HIV感染的实验室诊断研究进展_张京海

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(2006-12-25收稿)

H I V感染的实验室诊断研究进展

(文献综述)

济南军区总医院实验诊断科(250031) 张京海　李继霞　陈世敏　杨道理

获得性免疫缺陷综合征(Acquired i m munodeficiency syn2 dr ome),简称艾滋病(A I D S)。是由人类免疫缺陷病毒(H I V)感染引起的一种全身性疾病。自首例病例发现以来,在短短的二十几年间,全球已有4000万人感染H I V,其中300万人被艾滋病夺去生命[1]。我国自1985年发现首例艾滋病病例后,A I D S的流行也呈加速发展趋势。据报道[2～3],我国H I V 感染已近100万人,若不采取有效控制措施,到2010年我国H I V感染将达到1000万人,形势十分严峻[4～6]。H I V感染的实验室诊断是艾滋病预防控制工作的重要组成部分,只有发现传染源才能有效控制艾滋病的传播。

H I V感染的实验室诊断包括病原学诊断和血清学检测,前者包括病毒分离培养,病毒抗原检测,病毒核酸检测等。后者主要是检测人体血清中的特异性抗体。本文就近几年来H I V感染的实验室诊断研究进展作一综述。

1　H I V抗体检测技术

H I V抗体检测分为初筛实验和确认实验,前者包括酶联免疫吸附试验(E L I S A)、凝胶颗粒凝集实验(P A)、乳胶凝集实验(LA)、放射免疫分析和各种快速检测试验等。后者包括免疫印迹法(WB)、免疫荧光法(I F A)、条带免疫实验(L I A)和放射免疫沉淀实验(KI P A)等。

111　酶联免疫吸附实验　E L I S A是最常用的H I V抗体检测方法。它具有准确性高、价格低廉、判断结果有客观指标、结果便于纪录和保存等优点,适合大批标本检测,是献血员筛选、新兵入伍查体和临床诊断最常用的方法。其试剂经过了第一代、第二代和第三代,现已发展到第四代检测试剂[7～9]。1985年美国F DA批准使用了第一代E L I S A检测试剂。该试剂使用的抗原是完整的病毒裂解产物。这种抗原由于含有宿主细胞的成分而常常出现假阳性。为了提高特异性而稀释标本又使试剂的敏感性有所下降。同时这种抗原制备和纯化都比较困难,实验室感染危险性比较大。

1990年第二代试剂使用了重组或合成多肽的H I V抗原包被反应板,抗原组成一般包括p24、gp36、gp41、gp120等,能同时检测H I V-1、H I V-2型。第二代试剂由于选择了与免疫反应有重要相关的抗原决定簇,因此特异性较第一代试剂有了较大提高。1992年美国研制出第三代H I V诊断试剂,是用重组和合成多肽抗原制备的双抗原夹心法。这种试剂可以检测到针对H I V抗原的所有抗体亚类,包括I gG、I g A、I g M、I g D、I gE。同时不需将标本过度稀释来保证特异性,因而具有较高的敏感性。为了缩短窗口期,减少急性感染者窗口期漏检,以达到早期诊断的目的,又发展了能同时检测H I V抗体和H I V-1p24抗原的试剂,即所谓第四代诊断试剂。窗口期是指从H I V感染到血清阳转前的一段时间,这段时间通常不能在感染者体内检测到H I V特异性抗体。窗口期长短因病毒的致病性和宿主的免疫应答不同而异。

机体在感染了H I V以后,p24抗原是最早能在血清中检出的免疫标志物。一般感染后(2～3)周即可在病人的血清中检出。与第三代试剂相比,第四代试剂可提前(1～2)周作出实验诊断[10],第四代试剂已由法国、荷兰等国研制成功,并已在欧洲注册登记。但S peers[11]等比较了第三代和第四代试剂发现第四代试剂出现了“第二窗口期”,其原因是p24抗原水平下降一段时间后,抗体的量才上升到检测水平上。这段时间内即检测不到p24抗原也检测不到H I V抗体,因此称为“第二窗口期”,尽管这种情况并不多见,但也提示我们应注意“第二窗口期存在”。我国国产H I V E L I S A试剂起步较晚但发展较快[12]。目前国内各实验室所用的E L I S A试剂多为第三代试剂。近年来国内有的学者[13]也在着力研究能同时检测H I V-1、H I V-2抗体及p24抗原的快速诊断试剂。112　明胶颗粒凝集实验　它是通过包被H I V抗原的颗粒凝集来检测抗体的存在。标本中的抗体与颗粒载体上的H I V 抗原结合带动载体颗粒的凝集,出现肉眼可见的凝集现象。P A是一种快速简便的筛查实验,整个过程不需洗涤,不用任何仪器,一般(10～60)m in就会得到结果,很适合少量标本检测。但由于其灵敏度和特异性不及E L I S A,故不宜献血员

和大规模常规检测。

113　金标快速反应试剂　它是将颗粒凝集法的简便性和酶免疫测定(E I A)技术相结合。只需一步操作就能检测H I V 抗体。将抗原和信号试剂都固定在硝酸纤维膜上,将标本加在吸收垫上,与信号试剂结合以后,通过膜的迁移阳性标本在固定的部位出现肉眼可见的线条。可在不同的部位固定不同的抗原。可以区分H I V-I M群,O群和H I V-2的抗体。检测人I gG的控制线通常加在H I V抗体线的上部,出现检测线和控制线为阳性,只出现控制线显示为阴性,没有控制线出现结果不成立。快速检测多不需额外的试剂,15m in 内可得出结果。可检测血及尿等标本。快速法操作简便且不需特殊仪器,在操作正确的前提下可以得到与E L I S A同样正确结果。特别是适合急诊室、解剖室、殡仪馆以及意外暴露时追踪传染源等情况下使用。对于没有稳定用电保证的农村偏远山区,技术人员培训较低的情况下也较为实用[14]。114　免疫印迹试验　WB广泛用于许多传播性疾病的诊断实验。就H I V的病原学诊断而言,它是首选用以H I V抗体感染的确认实验方法。WB的检测结果常常被作为鉴别其它检测方法优劣的“金标准”。WB的敏感性一般不低于初筛实验,但它的特异性很高。这主要基于H I V不同抗原组分的分离以及浓缩和纯化。能够检测针对不同抗原成分的抗体。因而能够用WB方法鉴别初筛实验的假阳性结果。WB的原理是将H I V病毒蛋白通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电冰(S DS-P AGE),把分子量大小不等的蛋白带区分开来,再把这些已经分离的不同蛋白抗原转移到硝酸纤维膜上,将此膜切割成条状,每一条硝酸纤维素薄膜上均含有经电泳分离过的H I V病毒抗原。将待测血清样本用稀释液稀释成1:50或1:100,把它直接加到硝酸纤维膜上,恒温摇床震荡孵育使其充分接触反应。洗涤去除未结合的血清蛋白,然后加入酶(辣根过氧化物酶)标记的抗人免疫球蛋白与随后加入的底物反应,在条膜上结合的抗原抗体复合物的部分发生不溶性的显色反应,形成肉眼可见的条带,根据出现条带的情况判断结果。

