拟南芥室内简易栽培和田间大规模种植的方法
福建农林大学学报(自然科学版)第34卷第2期Journal of Fujian Agriculture and Forestry University(Natural Science Editi on)2005年6月
拟南芥室内简易栽培和田间大规模种植的方法
王爱荣,刘 丽,周 洁,鲁国东,王宗华3
(福建农林大学教育部生物农药与化学生物学重点实验室,福建福州350002)
摘要:采用菜园土、草木灰、锯木屑体积比为4∶2∶1的培养基质,用1g?L-1琼脂水悬浮种子直播培养拟南芥,根据其生物学特性在温度、空气相对湿度、土壤水分、光照以及病虫害防治等方面进行管理,培养出生长健壮、充分满足实验要求的拟南芥植株.用同样基质,适当遮荫,可以在田间大规模种植拟南芥.在月均温为11-14℃,日最低气温为2.1-4.7℃的自然条件下,夜间覆盖塑料薄膜,拟南芥仍能正常生长.
关键词:拟南芥;栽培技术;田间种植;突变体库
中图分类号:Q942331文献标识码:A文章编号:100627817(2005)022*******
I ndoor culture and l arge sca le f i eld culti va ti on of A rab idopsis tha liana
WANG A i2r ong,L I U L i,ZHOU J ie,LU Guo2dong,WANG Z ong2hua
(Key Laborat ory for B i opesticide and Chem ical B i ol ogy of M inistry of Educati on,Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou,Fujian350002,China)
Abstract:The s oil,p lant ash and wood chi p s at the p r oporti on of4∶2∶1were used asmediu m t o treat the seeds of A rabidopsis thali2 ana,and t o sus pend the m in1g?L-1agar water s oluti on at4℃for2-4days and directly s ow the m ont o those p repared pots t o make the m ger m inate and gr ow at the indoor or outdoor conditi ons with regular te mperature manage ment,watering,fertilizati on,and pest contr ol. A.thaliana was still gr owing well in the field even when the average monthly temperature was ar ound11.0-14.0℃and the daily m ini m u m te mperature declined t o2.1-4.7℃in winter as l ong as covered with p lastic fil m.The result p r ovides a ne w way t o gr ow A.thaliana at large scale but with l ow cost which may facilitate the p lant functi onal genom ics.
Key words:A rabidopsis thaliana;culture technique;field p lanting;mutant base
拟南芥(A rabidopsis thaliana)属十字花科拟南芥属植物,具有显花植物的全部特征,且还具有基因组小、结构简单、形体小、生长周期短、繁殖系数高、自花授粉等优点[1],这些特点使它成为“植物界的果蝇”,分子生物学、发育生物学和遗传学研究的模式物种.2000年,其基因组全序列测定工作的完成更加激发了人们对其基因结构与功能进行更为详尽研究的兴趣[2].现在,我国越来越多的实验室以拟南芥为试验材料.但拟南芥种子小,幼苗弱,对生长环境又有一定要求,这给它的培育带来了一定困难.目前,拟南芥的栽培方法主要有2种:一种是移栽法,即先将种子种在无菌培养基上,1周后再移栽到土壤中;另一种是土壤培养法,即直接把种子种在土壤中[3].国际上,已有很成熟的拟南芥栽培方法和材料[4],但是国内的条件往往达不到规范的要求,为此,已有一些改进方法的报道[3,5-7],但这些方法对设施依赖性很强,成本高,难以大规模种植.本研究摸索了一套简便易行的室内和田间栽培方法,为大规模、低成本栽培拟南芥提供参考.
1 材料与方法
供试拟南芥为Colu mbia24、Columbia20、gl、W s等生态型.
根据福州市的取材情况和拟南芥的生长特点配制了多种基质.各基质不同组分的体积比为:菜园土∶沙子=1∶1、菜园土∶花土=1∶1、菜园土∶椰糠=1∶1、椰糠∶沙子=1∶1、菜园土∶椰糠∶沙子=1∶1∶1、菜园土∶泥炭土=1∶1、菜园土∶草木灰∶锯木屑=4∶2∶1.观察拟南芥在不同基质的生长情况.
将混合均匀的培养基质装入培养盆中,培养盆放置于托盘上,一个托盘可放置多个培养盆.播种前向
收稿日期:2005-01-14 修回日期:2005-03-25
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30471178);福建自然科学基金资助项目(B0210018);福建省科技厅资助项目(2003F008).
作者简介:王爱荣(1975-),女,硕士.研究方向:分子植物病理学.
3通讯作者.
托盘内加水待培养基质表面湿润后,便可播种.种子熏蒸消毒后,用无菌水浸泡置于4℃冰箱内低温处理
2-4d 后播种.为使种子播得均匀并提高播种速度,将种子用1g ?L -1琼脂水悬浮,用滴管把种子点播在
基质表面,直径10c m 的培养盆播5-6点,每点播2-3粒种子,播后用扎有小眼的塑料薄膜覆盖.置于21-23℃、人工光照(白色荧光灯,16h 光照/8h 黑暗交替,光照度为4000lx )和空气相对湿度为70%左右的培养室生长,或置于田间塑料大棚中生长.
根据拟南芥生长特点进行水肥管理和病虫害防治.
2 结果与分析
2.1 不同基质对拟南芥生长的影响
本试验结果表明,拟南芥在菜园土、椰糠和沙子的体积比为1∶1∶1及菜园土、草木灰和锯木屑的体积比为4∶2∶1两种基质上生长最好.这两种基质松散性和通气性比较好,又有比较丰富的营养,有利于拟南芥萌发和幼苗生长.由于草木灰和锯木屑易得,因此在大规模种植拟南芥时,选用菜园土、草木灰和锯木屑的体积比为4∶2∶1的基质.用此基质培养,拟南芥不同生态型均生长良好.
2.2 拟南芥各发育期的关键管理措施
2.2.1 苗期 拟南芥苗期管理十分关键,否则极易死苗.拟南芥播种后2-4d 即可出苗,待子叶完全展开后揭开塑料薄膜.出苗后约1周,新叶长出时进行适当间苗,每穴留1株壮苗,未出苗的穴可以移苗补齐,保证每盆5-6株.间苗不宜太晚,否则易伤及临近的植株,且因养分、空间等的争夺减慢生长速度.拟南芥幼苗比较脆弱且根系不发达,需要较大的空气相对湿度和土壤湿度.因此,在揭去塑料薄膜后如果空气相对湿度低于70%,应在地面泼水并不定期喷雾小苗;土壤的含水量也要高,一般保持土壤表面潮湿即可,不宜过湿或过干.待出苗3周后,水与1/5MS 液体交替浇灌,以保证幼苗健壮.
2.2.2 成株期 拟南芥成株期除正常的水肥管理外,关键是病虫害的防治.在种植拟南芥的过程中,真菌如菌核病菌(S clerotin ia sclerotiorum )和白粉病菌(E rysiphae cichoracearum )及害虫如蚜虫(M yzus persicae )、小菜蛾(P lutella xyllostella )和菜青虫(A rtogeia rapae )常为害拟南芥,特别是大规模栽培时为害更大.
