(不用空腹)，检测结果不同医院换算单位不太一样，以下以nmol/L为单位为您提供检查结果的参考： hcg参考值：孕3~4周9~130mIU/ml，孕4~5周75~2600mIU/ml，孕5~6周850~208003mIU/ml，孕6~7周4000~100200mIU/ml，孕7~12周 11500~289000mIU/ml，孕12~16周18300~137000mIU/ml，孕16~29周1400~53000mIU/ml，孕 29~41周940~60000mIU/ml< 孕酮参考值：孕7周52.7~100.1 nmol/L，孕8周64.6~113.8 nmol/L，孕9~12周78~159.2 nmol/L，孕13~16周98.3~185.7 nmol/L，孕17~20周153.8~241.2 nmol/L，孕21~24周234.6~457.4nmol/L，孕 25~34周403.4~626.2 nmol/L，孕35周以后483.6~776.8 nmol/L 二、血HCG检查和尿HCG检查有什么不同? 1、从准确度来说： 尿HCG通过判断尿液中HCG值是否达到一定标准，以一种“定性”的方式判断是否怀孕;怀孕时间太短导致尿液中HCG值含量未达到标准，或者疾病因素导致HCG激素值飙升，都可能导致误判;相对而言，血HCG可准确检测出血液中HCG激素具体含量值，“定量”检查HCG值比“定性”检查更灵敏、更准确，准 确率在99%以上。 2、从检测意义来说： 尿HCG仅用于初步判断是否怀孕;血HCG除了用于早期妊娠的判断，对于多胎妊娠、宫外孕、胚胎不正常发育迟缓、葡萄胎、某些内分泌疾病或肿瘤等，将血液HCG值结合临床情况及其它检查结果，通过综 合分析往往可以得出正确判断。 3、从检测时间来说： 尿HCG必须在月经推迟7~10天后方可检测，太早检测即便受孕，由于尿液中HCG激素含量上升较慢，试纸无法敏感对低激素值做出反应，因而显示阴性 (没有怀孕);而女性受孕后从受精日第9~11天起即可测出血中β-HCG升高，在妊娠的前8周增值很快，换而言之，血HCG检查往往在停经一两天后即可检测，这样可以把确认怀孕的时间提前，更早的对怀孕做出相应的对策。 一般您到医院后，可在医生建议下选择尿HCG与B超、或者血HCG与B超，两者都可对妊娠做出判断，对于怀疑异常妊娠的女性，一般建议血HCG与其他辅助检查。
免疫层析技术的发展及在POCT中的应用
综一一述 免疫层析技术的发展及在P O C T中的应用 黄德智综述,蒲晓允?审校 (陆军军医大学新桥医院检验科,重庆４０００３７) 一一摘一要:免疫层析技术因其简单二方便二易操作二快速,价格相对低廉,已广泛应用于即时检测(P O C T).随着P O C T检测项目的增多和对已有项目检测定量二灵敏度二特异度等要求的提高,本文就免疫层析技术的最新发展及其应用,作以下综述. 关键词:免疫层析技术;一即时检测;一量子点 D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１６７３Ｇ４１３０．２０１９．０５．０２２中图法分类号:R４４６ 文章编号:１６７３Ｇ４１３０(２０１９)０５Ｇ０５９４Ｇ０４文献标识码:A D e v e l o p m e n t o f i m m u n o c h r o m a t o g r a p h y a n d i t s a p p l i c a t i o n i nP O C T HU A N GD e z h i,P UX i a o y u n? (D e p a r t m e n t o f C l i n i c a lL a b o r a t o r y,X i n q i a oH o s p i t a l,A r m y M e d i c a l U n i v e r s i t y,C h o n g q i n g４０００３７,C h i n a) A b s t r a c t:I m m u n o c h r o m a t o g r a p h y h a sb e e nw i d e l y u s e d i nP O C Tb e c a u s eo f i t s s i m p l i c i t y,c o n v e n i e n c e, e a s y o p e r a t i o n,r a p i d i t y a n d r e l a t i v e l y l o w p r i c e．W i t h t h e i n c r e a s eo fP O C Tt e s t i n g i t e m s a n d t h e i n c r e a s eo f t h e r e q u i r e m e n t s f o r q u a n t i f i c a t i o n,s e n s i t i v i t y,a n d s p e c i f i c i t y o f e x i s t i n g p r o j e c t s,t h i s p a p e r r e v i e w s t h e l a t e s t d e v e l o p m e n t s a n d a p p l i c a t i o n s o f i m m u n o c h r o m a t o g r a p h y． K e y w o r d s:i m m u n o c h r o m a t o g r a p h y;一P O C T;一q u a n t u md o t s １一免疫层析技术简介 一一免疫层析技术是在２０世纪６０年代在发达国家兴起并被用于检测血清蛋白的一种结合了免疫技术和色谱层析技术的快速检测分析方法,利用胶体金二胶体碳二磁性纳米材料二稀土纳米材料二量子点等着色标记物,在层析时,标记物与待测物的络合物被相应的配体捕获而浓集显色于硝酸纤维素膜上的检测线,以纤维膜上显色条带的有无二颜色深浅和反射光线来定性或定量,在即时检测(P O C T)中应用极为广泛.