手把手教你破解exe视频

我写得不好，看不明白的可以交流下，这里主要讲如何制作内存补丁。这次破解用的目标文件去下载吧

随便找了一个视频文件。

先看下效果：

下面是方法：

OD载入，很简单，esp定律进入， 8.0，9.0版本的都是一样的壳，9.7版本的不是这个壳了，后边的版本我没看，中断几次后就到了入口。这个壳没有难度就不一一讲述了。004A9BD3 > $ E8 00000000 call 004A9BD8

004A9BD8 $ 60 pushad

004A9BD9 . E8 4F000000 call 004A9C2D

esp定律，硬件断点进入壳，

004A9BDE . 3C 27 cmp al, 27

004A9BE0 . 0BFC or edi, esp

004A9BE2 . 67:6A 57 push 57

004A9BE5 . 0FAF82 96B1A7>imul eax, dword ptr [edx+4AA7B196]

查找字符串

00480BF4 mov eax, 00481040 播放授权不合法！

00480C03 mov eax, 0048105C 播放授权不正确！

00480C82 mov edx, 00481078 yaomediakj1jf

00480D4B mov eax, 00481090 播放密码不正确

00480D70 push 004810A8 c:\china-drm\

00480DAF push 004810C0 .ini

00480E43 mov eax, 00481090 播放密码不正确

00480E7C mov edx, 004810D0 yaomediakj2jf

00480F6C mov eax, 00481090 播放密码不正确

00480F98 mov edx, 004810E8 ok

00481160 mov edx, 0048141C yaomediakj3jf

00481288 mov edx, 00481434 3

00481294 push 00481440 c:\china-drm\

004812BD push 00481458 mediakjjf

0048131A mov edx, 0048147C 0

0048148B mov eax, 004814B4 确信要退出吗？

004814CE mov edx, 004814E8 ok

进入 00480C82 mov edx, 00481078 yaomediakj1jf 下断点进入 00481160 mov edx, 0048141C yaomediakj3jf 下断点之所以不在yaomediakj2jf下断点那是因为yaomediakj1jf和yaomediakj2jf很近而且这里连续有几个比较，直接跟

随便输入8位密码，确定。

00480C82 BA 78104800 mov edx, 00481078 ; yaomediakj1jf

00480C87 E8 CC3DF8FF call 00404A58

00480C8C 8B85 C4FDFFFF mov eax, dword ptr [ebp-23C]

00480C92 8D95 C8FDFFFF lea edx, dword ptr [ebp-238]

00480C98 E8 7B2E0000 call 00483B18

00480C9D 8B85 C8FDFFFF mov eax, dword ptr [ebp-238]

00480CA3 8D95 CCFDFFFF lea edx, dword ptr [ebp-234]

00480CA9 E8 7A7AF8FF call 00408728

00480CAE 8B85 CCFDFFFF mov eax, dword ptr [ebp-234]

00480CB4 8D95 E8FDFFFF lea edx, dword ptr [ebp-218]

00480CBA E8 496AFEFF call 00467708

00480CBF 8D85 E8FDFFFF lea eax, dword ptr [ebp-218]

00480CC5 8D95 D0FDFFFF lea edx, dword ptr [ebp-230]

00480CCB E8 AC6AFEFF call 0046777C

00480CD0 8B85 D0FDFFFF mov eax, dword ptr [ebp-230]

00480CD6 8D8D D4FDFFFF lea ecx, dword ptr [ebp-22C]

00480CDC BA 02000000 mov edx, 2

00480CE1 E8 42E9FAFF call 0042F628

00480CE6 8B85 D4FDFFFF mov eax, dword ptr [ebp-22C]

00480CEC 8D95 E8FDFFFF lea edx, dword ptr [ebp-218]

00480CF2 E8 116AFEFF call 00467708

00480CF7 8D85 E8FDFFFF lea eax, dword ptr [ebp-218]

00480CFD 8D55 F0 lea edx, dword ptr [ebp-10]

00480D05 8D8D C0FDFFFF lea ecx, dword ptr [ebp-240]

00480D0B BA 02000000 mov edx, 2

00480D10 A1 D8AD4800 mov eax, dword ptr [48ADD8]

00480D15 E8 0EE9FAFF call 0042F628

00480D1A 8B85 C0FDFFFF mov eax, dword ptr [ebp-240]

00480D20 8D95 E8FDFFFF lea edx, dword ptr [ebp-218]

00480D26 E8 DD69FEFF call 00467708

00480D2B 8D85 E8FDFFFF lea eax, dword ptr [ebp-218]

00480D31 8D55 EC lea edx, dword ptr [ebp-14]

00480D34 E8 436AFEFF call 0046777C

00480D39 8B45 F0 mov eax, dword ptr [ebp-10] ;这里放入的是正确的前两位

00480D3C 8B55 EC mov edx, dword ptr [ebp-14] ; 注意这里，把你的密码的前两位放入eax进行比较

00480D3F E8 583EF8FF call 00404B9C

00480D44 0F95C0 setne al

00480D47 84C0 test al, al

00480D49 74 0F je short 00480D5A

内存补丁只能够修改指令，有两种做法，一是直接修改00480D49 把je改成jne 我采用第二种做法，让eax和edx相等

直接把00480D3C改为 mov edx,eax 或者是eax, dword ptr [ebp-10]

往下一共有4个地方需要改

第二处

00480E27 E8 4021F8FF call 00402F6C

00480E2C E8 F31AF8FF call 00402924

00480E31 8B45 F0 mov eax, dword ptr [ebp-10] ; 真的00480E34 8B55 EC mov edx, dword ptr [ebp-14] ; 假的00480E37 E8 603DF8FF call 00404B9C

第三处

00480E48 E8 77B8FAFF call 0042C6C4

00480E4D E9 69010000 jmp 00480FBB

00480E52 8B45 F0 mov eax, dword ptr [ebp-10] ; 真的00480E55 8B55 EC mov edx, dword ptr [ebp-14] ; 假的00480E58 E8 3F3DF8FF call 00404B9C

第四处

00480F46 8D95 E8FDFFFF lea edx, dword ptr [ebp-218]

00480F4C E8 B767FEFF call 00467708

00480F51 8D85 E8FDFFFF lea eax, dword ptr [ebp-218]

00480F57 8D55 EC lea edx, dword ptr [ebp-14]