WB方法因为其良好的特异性,至今在世界许多国家被认为是筛查确认H I V感染的“金标准”。世界各国对免疫印迹试验结果的判定标准不完全相同,但是一般都要求出现至少一条env带。目前世界各国大多采用美国C DC的标准,见表1[15]。

表1　H I V抗体WB实验的阳性判定标准

美国CDC

美国FDA

WHO

泛美卫生组织

美国红十字会

德国Faul Ehrlich研究院中国gp41、gp120/gp160、p24中的任意两条带p24、p31、gp41、gp120/gp160之中任意一条两条env带,也可能存在gag或pol带p24或p31中的一条,并有一条env带Gap、pol和env各有一条

有两条带,其中一条必须是env带

两条env带,或一条env带加一条p24带

115　尿液中H I V抗体检测[16]　由于尿液标本收集容易、无创伤、安全、便捷等方面更具优势,尿液检测已成为艾滋病检测的一种全新方法,并得到世界艾滋病预防中心的大力推荐。1996年美国F DA批准了首个E L I S A检测的试剂盒。原理是以重组gp160包膜蛋白包被反应板来检测H I V抗体。但同时指出由于检测准确性不如标准的血清样品,因而只能作为辅助诊断工具。Desal S[17]等研究了140份尿液和血浆配对样品的E L I S A检测结果,与血浆样品的结果相比尿液E L I S A检测的敏感性和特异性分别达到99%(87/88)和90%(47/52)。尿液中的H I V抗体同样可以用于WB检出。Tiensi w akul P[18]研究了84份尿液和血浆配对样品的WB检测结果,与血浆样品的结果相比,尿液WB检测的敏感性和特异性分别达到了9717%(43/44)和100%(40/40)。我国在一项尿液评价实验中,Calyp te T M尿液试剂盒E L I S A的灵敏度达100%,特异性达9911%[19]。但是这一试剂目前仅能检测H I V-Ⅰ抗体,客观存在H I V-Ⅱ漏检,而且也无尿液WB试剂盒,阳性标本还需抽血做WB确认实验才能得到准确结果,故其在临床上的应用性还需进一步探讨。

116　放射免疫沉淀试验　R I P A是将放射性同位素标记的氨基酸加到感染的细胞培养基中。随着病毒的复制这些标记的氨基酸就进入病毒蛋白中。收集含有同位素的病毒颗粒,用除垢剂将细胞溶解,再用抗I gG A蛋白琼脂糖去除有反应的细胞抗原。将所得上清液(含有病毒蛋白)与待测血清混合,若有H I V抗体则同位素标记的H I V抗原与之结合形成沉淀。用S DS-P AGE电泳将沉淀物中的病毒蛋白按照分子量大小分离开来,并与已知的分子量比较。用这种方法可以将H I V的160、120、66、55、41、31、24和17Kda的蛋白抗体检测出来。这是目前最具敏感性和特异性的H I V检测方法。R I P A可以与WB联合应用,也可单独作为一种确认实验。但这种方法费时多,费用高,技术难度大且使用同位素,一般仅用于研究而不做实验室常规使用。

2　H I V抗原检测

H I V抗原的检测是指核心蛋白p24。p24抗原出现于感染的早期,可以作为早期辅助诊断H I V的一种方法[20]。美国1995年规定对献血员和血液制品必须进行p24抗原检测。以作为对抗-H I V检测的补充。在试剂方面多数厂家采用E L I S A双抗体夹心法。阳性结果再作中和实验加以确认。其原理是将特异性抗原的单克隆抗体包被在固相载体上作为捕获抗体,如果标本中含有p24抗原,它将与固相载体上的p24抗体结合,洗涤后形成“p24抗体-p24抗原-酶标p24抗体”复合物。加入底物后发生显色反应。检测临界值计算出结果。p24抗原的检测能够在病毒开始复制后检测到血清中的可溶性p24抗原。但有时出现假阳性结果,这可能是因为某些物质的干扰和抗体形成复合物的影响。因此阳性结果必须经过中和实验确认[3,21]。此外H I V-1p24抗原检测阴性只表示在本实验无反应,不能排除H I V感染。

3　病毒学检测

从H I V感染的细胞、组织和体液分离出病毒是确定H I V 感染最可靠的实验诊断。但由于病毒分离培养的敏感性不高,通常难以培养或培养时间较长,而且H I V病毒培养费时费力,危险性大,需要在生物安全三级(BS L-3)实验室内操作。这些都是限制并影响该项技术常规应用的障碍。因此

近些年来进展最快的是利用分子生物学方法进行病毒检测。311　PCR技术[21～22]　自发明了聚合酶链反应(PCR)以来,人们就试图应用PCR技术检测H I V。目前有检测试剂盒通过扩增H I V-1病毒基因gap区上的特异性RNA片段检测H I V,可用于早期诊断H I V病毒感染以及确认可疑病人和新生儿感染情况的检测。然而由于PCR方法本身敏感性极高,实验中需要开盖取样电泳,很容易导致“误诊”出现假阳性结果。另外,H I V基因的多样性,没有一套引物可以覆盖所有H I V序列,使检测的敏感性又受到影响,成为限制PCR 常规应用的重要原因。近年开展的全自动PCR检测技术是将PCR扩增反应和检测限制在单个反应管中进行,避免了在开放环境中对产物进行操作,因此大大减少了污染机会。同时最初的手工PCR的敏感性为200拷贝/m l,使用自动化后达到了50拷贝/m l,特异性为9916%,并可以对H I V-Ⅰ和H I V-Ⅱ的多个亚型做特异性的定量检测。