对菌核病的防治,采取预防为主.用哈尔滨市农欢化工厂生产的“克枯星2号”20g 拌土100kg,可达到很好的防治效果;若在幼苗期发病,则尽快将得病株拔掉,把病株的培养盆取出,浇灌1500-2500倍稀释液,可防止传染其它植株.白粉病易于传播,一旦发生,用福建龙岩市龙门化工发展有限公司生产的“粉
锈星”(10g 兑水15kg )或用西安克胜新依达农药有限公司生产的“倾止”
(稀释4000-6000倍)喷雾,严重时喷2-3次,效果甚好.
蚜虫发生时喷雾上海宏邦化工有限公司生产的“大救星”
(20g 兑水30L ).小菜蛾和菜青虫发生时,使用单一农药往往效果较差,且使用几次后就失效,化学农药和生物农药混合使用效果很好,且药效持久.
我们常将济南绿霸化学品有限责任公司生产的“毒死蜱”
(稀释1500-2000倍)与海南正业农业化工有限公司生产的“吊死它”(稀释3000-4000倍)或湖北康欣农用药业有限公司生产的“生绿B t 可湿性粉剂”
(稀释1000-1500倍)混合使用.
2.2.3 花期 拟南芥属长日照植物,增加光照时间,可以提前开花.此外,如果将花序掐除,则可以促进营养生长,延迟花期.通常待花序长至10c m 左右时从基部掐掉,这样从花序基部会发出更多花序,同时可短暂抑制生殖生长,促进营养生长,长出的次生花序非常粗壮,不易倒伏.在塑料大棚中,天气好时白天要掀开部分塑料薄膜以通风除湿且防止棚内温度过高,下午太阳快落山时再将塑料薄膜盖好.
2.3 拟南芥在培养室内的生长发育情况
按照上述栽培方法,拟南芥各生态型均能旺盛生长,满足研究需要(图1A 、1B ).进一步观察拟南芥生态型Columbia 24在室内的生长发育情况,拟南芥生长良好(表1).
2.4 拟南芥在大棚中的生长情况
用菜园土、草木灰和锯木屑体积比为4∶2∶1的培养基质在塑料大棚中培养Columbia 24生态型的拟南芥,其生长情况非常好(图1C ).与室内栽培相比,拟南芥在塑料大棚中生长更健壮,可以结更多的种子,这可能与自然光较强有关.但拟南芥种在塑料大棚中更易受菌核病菌、小菜蛾和菜青虫等为害,而且受自然
?352?第2期王爱荣等:拟南芥室内简易栽培和田间大规模种植的方法
气候影响较大,福州夏天温度过高,室外难以种植.不过,拟南芥较耐低温,根据福建气象台资料,福州2003年12月份,2004年1、2月份平均气温分别为13、11和14℃,日最低气温分别为4.2、2.1和3.7℃,大棚内的拟南芥仍生长良好,但冬季光照时间短,花期会延迟
.
A.室内生长9周半的植株;
B.室内生长情况;C .大棚内的生长情况.
图1 拟南芥的生长情况
Fig .1 Gr owth status of A.thaliana
表1 拟南芥生态型Colu m b i a 24在培养室内的生长情况
Table l Gr owth status of A.thaliana Columbia 24at the gr owth chamber
成苗率/%
始花时间/周开花时株高/c m 莲座直径/c m 果荚长度/cm 每荚种子数生活周期/周1004-58.5-11.08.5-10.5 1.2-1.442-5011-153 小结
拟南芥作为重要的模式植物,是植物功能基因组学研究的重要材料.如何大规模栽培拟南芥是国内许多实验室面临的实际问题.我们通过试验摸索出一套直播育苗的管理措施,培养出生长健壮、结实率高的拟南芥,特别是首次研究了拟南芥室外大规模栽培技术,发现拟南芥在极端气温为2.1℃下仍能正常生
长,具有较大的参考价值.本研究摸索的方法与其他方法[3,5-7]相比,具有操作简单,基质易得等优点,且拟
南芥生长健壮,是一种简便易行的方法.
致谢:本试验得到美国加州大学洛杉矶分校分子细胞和发生生物学研究所林辰涛教授和中国农业科学院作物科学研究所刘旭研究员指导,特此致谢!
参考文献:
[1]陈璋.拟南芥:植物分子生物学研究的模式物种[J ].植物学通报,1994,11(1):6-11.
[2]DE NN I S C,S URR I D GE C .A rabidopsis thaliana genome [J ].Na ture ,2000,792:150.
[3]于政权,孙颖.拟南芥菜室内培养技术的改进[J ].河北师范大学学报(自然科学版),1999,23(4):499-550.
[4]W E I GE L D,G LAZE BROOK J.Arab i dopsis:A Labora tory M anua l [M ].北京:化学工业出版社,2004.7-17.
[5]陈敏,白书农.拟南芥培养经验点滴[J ].植物生理学通讯,1995,31(6):436-438.
[6]王秀荣,沈宏,严小龙.拟南芥室内繁种技术研究[J ].华南农业大学学报(自然科学版),2002,23(3):94.
[7]李俊华,张艳春,徐云远,等.拟南芥室内培养技术[J ].植物学通报,2004,21(2):201-204.
(责任编辑:施晓棠)
?452?福建农林大学学报(自然科学版)第34卷
农杆菌侵染拟南芥花序的转化方法
农杆菌侵染拟南芥花序的转化方法 制备转化用的农杆菌菌液 准备： 1．灭菌试管 400毫升细长烧杯2瓶，离心瓶4-6个（250ml）。 2．试剂：YEP 1200ml（每瓶300ml 共4瓶）+Kan 1;1000，Rif1:500。 1/2MS+2%蔗糖（灭菌115度20分钟），Silwet在-20℃贮存。 3．步骤： 共转化农杆菌：于中午12点接菌于有YEP培养液的试管中10ul：10ml接种。28℃，3000rpm摇过夜，约30小时，次日下午6点将已摇活的菌按（1：400）及750ul菌液转至汉300毫升YEP+K50+Rif中培养28℃，300rpm约14小时，次日上午8点测OD值，用YEP+Rif作为空白对照，当菌液达到OD600为1.5~3.0之内时，可收集菌体于250ml离心瓶（灭菌）,4℃，4000g 离心10min 。用10%蔗糖（含0.02%silwet）稀释至OD600 约为0.8-- 1.0左右即，用10%蔗糖作对照。转化时将花在溶液中浸泡50s左右，于弱光下生长。 4．浇水：转化前一天将需要做转化的野生型拟南芥苗子浇水浇透。 （注意：选取上述配好的溶液2ml，充分打碎管底部的菌体，在将混匀的菌体溶入600ml溶液中，混匀后再加入Silwet(100%)120ul终浓度为0.02%）。 2．先将浇透水用于转化的苗子的夹全部剪掉，再用宽胶带把花盆的土封好。3．转化的准备工作：2个400细长烧杯，宽胶带，记号笔，表等。 4．转化过程略，视苗的长势弱 0.8 Pa 3`，长势好的0.8 Pa 5`。 5．标记好，将转化好的苗平放于盒子内，上盖封口膜封好，避光培养24hrs 2天后，将植株立起正常培养，浇水，3天1次。 花序浸泡(flower-dipping)法转化拟南芥
野外试验方案