00480F5A E8 1D68FEFF call 0046777C

00480F5F 8B45 F0 mov eax, dword ptr [ebp-10] ; 真的00480F62 8B55 EC mov edx, dword ptr [ebp-14] ; 假的

00480F6A 74 0C je short 00480F78

00480F6C B8 90104800 mov eax, 00481090 ; 播放密码不正确

第五处

由于这里是先得到假的所以不能用mov eax,edx了直接把mov的地址指向正确的地址了，改为mov eax, dword ptr [ebp-10]

00480F8E E8 59050000 call 004814EC

00480F93 A1 047F4800 mov eax, dword ptr [487F04]

00480F98 BA E8104800 mov edx, 004810E8 ; ok 00480F9D E8 4238F8FF call 004047E4

00480FA2 8B55 EC mov edx, dword ptr [ebp-14] ; 假的，这里得注意一下，这里是先入的eax

00480FA5 8B45 F0 mov eax, dword ptr [ebp-10] ; 真的00480FA8 E8 B777F8FF call 00408764

第六处

F9运行，到达yaomediakj3jf 往下，这次不能直接修改比较的地址了，貌似用两位有特殊用处，如果该比较的地址，能进入播放界面但是不能播放视频。经过跟踪，发现在比较的前边，有一个截取输入的密码最后两位的动作，不知道是做什么用的。把004811DE指向正确的地址就行，由于004811B6到004811DE ebp都没变化，计算都省略了，直接改为mov eax, dword ptr [ebp-30]

004811AC BA 02000000 mov edx, 2

004811B1 E8 E2E4FAFF call 0042F698

004811B6 8B45 D0 mov eax, dword ptr [ebp-30] ; 正确的最后两位的播放密码

004811B9 8D55 D4 lea edx, dword ptr [ebp-2C]

004811BC E8 4765FEFF call 00467708

004811C1 8D45 D4 lea eax, dword ptr [ebp-2C]

004811C4 8D55 FC lea edx, dword ptr [ebp-4]

004811C7 E8 B065FEFF call 0046777C

004811CC 8D4D B8 lea ecx, dword ptr [ebp-48]

004811CF BA 02000000 mov edx, 2

004811D4 A1 D8AD4800 mov eax, dword ptr [48ADD8]

004811D9 E8 BAE4FAFF call 0042F698

004811DE 8B45 B8 mov eax, dword ptr [ebp-48] ; 把错误的播放密码放进去了

004811E1 8D55 D4 lea edx, dword ptr [ebp-2C]

004811E4 E8 1F65FEFF call 00467708

004811E9 8D45 D4 lea eax, dword ptr [ebp-2C]

004811EC 8D55 F8 lea edx, dword ptr [ebp-8]

004811EF E8 8865FEFF call 0046777C

004811F4 8B45 FC mov eax, dword ptr [ebp-4]

004811F7 8B55 F8 mov edx, dword ptr [ebp-8]

004811FA E8 9D39F8FF call 00404B9C

F9 开始播放

至此一共修改了

第一处

00480D3C 8B55 EC mov edx, dword ptr [ebp-14]

00480D3C 8B55 F0 mov eax, dword ptr [ebp-10]

第二处

00480E34 8B55 EC mov edx, dword ptr [ebp-14]

00480E34 8B55 F0 mov edx, dword ptr [ebp-10]

第三处

00480E55 8B55 EC mov edx, dword ptr [ebp-14]

00480E55 8B55 F0 mov edx, dword ptr [ebp-10]

第四处

00480F62 8B55 EC mov edx, dword ptr [ebp-14]

00480F62 8B55 F0 mov edx, dword ptr [ebp-10]

第五处

00480FA2 8B55 EC mov edx, dword ptr [ebp-14]

00480FA2 8B55 F0 mov edx, dword ptr [ebp-10]

第六处

004811DE 8B45 B8 mov eax, dword ptr [ebp-48]

004811DE 8B45 D0 mov eax, dword ptr [ebp-30]

Keymake很简单

在菜单中选择内存补丁，然后依次填入，再点击生成就可以了，8.0，9.0的壳有校验，如果用文件补丁的话会出错

最后顺便把防止翻录破了

在查找字符串中找到

双击进去

00482F1C E8 03FBFFFF call 00482A24

00482F21 85C0 test eax, eax

00482F23 0F84 9D010000 je 004830C6

00482F29 8D55 F0 lea edx, dword ptr [ebp-10]

00482F2C 8B85 CCFEFFFF mov eax, dword ptr [ebp-134]

00482F32 E8 BD030000 call 004832F4

00482F37 8D45 F4 lea eax, dword ptr [ebp-C]

00482F3F E8 E418F8FF call 00404828

把00482F23改为jne就可以了

和上边一样填入Keymake

完成

8.0版本和9.0版本的破解方法一样只是输入密码的时候需要输入以9d打头的共18位字符。使用内存补丁有一个好处就是所有用这一个版本的加密的文件你都可以过，不用每个还去算号，去跟。不足之处是你必须把文件名改为你制作补丁选择的文件名

由于时间比较少，我只试了8.0版本和9.0版本，这样可以过，其他版本没试，如果核心算法没变，应该也是可以的。反正飙风8.0-9.0变化的仅仅是输入密码的长度而已，对于这个破解方法，我们完全无视。

手把手教你结构设计(入门到熟练)