最近荧光实时PCR检测技术的应用,使PCR的发展进入一个新的阶段[22],它改变了传统的电泳终点检测(end point)。荧光实时PCR可进行实时(real ti m e)检测。也可以进行实时监控,得到相应的S扩增曲线,不但可以进行定性检测还可进行定量检测。样品中的待测DNA或RNA拷贝数越高,则S型扩增曲线出现越早。若有已知拷贝数的标准品,则可以得到未知样品的拷贝数。美国PE公司于1996年开始的Taq man[23]技术,已广泛应用于基因检测。

荧光实时PCR检测技术的应用,使得血浆病毒载量的检测方法在原来的RT-PCR、分支DNA技术(b DNA)、核酸序列扩增系统(NAS BA)基础上又增加了一种新的方法。该方法可以检测血浆病毒载量,也可以检测血浆中单个核细胞的前病毒载量。一般说来前病毒载量与血浆病毒载量是平行的且具有相关性,但是经过高效抗逆转录病毒(HAART)治疗后血浆病毒载量可能检测不到。前病毒载量应该成为一个评价HAAPT疗法的指标。目前我国的荧光PCR检测技术发展很快[24],我国在2002年4月由国家药品监督管理局(S DA)批准了第一个H I V荧光PCR检测试剂盒,是由深圳匹基公司生产的。

312　H I V基因芯片　基因芯片技术是近些年来发展起来的新兴的生物技术,它是将许多特定的寡核苷酸片断作为探针,有规律的排列于固相支持物上,然后与检测标准品的基因进行杂交,再通过激光共聚焦荧光检测系统等对芯片进行扫描。并配以计算机系统对每一探针上的荧光便于做出比较和检测,从而得出所要的信息。

H I V病毒的基因芯片将PCR技术与核酸分子杂交完美结合,通过对H I V基因组分析,将该病毒的高度保守序列作为鉴定指标,可以直接对病毒病原体进行检测,极大提高了诊断的准确性,Kozal[25]等研制出一种DNA芯片技术,对H I V-Ⅰ逆转录酶及蛋白酶的基因突变进行筛选,并能监测疾病相关基因型以及监控患者在治疗中的反应。1998年Hauser[26]等应用DNA芯片技术在艾滋病患者出现抗体反应前监测H I V,对艾滋病的早期诊断有十分重要的意义。

综上所述,国内外近几年在H I V感染实验室诊断方面有很大进展,其第四代试剂已研制成功,在缩短窗口期,提高监测敏感性方面具有良好的应用前景。分子生物技术作为H I V检测技术的一个新实验正处于研究实验阶段,虽存在一些问题但在H I V检测方面相对血清学技术具有一定的优越性。H I V基因芯片技术作为PCR技术后的又一次革命性技术突破,将会给H I V检测带来一个新的发展方向。我们相信H I V实验室诊断正朝着快速、敏感、准确、自动化方向发展,在不久的将来一定会有更多的新技术应用到这一领域。

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(2006-12-07收稿)

?论　著?

AFP联合CA199检测对原发性肝癌的诊断价值

及对三维适形放疗的疗效判断

上海东方肝胆外科医院(200438) 董　芸　孟　岩　赵丽华

摘要　目的:通过联合检测血清中AFP及C A199的含量,观察其对原发性肝癌(P LC)的临床诊断及疗效

观察的价值。方法:85例P LC患者、42例肝良性疾病患者血清样品用电化学发光免疫法测定AFP及C A199的

含量。结果:与良性肝病相比,P LC患者血清AFP及C A199含量明显升高(P﹤0.01),两项标志物阳性检出率

分别为81.2%和53.0%,两者联检阳性率为88.8%。P LC患者血清AFP、C A199含量在治疗后与治疗前相比,

有显著性差异(P﹤0.05)。结论:AFP及C A199测定对肝肿瘤的良恶性辅助诊断具有一定的应用价值,联检

不仅可以提高P LC的阳性诊断率,对P LC的三维适形疗效监测也具有重要价值。

关键词　原发性肝癌　甲胎蛋白　糖类抗原CA199　三维适形放疗

D ynam i c M e a su rem e n t o f S e rum AFP a nd CA199Co n te n ts fo r D i a gno s is a nd

A s se s sm e n t o f Effi ca cy o f Lo ca l R a d i o the rap y i n P a ti e n ts w ith P ri m a ry L i ve r C a nce r

Dong Yun,M eng Yan,Zhao L ihua

D epart m ent of Radiation O ncology,Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital,

Second M ilitary M edical U niversity,Shanghai(200438),China

Ab s trac t　O b j e c ti ve　To investigate the usefulness of dyna m ic combined measure ment of seru m AFP and CA199contents in di2 agnosis and treat m ent efficacy assess ment in patients with p ri m ary liver carcinoma.M e tho d s　Seru m AFP and CA199contents were measured with CL I A in85patients with p ri m ary liver cancer both bef ore and after3-di m ensi onal conf or mal l ocal radi otherapy,42pa2 tients with benign hepatic dis orders and52contr ols.R e su lts　Seru m AFP and CA199contents in patients with p ri m ary hepatic cancer were significantly higher than those in patients with benign hepatic dis orders and contr ols(P<0.01).The diagnostic sensitivity of AFP and C A199for liver cancer was81.2%and53.0%res pectively,with88.8%f or combined deter m inati on of the t w o markers.I n the cancer patients,the concentrati ons of the markers dr opped significantly after radi otherapy(P<0.05).Co nc l u si o n　Combined deter m inati on of seru m AFP and CA199contents would increase the diagnostic senitivity f or p ri m ary liver cancer and was als o valuable for assess ment of the therapeatic result of l ocal radi otherapy.