野外试验方案-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN
试验方案 一、试验目的 近年来，有关利用合理的水稻种植模式，尤其是水稻品种间栽或混作来增加稻田的生物多样性，从而控制水稻病虫害的研究报道不断增多，这方面的研究已成为国内外的一个热点，本次实验就是为了探究增加稻田生物多样性对害虫飞虱的影响，通过观察稻田生物多样性对飞虱繁殖力、抗药性、致害型、天敌数量、对水稻病虫害的等影响，从而去研究其中的相关影响机制。以期能减少化学农药的施用，减少环境污染，更好地去发展生态农业。 二、试验材料 由广东田联种业有限公司提供水稻种子，选取以下两种： 植优523：感温型三系杂交稻组合。早造平均全生育期130～132天。科高～106.3厘米，株型中散，分蘖力中强，穗大粒多。中抗稻瘟病，全群抗性频率%～%，对中B群、中C群的抗性频率分别为%～75%和85%～%；中抗白叶枯病（IV型菌3级、V型菌7级）。丰产性较好，中抗稻瘟病和白叶枯病，耐寒性中弱。 特优816：感温型三系杂交稻组合。早造平均全生育期131～132天。科高～115.6厘米，植株较高，株型中集，分蘖力和抗倒力中弱，剑叶较宽、长，穗大粒多，后期熟色好。高抗稻瘟病，全群抗性频率%，对中C群、中B群的抗性频率分别为%和%，田间监测结果表现抗叶瘟、高抗穗瘟；感白叶枯病，对C4菌群、C5菌群分别表现感和中感。 田间均无抗飞虱抗性表现。 三、试验设计 试验设三个处理，分别为A：单作植优523、B：单作特优816、混作植优523和特优816，其比例A：B=5：1设三次重复，每小区面积200 m2，总面积大概3亩左右。如下图所示
拟南芥种植及处理基本方法
培养基 MS培养基 (Sigma公司) B5培养基 (pH 5.5) Content mg/L Content mg/L Content mg/L KNO3 2500 ZnSO47H2O 2.0 Nicoti nic 1 CaCl22H2O 150 H3BO3 3.0 Thiami ne HCl 10 MgSO47H2O 250 KI 0.75 Pyri ndox ine 1 NaH2PO4'H2O 150 Na2MoO42H2O 0.25 m-I no sitol 100 FeSC47H2O 27.8 CoCl26H2O 0.025 Glyci ne 200 MnSO4H2O 10 Na2EDTA 37.3 Ki netin 0.1 CuSO45H2O 0.025 IAA 0.1-1 改良的1/4 Hoagland 培养液(mM, pH6.0): Content mM Content mM KNO3 1.25 Zn SO40.002 Ca(NO3)2 1.50 H3BO3 0.050 MgSO40.75 KCl 0.050 KH2PO4 0.5 (NH4)6Mo7°24 0.075 FeSq 0.072 CuSO40.0015 Na2EDTA 0.072 Na2SiO30.1 2植物材料的常规种植 拟南芥种子均匀地播撒于1/3 B5液体培养基浸润的蛭石上，塑料膜遮盖至种子萌 o 发，揭开膜，让其自然生长，适当间苗，烤苗至蛭石表面干燥后加水。置于23 C，16/8 h的光照培养间中生长。 3拟南芥种子的表面灭菌处理 1）拟南芥种子在4 C下春化3-5天
2）在超净台上用70%酒精处理种子2-5分钟 3）弃去酒精，用无菌水洗1-2次。 4）将种子用15% Bleach （KAO公司）处理15分钟，间歇振荡。 5）用无菌水洗4-6次，每次充分振荡混匀。 6）将种子悬浮在灭菌的0.1% Agar中。 7）均匀地将种子播撒在B5培养基平皿中。 4植物材料的水培体系 拟南芥种子经表面灭菌处理后均匀播撒于1/2 MS固体培养基上，10-15粒/ 皿，生长2周后，小心地将其转入水培体系中。 水培体系是由培养皿及起支撑作用的锡箔纸组成。培养皿中盛适当的液体培养基（通常用上述改良的1/4 Hoagla nd培养液）；锡箔纸上留出相距适当的小洞后，盖于培养皿之上。将拟南芥幼苗的根小心地经由锡箔纸上的小洞浸入培养液中。塑料膜覆盖，2-3天后揭去。整个体系置于光照培养间中生长，每3-6天更换 一次培养液。 5拟南芥T-DNAS入突变体的筛选方法 到网站输入salk号设计引物LP、RP T-DNA LB : LBb1: GCGTGGACCGCTTGCTGCAACT LBa1: TGGTTCACGTAGTGGGCCATCG 用于PCR扩增。采用双引物法，分别用LP + RP, BP+ RP扩增基因组DNA 方法: 1）将拟南芥突变体种子播种于MS培养基平皿中，生长2周后，将其转入蛭石中，待长至抽苔期准备DNA的提取。 2） DNA提取缓冲液的配制： Genome\ /Flankira SaaiifincfiL Pa N pZme Exl5Ext3pZcne EPa w
大苗培育
?整地如果移植苗木较小，根系较浅，可进行全面整地。将地表均匀地抛撒一层有机肥（农家肥），用量以每亩1500~3000千克为宜，也可结合施农家肥施入适量的迟效肥如磷肥。然后对土地进行深翻，深翻的深度以30cm为准，深翻后再打碎土块、平整土地，划线定点种植苗木。采用沟状整地或穴状整地。挖沟、挖坑以线或点为中心进行挖掘。挖沟一般为南北向，沟深50~60cm，沟宽70~80cm。挖坑深一般60cm，宽度80~100cm。 大苗的概念 ?大苗是指经移栽、修剪和多年培育，符合城市绿化要求的苗木。 ?大苗是指在苗圃中培育几年到十几年，规格较大的苗木。一般情况下在苗圃中培育5～8年，有时需要十几年。 ?培育大苗是园林苗圃区别林业苗圃的重要特点 城市在绿化工程中应用大苗的好处 ?在园林绿化中使用大规格的苗木，主要是为了尽快成景，达到设计的绿树成荫，花枝交错的绿化效果，尽快发挥树木对环境的美化、净化的作用。 ?在苗圃中培育出的大苗，具有发达紧凑的根系、完美的树形，健壮的生长势，较大的树体，能更好地适应园林树木栽植地如公园、人行道等人多的环境，栽植后顺利地存活和生长。?能与建筑成比例，相协调
大苗的培育途径 ?苗圃中经播种、扦插、嫁接等方法育出的小苗必须经过多次移植，扩大生长空间，加强肥水管理，合理整形修剪，有时还要嫁接，经过几年或十几年，才能培育出适合于园林绿化种植的大苗。在大苗培育的过程中，最主要的工作就是苗木的移植，同时结合移植进行施肥、灌排水、整形修剪、嫁接等工作。 一苗木移植 ?1苗木移植的概念；将播种苗或营养繁殖苗掘起，扩大株行距，种植在预先设计准备好的苗圃地内，使小苗继续更好地生长发育，这种育苗的操作方法叫移植。幼苗移植后叫做移植苗。这一环节是培育大苗的重要措施。移植与移栽是同义词。
广西水稻品种试验实施方案