手把手教你结构设计（入门到熟练） 1.结构设计的过程（了解）本文是送给刚接触结构设计及希望从事结构设计的新手的，其目的是使新手们对结构设计的过程以及结构设计所包括的内容有一个大致的了解，请前辈们不要见笑了，新人们有什么问题也可以在贴中提出来，大家共同讨论，共同进步。 1，看懂建筑图结构设计，就是对建筑物的结构构造进行设计，首先当然要有建筑施工图，还要能真正看懂建筑施工图，了解建筑师的设计意图以及建筑各部分的功能及做法，建筑物是一个复杂物体，所涉及的面也很广，所以在看建筑图的同时，作为一个结构师，需要和建筑，水电，暖通空调，勘察等各专业进行咨询了解各专业的各项指标。在看懂建筑图后，作为一个结构师，这个时候心里应该对整个结构的选型及基本框架有了一个大致的思路了. 2，建模(以框架结构为例)（关键）当结构师对整个建筑有了一定的了解后，可以考虑建模了，建模就是利用软件，把心中对建筑物的构思在电脑上再现出来，然后再利用软件的计算功能进行适当的调整，使之符合现行规范以及满足各方面的需要.现在进行结构设计的软件很多，常用的有PKPM，广厦，TBSA等，大致都差不多。这里不对软件的具体操作做过多的描述，有兴趣的可以看看，每个软件的操作说明书（好厚好厚的，买起来会破产）。每个软件都差不多，首先要建轴网，这个简单，反正建筑已经把轴网定好了，输进去就行了，然后就是定柱截面及布置柱子。柱截面的大小的确定需要一定的经验，作为新手，刚开始无法确定也没什么，随便定一个，慢慢再调整也行。柱子布置也需要结构师对整个建筑的受力合理性有一定的结构理念，柱子布置的合理性对整个建筑的安全与否以及造价的高低起决定性作用...不过建筑师在建筑图中基本已经布好了柱网，作为结构师只需要对布好的柱网进行研究其是否合理.适当的时候需要建议建筑更改柱网.当布好了柱网以后就是梁截面以及主次梁的布置.梁截面相对容易确定一点，主梁按1/8~1/12跨度考虑，次梁可以相对取大一点主次梁的高度要有一定的差别，这个规范上都有要求。而主次梁的布置就是一门学问，这也是一个涉及安全及造价的一个大的方面.总的原则的要求传力明确,次梁传到主梁，主梁传到柱.力求使各部分受力均匀。还有，根据建筑物各部分功能的不同，考虑梁布置及梁高的确定（比如住宅，在房中间做一道梁，本来层就只有3米，一道梁去掉几十公分，那业主不骂人才怪...）。梁布完后，基本上板也就被划分出来了，当然悬挑板什么的现在还没有，需要以后再加上...,梁板柱布置完后就要输入基本的参数啦，比如混凝土强度啊，每一标准层的层高啊，板厚啊，保护层啊，这个每个软件设置的都不同，但输入原则是严格按规范执行.当整个三维线框构架完成，就需要加入荷载及设置各种参数了，比如板厚啊，板的受力方式啊，悬挑板的位置及荷载啊什么的，这时候模形也可以讲基本完成了，生成三维线框看看效果吧，可以很形象的表现出原来在结构师脑中那个虚构的框架. 2.计算计算过程就是软件对结构师所建模型进行导荷及配筋的过程，在计算的时候我们需要根据实际情况调整软件的各种参数，以符合实际情况及安全保证,如果先前所建模型不满足要求，就可以通过计算出的各种图形看出，结构师可以通过对计算出的受力图，内力图，弯矩图等等对电算结果进行分析，找出模型中的不足并加以调整，反复至电算结果满足要求为止，这时模型也就完全的确定了.然后再根据电算结果生成施工图，导出到CAD中修改就行了，通常电算的只是上部结构，也就是梁板柱的施工图，基础通常需要手算，手工画图,现在通常采用平面法出图了，也大大简化了图纸有利于施工. 3.绘图当然，软件导出的图纸是不能够指导施工的,需要结构师根据现行制图标准进行修改，这就看每个人的绘图功底了，施工图是工程师的语言，要想让别人了解自己的设计，就需要更为详细的说明，出图前结构师要确定，别人根据施工图能够完整的将整个建筑物再现于实际中，这是个复杂的过程，需要仔细再仔细，认真再认真。结构师在绘图时还需要针对电算的配筋及截面大小进一步的确定，适当加强薄弱环节，使施工图更符合实际情况，毕竟模型不能完完全全与实际相符.最后还需要根据现行各种规范对施工图的每一个细节进行核对，宗旨就是完全符合规范，结构设计本就是一个规范化的事情.我们的设计依据就是那几十本规范，如果施工图中有不符合规范要求的地方，那发生事故，设计者要负完全责任的......总的来讲，结构施工图包括设计总说明，基础平面布置及基础大样图，如果是桩基础就还有桩位图，柱网布置及柱平面法大样图，每层的梁平法配筋图，每层板配筋图，层面梁板的配筋图，楼梯大样图等，其中根据建筑复杂程度，有几个到几十个结点大样图. 4.校对审核出图当然，一个人做如此复杂的事情往往还是会出错，也对安全不利，所以结构师在完成施工图后，需要一个校对人对整个施工图进行仔细的校对工作，校对通常比较仔细资格也比较老，水平也比较高，设计中的问题多是校对发现的，校对出了问题后返回设计者修改。修改完毕交总工审

引物设计基本方法

Primer 5.0搜索引物： 1.Primer Length我常设置在18－30bp,短了特异性不好，长了没有必要。当然有特殊要求的除外，如加个酶切位点什么的。 2.PCR Product size最好是100－500bp之间，小于100bp的PCR产物琼脂糖凝胶电泳出来，条带很模糊，不好看。至于上限倒也不必要求苛刻。 3.Search parameters还是选Manual吧，Search stringency应选High，GC含量一般是40－60％。其它参数默认就可以了。 4.搜索出来的引物，按Rating排序，逐个送Oligo软件里评估。当然，搜索出的引物，其扩增产物很短，你可以不选择它，或是引物3端≥2个A或T,或引物内部连续的G或C太多,或引物3端≥2个G或C，这样的引物应作为次选，没得选了就选它。对于这样的引物，如果其它各项指标还可以，我喜欢在引物末端去掉一个不满意的或加上一个碱基，看看引物的评估参数有没有变好点。 Oligo 6.0评估引物： 1.在analyze里,Duplex Formation不管是上游引物、下游引物还是上下游引物之间，The most stable 3’-Dimer绝对值应小于4.5kcal/mol, The most stable Dimer overall绝对值一般应小于多少kcal/mol跟PCR退火温度有关，我几次实验感觉在PCR退火温度在65°的时候，The most stable Dimer ove rall 6.7kcal/mol没有问题。 2.Hairpin Formation根据黄金法则 3.False priming sites: Primer的priming efficiency应该是错配地方的4倍左右，更多当然更好。 4.在PCR栏，个人感觉其所显示的optimal annealing temperature数值值得参考。在PCR摸索条件的时候，退火温度为其数值加减2的范围就可以了。 5.Internal stability很重要：我们希望引物的内部稳定性是中间高、两边低的弧形，最起码保证3端不要过于稳定。下图1引物3端过于稳定，很容易导致不适当扩增。△G参照黄金法则，这其实很好理解：把一滴水放到大海里，这滴水就会不停的扩散分布，扩散的越厉害越稳定，所以△G绝对值越大结构越稳定。最后说一句，敢于尝试就会成功。第二贴－－科室工作很多，小医生了，没有办法，所以肯怕不能满足很多战友的要求（qq聊或帮助设计），在此表示抱歉。就楼上的问题我试着回答一下，不一定正确，供参考吧。－－1、两个评价系统不一样，个人感觉oligo评价引物好点，primer出来的引物，我一般按效率排序，再结合退火温度和引物长度，选择引物到oligo测试。这是初步的选择，其实引物到了oligo里，退火温度也不一样。－－2、3端的二聚体应该避免，这个要看你的退火温度决定，一个50°的退火温度肯定和65°对二聚体的影响不一样了，一般来讲尽量控制在－4.5kcal/mol以下（个人观点，很多东西真得还是需要自己摸索）。－－3、个人感觉3端有A无A影响不大，3端有T的没有经验。有T是不是一定不行，个人感觉不见得。软件是评估，法则也不是没有例外，不是1＋1＝2那么确定。－－4、错配和二聚体谁轻谁重，个人觉得“到致命的程度”谁都重要，我也说不好。我设计的时候，尽量两个都不得罪。－－5、GC含量并非不重要，它直接影响引物各端稳定性，3端来两个G或C,稳定性就上去了，粘在模板上很牢。所以我设计的时候，尽量避免这样的情况出现。谈一下我学这个引物设计的过程吧：