Ke y W o rd s　p ri m ary liver cancer,AFP,C A199,three-di m ensi onal conf or mal radiati on

原发性肝癌(P LC)是当今世界上最常见的恶性肿瘤之一,预后差,在诊断后的五年存活率还不到5%。由于缺乏足够的高特异性和高敏感性的生物学标志物,因此肝细胞癌的早期诊断相当困难,我们对85例P LC及42例良性肝病患者进行血清AFP及CA199检测,以52例正常人血清做对照,探讨2项肿瘤标志物对P LC的诊断价值。

1　材料和方法

(工作规范)湖北省艾滋病检测实验室管理及资质认定工作规范

1 目的为规范我省艾滋病检测实验室资质认定评审工作，明确资质认定的范围和形式；保证资质认定工作规范及评审结果客观、公正和准确，提高省艾滋病检测实验室管理工作质量，特制定本规程。 2 范围本规程适用于湖北省艾滋病检测实验室资质认定工作，可供全省各级验收工作组相关工作人员和评审员使用。也可供各类艾滋病检测实验室在申请资质认定准备工作和日常管理中参考。 3引用文件及技术资料 1)《全国艾滋病检测工作管理办法》 2)《湖北省艾滋病检测工作管理实施办法》 3)《全国艾滋病检测技术规范》（2004年版） 4)《实验室生物安全通用要求（GB 19489－2004）》 5)《实验室资质认定评审准则》 6)《医学实验室质量和能力认可准则（CNAS-CL02:2006/ISO 15189:2007）》 7)《省疾病预防控制中心关于下发<湖北省艾滋病检测实验室相关操作规程及检测工作记录（试行）>的通知》 4 艾滋病检测实验室的类型：分为艾滋病检测确证实验室和艾滋病检测筛查实验室两类，后者包括艾滋病筛查中心实验室、艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点三种。

5 组织管理 5.1湖北省卫生厅是全省艾滋病检测实验室管理资质认定的主管部门，负责全省艾滋病检测实验室的监督管理和发证工作。 5.2各级验收工作组 5.2.1省艾滋病检测实验室验收工作组（以下简称“省验收工作组”）设在省疾病预防控制中心质量技术管理办公室，负责受理全省艾滋病确证实验室、市州级疾病预防控制机构筛查中心实验室的申请、资料审核和安排初审，对已完成初审的初筛实验室安排现场评审。 5.2.2市、州卫生行政部门应成立市级艾滋病检测实验室验收工作组（以下简称“市级验收工作组”）负责受理本辖区艾滋病筛查实验室的申请、资料审核和安排初审，对已完成初审的艾滋病检测点安排现场评审。 5.2.3 县(市、区)卫生行政部门应成立县级艾滋病检测实验室验收工作组（以下简称“县级验收工作组”），负责受理辖区内艾滋病检测点的申请、资料审核和安排初审。 5.3 评审组 5.3.1 评审员管理 5.3.1 评审员的基本条件：从事艾滋病相关管理人员；从事与艾滋病检测相关的技术人员；大专以上学历或中级以上技术职称；热爱艾滋病检测实验室管理工作；卫生行政主管部门审核并经培训考核合格者。 5.3.2 评审员的基本素质要求 5.3.2.1 熟悉《全国艾滋病检测工作管理办法》、《省艾滋病检测工作管理实施办法》、《全国艾滋病检测技术规范》（2004年版）、《实验室生物安

HIV初筛实验室相关工作制度样本

HIV初筛实验室工作制度 1、本实验操作人员必要经省艾滋病初检技术培训学习合格后方可持证上岗。 2、严格遵守样本采集、保存制度；样品运送解决制度；遵守实验室操作、检验成果报告解决和保密、实验室污染物废弃物以及工作人员防护消毒隔离制度。 3、积极参加上级实验室业务培训和技术考核。 4、必要参加省临检中心室间质量评价工作。 5、未尽事宜按科室实验室按科室工作制度和有关管理条例执行。

HIV抗体检测程序及其流程 1、血液标本验收合格后，用初筛试剂进行检测，如呈阴性反映，则作HIV抗体阴性报告； 2、初筛检测成果呈阳性反映标本，须进行重复检测。复检时用两种不同初筛检测试剂复测； 3、如两种试剂复检成果均呈阴性反映，则作HIV抗体阴性报告；如均呈阳性反映，或有一份阳性，该标本需送上级实验室加以进一步证明。送检时应将重新采集该受检者血液标本和原有血液标本一并送检。 4、检测成果鉴定和解决对HIV抗体阳性者应做好征询、保密和报告工作。对HIV抗体阴性者，如近期有高危行为如性乱史、吸毒史、受血史，或有急性流感样症状等状况，为排除窗口期也许，建议每3个月复查一次，持续2次。对HIV抗体可疑对象要做好征询和随访工作。5、、反馈与报告程序（一）初筛检测中发现HIV抗体阳性反映标本，应尽快(城区普通规定在48小时内，农村规定在96小时内)将血样连同原始实验资料（涉及厂家批号、试剂种类、有效期，如ELISA实验应附上阴性、阳性对照值，Cut off值及样品OD值）和送检化验单送卫生行政部门指定初筛中心实验室，再转送确认实验室，或直接送至HIV抗体确认实验室。送检化验单必要由初筛实验室一名直接实验操作人员和一名中级技术职称以上负责人员签名。初筛实验室不得向受检者宣布初检阳性反映成果；（二）做好标本收集与检测登记工作，每月5日按统一表格向卫生行政部门指定HIV抗体初筛中心实验室报告检测状况，如无HIV抗体中心实验室，则直接向省级HIV抗体确认中心报告。

HIV实验室ELISA检测方法

人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法） 1 试剂信息试剂厂家：北京万泰生物药业股份有限公司 2 样本要求 2.1 本试剂使用样品为人血清或血浆，含有EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。 2.2 不能检测含悬浮纤维蛋白或聚集物，重度溶血的样品。 2.3 样品中应无微生物，可在2-8℃储存1周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。 2.4 使用前请将样品室温平衡30分钟以上，冷冻样品实验前需混匀。 3 检测步骤 3.1 配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。 3.2 编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照1型、2型各1孔、空白对照1孔。 3.3 加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照100μL。 3.4 温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育60±2分钟。 3.5 洗板：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。 3.6 加酶：每孔加入酶标试剂100μL，空白孔除外。 3.7 温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育60±2分钟。 3.8 洗板：操作同步骤5。 3.9 显色：每孔加入显色剂A、B液各50μL，轻轻震荡混匀，37±1℃避光显色30±1分钟。 3.10 测定：每孔加入终止液50μL，轻轻振荡混匀，10分钟内测定结果。 4 参考值临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照A均值+0.12. 5 检验结果的解释 5.1 阴性对照孔A值≦0.10，阳性对照A值≧0.80，否则试验无效。 5.2 若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃，若两孔或两孔以上阴性对照A值大于0.1，应重复试验。

5.3 阴性判定：样品A值<临界值（CUTOFF）者为HIV抗体阴性。 5.4 阳性判定：样品A值≧临界值（CUTOFF）者为HIV抗体阳性。（注意：初试阳性应重新取样双孔复试。复试阳性者应按《全国艾滋病检测技术规范》送HIV确证实验室进行确证实验。）