年广西水稻品种实验实施方案 广西区种子管理局 广西农科院水稻研究所 一、实验目的 为了鉴定评价新选育的水稻品种(组合，下同)在我区的丰产性、稳产性、适应性、抗逆性、品质及其它重要特征特性表现，为我区品种审定、推荐参加全国南方区试等提供科学依据，根据《广西壮族自治区农作物品种管理实施办法》有关规定，特制定年广西水稻品种区域实验、生产实验和预备实验实施方案。 二、参试品种 （一）区域实验和生产实验 年开展早稻桂中、桂北早熟组(以金优和株两优为对照)、中熟组(以优和五丰优为对照)、桂南迟熟组(以特优为对照)、常规优质稻组(以柳沙油占为对照)；晚稻设桂中、桂北中熟组(以优和五丰优为对照)、桂中中迟熟组(以天优华占为对照)、桂南感光组(以博优为对照)；高寒山区一季中稻组(以中浙优号为对照)； （二）预备(筛选)实验 开展早稻桂中、桂北早熟组(以株两优为对照)、中熟组(以五丰优为对照)、桂南迟熟组(以特优为对照)；晚稻设桂中、桂北中迟熟组(以天优华占为对照)、桂南感光组(以博优为对照)、常规优质稻组(以柳沙油占为对照)； 各熟组参试品种安排详见附件表～、表～。附件上没有参试品种安排的，请不要寄种子，否则当废种处理。 实验方案在“广西种业信息网()”上公布，不再印发。 三、供试种子要求 年所有参试品种(包括对照品种)在实验过程中实行实验编号管理，要求供种单位统一把参试品种的种子提供给广西农科院水稻所，进行编号后再分发到各承试点(包括抗性鉴定点)。分组编号情况报广西区种子管理局备案，对实验点和供种单位一概保密。各实验点不需再重新编号，以免发生错误。 (一)供种量 区域实验公斤个，生产实验早稻中熟组、晚稻中熟组和中迟熟组公斤个，其它熟组公斤个，预备(筛选)实验公斤个。
拟南芥植物组织培养
拟南芥植物组织培养 WTD standardization office【WTD 5AB- WTDK 08- WTD 2C】
拟南芥组织培养 一、种子消毒： 方法一：将拟南芥种子置于1 .5 ml eppendorf 管(微量离心管)中，加入1 ml 蒸 馏水，4C春化3 d，70 %（v／v ）乙醇1mi n、7 %（v／v ）次氯酸钠10 mi n 浸泡消毒，并用无菌水冲洗5 次。 方法二：在超净工作台内，用无菌蒸馏水浸泡1 min，然后用80％乙醇消毒90s，最后用无菌蒸馏水冲洗3～5次备用。 消毒完毕的种子可以用200ul的tips吸去洗涤液，然后在超净工作台上挥发掉残余水分、洗涤液。 方法三、取野生型拟南芥种子放人离心管内，75％乙醇清洗后，无菌蒸馏水清洗1—2次，转入无菌离心管；5％次氯酸钠溶液浸泡5—6 min，用无菌蒸馏水清洗3～4次，加入1 ml无菌水，用移液枪接种。 二、选用的培养基 选用1/2MS培养基对种子进行培养。（MS和1/2MS都可以，1/2MS就是大量元素减半，其他东西和ms培养基是一样的量。糖可以加，会长得比较好，但是也很容易污染。如果在平板上要生长时间比较长，需要做一些实验的，比如根的发育，最好不要加。）也可以用MS+30 g／L蔗糖的固体培养基。（我想两种培养基都接种上，比作对比确定好坏）。 MS培养基配料表： 三：接种方法 拟南芥种子消毒后，用移液枪吸取拟南芥种子和水的混合物，均匀地在MS 生长培养基的培养皿平板上滴落，并使之形成两条平行的直线。（如不行，可适当添加琼
脂）。 四、培养得无菌苗 接种后置于光照培养箱(型号：GXZ．500C；培养光照条件为16小时光照，8小时黑暗，培养温度为22℃中竖直培养。3天后即可取材用于器官离体再生实验。萌发5天后，在超净工作台中，用镊子将苗移栽到装有1／2 MS培养基的50ml三角瓶中（每瓶4--6棵，视情况而定），于短日照条件下培养30天左右获得无菌苗。（短日照光照条件8小时光照，16小时黑暗，长日照光照条件为16小时光照，8小时黑暗，培养温度均为22℃。）此处获得无菌苗的时间有异议，应该为2--3周？ 五、外植体的选取 B5 + 5 mg／L2 ，4-D+ 0 .5 mg／L KT 培养基上诱导愈伤组织,莲座叶作外植体出愈慢，出愈率低，愈伤组织质量较差；叶柄、下胚轴和根作外植体出愈快，且愈伤组织质量好，后期易分化。 由于叶柄、下胚轴相对较短，难于收集，为了便于操作，减少污染，试验中采用根作为外植体诱导愈伤组织和诱导分化试验。 所取外植体的大小为5mm左右，不宜过大或过小。 滴落种子形成的两条直线位于平皿的上半部，可以避免伸长的根被培养基中渗出的水分所淹。无菌苗的苗龄太短不易得到足够多的外植体，苗龄太长则外植体脱分化的时间明显延长，最适苗龄以2 --3 周为宜。 六、胚性和非胚性愈伤组织的诱导 1、以MS 为诱导培养基, 附加2, 4一D 2mg/L,KT、NAA各L,水解酪蛋白300mg/L，6%蔗糖，琼脂， 2、接种幼穗长度为1--2cm 左右, 置于2 8 ℃恒温箱内暗培养。
拟南芥种植方法
拟南芥种植方法 This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020
培养基上点种子： 1.种子处理 1.1 种子消毒处理 在培养基中点样前，必须对种子进行消毒，防止感菌，具体方法为：先将种子倒在干净的纸上，挑去大的杂质，再将种子倒入EP管中，加入1mL70%酒精，振荡10min，将种子放在超净台中吹干。 1.2 点样 将消毒处理后的种子，可以利用牙签点到培养基上，每次仅点一粒种子，根据培养皿的大小，确定一个里面能够点多少个种子，每个90mm培养皿上大约种30粒种子，防止植株长大后影响根与子叶的发育。 1.3 春化 种子点样完毕后，将培养基密封，置于4℃冰箱里放置72h后，放回温室。 土培法： 1.种种子前，要将营养土用自来水混匀后，121℃灭菌30min，待土冷却后，装入种植拟南芥的方盒中，再将方盒放入红色托盘中。 2.将要点的种子平铺在称量纸上，用牙签蘸取一粒种子点在营养土上,每点一个小盒时都用牙签做标记，以免遗种某个盒子。（每个小盒子种5粒种子，每个大方盒子种9粒种子） 3.将点了拟南芥种子的托盘置于22℃温室，并用一个干净的托盘盖在上面，大约两天后
就可以打开上面的托盘，待植物长出4片叶子时，可以根据自己的实验需求对植物的幼苗进行取舍。 4.植株生长条件的控制 幼苗移植后将花盆置于温室内，保证温室温度恒定在22℃，空气湿度70—80%，光照强度100—150μmol/m2/s，每天浇两次纯净水，上午9点左右一次，下午5点左右一次；一周浇一次营养液（1平匙溶于1L水中），营养液要灌在盆底。 浇水注意事项： 1）水不可以浇的过多或过少，用手捏起一些土能挤出水来说明就有点太湿； 2）水要浇均匀，托盘四个角的方向如果喷壶喷不到，可以用挤瓶均匀地喷一些水； 3）用喷壶浇水时，喷壶的水柱不可以太大，以免把植物连根拔起； 4）当植株出现花芽时，一定要保证水分的供应，促进果实的发育。当植株结有豆荚时，可以适当的减少供水量，每两三天浇一次水便可，以利于种子的成熟。开花后的植物不能再用喷壶浇水，要从盆底灌水，但不可以一次性灌太多水； 5）在盆底灌水后，待植物吸收完水后，可以将盆底多余的水分倒出来； 6）拟南芥受到胁迫判断标准：叶柄发紫，叶片发黄，开花期提前等； 7）如果做生理实验，植物一旦受到胁迫，需要把植物丢弃，重新种植，以免实验数据不准确。 注：温室202光照时间：9:00—19:00为短日照，有利于营养生长