引物设计的11条黄金法则

PCR引物设计的11条黄金法则 1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2.引物长度一般在15~30碱基之间。引物长度（primerlength）常用的是18-27bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于TaqDNA聚合酶进行反应。 3.引物GC含量在40%~60%之间，Tm值最好接近72℃。 GC含量（composition）过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。另外，上下游引物的Tm值（meltingtemperature）是寡核苷酸的解链温度，即在一定盐浓度条件下，50%寡核苷酸双链解链的温度。有效启动温度，一般高于Tm值

5~10℃。若按公式Tm=4（G+C）+2（A+T）估计引物的Tm值，则有效引物的Tm为55~80℃，其Tm值最好接近72℃以使复性条件最佳。 4.引物3′端要避开密码子的第3位。如扩增编码区域，引物3′端不要终止于密码子的第3位，因密码子的第3位易发生简并，会影响扩增的特异性与效率。 5.引物3′端不能选择A，最好选择T。引物3′端错配时，不同碱基引发效率存在着很大的差异，当末位的碱基为A时，即使在错配的情况下，也能有引发链的合成，而当末位链为T 时，错配的引发效率大大降低，G、C错配的引发效率介于A、T之间，所以3′端最好选择T。 6.碱基要随机分布。引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错误引发（Falsepriming）。降低引物与模板相似性的一种方法是，引物中四种碱基的分布最好是随机的，不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。尤其3′端

教你如何破解各种网络验证

教你如何破解各种网络验证文件夹内有几个文件，分别是main.dat,start.exe OD加载start.exe，退出，弹出软件窗口，OD下断CreateProcess，发现其打开的是main.dat，用UE查看main.dat，原来是个可执行文件被改名了，于是改名为main.exe。 PE查壳ASPack 2.12 -> Alexey Solodovnikov 直接cooldumper搞定开始分析点击登录，出现MessageboxW，未注册用户，窃喜，bp MessageBoxW. 果断断住，看堆栈调用情况 0013F550 0065A066 /CALL 到MessageBoxW 0013F554 007802CC |hOwner = 007802CC ('三国哈哈1.17',class='TLoginForm',parent=018803B2) 0013F558 00C6F33C |Text = "?,B4,"",D7,"",A2,"",B2,"嵊?,BB,"? 0013F55C 00C76544 |Title = ""D7,"",A2,"意" 0013F560 00000000 \Style = MB_OK|MB_APPLMODAL 0013F564 0013F93C 指向下一个SEH 记录的指针 0013F568 00546D1F SE处理程序 0013F56C 0013F5F8 0013F570 0013F798 0013F574 0044E700 dumped_.0044E700 0013F578 00BC67C0 ASCII "pkD" 0013F57C 00000000 0013F580 00000000 0013F584 00000000 0013F588 00000000 0013F58C 00000000 0013F590 00000000 0013F594 00000000 0013F598 00000000 0013F59C 00000000 0013F5A0 00C6F33C ASCII "*g鑜孮(u7b" 0013F5A4 00C76544 0013F5A8 00000000 0013F5AC 00000000 0013F5B0 00C8AA7C UNICODE "d00b-207dcdd2" 0013F5B4 00C8AA1C UNICODE "D00B-207DCDD2" 0013F5B8 00C8AA4C UNICODE "d00b-207dcdd2" 0013F5BC 00C8EC14 UNICODE "D:\sg117\script\" 0013F5C0 00000000

【定量数据分析】荧光定量PCR_完整版

08 年第一期螺旋课堂--“荧光定量 PCR 技术”
螺旋网(https://www.360docs.net/doc/b514994132.html,/)
是一个以分子生物学实验及对实验结果进行处理为核心，以生物技术前沿发展为导向的一个专业型科学技术讨论社区。本着“共分享，同成长”的理念，给广大生物科研工作者一个交流经验、分享资料的平台。
螺旋网版块设置主要分为三个部分：
实验技术交流（实验互助）实验结果处理（生物信息学）实验之余的生活螺旋网的特色： 1、毕赤酵母表达系统； 2、发酵工艺 3、螺旋课堂； 4、Seminar； 5、生物学科研究进展； 6、实验交流及生物信息学。
欢迎广大生物专业的同学和爱好生物学的朋友加盟，共同学习，共同进步！
螺旋网：https://www.360docs.net/doc/b514994132.html,
祝大家新年快乐，万事如意!