艾滋病检测筛查实验室基本标准

艾滋病检测筛查实验室基本标准（一）艾滋病筛查中心实验室及艾滋病筛查实验室。 1、人员条件至少由3名医技人员组成，其中具有中级卫生技术职称人员至少1名。负责筛查试验的技术人员需具有2年以上从事病毒性疾病血清学检测工作经验，接受过省级以上艾滋病检测技术培训，并获得培训证书。 2、建筑条件：实验室或检测区域应分为清洁区、半污染区和污染区，应符合二级生物安全实验室（BSL-2）要求。 3、仪器设备条件配备艾滋病病毒抗体筛查试验所需设备，至少包括酶标读数仪、洗板机、普通冰箱、水浴箱（或温箱）、离心机、加样器（仪）、消毒与污物处理设备、实验室恒温设备、安全防护用品和生物安全柜。（二）艾滋病检测点。 1、人员条件：至少由2名经过艾滋病检测技术培训并获得培训证书的专业人员组成。 2、建筑条件：需有艾滋病检测区域或专用实验台，能开展简便、快速检测。 3、设备条件：需配备快速试验所必须的物品，包括普通冰箱、消毒与污物处理设备、一次性消耗品、安全防护用品。

艾滋病检测筛查实验室职能包括艾滋病筛查中心实验室、艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点。艾滋病筛查中心实验室设在市（地）级疾病预防控制中心；艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点可设在疾病预防控制机构、医疗机构、采供血机构、计划生育技术服务机构等。 1、艾滋病筛查中心实验室职能。（1）负责职责范围内艾滋病病毒抗体筛查试验，根据需要可开展其他艾滋病检测工作。（2）负责将艾滋病病毒抗体筛查呈阳性反应的样品送艾滋病检测确证实验室。（3）定期汇总艾滋病检测资料，并上报艾滋病检测确证实验室。配合艾滋病检测确证实验室做好个案调查、登记等随访工作。（4）负责对职责范围内艾滋病检测筛查实验室的技术指导；协助艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点开展自愿咨询检测工作，给予技术支持和指导。 2、艾滋病筛查实验室职能。（1）开展艾滋病病毒抗体的筛查试验，根据需要可开展其他艾滋病检测工作。（2）负责将艾滋病病毒抗体筛查呈阳性反应的样品送当地艾滋病筛查中心实验室或艾滋病检测确证实验室。（3）定期汇总艾滋病检测资料，并上报当地艾滋病筛查中心实验室或艾滋病检测确证实验室。（4）对自愿咨询检测工作提供技术支持。 3、艾滋病检测点职能。（1）开展艾滋病病毒抗体的筛查试验。（2）负责将艾滋病病毒抗体筛查呈阳性反应的样品送当地艾滋病筛查实验室或艾滋病筛查中心实验室。（3）定期汇总艾滋病检测资料，并上报当地艾滋病筛查实验室或艾滋病筛查中心实验室。（4）开展艾滋病自愿咨询检测工作。

艾滋病检测筛查实验室基本标准

艾滋病初筛实验室

附件1：艾滋病初筛实验室标准一、必备条件（一）人员条件有3名以上的医技人员，其中中级卫生技术职称人员1名以上（采供血机构的HIV抗体检测人员须具有技师以上卫生技术职称），从事病毒血清学检测技术工作2年以上，接受过国家或省级HIV抗体确认中心举办的HIV抗体检测学习班培训，并获得合格证书。（二）设备条件有独立的实验室用房（或至少有专用的检测台），污染区和清洁区要分开。从我国HIV抗体检测工作发展要求，要以酶联免疫法测定考虑所需的检测器材，包括酶标读数仪和洗板机、精确的移液器、专用的普通冰箱、低温冰箱、离心机以及各种消毒与污物处理设施、安全防护用品和恒温设施。二、HIV抗体检测程序（一）检测试剂初筛用的HIV抗体检测试剂，必须是HIV-1/2混合型，经卫生部批准或注册，经过批检检定合格，并在有效期内。常用的检测方法有固相酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay，ELISA）等。（二）HIV抗体检测程序及其流程图 1、血液标本验收合格后，用初筛试剂进行检测，如呈阴性反应，则作HIV抗体阴性报告； 2、初筛检测结果呈阳性反应的标本，须进行重复检测。复检时用两种不同的初筛检测试剂复测； 3、如两种试剂复检结果均呈阴性反应，则作HIV抗体阴性报告；如均呈阳性反应，或有一份阳性，该标本需送上级实验室加以进一步证实。送检时应将重新采集的该受检者血液标本和原有血液标本一并送检。 4、初筛检测的流程图三、检测结果的判定和处理对HIV抗体阳性者应做好咨询、保密和报告工作。对HIV抗体阴性者，如近期有高危行为如性乱史、吸毒史、受血史，或有急性流感样症状等情况，为排除窗口期的可能，建议每3个月复查一次，连续2次。对HIV抗体可疑的对象要做好咨询和随访工作。四、反馈与报告程序（一）初筛检测中发现HIV抗体阳性反应的标本，应尽快(城区一般要求在48小时内，农村要求在96小时内)将血样连同原始实验资料（包括厂家批号、试剂种类、有效期，如ELISA实验应附上阴性、阳性对照值，Cut off值及样品OD值）和送检化验单送卫生行政部门指定的初筛中心实验室，再转送确认实验室，或直接送至HIV抗体确认实验室。送检化验单必须由初筛实验室一名直接实验操作人员和一名中级技术职称以上的负责人员签名。初筛实验室不得向受检者宣布初检阳性反应结果；

艾滋病检测实验室的安全防护措施和要求(一)

