微生物参考答案

一、2014年春季微生物学检验复习大纲

名词解释：

1.生长曲线:将一定数量的活菌接种于适宜的培养基中，置于适宜环境培养，以培养时间为横坐标，活菌数的对数为纵坐标，可得出一条反映细菌生长繁殖规律的曲线，称生长曲线。

2.接合：供体菌通过性菌毛将质粒或部分染色体基因转移至受体菌的过程称为接合。

3.肠道杆菌：指由许多中等大小，有菌毛，无芽孢的杆菌属组成的革兰阴性杆菌，广泛分布于自然界，多数为人肠道的正常菌群，部分致病性较强。

4.非发酵菌：非发酵菌是一群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧，无芽孢的革兰阴性杆菌。

5.敏感：指对感染部位使用推荐剂量时，该菌株通常被抑制。

6.耐药：指菌株不能被常规剂量抗菌药物达到的浓度所抑制，和/或抑菌圈直径落在某些特定细菌可能的耐药机制范围内，或在研究治疗中表现为抗菌药物对菌株的临床疗效不可靠。

7.中介：指抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）接近血液和组织中通常可达到的浓度，疗效低于敏感株。

8.ESBLs ：超广谱β-内酰胺酶，是由普通质粒编码的β-内酰胺酶突变而来，或与天然的β-内酰胺酶有较远的关系，能水解青霉素、广谱头孢菌素和单环类抗生素，主要由大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、奇异变形杆菌等肠杆菌科细菌产生。

9.MRSA：指耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，具有耐受甲氧西林的能力。

10.PBP（PBP S)：青霉素结合蛋白,是存在于某些细菌表面的一组蛋白质，是细菌的常见的结构之一，能够和青霉素特异性结合，使青霉素具有完全的抗原性,是β-内酰胺类抗生素的主要作用靶位。

11.有菌免疫：人的免疫力随结核分支杆菌或其成分在体内存在而存在,被称为有菌免疫或感染免疫，一旦体内结核分支杆菌或其成分全部消失，免疫力也随之消失。

12.阮粒：是蛋白质侵染颗粒的缩写，是一种个体微小，不含核酸，主要成分是一种蛋白酶抗性蛋白，是引起传染性海绵状脑病的病原体。

13.真菌：是一类真核细胞型微生物，具有典型的细胞核，胞浆内有完整的细胞器，不含叶绿素，没有根茎叶的分化，以寄生或腐生方式生存，能进行有性繁殖和（或）无性繁殖。

14.假菌丝：酵母菌进行出芽生殖时，子母细胞不立即分离而以狭小的面积相连，则称这种藕节状的细胞串为假菌丝

15.二相性真菌：一些真菌可因寄生环境及培养条件（营养、温度、氧气等）的不同而交替形成两种形态，这类真菌有双向性，所以称之为双态真菌或二相性真菌。

16.核衣壳：病毒蛋白质衣壳和衣壳中心包含的病毒核酸的合称。

17.病毒包膜：指包膜病毒在成熟过程中，核衣壳以出芽的方式向宿主细胞释放时穿过宿主细胞膜或核膜时获得的细胞膜或核膜成分，含脂类和少量糖类，也含有病毒基因编码的蛋白质成分。

18.Dane颗粒：乙型肝炎病毒大球形颗粒又称Dane颗粒，具有感染性的完整的HBV颗粒，呈球形，具有双层衣壳。血清中检出dane颗粒是肝内病毒活跃复制的标志。

19.IMVC：靛基质（吲哚、I）实验、甲基红（MR）实验、伏-普（VP）实验、枸橼酸盐利用（C）试验的合称缩写，常用于鉴定肠道杆菌。主要用于鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌

20.KIA：即克氏双糖铁半固体斜面培养基，可检查4种反应即葡萄糖、乳糖的发酵反应，是否产生H2S，有无产气等

21.MIU：动力靛基质尿素酶试验培养基，将半固体观察动力、靛基质试验和尿素酶试验综合到一起。

简答题：

1. 革兰阳性菌和阴性菌细胞壁共有结构和特有结构

答：共有结构：肽聚糖（聚糖骨架，四肽侧链）

特有结构：革兰阳性：五肽交联桥，磷壁酸（磷壁酸抗原性强，是革兰阳性菌表面的特有抗原，具有粘附宿主细胞的功能，与细菌的致病性有关）

革兰阴性：外膜(脂蛋白、脂质双层、脂多糖）、周浆间隙（细胞膜和细胞壁之间的空隙）

2. 革兰染色原理、步骤及影响因素

革兰染色原理：（阳性：紫色；阴性：红色）

⑴ 通透性说：主要是由于两类细菌的细胞壁成分和结构的不同。革兰阴性菌细胞壁中含有较多类脂质，而肽聚糖含量较少。当用酒精脱色时，溶解了类脂质，增加了细胞的通透性，使结晶紫和碘的复合物易于渗出，细胞脱色，经复染后，染上复染液(复红)的颜色；而革兰阳性菌细胞壁中肽聚糖含量多且交联度大，类脂质含量少，经酒精脱色后，肽聚糖层的孔径变小，通透性降低，酒精不易进入菌体脱色，故细胞仍保留初染液(结晶紫)的颜色。

⑵ 化学说：G+菌菌体含有大量的核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫牢固结合，使已着色的菌体不易脱色。

⑶ 等电点说：G+菌等电点低于G-菌，G+菌带负电荷比G-菌要多，G+菌易与带正 电荷的碱性染料（结晶紫）结合牢固，因而不易脱色。 革兰氏染色的步骤（方法）如下：

待干镜检

复染脱色媒染初染固定干燥涂片后水洗滴加稀释石碳酸复红后水洗

乙醇约后水洗卢氏碘液后水洗

结晶紫?????????→???????→???

????→??????→

??→??→??→?min 5.0min 5.0%95min 1min 1

影响因素：1. 涂片太厚： 可能会使革兰阴性菌也出现紫色，误认为革兰阳性菌。

2.脱色时间：阳性菌透性小，不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色；如果延长脱色时间，会使革兰阳性菌染上的结晶紫脱去颜色，最后染上复红的颜色，变成革兰阴性菌。而脱色时间太短的话又会使阴性菌染上的结晶紫不能完全脱色，出现紫色，误认为革兰阳性菌。

3. 固定方法：如果玻片在火焰上烤的太久、温度过高，改变了细菌原有的通透性，会使细菌的染色性发生变化。影响了染色的结果。

4. 细菌培养时间：如果细菌培养时间太长，变成了老龄菌，可能会使革兰阳性菌染成革兰阴性菌。

5. 碘液如果碘液放置时间太长，或经日光照射失效，失去媒染剂的作用，就可能使结晶紫与细菌结合的不牢固，容易被脱色，使革兰阳性菌染成革兰阴性菌。

6.水洗：水流过大可能会使菌膜被冲掉。

3.抗酸染色步骤及结果

1.涂片

2.初染：滴加石炭酸复红染液覆盖涂膜，于玻片下方微火加热至出现蒸汽（期间及时补充染液）持续5min，冷却后水洗

3.脱色：加3%盐酸酒精脱色至无红色染液脱下为止，水洗

4.复染：加吕氏美蓝染液复染0.5min后水洗

5.待干镜检

结果：油镜下观察，淡蓝色背景下呈红色细长或带弯曲的杆菌为抗酸染色阳性菌，其他细菌和细胞呈蓝色。

4.K-B法药敏试验的操作，影响因素及如何进行质控。哪些因素可致抑菌环的扩

大或缩小？

操作步骤：见实验书40页如何质控：见实验书40页

影响因素：

①培养基：应根据试验菌的营养需要进行配制，应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质。太厚会使抑菌圈偏小。太薄，会使抑菌圈偏大

②细菌接种量：细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小，能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。

③药物浓度：药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果，需精确配制。

④培养时间：一般培养温度和时间为37℃，16-18小时

⑤药敏纸片质量

抑菌环大小的影响因素：培养基太厚会使抑菌圈偏小。太薄，会使抑菌圈偏大；细菌接种量太多使抑菌环变小

5.MRSA的检测方法，ESBLs的检测方法。

MRSA：苯唑西林琼脂筛选试验（P133表格）、纸片扩散法、MIC法（见P132) ESBL:初筛试验和确证试验都可用纸片扩散法或微量肉汤稀释法。（P135)