08 年第一期螺旋课堂--“荧光定量 PCR 技术”
2008 年螺旋课堂的课程计划！
2007 年已悄然逝去，2008 年已向我们扑面而来。08 年是共和国发展的关键一年，也是螺旋网抓住机遇，加快发展的关键一年。今年螺旋网将为各位螺友提供大量的关于生命科学的讨论主题，让各位螺友对生命科学的灵感相互碰撞，达到共鸣。还有螺旋网将联合一批一线生命科学人员为您的研究保驾护航。同时还将为大家提供各种资源包括各类电子书、生命科学研究进展、生物软件等。为此，螺旋课堂 08 年的课程将围绕着最新的研究方法、研究进展进行课程设置。具体安排如下：第一期：荧光定量 PCR 技术第二期：原位杂交技术第三期：引物的设计原理及方法第四期：BAC 库的构建技术第五期：手把手教你进行序列分析
..................... 除以上技术外，欢迎大家点播！
以上讲座的具体时间详见论坛通知!
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手把手教你学FPGA 设计思想篇

泽屹电子手把手教你学FPGA 设计思想篇阿东团队编著

手把手教你学FPGA 设计思想篇

目录写在前面...................................................................................................................................... - 4 - 1 什么是设计思想.................................................................................................................... - 6 - 2 概述........................................................................................................................................ - 6 - 3 代码简单化............................................................................................................................ - 6 - 4 注释层次化............................................................................................................................ - 7 - 5 交互界面清晰化.................................................................................................................... - 7 - 6 模块划分最优化.................................................................................................................... - 7 - 7 代码工具化............................................................................................................................ - 8 - 8 方案精细化............................................................................................................................ - 8 - 9 资源合理化............................................................................................................................ - 9 - 10 时序流水化.......................................................................................................................... - 9 - 11 资源优化方法.................................................................................................................... - 10 - 12 代码自检............................................................................................................................ - 10 - 13 通用电路BB化.................................................................................................................. - 10 -

用一个软件教你如何破解的多种方法

只用一个软件，说明破解的层次！前言网上流传的卡巴斯基30天循环使用补丁，是怎么制作出来的如何把共享软件的注册码变成形同虚设遇到软件要注册，不用到处跪求注册码，如何自己寻找到真正的注册码如何制作一个属于自己的注册机我将对一个软件《拓维美容美发行业管理系统》进行多层次破解，借助最基本的方法来说明这些原理。软件下载地址：一、修改注册表文件，清除软件使用次数限制。打开软件，首先跳出来一个注册的框，其中用户名可以随便填写。左下角红色的字显示还可以试用的次数。点击试用以后，可以进入软件。但是试用总共有100次。我们要做的是消除次数限制，无限试用。

原理分析：一般来说，试用次数被记录在注册表中，不管使用了多少次，我们如果能找到这个注册表文件，把已经使用的次数改为0，又可以重头计算，那样不就是无限循环使用了吗工具：Regshot，一款体积小巧的注册表比较软件能在操作前后对注册表进行两次快照，自动比较。步骤： 1、安装好软件以后，先不要启动软件。打开regshot，选择第一快照。这记录的是试用次数还有100次的注册表状态。

2、扫描完成后，不要关闭regshot，这时打开软件，点击试用，进入软件，然后可以退出了。 3、启动regshot，选择第二快照。扫描结束后，自动比较两个扫描结果，并弹出如图的报告。

报告显示有3处发生改变，找到显示改变注册表的路径。其中的[HKEY_LOCAL_MACHINE\SOFTWARE\tw\twzc]引起了我们的注意。因为这个路径tw是软件名称拓维的缩写，而且键的名称是day，肯定和时间有关。

4、点击开始—运行—输入regedit，回车，进入注册表编辑器。按照路径找到这个键，选中它，依次点击文件—导出。可以将这个注册表文件任意命名保存。

手把手教你设计最佳的移动支付流程新

左边是是由Moby设计的响应式移动支付流程，他减少了不必要的信息只保留了必要的信息。成功的把整个支付流程聚合到了一个页面。右边是kayjeweler把一个简单的体验变得非常繁琐。总共有三页，展示了很多不必要的信息，例如“晚上电话”和“手机号码”两个没有用的信息，把地址栏分成了三栏（而不是只有一个邮政编码栏），还需要用户重复输入email地址。 2、允许以访客身份结账提供访客身份支付在媒介中应该是一个标准的做法（尽管24%的电子商务网站不会这样做），尤其在移动端。统计数据显示，如果用户必须去建立一个账户并确认，他们可能不会完成订单，这有时候还是非常令人震惊的。据报道，一个商家删除了“注册”按钮后，看到了销售额3亿美元的飞跃。

伯顿开始对结帐过程对冲赌注，为用户提供三个选项：“登录”，“创建帐户”或“访客结帐。” 3、利用移动用户界面元素 Fandango有一个流畅的手机支付体验。其中很大一个原因在于它善于利用媒介的优势，更多使用触控设备，用户使用起来比打字更容易。

Fandango的桌面端UI和移动端UI Fandango的桌面版UI（左边），提供给用户使用一个典型的下拉菜单选择数量。在移动UI（右边），则提供他们使用的的增量选择器（也有输入选项），更快速的选择数量。 4、消除干扰，而不是内容一旦用户到达了支付的页面，他们显然已经有意愿购买这个产品了。这个时候，该网站已切换从一个销售人员转变成一个订单执行中心。由此，支付的页面应当去掉影响用户注意力的多余信息。当你在亚马逊购物时会注意到封闭的支付策略，页面去除了标准的页头，包括可能推动用户去其他地方的菜单链接和搜索栏，支付页面在移动端可以做的更加简单。用户一旦来到 dillard支付页面，, 他们唯一的逃生舱就是左上角的logo。

QPCR原理及应用

QPCR原理及应用由于Real-time qPCR的众多优点，现在已经是生命科学领域的一项常规技术。越来越多的研究文章中涉及RT-PCR的实验，也基本上被real-time qPCR 所代替。由于real-time aPCR 输出的数据不同于常规的PCR 电泳检测，很多没有做过real-time qPCR的研究者常常感到高深莫测，不知从何入手；甚至一些做过次实验的研究者也会对数据处理分析感到迷惑，不知所措。本文就从real-time qPCR的发展史说起，包括real-time qPCR的原理，实验设计，实际操作，数据分析，常见问题解答五个方面，手把手教你从各个方面了解real-time qPCR，彻底的从菜鸟到高手！一、Real-time qPCR发展史 Real-time qPCR就是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct 值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。由于常规的PCR的缺点，real-time qPCR 由于其操作简便，灵敏度高，重复性好等优点发展非常迅速。现在已经涉及到生命科学研究的各个领域，比如基因的差异表达分析，SNP检测，等位基因的检测，药物开发，临床诊断，转基因研究等。在Real-time qPCR技术的发展过程中，定量PCR仪的发展起了至关重要的作用。1995年，美国PE公司（已经并入Invitrogen公司）成功研制了Taqman 技术，1996年推出了首台荧光定量PCR检测系统，通过检测每个循环的荧光强度，通过Ct值进行数据分析。从而荧光定量PCR获得广泛应用。现在的定量PCR 仪有ABI7000、7300、7500，7700、7900HT、StepOnePlusTM、StepOneTM、PRISM@StepOneTM系列；BIO-RAD的CFX96、iCycler iQ5@、MyiQ@、MJ Research Chromo4TM Opticon 系列；Stratagene MxTM系列；Roche LightCycler@系列；Eppendorf Masercycler@；Corbett Rotor-GeneTM；Cepheid SmartCycler@和BIOER的LineGene系列。随国内生命科学的快速发展，科研水平不断提高，发高水平文章已不再是新鲜事。与其同时，国内公司经过长期不懈的努力，也有自主研发的real-time PCR