艾滋病检测实验室的安全防护措施和要求(一) 艾滋病检测实验室人员安全防护工作对预防及减少意外事故的发生，提供意外事故发生时的处理方法，明确制定“艾滋病实验室安全防护和要求”是十分必要的。 1艾滋病检测实验室的安全操作和防护措施除做好对临床实验室10条要求外，还应做到以下8点： 1.1具有高度的实验室全安防护意识： 1.1.1实验室审评专家验收考核时，应对设备和实验室安全时行评估，对提出的意见和指出的隐患要及时改进。 1.1.2建立本实验室的安全－标准操作程序，这些程序适用于现有实验条件，并与其他规则和操作过程相一致。 1.1.3无论是否有意外发生和新的危险出现，每年均要对安全－标准操作程序及实施情况进行检查。 1.2接受严格的培训和复训：所有工作人员都必须经过培训，并要接受实验管理人员的监督，所有工作人员均有责任保证自己和他人的工作安全。 1.3注意个人保健： 1.3.1注意个人保健对于减少感染的危险性很重要。皮肤受损、患病都会增加感染的危险性。很小的伤口和擦伤都应以防水的敷料覆盖。 1.3.2进实验室前要摘除首饰，修剪长的、带刺的手指甲，以免刺破手套。 1.3.3进入实验室应穿隔离衣、戴手套，必要时戴两层手套和防护眼镜。 1.3.4切忌用嘴吸液，避免用锐利的器材和玻璃器皿，以减少刺伤机会。 1.3.5在脱去隔离衣，离开实验室前必须洗手。 1.4人员： 1.4.1实验室工作人员只限于被批准的、按艾滋病检测工作规范培训合格的人员。实验室工作人员要有安全防护意识，熟悉生物安全知识和消毒技术。 1.4.2在安排工作人员的实验室区域时，要根据其工作的各类和所涉及的生物试剂，对实验室环境做好安全检查。 1.4.3严格执行实验室工作人员年度采血检测HIV抗体和备案制度。 1.5血清及其他体液样品：所有的样品均应严格按要求妥善保存，HIV抗体阳性样品应做好标记单独保存。 1.6带入及带出实验室的物品： 1.6.1所有带入实验室的包裹都应经过检查。 1.6.2装有样品、细菌或病毒株及有毒物的包裹应在安全柜或其他适当的消毒装置内打开。 1.6.3在将HIV/AIDS样品转到其他实验室时，实验室负责人和指定人员应确定样品送达哪个实验室。 1.6.4向实验室运送样品时，应防止对工作人员、患者或环境造成污染。 1.6.5应将样品放入可靠、安全防漏的容器中运输。所有样品应装入密封塑料管内，样品管外面套上塑料袋，一并装入有缓冲垫的冷藏瓶内，做好标记。 1.6.6护送者应了解接受者，并保证这些材料被转入安全位置，得到安全的处理。

艾滋病的实验室检测流程

艾滋病的实验室检测流程中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心继发布《全国艾滋病检测技术规范(xx 年版)》后，近日即将发布 xx 年版《全国艾滋病检测技术规范》，此规范堪称艾滋病检测实验室的「红宝书」，适用于疾病控制中心艾滋病确认实验室和医疗机构的艾滋病初筛实验室的 HIV 检测技术操作。下面是为大家带来的艾滋病的实验室检测流程的知识，欢迎阅读。检测项目的样品种类 1 HIV 抗体检测：全血、血清、血浆、口腔黏膜渗出液、尿液以及干血斑样品。 2 HIV 抗原检测：全血、血清、血浆、病毒培养上清液。 3 T 淋巴细胞亚群测定：EDTA 或肝素抗凝全血。 4 HIV-1 病毒载量、基因型、耐药检测：血浆、滤纸干血斑(DBS)。 5 HIV 核酸定性与定量、基因型检测和 HIV-1 分离培养：淋巴细胞富集液、外周血单核淋巴细胞(PBMC)及全血。当然，实验室最常用的仍然是血液标本，其他只作为补充样本。 HIV 抗体检测 HIV 抗体检测是艾滋病实验室检测的优先选择项目，在国内绝大多数初筛实验室应用最广泛。 1 初筛方法 (1)酶联免疫吸附试验(ELISA)

ELISA 法检测 HIV 抗体是 HIV 初筛实验室最常用最普遍的方法，目前检测试剂已经发展到 * ，即同时检测血液中 HIV-1P24 抗原和 HIV-1/2 抗体，秉承「宁可错杀一千，不可漏网一个」的革命精神，其灵敏度远高于特异性，直叫 HIV 抗体无处遁形。 (2)化学发光或免疫荧光试验(CIA/IFA) 这个试验方法是近 10 年迅猛发展的一种新型检测方法，其采用发光或荧光底物，既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体，用发光或荧光仪测定结果，其灵敏度较 ELISA 有了进一步的提高，同时带来的是检测成本的增加和假阳性率的增高。 (3)快速检测(RT)方法此类方法操作简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测，但灵敏度和特异性远不如 ELISA 和发光法，但是经济实惠，也有一定的市场影响力。主要包括以下几种方法：明胶颗粒凝集试验(PA)、免疫渗滤试验、免疫层析试验。 2 确认实验 (1)免疫印迹试验(WB) WB 采用间接法检测样品中的抗 HIV-1/HIV-2 特异性抗体。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳把分子量大小不等的 HIV-1 蛋白分离开来，经过一系列处理后，硝酸纤维素膜显示与特异抗原的结合的抗体条带，从而确诊抗体的存在。 (2)条带/线性免疫试验(RIBA/LIA) 实验原理基本同 WB 法，不再赘述。

艾滋病检测实验室基本标准

艾滋病检测实验室基本标准一、艾滋病参比实验室 (一)人员条件。由10名以上医技或科研人员组成,其中具有高级卫生技术职称人员至少5名,中级卫生技术职称人员至少3名。高级技术负责人需具有5年以上艾滋病病毒检测和研究经验,接受过国际或国家级艾滋病检测技术培训,并获得培训证书。 (二)建筑条件。需有独立的符合二级生物安全实验室(BSL-2)要求的以下建筑区域,包括血清学检测、质量控制、核酸检测、基因序列测定及分析、免疫学检测、血清库和冷库等,并将建筑区域分为清洁区、半污染区和污染区。具有满足艾滋病病毒分离、培养与扩增、浓缩与纯化、中和试验等需要的三级生物安全实验室(BSL-3)。 (三)仪器设备条件。配备血清学检测、病原学检测、核酸检测、基因序列测定、免疫学检测设备和三级生物安全实验室(BSL-3)所需仪器设备,至少包括酶标读数仪、洗板机、病毒载量测定仪、