种苗培育课程标准
种苗培育课程标准 【课程名称】 园艺植物种苗培育 【适用专业】 中等职业学校园艺专业 1.前言 1．1课程性质 本课程是中等职业学校园艺专业（园艺植物栽培方向）的一门专门化方向课程，是从事园艺植物栽培和种苗培育岗位工作的必修课程。其功能是使学生掌握各种不同育苗方式的基本原理和操作技能，具备从事种苗培育的基本职业能力。 1．2课程设计思路 本课程以“园艺专业工作任务与职业能力分析”为依据设置。其总体设计思路是打破传统课程模式中以知识为主线的设计思路，采用以不同种苗培育方式的工作任务为引领，通过工作任务来整合相关知识和技能，将该课程设计成任务引领型课程。 本课程的相关工作任务是以种苗培育的场所来划分和设计的，工作任务间按照平行并列的关系进行排列。先总体讲解种子检验和种子处理，然后按育苗场所将工作任务分解为穴盘（容器）育苗、设施苗床育苗、组织培养育苗、苗圃（地）育苗等几个并列的任务，以利于学生根据自己兴趣和就业需要对某一育苗方式进行强化训练。课程内容的选取紧紧围绕完成工作任务的需要循序渐进，以满足职业能力的培养要求，同时又要充分考虑学生对理论知识学习的需要，融合种苗培育工以及花卉园艺工、蔬菜园艺工、果树园艺工、瓜果栽培工的四级职业标准对种苗培育相关知识、技能和态度的要求。 每个任务的学习都以典型的园艺植物种苗培育的各个环节为载体，以工作任务为中心整合相关理论与实践，每个环节要结合当地生产实际设计相应实训活动，使学生在实际操作过程中强化技能，各个环节完成后进行企业化综合实习实训，加深对专业知识、技能的理解和应用，培养学生的综合职业能力，满足学生职业生涯发展的需要。 本课程建议学时数为176。
种子培育最方法
种植方法： 一、影响荞麦种子萌发和幼苗生长的因素生产荞麦芽苗要求种子出苗率高，苗壮而整齐均匀。能否培养成品质优良的产品，主要受荞麦种子质量、温度、水分等因素的影响。 １、种子质量：种子成熟度对其萌发、出苗及幼苗的生长影响很大。种子成熟度好，则饱满而粒大，出苗率高，子叶大而厚，胚轴粗壮。荞麦种子寿命较短，存放年限对其生活力的影响较大。因此，选择成熟度高而饱满的新种子，是培育荞麦芽苗的一项重要的技术措施。 ２、温度：荞麦属喜温性作物，种子萌发要求一定的温度。发芽要求最低温度为７—８℃，适宜温度为１５—２０℃，最高温度为３６—３８℃。温度过低，种子萌发缓慢，对幼苗的生长极为不利，苗瘦弱而不整齐。在适宜的温度条件下，荞麦浸种后３—４天能出芽，１０—１２天可以培育成荞麦芽苗。 ３、水分：浸种后，当种子吸水量达到风干种子自重的６０％左右时，即可完成吸胀作用而进入种子萌发阶段。幼苗生长期间需要较多的水分，因此要保证有充足的水分供应幼苗的生长。 ４、光照：荞麦芽苗生长对光照的要求较高，光照不足时，种壳紧包着子叶，使子叶难以打开，且生长不整齐。如果发芽后给予光照，则幼苗生长健壮，子叶容易打开，植株生长整齐。 二、荞麦芽苗的生产方法生产荞麦芽苗需经过种子清洗、浸种、播种、催芽、育苗和收获等几个阶段。 １、种子清洗：生产荞麦芽苗首先要进行种子的清洗工作，把成熟度差、不饱满的种子和杂质漂去，剩下干净的成熟度高的饱满种子，以保证种子的发芽率及发芽势，为获得优质的产品打下基础。 ２、浸种：浸种时间对种子萌发非常重要。通常浸种时间为４—６小时，温度高时浸种时间可短些，温度低时浸种时间可长些。浸种后要用清水洗几次种子，沥去多余的水分后再播种催芽。 ３、播种、催芽：播种催芽是保证荞麦芽苗整齐生长的重要措施。播种前在盘内放一片与盘子大小相同的网纱作基质，把种子均匀的撒在基质上，每盘播种约１５０克。催芽时需保证适宜的温度、湿度和良好的通气条件。可将苗盘叠在一起，最上一层盖上湿报纸保湿，每天进行１—２次倒盘，变换苗盘上下位置，并均匀喷雾。催芽期间一般需要３—５天。当幼苗长出，根系开始伸长时，即可进入育苗阶段。 ４、育苗：育苗期间的荞麦需要充足的阳光、水分和适当的营养成分。不适宜在黑暗或弱光条件下栽培，宜在阳光充足的大棚、开阔地栽培。生长期需水量较多，要保持有充足的水分。可以建一浅水池，将苗盘浸泡在水池中，水深以不入盘内为准，仅浸着根即可，以保证根系水分吸收。在生长过程中，可适当喷施叶面肥，促进下胚轴的伸长和子叶的展开，提高产量。 ５、收获：当荞麦芽苗长高至１２—１５厘米，子叶充分展开时，即可采收。荞麦芽苗产品幼嫩，含水量高，如果采收后包装上市，贮藏保鲜期较短，如采后整盘活体销售，其销售期则可延长。 三、荞麦芽苗的食用方式荞麦的根、茎、叶含有丰富的芦丁等黄酮类物质，具有降低毛细管的通透性，维持微血管循环的作用，并用作高血压的辅助治疗剂。荞麦还含有大量的食用纤维，而食用纤维在减肥、降血脂及降血糖方面都有极为重要的作用。荞麦芽苗作蔬菜，既丰富了菜篮子，也实现了菜药同源，能增进人们的健康。荞麦芽苗味微酸，口感好，可作上汤，佐以鲜肉、蛋、味道更佳，还可鲜榨荞麦芽苗汁与果汁混
实验室水稻种植方法
一个水培还有就是土培 水培就是放在水里让他们发芽的土培就是种在土里保持土层湿润就好了 种子播在准备好的秧田上，当苗龄为20～25天时移植到周围有堤的水深为5～10公分(2～4吋)的稻田内，在生长季节一直浸在水中。 耕种方式 稻米的种植技术，包括稻田和插秧，是在中国发明的。传说中是神农氏教导人们如何种稻。 目前稻的耕种除传统的人工耕种方式，亦有高度机械化的耕种方式。但仍不失下列步骤： 整地： 种稻之前，必须先将稻田的土壤翻过，使其松软，这个过程分为粗耕、细耕和盖平三个期间。过去使用兽力和犁具，主要是水牛来整地犁田，但现在多用机器整地了。 育苗： 农民先在某块田中培育秧苗，此田往往会被称为秧田，在撒下稻种后，农人多半会在土上洒一层稻壳灰；现代则多由专门的育苗中心使用育苗箱来使稻苗成长，好的稻苗是稻作成功的关键。在秧苗长高约八公分时，就可以进行插秧了。 插秧： 将秧苗仔细的插进稻田中，间格有序。传统的插秧法会使用秧绳、秧标或插秧轮，来在稻田中做记号。手工插秧时，会在左手的大拇指上戴分秧器，帮助农人将秧苗分出，并插进土里。插秧的气候相当重要，如大雨则会将秧苗打坏。现代多有插秧机插秧，但在土地起伏大，形状不是方型的稻田中，还是需要人工插秧。秧苗一般会呈南北走向。还有更为便利的抛秧。 除草除虫： 秧苗成长的时候，得时时照顾，并拔除杂草、有时也需用农药来除掉害虫（如福寿螺）。 施肥： 秧苗在抽高，长出第一节稻茎的时候称为分蘖期，这段期间往往需要施肥，让稻苗成长的健壮，并促进日后结穗米质的饱满和数量。 灌排水： 水稻比较倚赖这个程序，旱稻的话是旱田，灌排水的过程较不一样，但是一般都需在插秧后，幼穗形成时，还有抽穗开花期加强水份灌溉。 收成： 当稻穗垂下，金黄饱满时，就可以开始收成，过去是农民一束一束，用镰刀割下，再扎起，利用打谷机使稻穗分离，现代则有收割机，将稻穗卷入后，直接将稻穗与稻茎分离出来，一粒一粒的稻穗就成为稻谷。 干燥、删选： 收成的稻谷需要干燥，过去多在三合院的前院晒谷，需时时翻动，让稻谷干燥。删选则是将瘪谷等杂质删掉，用电动分谷机、风车或手工抖动分谷，利用风力将饱满有重量的稻谷自动筛选出来。