6.金黄色葡萄球菌、A群链球菌、B群链球菌的鉴定依据。

金黄色葡萄球菌：革兰阳性球菌触酶试验阳性凝固酶试验阳性耐热核酸酶试验阳性（粉红色）新生霉素抵抗试验敏感（阴性）

A群链球菌：革兰阳性球菌触酶试验阴性杆菌肽敏感试验阳性

B群链球菌：革兰阳性球菌触酶试验阴性CAMP试验阳性马尿酸钠水解试验阳性

D群链球菌：胆汁七叶苷试验阳性 6.5%氯化钠肉汤生长阴性

7.肺炎链球菌的致病因素及鉴定要点是什么？

致病因素：致病物质有荚膜，肺炎链球菌溶素O，脂磷壁酸和神经氨酸酶等

鉴定要点：optochin试验阳性胆汁溶菌酶试验阳性形态和菌落特征典型

8.不动杆菌属主要特征：生物学特性：革兰阴性球杆菌，常呈双排列。无芽孢、

无鞭毛。专性需氧，血平板上呈圆形、光滑、湿润、边缘整齐、灰白色菌落，溶血不动杆菌可形成β溶血。MAC平板上形成无色或粉红色（氧化乳糖）菌落，部分菌株呈粘液状。

生化鉴定：氧化酶阴性、O/F试验为氧化型或产碱型、无动力。

9.铜绿假单胞菌的主要生物学特性

1.革兰阴性杆菌、菌体直或微弯、无芽孢、无荚膜、有单鞭毛，运动活泼。

2.普通平板上形成的菌落扁平湿润、大小不一、边缘不整齐、常呈融合状生长，培养基被染成蓝绿色或黄绿色；血平板上有生姜样气味、扁平湿润、有金属光泽的菌落，常呈β溶血。

3.抵抗力强，天然抵抗多种抗生素及消毒剂——多重耐药

10.不发酵革兰阴性杆菌的共同特点是什么？试例举出3个临床常见菌属

共同特点：不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖、需氧或兼性需氧、无芽孢、革兰阴性杆菌。

常见均属：假单胞菌属、不动杆菌属、窄食单胞菌属、军团菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、金黄杆菌属等。

11.写出沙门菌属、志贺菌属、变形杆菌属在KIA、MIU培养基上的生化结果。

12.沙门菌、变形杆菌、志贺菌、埃希菌初步生化结果的相同与不同点，肠道杆菌

中需要进行血清学鉴定的主要有哪些？

埃希菌属，沙门菌属，志贺菌属，耶尔森菌属需要进行血清学鉴定

13.革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌的检验程序及方法。

14.霍乱弧菌的主要生物学特性、致病物质及常用培养基

一、生物学特性

1、形态染色：G-弧菌，单鞭毛，穿梭样动力，鱼群状排列，有菌毛，个别有荚膜，无芽胞。

2、培养特性：兼性厌氧，氧气充分生长良好。营养要求不高，耐碱不耐酸（pH7.4-9.6），故用pH8-9碱性培养基，形成光滑透明湿润的“水滴样”菌落，分离（选择）能在无盐培养基中生长（区别其它弧菌）。

3、生化反应：触酶（+）、氧化酶（+），硝酸盐还原（+），靛基质（+）（其他见书P230）

4、抗原分型：根据0抗原的不同，有155个血清群，其中O1群、O139群可引起霍乱，其余不致病或仅引起胃肠炎等， O1群包括两个血清型：古典生物型和埃尔托生物型（E1-Tor）。

5、抵抗力：较弱，干燥时易死亡，水环境中可存活两周（水源性传播，水性爆发）；怕酸——正常胃酸4min；不耐热——100℃，1-2min；对消毒剂敏感，可用漂白粉处理病人的排泄物或呕吐物。