基因序列测定仪和流式细胞仪、普通冰箱、低温冰箱、超低温冰箱、水浴箱、温箱、离心机、旋转震荡器、摇床、加样器(仪)、专用计算机和必要的摄像器材、消毒和污物处理设备、实验室恒温设备、安全防护用品和生物安全柜等。具有建立国家艾滋病病毒毒种库、检测样品库、质控品库、基因库、细胞库和数据库的设备条件。二、艾滋病检测确证实验室 (一)人员条件。至少由5名医技人员组成,其中专职人员至少2名,具有副高级卫生技术职称人员至少1名。负责确证试验的技术人员需具有3年以上从事艾滋病病毒抗体检测工作经验、接受过省级以上艾滋病检测技术培训,并获得培训证书。 (二)建筑条件。需有独立的血清学检测实验室,分为清洁区、半污染区和污染区,符合二级生物安全实验室(BSL-2)要求。根据需要可设置核酸检测、免疫学检测等建筑区域。 (三)仪器设备条件。配备血清学检测和二级生物安全实验室(BSL-2)所需仪器设备,至少包括酶标读数仪、洗板机、普通冰箱、低温

艾滋病实验室的基本标准

艾滋病实验室的基本标准一. 艾滋病参比实验室 1. 人员条件至少由9名医技或科研人员组成, 具有高级卫生技术职称人员至少4名, 中级卫生技术职称人员至少3名。高级技术负责人需具有5 年以上艾滋病病毒检测和研究经验, 接受过国际或国家级HI V检测技术培训，并获得培训证书。 2. 建筑条件需有独立的符合II级生物安全实验室（BSL-2）要求的以下建筑区域和条件: 血清学检测、质量控制、核酸检测、基因序列测定及分析、免疫学检测、血清库和冷库等, 并将其分为清洁区、半污染区和污染区。HIV 病毒分离、细胞培养、HIV病毒研究需要有BSL-3级生物安全实验室。 3. 仪器设各条件配备血清学、病原学、核酸检测、基因序列测定、免疫学检测和BSL-3级生物安全实验室所需仪器设备。血清学和病原学检测设各至少包括酶标读数仪、洗板机、基因序列测定仪和流式细胞仪、普通冰箱、低温冰箱、超低温冰箱、水浴箱、温箱、离心机、旋转震荡器、摇床、移液器、专用计算机和必要的摄像器材、消毒和污物处理设备、安全防护用品和实验室恒温设各等。核酸检测按照国务院卫生行政主管部门制定的有关规定执

行。BSL-3 级生物安全实验室按照《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》及《实验室生物安全通用要求（GB 19489-2004）》的有关规定执行。需要建立国家的艾滋病病毒毒种库、检测样品库、质控血清库、基因、细胞库和数据库。二. 省艾滋病确认中心实验室 1. 人员条件至少由5名医技（或科技）人员组成,具有高级卫生技术职称人员至少2名、中级卫生技术职称人员至少2 名。负责确认试验的技术人员需具有3年以上从事HI V抗体筛查工作经验、接受过国家级或国际HI V检测确认试验技术培训，并获得培训证书。 2. 建筑条件需有独立的符合II级生物安全实验室（BsL2）要求的以下建筑区域和条件: 血清学检测、质量控制、血清库和冷库等并将其分为清洁区、半污染区和污染区。建立省内的艾滋病检测样品库、质控血清库和数据库。根据需要可设置核酸检测、免疫学检测室等。开展HI V病毒分离等研究工作者，需要有BSL-3 级生物安全实验室。 3. 仪器设备条件配备筛查试验和确认试验所需设备, 包括酶标读数仪、洗板机、普通冰箱、低温冰箱、超低温冰箱、水浴箱、温箱、离心机、旋转震荡器、摇床、移液器、专用计算机和必要的摄像器材、消毒和污物处理设备、安全防护用品和实验室恒温设备。要

艾滋病、梅毒、乙肝实验室检测技术教材

艾滋病、梅毒、乙肝实验室检测技术岳阳市疾控中心白志永艾滋病抗体检测及样品保存、运送一、HIV抗体检测筛查方法酶联免疫吸附试验（ELISA）化学发光或免疫荧光试验快速检测（RT）（建议配备合格的快速检测试剂，灰区。）二、筛查程序初筛和复检流程（图1）样品筛查试剂初筛试验阳性反应阴性反应原有试剂+另一不同原理（或厂家）试剂或另外两种不同原理（或厂家）试剂复检试验均阳性反应一阴一阳均阴性反应确证试验报告阴性图1 HIV抗体筛查检测流程三、筛查试验结果的报告（建议用修改后报告单附表3）（例） HIV抗体筛查试验用附表1、2进行报告，阴性反应报告为“HIV抗体阴性（-）”；阳性反应报告为“HIV抗体待复检”。

四、 HIV感染产妇所生儿童HIV抗体检测策略及流程 1、适用范围 HIV感染产妇所生婴幼儿；已满18个月的婴幼儿，其母亲HIV感染状态不详，儿童出现H IV相关临床表现，临床怀疑HIV感染的儿童。 2、检测程序图4 艾滋病感染产妇所生儿童HIV抗体检测流程五、样品的保存、运送 1、样品的保存用于抗体和抗原检测的血清或血浆样品，短期（1周）内进行检测的可存放于2～8℃，一周以上应存放于-20℃以下。 2、样品的运送（例）（1）应符合生物安全要求； (2)应采用三层容器对样品进行包装。

第一层容器：直接装样品，应防渗漏。样品应置于带盖的试管内。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。第二层容器：容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。要求不易破碎、带盖、防渗漏、容器的材料要易于消毒处理。第三层容器：容纳并保护第二层容器的运输用外层包装箱。外面要贴上醒目的标签、联系方式，还应易于消毒。 (3) 用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下运送。质量控制一、艾滋病抗体检测的统计学室内质量控制 1、试剂盒内部对照即试剂盒提供的阳性和阴性对照血清。用于判断实验的有效性，不能作为室内质控品使用，内部对照结果无效，必须重新试验。 2、室内质控品为非试剂盒组份的外部质控品，是为了监控检测的重复性而设置的，包括强阳性、弱阳性和阴性质控血清。也可以只设置一个弱阳性质控，以该试剂盒临界值（Cut-off）的2～3倍为宜。作用：判断该批临床样品检测的有效性，每次实验必须包含室内质控品，其结果无效，必须重新试验。

