植物组织培养实验报告

植物组织培养实验课题：不同激素组合培养基对菘蓝叶片植株再生的影响

姓名：吴楠

学号：20126197

专业年级：生技12-1

不同激素组合培养基对菘蓝叶片植株再生影响

摘要：本实验依次进行了培养基母液的配置、不同激素组合培养基的配置、培养基的分装与灭菌、不同激素组合培养基对菘蓝叶片植株再生的影响。

旨在掌握不同培养基母液的配置方法、培养基的灭菌操作、超净台操作和接种的操作。通过不同激素组合培养基对菘蓝叶片植株再生的对照实验，了解不同激素对植株再生不定芽、不定根以及生长状况的情况，探究不同激素组合的培养基对植株再生的效果。

结果证明2,4-D抑制不定芽的形成，6-BA与NAA配比越高，越有利于诱导愈伤组织的形成。

关键词: 菘蓝叶片；培养基；灭菌；无菌植株；愈伤组织；0.1%HgCI

前言：植物组织培养是指以植物组织或细胞立体操作为基础的实验性学科，又称植物离体培养。它是指在无菌和人工控制的条件下，利用适合的培养基，对植物的器官、组织、细胞或原生质体进行精细操作和培养，使其按人们的意愿生长、增殖、或者再生的一门生物技术学科。[1]

人工控制的条件指营养条件和环境条件；植物体的任伺一部分是指根、茎、叶、花、果以及它们的组织切片和细胞。植物组织培养可以在不受其他部分干扰的情况下研究被培养部分的生长和分化规律。组培实验取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制。

植物组织培养的理论基础是植物细胞的全能性。植物体的每个细胞都具有该物种的全部遗传信息，在离体培养条件下能经过脱分化形成胚性细胞或愈伤组织，并经过再分化发育成完整的植株个体。[2]

对培养基和器皿的彻底灭菌及正确的无菌操作是防止染菌、保证组培材料正常生长及分化的关键，是植物组织培养工作中最基本，也是最重要的技术。

1. 材料与方法

1.1材料与试剂：菘蓝叶片培养基母液

1.2 方法：

1.2.1 植物器官的前处理剪取生长正常的菘蓝叶片3-4cm，用纱布包好，置

流水下冲洗20-30min。在已灭菌的超净工作台中，用75%的酒精消毒10s，无菌

水水漂洗3次；再用0.1%升汞进行消毒10min，每隔1分钟轻轻震荡一次，再用

无菌水漂洗4次，消毒完成后用将材料放在已消毒的无菌皿上待用。[3] 1.2.2培养基的制备 1.2.2.1 母液的配制与保存

（1）实验试剂 NH 4NO 3 ,KNO 3 ,KH 2PO 4 ,CaCl 2·2H 2O ,MgSO 4·7H 2O,FeSO 4·7H 2O Na 2-EDTA,MnSO 4·4H 2O,ZnSO 4·7H 2O,H 3BO 3,KI,Na 2MoO 4·2H 2O ，CuSO 4·5H 2O,CoCl 2·6H 2O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸、蒸馏水。

（2）实验用品 电子天平，烧杯（50ml 、100ml 、500ml 、1000ml ）量筒（1000ml 、100ml 、25ml ），容量瓶(1000ml 、500ml 、100ml)，试剂瓶，玻璃棒数支，药芍，称量纸等。

（3）不同培养基配置[4]

表1 MS 培养基大量元素母液的配置

序号 培养基

扩大倍数

母液

成分 浓度（mg/L ） 称量 体积（L ） 浓度（mg/L ）

表2 MS 培养基微量元素母液的配置

序号 培养基

扩大倍数

母液 成分 浓度（mg/L ）

称量 体积（L ） 浓度（mg/L ）

表3 MS 培养基铁盐母液的配置

序号 培养基

扩大倍数

母液

成分 浓度（mg/L ） 称量 体积（L ） 浓度（mg/L ）

表4 MS 培养基有机物母液的配置

序号 培养基

扩大倍数

母液

成分 浓度（mg/L ） 称量 体积（L ） 浓度（mg/L ）

1.2.2.2 培养基的制备与灭菌

(1).试剂：琼脂，蔗糖，蒸馏水，1mol/L NaOH,各类母液和不同激素。

(2).仪器设备：电子天平，烧杯，量筒，移液管，玻璃棒，药芍，称量纸，PH 试纸，锥形瓶瓶等。

(3)不同激素组合培养基的配置： 1.MS+6-BA2.0+NAA0.1mg/L

2.MS+6-BA2.0+NAA0.5

3.MS+2,4D1.0+KT0.5

4.MS+2,4D2.0+KT0.5

（4）方法

a.将所需的各种母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿放在指定位置

b.各组取50ml烧杯一个，将大量、有机、肌醇、镁盐，钙盐、按配方表中的用量依次称取并倒入烧杯中。

c.各组取50ml烧杯一个，将微量和铁盐按配方表中的用量称取并倒入烧杯中。

d.取瓷杯一个，加入300ml蒸馏水，置于电磁炉上加热，称量琼脂6克，白砂糖 40 克，依次倒入瓷盆中，待琼脂和白砂糖完全溶解后，将称量好的所有母液倒入瓷盆中，用玻璃棒不断搅拌，并定容至 1 L。

e.调PH值。

f.把培养基分装到广口瓶中，用塑料纸扎好，待灭菌。

g.培养基灭菌。

1.3无菌植株建立(接种)

(1)实验材料、试剂和仪器设备

超净工作台、培养基，大号镊子，剪刀，酒精灯，喷雾器

(2)实验步骤

首先对菘蓝幼嫩叶片进行活体消毒：自来水洗30min（在超净工作台外进行），接着

a.准备打开超净工作台，用紫外灯烧2h,关闭紫外灯，将灭菌溶液，无菌水，菘蓝叶片，大烧杯等放入超净工作台，在台上点燃2个酒精灯。

b.灭菌在超净工作台上取经浸泡处理的植物器官，先用95%酒精清洗3次，用