手把手教你天线设计——用MATLAB仿真天线方向图

手把手教你天线设计—— 用MATLAB仿真天线方向图吴正琳天线是一种变换器，它把传输线上传播的导行波，变换成在无界媒介（通常是自由空间）中传播的电磁波，或者进行相反的变换。在无线电设备中用来发射或接收电磁波的部件。无线电通信、广播、电视、雷达、导航、电子对抗、遥感、射电天文等工程系统，凡是利用电磁波来传递信息的，都依靠天线来进行工作。此外，在用电磁波传送能量方面，非信号的能量辐射也需要天线。一般天线都具有可逆性，即同一副天线既可用作发射天线，也可用作接收天线。同一天线作为发射或接收的基本特性参数是相同的。这就是天线的互易定理。天线的基本单元就是单元天线。 1、单元天线对称振子是一种经典的、迄今为止使用最广泛的天线，单个半波对称振子可简单地单独立地使用或用作为抛物面天线的馈源，也可采用多个半波对称振子组成天线阵。两臂长度相等的振子叫做对称振子。每臂长度为四分之一波长、全长为二分之一波长的振子，称半波对称振子。对称振子是一种经典的、迄今为止使用最广泛的天线，单个半波对称振子可简单地单独立地使用或用作为抛物面天线的馈源，也可采用多个半波对称振子组成天线阵。两臂长度相等的振子叫做对称振子。每臂长度为四分之一波长、全长为二分之一波长的振子，称半波对称振子。

1.1用MATLAB画半波振子天线方向图主要是说明一下以下几点： 1、在Matlab中的极坐标画图的方法： polar(theta,rho,LineSpec)； theta：极坐标坐标系0-2*pi rho：满足极坐标的方程 LineSpec：画出线的颜色 2、在方向图的过程中如果rho不用abs(f)，在polar中只能画出正值。也就是说这时的方向图只剩下一半。 3、半波振子天线方向图归一化方程： Matlab程序： clear all lam=1000;%波长 k=2*pi./lam;

知识：手把手教你计算光电参数,设计高光效产品

知识：手把手教你计算光电参数，设计高光效产品作为一个光学设计师，在工作中经常遇到关于光电参数计算的问题，以前100lm/W灯管就是好产品，但随着LED的发展，要求也水涨船高，现在很多工程案例为了节能，光效从120涨到150、甚至180lm/W，让人非常头疼。下面结合实例，谈一谈怎么设计一款光电满足要求的灯具。标称值一般指产品稳定后的测试数据。你首先必须知道灯具测试的标准，大部分灯具可以直接通过积分球完成光电测试，依据IESLM79提供的方法，需要待灯具稳定后来测试，至于一些参数虚标的产品可以无视。

图1.IES LM79中对灯具稳定的要求为什么一定是稳定后的数据，大部分LED产品从瞬态到稳态都有一个衰减，而这些衰减很大，不能够忽视。通过测试这些衰减大小，可以等到一个相对的热衰减系数，可以参看红字部分。表2市场上8-9W球泡灯的测试参数 LED灯珠选型与测试设计的时候，首先是LED选型，LED规格书好多页，让你眼花缭乱。主要有额定功率、光通量、电压、色温、显色指数、色容差等等。如果继续深究下去，支架有ppa、pct、emc 几种，芯片尺寸有好多种，荧光粉、硅胶、金线、支架金属都有很大的猫腻，这些对光源寿命都有着很大影响。对LED而言，最重要的就是额定电流下光通量，比如现在最常用2835颗粒，额定60mA 的光通量24-26lm。那是不是我将100pcs该LED焊在灯条上，60mA测试时光通量就是240-260lm？

答案是否定的，以下是一些误差的来源，最后测试报告一定是以自己仪器测试为准，所以就需要弄清楚这些系数。表3 一些误差汇总然而这些系数有时候推算比较麻烦，也少不了很多一对一测试。所以我的思路是，直接将厂商的标准LED灯珠焊在灯板上，用大积分球测试，直流供电，测试多个电流下的数据。如果你设计一款常规的产品，对光效没有要求，额定电流下测试就可以了。但如果你需要更高光效的产品，那些方法就不适用了，要么选择更亮的灯珠，要么就是降低电流使用，更多的时候两者需要结合来使用。表4 一款颗粒的测试数据 LED灯珠数量计算做好以上一些工作后了，你还缺少两个重要的参数，一个是灯具电源转换效率，另外一个就是灯具的光学效率，可以通过如下公式计算，有时候面对全新的灯具无从入手，可以根据经验进行一些估算。

引物设计OLIGO图解

在专门的引物设计软件中，“Oligo”是最著名的。它的使用并不十分复杂，但初学者容易被其复杂的图表吓倒。Oligo 5.0的初始界面是两个图：Tm图和ΔG图；Oligo 6.0的界面更复杂，出现三个图，加了个Frq图。“Oligo”的功能比“Premier”还要单一，就是引物设计。但它的引物分析功能如此强大以至于能风靡全世界。oligo的下载和安装我就不多说了，打开oligo相信也无需多讲。打开oligo的页面如下：单击file菜单再点open或点击“打开”快捷图标或者用快捷键“CTrl＋O”可打开下面的窗口：在打开的OPEN窗口内选择FreqSeq再点“打开”：选择drosfr或者其它一个文件点击“打开”：