拟南芥原生质体制备转化方法整理
溶液配制 1、纤维素酶解液：
2、PEG4000溶液（一次配置可以保存五天，但是最好现用现配，每个样品需100μl PEG4000溶液，可根据实验样品量调整溶液配置总量）
3、W5 溶液 4、MM G溶液
5、WI溶液 拟南芥原生质体制备转化方法整理 一、土培室播种种植的拟南芥。 二、生长良好情况下在未开花前用于取材叶片制备原生质体。 三、剪取中部生长良好的叶片用刀片切成0.5 -1 mm宽的叶条。 四、将切好叶条掷入预先配置好的酶解液中（每5-10 ml酶解液大约需10-20片叶子）。并用镊子帮助使叶子完全浸入酶解液。
五、用真空泵于黑暗中抽30分钟。（此时可配制PEG4000溶液，200和1000 ul 枪头去尖使操作时吸打缓和。） 六、在室温中无须摇动继续黑暗条件下酶解至少3个小时。当酶解液变绿时轻轻摇晃培养皿促使原生质体释放出来。（此时预冷一定量W5溶液） 七、显微镜下检查溶液中的原生质体，拟南芥叶肉原生质体大小大约30-50 um。 八、在过滤除去未溶解的叶片前用等量的W5溶液稀释含有原生质体的酶液。 九、先用W5溶液润湿35-75 um的尼龙膜或60-100目筛子，然后用它过滤含有原生质体的酶解液。 十、用30毫升的圆底离心管100g，1-2分钟离心沉淀原生质体。尽量去除上清然后用10ml 冰上预冷的W5溶液轻柔重悬原生质体。 十一、在冰上静至原生质体30分钟。 以下操作在室温23℃下进行
十二、100g离心八至十分钟使原生质体沉淀在管底。在不碰触原生质体沉淀的情况下尽量去除W5溶液。然后用适量MMG溶液（1m）重悬原生质体，使之最终浓度在2X105个/ml。 十三、加入10 ul DNA（10-20微克约5-10kb的质粒DNA）至2ml离心管中。 十四、加入100 ul原生质体（2x104个），轻柔混合。 十五、加入110 ul PEG溶液，轻柔拍打离心管完全混合（每次大约可以转化6-10个样品）。 十六、诱导转化混合物5-15分钟（转化时间视实验情况而定，要表达量更高也许需要更高转化时间）。 十七、室温下用400-440 ul W5溶液稀释转化混合液，然后轻柔颠倒摇动离心管使之混合完好以终止转化反应。 十八、室温下用台式离心机100g离心2分钟然后去除上清。再加入1ml W5溶液悬浮清洗一次，100g离心两分钟去上清。
金桔苗的培育方法与相关技术
本技术公开了一种金桔苗的培育方法，属于金桔种植技术领域。本金桔苗的培育方法包括如下步骤：S1、种子催芽；S2、育苗地准备，施用育苗专用肥；S3、播种；S4、水肥管理；S5、病虫害防治，喷施防病虫液；S6、当金桔苗生长至3545cm高时，完成金桔苗的培育，直接将金桔苗从育苗地中移出进行定植。本方法能够提高金桔的出苗率和成活率，并且金桔苗长势均匀，整齐度高，抗性较强，植株患病少，利于后期定植管理；本方法培育出的金桔苗可以直接进行定植，并且能解决定植后金桔出现变异、品种退化、结果晚等问题。 权利要求书 1.一种金桔苗的培育方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： S1、种子催芽：将金桔种子用催芽剂进行催芽48-56小时； S2、育苗地准备：深耕翻土，清除石块、草根、垃圾，晾晒5-7天后，撒入育苗专用肥，然后来回耙地耕匀即可；所述育苗专用肥由如下重量份的原料制成：苹果渣80-90份、植物秸秆粉末50-60份、米糠30-40份、蜡状芽孢杆菌0.01-0.02份、麦饭石10-20份、酒精废醪液30-50份、钙镁磷肥8-10份； S3、播种：将经过步骤S1催芽后的金桔种子点播于步骤S2准备好的育苗地中； S4、水肥管理：在种子播种后保持土壤湿润，播种两星期后开始喷施营养液，每10天/次，每次喷施至土壤湿润；金桔苗展叶后喷施一次质量浓度为0.2％的磷酸二氢钾作根外追肥，喷至土壤湿润； S5、病虫害防治：在金桔苗展叶后开始喷施防病虫液，每隔7天喷施一次，每次喷至土壤湿润；防病虫液由以下重量份数的组分制成：夹竹桃20-30份、除虫菊10-15份、大蒜5-10份、白醋3-5份、水200-300份；
2019年鉴别水稻种子优劣的方法有何些
2019年鉴别水稻种子优劣的方法有何些篇一：水稻种子的正确选种方法 水稻种子的选种方法 种子质量是决定水稻质量的重要因素，关系到农业生产的安全。 在选种时，了解需要掌握的事项，能为水稻安全生产提供保障。 1.坚持品种选定原则 根据《中华人民共和国种子法》第十七条规定，未经审定的品种 任何单位和个人不得宣传、销售和推广。凡政府允许大面积推广的品种，必须是由国家或省级农作物品种审定委员会审定通过的水稻品种。不要购买未经审定而先行推广的品种，而且最好不要选择那些没有大面积普及的品种。谨慎购买新品种，遇到从来没有种植过的新品种，要向经营者询问该品种是否通过引种测试，其结果如何，最好不要盲目购买。 2.选择具有合法资格的种子供应商 不要在无证经营的门店、街头巷尾摆摊及走街串巷叫卖的种子商 贩手里购买种子，避免买到假冒、伪劣和陈年的种子。应该选择经营
证照齐全、具有合法资格的种子供应商。购种时注意要供应商开具有效发票（或种子质量信用卡），并妥善保管购种发票和种子包装袋，以备种子出问题时有据可查。 3.确保其品种特性和所种植区域自然条件相吻合 选择的品种要和自身的用种目的、栽培条件相匹配。不同品种的抗逆性、丰产性、成熟期、商品性等各不相同；不同使用者的用种目的、栽培条件、肥力条件、上下茬口安排、管理水平等也不尽相同。所以，在选种时，要根据自身条件和用种目的，结合品种的特征属性，有目的地选择品种。 4.善于分析种子的标签等信息 购种时要选择正规包装正规生产单位生产的原包装种子，包装物上印有醒目图案及文字说明，有的还有防伪标志。要注意查看稻种说明书或品种简介，内容包含适宜种植地域、特征特性、栽培措施等。还要注意查看包装是否规范，如所装数量、质量指标、生产商、经营许可证号码、产地及联系电话等明确标识。同时要注意查看种子包装袋上标注的种子生产日期，隔年生产的陈年种子不要买，没有注明生产日期的种子也不要买。诚邻粮食选用优质种子公司提供的高品质品种，比如稻花香2号选用的是稻花香之父“田永太”培育的种子，确
拟南芥培养Protocol
