临床微生物SOP粪便标本细菌学检验标准操作规程

1.目的

规范粪便标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。

2．适用范围

粪便培养。

3．标本

3.1 标本类型粪便、直肠拭子。

3.2 标本采集

3.2.1 自然排便采集自然排便后，挑取其脓血、黏液部分2～3 g，液体粪便取絮状物2～3ml，盛于灭菌容器内，或置于保存液（运送培养基）、增菌培养基中送检。

3.2.2 直肠拭子如不易获得粪便时，或排便困难病人及婴儿，可用直肠拭子采取，即以无菌棉拭用保存液或生理盐水湿润后，插入肛门内4～5cm（幼儿2～3cm）轻轻转动取出，插入卡-布(Cary- Blair）运送培养基内或无菌容器内送检。

3.2.3 粪便标本应立即送检，室温保存不能超过2小时，如不能及时送检可以放人磷酸盐甘油（PH7.0）或转运培养基，但不能超过24小时。培养艰难梭菌的标本保存于-20℃以下。培养沙门菌和志贺菌的标本应放置磷酸盐甘油溶液中保

(100mg/L)试剂。

存。保存弯曲杆菌和弧菌的标本，需加CaCl

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3.3 标本拒收标准

3.3.1 粪便标本放置时间超过2小时。

3.3.2 送检的粪便标本混有尿液。

3.3.3 直肠拭子未置于运送培养基中。

4. 试剂、仪器

4.1 革兰染液、氧化酶试剂、麦康凯平板。SS平板、TCBS平板及相关生化试剂等。

4.2 VITEK 鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性细菌药敏卡（GNS）、革兰阳性细菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性细菌药敏卡（GPS）。真菌鉴定卡(YBC）药敏纸片、ATB板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。

培养箱。

4.3 接种针、接种坏、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO

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4.4 诊断血清。

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5.

细菌鉴定和药敏质控

参见《质量管理程序》。

6. 检验步骤

接收标本后，立即对标本进行编号、登记。

6.1 涂片检查粪便标本因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法辨别是否为病原菌。因此，粪便标本一般不作涂片检查。只有怀疑霍乱弧菌及菌群失调所致腹泻时，才作直接涂片检查（观察动力和菌群比例）。

6.2培养

6.2.1 沙门一志贺菌培养参见《沙门菌属检验标准操作规程》、《志贺菌属检验标准操作规程》。

6.2.2 致病性大肠埃希菌培养参见《致病性大肠埃希菌检验标准操作规程》。

6.2.3 霍乱弧菌培养参见《霍乱弧菌检验标准操作规程》。

6.2.4 副溶血弧菌培养参见《副溶血弧菌检验标准操作规程》。

6.2.5 小肠结肠炎耶尔森菌培养参见《耶尔森菌属检验标准操作规程》。

6.2.6 空肠弯曲菌培养参见《弯曲菌属检验标准操作规程》。

6.2.7 金黄色葡萄球菌培养参见《葡萄球菌属检验标准操作规程》。

6.2.8 艰难梭菌培养取水样或黏液样粪便立即接种于环丝氨酸头孢西丁果糖琼脂(简称CCFA)平板上，并将粪便作102～l06稀释后定量接种。35℃厌氧环境下培养48小时后，选择粗糙型黄色茵落，移种于葡萄糖庖肉培养基作毒素测定；同时制涂片，悬滴检查动力、革兰染色及生化鉴定。

6.2.9 真菌培养参见《真菌检验标准操作规程》。

6.2.10 气单胞菌和邻单胞菌的培养参见《气单胞菌属检验标准操作规程》和《邻单胞菌检验操作规程》。

6.2.11 分枝杆菌培养参见《分枝杆菌属检验标准操作规程》。

7. 操作流程