出现以下窗口，点击“window”再点击“Tile”：出现以下窗口，图中显示的三个指标分别为Tm、ΔG和Frq，其中Frq是6.0版本的新功能，为邻近6至7个碱基组成的亚单位在一个指定数据库文件中的出现频率。该频率高则可增加错误引发的可能性。因为分析要涉及多个指标，起动窗口的cascade排列方式不太方便，可从 windows菜单改为tile方式。如果觉得太拥挤，可去掉一个指标，如Frq，这样界面的结构同于Oligo 5.0，只是显示更清楚了： ?G值反映了序列与模板的结合强度，最好引物的?G值在5'端和中间值比较高，而在3'端相对低（如图）。Tm值曲线以选取72℃附近为佳，5'到3'的下降形状也有利于引物引发聚合反应。Frq曲线为“Oligo 6”新引进的一个指标，揭示了序列片段存在的重复机率大小。选取引物时，宜选用3'端Frq值相对较低的片段：再点击Search再点“Fo'r Primers and probes”或使用快捷键F3：

教你如何破解exe软件

教你如何破解软件要破解的软件：网络填表终结者破解需要的软件（点击下载）：侦壳 language.exe 脱壳AspackDie.exe 反编译 W32Dasm黄金中文版 16进制编辑器 UltraEdit.rar 在破解之前先复习一下基础知识：一.破解的等级初级,修改程序,用ultraedit修改exe文件,称暴力破解,简称爆破中级,追出软件的注册码高级,写出注册机二.用w32dasm破解的一般步骤: 1.看软件的说明书,软件注册与不注册在功能上有什么区别,如何注册 2.运行此软件,试着输入你的姓名和任意注册码去注册,有什麽错误提示信息,将错误提示信息记下来 3.侦测有无加壳(第一课).若加壳,脱壳(第二课) 4.pw32dasmgold反汇编 5.串式参考中找到错误提示信息或可能是正确的提示信息双击鼠标左键 6.pw32dasmgold主窗口中分析相应汇编,找出关键跳转和关键call 7.绿色光条停在关键跳转,在pw32dasmgold主窗口底部找到关键跳转的偏移地址(实际修改地址) 8.用ultraedit找到偏移地址(实际修改地址)修改机器码,保存壳的概念：版权信息需要保护起来,不想让别人随便改动,exe可执行文件压缩，最常见的加壳软件ASPACK ,UPX,PEcompact 脱壳：拿到一个软件，侦测它的壳,然后我们要把它的壳脱去,还原它的本来面目.若它没有加壳,就省事不用脱壳了.脱壳软件unaspack,caspr,upx,unpecompact,procdump 实际修改地址(偏移地址)和行地址(虚拟地址)pw32dasmgold反汇编出来的代码由三列组成第一列行地址(虚拟地址) 第二列机器码(最终修改时用ultraedit修改) 第三列汇编指令

手把手教你设计限制性股票和股票期权方案

手把手教你设计限制性股票和股票期权方案2018-08-08 11:38 限制性股票和股票期权是国内上市公司应用最广泛的两种股权激励方式，也是有明确政策规范的两种股权激励方式，本文将讲述如何设计限制性股票和股票期权方案。一、基本原则由于非上市公司并无股票，因此上市公司和非上市公司在方案的设计和应用层面会有如下不同之处：二、政策要求上市公司在设计限制性股票和股票期权计划的时候，会有明确的政策规范，最主要的规范如下表：

上表中，虽然对限制性股票和股票期权的授予价和行权价有明确规定，但并不绝对，只要给出证监会充分合理解释也能获批。例如，2017年苏泊尔限制性股票激励案例，股票来源是通过二级市场回购，公告草案前一日收盘价是37.07元/股，但是公司授予价格是1元/股，远远低于规定的价格，公司在公告中披露，该定价目的为考虑激励对象整体薪酬水平的竞争力。非上市公司在方案设计中，可以不受上述政策约束，根据公司实际情况自行设计。

三、方案设计股权激励方案设计需遵守四步法原则，方能保证方案的切实有效，四步分别是激励分析、激励基础、激励保障和激励实施。 1）激励分析对公司的人员情况、业务发展和资本现状进行分析。而对于限制性股票和股票期权两种方案，大致可以总结出以下几种情况： ?人员较稳定，能力较确定的，可采取限制性股票的方式；人员还有待观察的，但又确实十分重要的，可采取股票期权的方式； ?初创公司一般倾向于股票期权；上市公司一般倾向于限制性股票； ?未来企业估值明显提升的、或者上市公司股价肯定上涨的，采用股票期权的较多；股价平缓甚至略微不稳定导致可能下降的，采用限制性股票的较多。当然，限制性股票和股票期权各有特色，企业到底采取哪种方式还有很多影响因素，需要全盘考虑才能更加周详。 2）激励基础激励基础是一些基本的股权激励规则，包括选人机制、分配机制、发放机制、定价机制和收益机制。

教你怎么破解有注册码的软件

教你怎么破解有注册码的软件学习破解的三个阶段初级,修改程序,用ultraedit等工具修改exe文件,称暴力破解,简称爆破中级,追出软件的注册码高级,写出注册机先说这爆破。所谓爆破，就是指通过修改可执行文件的源文件，来达到相应的目的。你不明白呵呵，举个例子好了，比如说某共享软件，它要求用户输入的注册码，如果用户输入的，跟它通过用户名（或其它）算出来的注册码相等的话（也就是说用户输入的注册码正确了），那么它就会跳到注册成功的地方去，否则就跳到出错的地方去。明白过来了吧，我们只要找到这个跳转指令，把它修改为我们需要的"造型"，这样，我们是不是就可以为所欲为了（某软件双手放在胸口，你要干嘛）常见的修改方法有两种，我给你举例说明：在某软件中，这样来进行注册： 00451239 CALL 00405E02 (关键CALL，用来判断用户输入的注册码是否正确) 0045123D JZ 004572E6 (!!!<――此为关键跳转，如果用户输入的注册码正确，就跳向成功处，即004572E6处) 0045XXXX YYYYYYYYYY