拟南芥培养Protocol 拟南芥生长的适宜温度白天为22℃-24℃,夜温最好比日温低2℃,适宜的湿度为60-70%,生长期适宜的光强为150μmol·s-1·m-2(6支36W日光灯下35cm处测得)。幼苗期不耐高光强,可适当遮荫.光质也较重要,应选用植物生长专用的日光灯(如荷兰产TLD型Philip豪华直管荧光灯).拟南芥在日照长于12小时下才会开花,一般拟南芥生长室的日照长度定于14-16h为佳 1.准备发苗培养基:1/2 MS,Sucrose:10g/L,pH5.7,agar:0.7-0.8%.灭菌后,在超净台上分装入培养皿. 2.种子消毒:种子放在1.5ml试管中, 加入1ml10%NaClo,混匀,消毒5min,用无菌水洗5次以上(用移液枪吸). 3.播种:用移液枪将种子吸到培养皿上,可多加些水,将种子铺均匀(不要太密,太密根缠在一起不好移苗),用移液枪吸干水,在超净台上让培养皿干了,密封盖子,4℃暗处理两天后,移到光照培养箱(22℃,光周期12h),若种子较密,则在光照培养箱中生长1周后即可移苗,否则根长太长后易缠在一起,但太小的苗移栽后,需适当遮荫.最好是在每皿<30株这样的密度下,让其生长两周后再移苗. 4.移苗:将蛭石与珍珠岩按(3:1)的比例混好,装入花盆,将花盆放入有水的塑料周转框中,框中的水就会通过花盆底部的孔渗上来,待花盆中的基质湿透后即可移苗.小心轻轻用镊子从培养皿中连根拉出小苗,把根平放在蛭石表面,用镊子把根轻轻压下.移苗结束后,用保鲜膜覆盖3-4天后揭膜.从苗期直至开花,可在塑料周转框中始终保持1-3cm的水层,在开始收籽期,不再需要过多的水分,可保持塑料周转框干燥,此时每隔2-3天浇一次水即可.整个生长期可浇3-4次拟南芥营养液. 5.收籽:在种荚变黄,变干时可以收籽.将种子抖落在纸上,用金属滤网过一下以除去杂质,将种子装入写了标记的小纸袋中,放于干燥的环境中让种子进一步干燥后,封存于1.5ml试管中.
拟南芥转化 浸花法
拟南芥转化—浸花法 实验步骤： 关键记录： a浸染的最好阶段是一个花盆里有20-30个花絮以及一些成熟的果夹，这些果夹浸染之前需要剪掉。 b/颠倒植株将植株浸入农杆菌细胞悬浮液10s。 c.塑料膜包裹保持黑暗高湿度16-24h。一周后可再次侵入农杆菌细胞悬浮液浸染。
d.移去塑料膜，让植株在温室中生长一个月。 e.干燥成熟的果夹用小袋套住。 f.筛选主要转基因植株在筛选培养基上。
说明： 如果转化实验要延迟或者构建没有准备好又或者想要植株有很多的花序，可以剪掉植株第一次的抽苔，使其长出更多的分支和花序，在剪去第一个抽苔的6-8天后，开始农杆菌悬浮液浸染。 如果希望增强营养来支持转化的细胞，同时又减少野生型种子（即增加转化效率）以及减少筛选主要转基因植株期间真菌病害。去掉用于转化植株上的果夹。 具体步骤： 1.已转化的农杆菌在含抗生素筛选培养基上长出单克隆，对鉴定后确定转化成功的单克隆于5ml液体YEP培养基（含抗生素）28℃活化培养16h。 2.取适量（1:50）活化培养的菌液于50ml液体YEP培养基（含抗生素）中28℃扩大培养6h。 注意：在此要鉴定是否为正确的转化农杆菌，酶切、PCR均可。确认后，为了下次转化浸染，可以在这一步将农杆菌甘油管-70℃保存或者将菌液密封保存于4℃,高达1个月。 3.将20ml农杆菌细胞悬浮液于4000g、10min室温离心，加入1倍体积的10mM MgCl2,5%蔗糖溶液（即100ml H2O中加MgCl2·6H2O 0.202g，蔗糖 5g）。 浸染前加表面活性剂使其终浓度为0.02%（20ml加4uL）。混匀，转移至50ml离心管。 注意：表面活性剂浓度过高有毒害。为了产生含两种独立载体的转化植株，我们要用两种农杆菌细胞，各含有一种载体，分别加入30mL 10mM MgCl2,5%蔗糖溶液，浸染前加入适量表面活性剂，将它们混合在一个大烧杯里。在双转化试验中我们至少要用48株植株。间隔7天进行第二次浸染植株。 小心：戴手套及口罩防止表面活性剂的毒害。 4.浸染时将农杆菌悬浮液倒满50mL离心管的小盖子，将拟南芥横放使花序浸入小盖子中的悬浮液10s，轻微晃动小盖，20ml农杆菌悬浮液至少有效用于转化30株拟南芥， 150个花序以上，这一步骤要保证能在植株上看到菌液。 注意：确定所有花盆都已浸染，有时很有必要浸染整个植株确保浸染更短更多的花芽。将过多的农杆菌液移除也很重要。否则长时间
拟南芥Arabidopsis
拟南芥的基础探索 生科二班 李俊龙 20131678 一、拟南芥属的种类及分布 拟南芥属拥有众多种类，包括拟南芥、大夏拟南芥、短茎拟南芥、毛果拟南芥、柔拟南芥、直立拟南芥、西藏拟南芥等等。 这里就不介绍世界范围拟南芥属的分布了，下图标出了中国国内拟南芥属的分布[1]。 二、拟南芥的形态 拟南芥Arabidopsis （L.） Heynh ，拟南芥属，十字花科，白花菜目。双子叶植株，叶片互生，总状花序，花萼、花瓣各4片，雄蕊6枚，4长2短，子房 有两层心皮，中间是假隔膜，高度只有3Ocm 左右[2]。 拟南芥 拟南芥花样 拟南芥果实
三、拟南芥的培育 拟南芥生长的适宜温度白天为22℃-24℃,夜温最好比日温低2℃,适宜的湿度为60-70%,生长期适宜的光强为150μmol·s-1·m-2.拟南芥在日照长于12小时下才会开花,一般拟南芥生长室的日照长度定于14-16h为佳。 1．准备发苗培养基: 1/2 MS,Sucrose:10g/L,pH5.7,agar:0.7-0.8%.灭菌后,在超净台上分装入培养皿. 2．种子消毒有两种方法： 一种是湿法NaClO水溶液消毒:种子放在 1.5ml试管中, 加入1ml10%NaClo,混匀,消毒5min,用无菌水洗5次以上(用移液枪吸)，湿法消毒后的种子要马上播；另一种是干法8%NaClO 酒精溶液，此时需用95%的酒精来配制8%NaClO 酒精溶液。在8%NaClO 酒精溶液中消毒6-8min。然后用无水酒精洗种子5次以上，吸干无水酒精后，在超净工作台上吹干透后再密闭保存。 3．播种： 对湿法NaClO水溶液消毒种子用移液枪将种子吸到培养皿上,可多加些水,将种子铺均匀(不要太密,太密根缠在一起不好移苗),用移液枪吸干水,在超净台上让培养皿干了；对干法消毒的种子，用无菌牙签将种子点播到培养基上。用Parafilm密封盖子后,请用牙签或镊子在上下两处各打4个小孔以通气。最好是在每皿<30株这样的密度下,让其生长两周后再移苗. 4.移苗及后续管理: 如果培养基质用花泥，将花泥装入花盆,将花盆放入有水的塑料周转框中,框中的水就会通过花盆底部的孔渗上来,待花盆中的基质湿透后即可移苗.小心轻轻用镊子从培养皿中连根取出小苗,把苗种入花泥中.移苗结束后,用保鲜膜覆盖1-2天后揭膜，如果苗很弱，则在此基础上还需多覆盖1天.在花泥中种植时，苗期不需要添加营养液，开始抽苔时请及时添加营养液，一般需要添加2次，每次加入1升拟南芥营养液，2次添加最好间隔一段生长时期（7-10天），由于花泥有较好的吸附缓释能力，对间隔时间长短没有严格要求。如果盆栽密度较大或框中花盆数量较多则需要多加一次营养液。对于花泥种植来说，不要在塑料周转框中始终保持水层,一次吸足水分后，可以隔4-6天后再加水让其吸足水分，在开始收籽期,不再需要过多的水分,可保持塑料周转框干燥,此时每隔7-10天加一次水即可. 5．收籽: 在种荚变黄,变干时可以收籽.将种子抖落在纸上,用金属滤网过一下以除去杂质,将种子装入写了标记的小纸袋中,放于干燥的环境中让种子进一步干燥后,封存于1.5ml试管中，切记越干越好，长期保存的种子必需要干燥保存到4℃[3]。 拟南芥作为一种模式植物，它的研究将会对植物界乃至生物界都将产生很大程度的影响。 参考文献 [1]《石河子大学学报（自然科学版）》2001期02版王绍明李学禹 [2]《拟南芥》2004.6 曹仪植 [3]《植物学通报》2004年02期李俊华张艳春徐云远种康王辉