免疫层析试纸条由样品垫二结合垫二硝酸纤维素(N C)膜二检测线(T线)二质控线(C线)二吸水垫二聚氯乙烯(P V C)底板等部分组成,根据待检测物的大小和抗原抗体结合的方式,分为双抗体夹心法和竞争法[１Ｇ２].２一免疫层析技术发展及应用 一一免疫层析技术关键在于依靠标记抗体的免疫标记材料,而纳米材料由于优越的信号放大作用,能达到良好的灵敏度和特异度而备受青睐.下面主要从胶体碳二量子点二稀土纳米材料二上转换发光技术和超顺磁性纳米材料以及适配体等方面进行介绍.２．１一胶体碳一与胶体金相比,胶体碳的优点包括更高的颜色强度,即更高的灵敏度和标记效率,动力学检测范围更广,成本低廉,制作工艺简单,可大规模生产且更环保,但由于其标记和封闭时间长,并未体现出对胶体金的绝对优势,故其商业化程度较低[３Ｇ４].何卓等[３]利用碳纳米颗粒制作的胶体碳试纸条用于检测疟原虫,并可通过扫描检测带灰度值以定量.最近,Y U等[４]利用一种新的胶体碳材料氧化石墨烯作为标记物,成功制作出用于检测黄曲霉素B１的试纸条,肉眼最低检测限可达０．３n g/m L.材料学的进步能促进检测的进步,诸如碳量子点和石墨烯量子点等材料也是免疫层析研究中可以利用的标记材料.２．２一量子点一量子点被认为是免疫层析中最有前途的荧光半导体纳米材料,与一般荧光染料相比,量子点具有尺寸可调的荧光,发射光谱窄而对称,高量子产率,宽吸收光谱,荧光强度高,耐光漂白和稳定性好等优点[５Ｇ６].水溶性量子点表面富含羧基或氨基以用于连接蛋白质.表面是羧基的量子点被１Ｇ(３Ｇ二甲氨基丙基)Ｇ３Ｇ乙基碳二亚胺盐酸盐(E D C)和NＧ羟基琥珀酰亚胺(N H S)激活,并且这些激活的羧基和抗体的氨基相连接.这些特性使得量子点是一个可以达到高灵敏度和同时对多种检测物定量的免疫层析标记物[７].为了检测样本中不同的物质,有两种不同模式的检测方法.第一种模式是不同的T线去检测与之对应的分析物;第二种模式是一条T线去检测不同的分析物.例如,第一种模式,T A R A N O V A等[８]设计了一种 交通信号灯 式的竞争性免疫层析方法,他们 ４９５ 国际检验医学杂志２０１９年３月第４０卷第５期一I n t J L a bM e d,M a r c h２０１９,V o l．４０,N o．５ ?一通信作者,EＧm a i l:１５８０９３２０＠q q．c o m. 一一本文引用格式:黄德智,蒲晓允．免疫层析技术的发展及在P O C T中的应用[J]．国际检验医学杂志,２０１９,４０(５):５９４Ｇ５９７．
尿HCG检测的影响因素
尿HCG检测的影响因素 人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin, HCG）是由胎盘合体滋养细胞分泌的一种促进性腺发育的糖蛋白激素，由α和β两个肽链（或亚基）组成。妊娠1周后血液HCG为5-50 IU/L，尿HCG>25 IU/L，第8-10周左右达到高峰，持续1-2周后迅速减低，以后逐渐下降并以1/5-1/10左右峰值水平维持至分娩。尿HCG试纸检测法（胶体金法）由于方便、快捷、灵敏度高等优点被广泛应用于育龄妇女早期妊娠的筛查。但由于样本中可能存在的干扰物质，可能导致假性结果的出现。 一、某些交叉反应性物质的存在 多种胎盘绒毛膜激素的化学结构相似，都是糖蛋白复合物，均由α和β两个肽链亚基所组成，而且α肽链结构也极其相似，二者在化学、生物学、免疫学等方面具有相同特性。HCGα亚基与卵泡刺激素（FSH）、黄体生成激素（LH）、促甲状腺激素（TSH）有相似的化学结构，所有与HCGα亚基反应的抗体均能与FSH、LH、TSH的α亚基发生交叉反应。常用的HCG检测方法几乎不能将LH排除在外，但LH在正常尿中含量很少，在一般检测HCG的方法中不显阳性，故对妊娠诊断的影响不大。可是更年期妇女、妇女的排卵期以及双侧卵巢切除的病人等，因尿液LH含量增加，有时可达到 240-480IU/L，对葡萄胎和绒毛膜癌随访病例在上述情况下则可能引起误诊。 二、某些病理改变也能使HCG含量增高 据报道，脑垂体疾病、甲亢、卵巢囊肿、子宫内膜增生、子宫癌等也可导致检测HCG的试验出现阳性反应。还有人报告在某些肿瘤病例中发现一种能产生HCG物质的细菌。对这些情况，只能用有关的临床和实验室方法去加以鉴定。另外如果抗体的纯度不够也会产生一些交叉反应，需结合临床鉴别。 三、检测前标本的质量影响检测结果 1、宜采集首次晨尿检测，随机尿可能因尿液被稀释可呈假阴性； 2、怀孕初期尿液中HCG浓度很低，检测结果可能为阴性，可在48-72h后重新采集晨尿复检；