XXXXXXXX YYYYYYYYYY XXXXXXXX 执行到此处，就提示用户注册失败 ...提示用户注册码不正确等相关信息 ... 004572E6 ... <――(注册成功处!!!) ...提示用户注册成功等相关信息呵呵，看明白了吗没有的话，我来给你讲一下。在软件执行到00451239处的时候，CALL置0045E02处来进行注册码判断。接着回来后就来一个跳转语句，即如果用户输入的注册码正确就跳到004572E6处，跳到此处，就算是注册成功了。如果用户输入的注册码不正确的话，那么就不会在0045123D处进行跳转，而一直执行下去。在下面等它的，是注册失败部分。想明白了吗嘿嘿...没错，我们只要把那个关键跳转JZ给改为JNZ(如果用户输入的注册码错误，就注册成功，输入正确则注册失败)。当然你也可以将JNZ修改为Jmp，这样的话，你输入的注册码无论正确与否。都可以注册成功。我们再来讲一下另外的一种情况： 00451239 CALL 00405E02 (关键CALL，用来判断用户输入的注册码是否正确) 0045123D JNZ 004572E6 (!!!<――此为关键跳转，如果用户输入的注册码不正确，就跳向失败处，即004572E6处)

手把手教您设计一堂微课

手把手教您设计一堂微课转载2016-09-19 ~嘿，老师们，微课制作今天教您微课成为当下流行的授课方式，它时间短、制作简单，容量小、易搜索、易传播的特点，以及适合学习者自主学习、探究学习的优点备受老师和学生的青睐。的作用，启示，解惑”同时，它也打破了传统课堂讲课的方式，在五分钟内达到“让优质的教育资源得到充分的利用与整合，我们的学生学习也更加轻松快乐高效。短短五很多老师在制作微课的过程中呢，会遇到各种各样的困难和疑惑，但是，分钟的微课有时怎么都做不精彩，吸引不了学生的注意。将所有微接续本周翻转课堂专题，小编特意给老师们推出四步搞定微课，今天，! 课的小技巧全都罗列出来，大家一目了然，简单又快捷 ! 轻轻松松搞定四步制作微课青花瓷我很忙周杰伦- 1选题有重点微课的选题是微课制作最关键的一环，良好的选题可以事半功倍的进行讲解、录制，不好的选题同样可以使得微课变得平凡乃至平庸。 1、选择教学中的重点难点一节微课一般讲授一个知识点，对于这个知识点的选择，关乎知识结构的设计，对于教学中的重点难点用来制作微课，是一个较好的选择，较为符合微课制作的初衷：教学资源分享，为学生（教师）解惑，启发教学。 2、要适合用多媒体表达微课作为一种媒体，内容的设计要适合使用多媒体特性，对于不适合使用多媒体因为也许使用黑板教学或进行活动实践制作的结果也许是徒劳的，表达的内容，的教学效果更佳。同时也会使教学过程平庸无奇，令观看者失去学习欲望。因而微课选题要适合使用多媒体表达，适合加入丰富的图形图像、多姿的动画、声色兼有的视频。 2总有一款微课适合您 1、讲授类适用于教师运用口头语言向学生传授知识。这是最常见、最主要的一种微课类型。 2、问答类适用于教师按一定的教学要求向学生提出问题，要求学生回答，并通过问答的形

手把手教你PCR引物设计来自小木虫

PCR引物设计的黄金法则 1. 引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2.引物长度一般在15~30碱基之间。引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。 3.引物GC含量在40%~60%之间，Tm值最好接近72℃。 GC含量（composition）过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。另外，上下游引物的Tm值（melting temperature）是寡核苷酸的解链温度，即在一定盐浓度条件下，50%寡核苷酸双链解链的温度。有效启动温度，一般高于Tm值5~10℃。若按公式Tm= 4（G+C）+2（A+T）估计引物的Tm值，则有效引物的Tm为55~80℃，其Tm值最好接近72℃以使复性条件最佳。 4.引物3′端要避开密码子的第3位。如扩增编码区域，引物3′端不要终止于密码子的第3位，因密码子的第3位易发生简并，会影响扩增的特异性与效率。

5.引物3′端不能选择A，最好选择T。引物3′端错配时，不同碱基引发效率存在着很大的差异，当末位的碱基为A时，即使在错配的情况下，也能有引发链的合成，而当末位链为T时，错配的引发效率大大降低，G、C错配的引发效率介于A、T之间，所以3′端最好选择T。 6. 碱基要随机分布。引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错误引发（False priming）。降低引物与模板相似性的一种方法是，引物中四种碱基的分布最好是随机的，不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。尤其3′端不应超过3个连续的G或C，因这样会使引物在GC富集序列区错误引发。 7. 引物自身及引物之间不应存在互补序列。引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹结构（Hairpin）使引物本身复性。这种二级结构会因空间位阻而影响引物与模板的复性结合。引物自身不能有连续4个碱基的互补。两引物之间也不应具有互补性，尤其应避免3′ 端的互补重叠以防止引物二聚体（Dimer与Cross dimer）的形成。引物之间不能有连续4个碱基的互补。引物二聚体及发夹结构如果不可避免的话，应尽量使其△G值不要过

手把手教你设计引物

手把手教你设计引物（图文并茂）关键词：引物设计2014-05-14 10:33来源：丁香园点击次数：9911 不知不觉几年下来自己也快毕业了，感谢丁香园这些年来的帮助。没有什么可回报的东西，就发个帖教教新人如何设计引物吧，尽量做到手把手的教，图文并茂。引物设计的帖子不少，以前很多战友会推荐Oligo、PrimerPremier、DNA man等等软件。这些软件设计完最后还是要去BLAST比对下，所以我教大家一种易懂实用的在线设计方法，觉得好的话请投个票。就以人的PTEN基因为例，首先你要找到他的基因序列，如果你要用的是cDNA，就找它的mRNA序列。如果你要做的是DNA，就找DNA的序列。以cDNA为例，普遍的一种方法是上PUBMED中GENE栏搜索找到cDNA那栏，但PUBMED 导出序列不太方便，我介绍个网站 https://www.360docs.net/doc/b514994132.html,/index.html 1. 输入目的基因，进入 2.在左侧栏选择TRANSCRIPT，选择后进入

3. 选择PTEN-001中的TRANSCRIPT进入，点击左侧cDNA 4. 然后点击CONFIGURE THIS PAGE进入设置你要显示的内容

5. 除了第一栏SHOWEXONS选择YES外，其他的都选择NO，然后取个名字保存SAVE CONFIGURATION AS 6. 然后在左侧栏点击DOWNLOADVIEW AS RTF可下载你要的cDNA序列，这个文件可以用WORD打开，不同的颜色代表一个外显子间断

下载后打开的WORD

7. 然后根据可以根据你感兴趣的序列设计引物了，比如我在分别在第6和第7外显子分别设计上下游引物。选取并复制第6和第7外显子序列