拟南芥种植手册_tair
HANDLING ARABIDOPSIS PLANTS AND SEEDS Methods used by the Arabidopsis Biological Resource Center GROWTH OF PLANTS Growth of plants in sterile conditions Growth of plants on soil ?Planting on soil ?Growth conditions ?Control of pests ?Plant isolation and harvesting SEED HANDLING AND PRESERVATION Threshing Seed drying Seed moisture content determination Seed packaging for storage Seed storage and preservation Seed viability The methods used by the ABRC for handling plants and seeds are outlined below. These procedures are designed to generate healthy plants that give maximum set of pure seeds and to preserve these in the safest and most convenient manner. Many other approaches may be equally as good, especially in specific experimental situations. GROWTH OF PLANTS Arabidopsis can be grown in a variety of environmental settings including growth rooms, window ledges, outdoors, growth chambers and greenhouses. Peat moss-based mixes, commercial greenhouse mixes, relatively inert media watered with nutrient solutions, and defined agar media can all be employed as plant substrates. Our focus will be on growth of plants on agar and soil in growth chambers and greenhouses. The plant and seed management methods are discussed in the chronological order in which they would normally be utilized. Growth of plants in sterile conditions It is necessary to use sterile conditions to grow Arabidopsis for specific experiments such as selection of transformed plants, drug resistant plants, early root and shoot phenotypes, lethal mutants, etc. Otherwise, contaminants can essentially take over plant cultures. Various shapes and sizes of containers such as petri dishes, 'Magenta' boxes, or culture tubes can be used, depending on the required length of the growing time (2-3 weeks or to maturation) and characterization of phenotypes (shoot or roots). We will emphasize the
拟南芥原生质体的提取和转化
拟南芥原生质体的提取和转化 (1)取4周后抽薹前的叶片，切成1mm宽的长条，置于甘露醇溶液（称1.82g D-甘露醇于 20ml双蒸水中）；共需叶片约90片； (2)将步骤1中细条捞出，置于酶解液中；避光，23℃,40-50rpm摇床上酶解3小时； (3)酶解液过100-200目的筛子，收集滤液，置于15ml离心管中，均分为两管；于4℃， 60g，离心15min； (4)原生质体用冰冷W5溶液轻柔洗涤，每管4ml；4℃，100g，离心1min； (5)弃上清，沉淀用冰冷的W5溶液轻柔悬浮，每管4ml；冰上放置30min； (6)23℃，100 g离心1min；弃上清，每管沉淀用0.5ml MaMg重悬； 以下操作均在23℃下进行： (7)取约10-20ug 质粒于1.5ml EP管中，加100ul 步骤6中的原生质体；用200ul 枪头（剪 去前端）轻柔混匀； (8)加入110ul PEG/Ca 溶液，轻柔混匀；放置20-30min； (9)加入0.44ml W5 溶液，来回颠倒混匀；23℃，100 g，1min，brake 设为4-5； (10)弃上清，加100ul W5，混匀；加900ul W5，混匀； (11)上述混合液体置于六孔板内，23℃，避光，孵育6-18小时。 (1)酶解液： cellulose R10 15% Macerozyme R10 0.3% Mannitol 1.09g KCl 0.3M MES 0.3M 调节pH值到5.7，55℃加热10min，冷却到室温再加入下列溶液 CaCl20.15M β-巯基乙醇0.75mM (2)PEG溶液（40%，v/v） PEG4000 1g 0.8M Mannitol 0.625ml 1M CaCl2 0.25m (3)W5溶液