二、致病物质：

①霍乱肠毒素——最强烈的致泻毒素

②菌毛：使细菌定植于小肠

③鞭毛：鞭毛运动有利于细菌穿过黏膜表面黏液

④粘液素酶

常用培养基：TCBS培养基

15.小结：霍乱弧菌、沙门菌、金葡、结核杆菌、病原性真菌的选择性培养基/培养基

16.小结使用酚红、中性红、BTB、溴甲酚紫为指示剂的细菌常用培养基。

17.以下细菌的主要生化鉴别试验：

链球菌属与葡萄球菌：触酶试验（葡萄球菌属阳性；链球菌属阴性）

D群链球菌与肠球菌：65g/L（6.5%）NaCL生长试验（肠球菌生长试验阳性；链球菌生长试验阴性）

脑膜炎奈氏菌与淋病奈瑟菌：麦芽糖发酵试验（脑膜炎奈瑟菌阳性；淋病奈瑟菌阴性）

肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌的共同点和不同点

弧菌科、肠杆菌科、非发酵菌

氧化-发酵试验（O/F）：鉴别肠杆菌科和非发酵菌

氧化酶试验：鉴别肠杆菌科和弧菌科（弧菌科阳性；肠杆菌科阴性）

葡萄糖发酵试验：鉴别非发酵菌和弧菌科（弧菌科阳性；非发酵菌阴性）

18.细菌学检查时对标本采集和送检过程中应遵守的原则

①采集标本时应注意无菌操作,尽量避免标本被杂菌污染；②根据疾病特点,适时采集适当部位的标本.采取局部标本处,不应使用消毒剂；③采集标本原则上应在使用抗菌药物之前,对已用抗菌药患者的标本,应注明药物名称；④标本采取后,应尽快送检.除某些细菌(如脑膜炎球菌)在送检中要注意保温外,大多数标本可冷藏送检；⑤在检材容器上贴好标签,并在化验单上填好检验目的、标本种类和临床诊断等内容,以供检测时参考.

19.细菌生长曲线各阶段的特点及在实际工作中应用

⑴迟缓期：代谢活跃，菌体增大，积累酶、辅酶和中间代谢产物，不分裂繁殖，为细菌大量繁殖作好物质准备。

⑵对数期：细菌繁殖迅速，菌数呈几何级数增长，细菌的生物学性状典型，对外界环境作用敏感，适用于研究细菌的生物学性状和进行药物敏感实验，一般在培养后8-18小时。

⑶稳定期：细菌数仍在增加，死菌数与活菌数形成一种动态平衡。其特点：形态、染色性等生物学性状常有改变；芽孢，毒素、抗生素等产生；若向培养系统补充营养物质，取走代谢产物，改善培养条件则可延长稳定期。

⑷衰亡期：死亡菌数增多，超过活菌数，细菌形态显著改变，生理活动趋于停止。一般不用该期细菌作鉴定和研究工作。

应用：

延滞期：食品工业上尽量在此时期消毒灭菌

指数期：此时菌种比较健壮，是增值噬菌体的最适菌龄；生产上作为接种的最佳菌龄；发酵工业尽量延长此时期，以获取最大的菌种密度；食品工业上尽量使有害微生物不能进入此时期；生理代谢及遗传研究或进行染色，形态观察的最好材料。稳定期：发酵生产形成的最重要时期，生产上尽量延长此时期（补充营养物质，调节pH，调整温度）；此时期产物累计达到最高，收获的最佳时期。

衰亡期：产生芽孢，有些此生代谢产物在此时期产生

20.厌氧菌标本采集的原则：（1）不能被正常菌群污染（2）不能接触空气

21.无芽孢厌氧菌分布特点及感染特征：

分布特点：厌氧菌为人体正常菌群构成的优势菌

体内正常菌群厌氧菌与需氧菌的比例：

牙表面、胃、小肠中为1：1

眼结膜、鼻涕、唾液、外尿道、皮肤表面为10：1

牙周、牙垢、结肠中为1000 ：1

感染特征：

内源性感染，部位广泛，多呈慢性过程

无特定病型，多为化脓性感染（局部、全身）分泌物粘稠，有色，恶臭常用抗生素无效

普通培养不长，涂片可见细菌

22.破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌主要鉴定特征

23.白色念珠菌的鉴定依据：革兰阳性酵母样球菌；可产生假菌丝和芽生孢子；在玉米粉培养基上产生厚荚膜孢子；在血清中形成芽管；在沙氏培养基上为酵母样菌落。

24.流感病毒的分型及其依据：

分型：甲型、乙型、丙型

流感病毒分型的依据是核蛋白（NP）和基质蛋白（MP）的抗原性差异

根据其包膜上的血凝素HA和神经氨酸酶NA抗原性的差异将甲型分为若干亚型。

25.HIV的微生物学检查方法：

1）检测抗体：初筛试验：酶免疫测定法（ELISA)、免疫荧光法（IFA法）、凝集试验确证试验：免疫印迹试验（WB）、放射免疫沉淀试验

2）检测病毒及其成分：病毒分离，抗原成分，核酸