艾滋病检测点实验室

标准操作规程（SOP）（单位名称）题目：XX检测点SOP 版本：第版作者：日期：年月日页数：页修订历史：版本号批准日期第版

（单位名称）艾滋病检测点实验室标准操作规程（SOP）目录 SOP01 XX低速自动平衡离心机操作规程的使用及日常维护错误!未定义书签。3 SOP02 移液器的校正及标定................ 错误!未定义书签。SOP03 保密工作管理. (07) SOP04 环境和设施管理.................... 错误!未定义书签。SOP05 记录管理.......................... 错误!未定义书签。SOP06 校准管理.......................... 错误!未定义书签。SOP07 检测样品管理..................... 1错误!未定义书签。SOP08 检测结果控制..................... 1错误!未定义书签。SOP09 检测数据管理...................... 错误!未定义书签。SOP10 纠正措施.......................... 错误!未定义书签。SOP11 文件和资料控制..................... 错误!未定义书签。SOP12 血标本的采集..................... 2错误!未定义书签。SOP13 血标本分离........................ 错误!未定义书签。SOP14 样本接收程序...................... 错误!未定义书签。SOP15 血标本的储存...................... 错误!未定义书签。SOP16 结果报告.......................... 错误!未定义书签。SOP17 实验室安全管理.................... 错误!未定义书签。SOP18 实验室废弃物处理.................. 错误!未定义书签。SOP19 实验室突发事件处置预案............ 错误!未定义书签。

艾滋病检测点标准操作规程(参考范本)

HIV抗体检测标准操作规程（SOP文件） 1、目的：为了规范本卫生院艾滋病检测点的正常运行，保证艾滋病抗体检测的准确，确保实验室生物安全，特制定本操作规程。 2、适用范围：适用于本卫生院艾滋病抗体检测从标本的采集、处理、检测到报告的全过程。 3、职责：各检测工作人员按标准操作规程进行艾滋病抗体检测，本院艾滋病检测工作领导小组负责对检测活动全过程及各项生物安全措施执行情况进行监督。 4、标准操作程序： 4.1样品的采集和处理 4.1.1样品的采集： 4.1.1.1血清样品采集：用真空采血管抽取5mL静脉血，室温下自然放置1-2小时，待血清凝固和血块收缩后在用4000rmp离心15min，吸出血清备用。 4.1.1.2抗凝血样品采集：用加有抗凝剂的真空管或用消毒注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管，反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。 4.1.1.3采样注意事项： 4.1.1.3.1采集样品应按临床采血技术规范及试剂盒说明书要求进行。 4.1.1.3.2采集标本时应注意安全，直接接触HIV感染者或艾滋病病人血液和体液的操作应戴双层手套。 4.1.2样品的保存：用于抗体检测的血清或血浆样品应存放与-20℃以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2-8℃。 4.1.3样品的运送： 4.1.3.1实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类、采样时间。

4.1.3.2将试管放入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒。在试管的周围垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。 4.1.4样品的接收： 4.1.4.1含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。 4.1.4.2核对标本与送检单，检查样品管有无破损及遗漏。如发现遗漏应立即将尚存留的样品移出、对样品管和盛器消毒，同时还要报告有关领导和专家。 4.2检验方法和步骤 4.2.2快速检测法（胶体金法） 4.2.2.1原理采用胶体金免疫技术和层析原理，定性测定血清样本中的HIV1+2抗体。 4.2.2.2操作步骤 4.2.2.2.1将标本平衡至室温。 4.2.2.2.2将所需数量的测试卡从包装盒中拿出平衡至室温，打开铝箔包装袋，平置于台面上并编号（与样本编号相对应）。 4.2.2.2.3用微量加样器取试剂说明书规定的样本血清或血浆，加到测试卡的加样处。 4.2.2.2.4在试剂说明书规定的时间内观察结果。 4.2.2.3结果判定： 4.2.2.3.1阳性：在检测区和对照区位置出现两条紫红色条带。如果检测区的条带隐约可见，建议对该样本重复试验，并使用其他厂家的试剂确认。 4.2.2.3.2阴性：只在对照区出现一条紫红色条带。 4.2.2.3.3无效：对照区未出现紫红色条带。 4.2.2.3.4注意：在规定的时间内不论测试区内的色带颜色深浅与否均应判为阳性。 4.3仪器的使用和维护 4.3.1设立常用仪器的维护制度，以保证正常运转；根据使用情况更换必要的部件： 4.3.2冰箱定期检查温度并作好记录，必须每天检查和记录冷冻和冷藏室的温度。 4.3.3定期检查其他仪器设备。 4.4 HIV抗体筛查结果的记录、解释与报告 4.4.1筛查试验呈阴性反应出具HIV抗体阴性报告。 4.4.2筛查试验呈阳性反应，可出具“HIV抗体待复检”报告，不能出阳性报告。同时应尽快进行以下处理： 4.4.2.1填写HIV抗体筛查报告，经检测者、复核者和签发者审核签字。 4.4.2.2尽可能重新采集受检者的血样。

艾滋病实验室检测【最新】

艾滋病实验室检测 HIV/AIDS 的实验室检测主要包括HIV抗体检测、HIV核酸定性和定量检测、CD4+ T淋巴细胞计数、HIV耐药检测等。HIV?1/2抗体检测是HIV感染诊断的金标准，HIV核酸检测(定性和定量)也用于HIV 感染诊断;HIV 核酸定量(病毒载量)和CD4+ T 淋巴细胞计数是判断疾病进展、临床用药、疗效和预后的两项重要指标;HIV 耐药检测可为HAART方案的选择和更换提供指导。 1.HIV?1/2 抗体检测:包括筛查试验和补充试验。HIV?1/2抗体筛查方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光或免疫荧光试验、快速试验(斑点ELISA和斑点免疫胶体金或胶体硒、免疫层析等)、简单试验(明胶颗粒凝集试验)等。补充试验方法包括抗体确证试验(免疫印迹法，条带/线性免疫试验和快速试验)和核酸试验(定性和定量)。筛查试验呈阴性反应可出具HIV?1/2抗体阴性报告, 见于未被HIV感染的个体，但窗口期感染者筛查试验也可呈阴性反应。若呈阳性反应，用原有试剂双份(快速试验)/双孔(化学发光试验或ELISA)或两种试剂进行重复检测，如均呈阴性反应，则报告为HIV抗体阴性;如一阴一阳或均呈阳性反应，需进行补充试验。补充试验:抗体确证试验无HIV特异性条带产生，报告HIV?1/2

抗体阴性;出现条带但不满足诊断条件的报告不确定，可进行核酸试验或2~4周后随访，根据核酸试验或随访结果进行判断。补充试验HIV?1/2 抗体阳性者，出具HIV?1/2抗体阳性确证报告。核酸试验:核酸定性检测结果阳性报告HIV?1核酸阳性，结果阴性报告HIV?1核酸阴性。病毒载量检测结果低于检测线报告低于检测线;>5 000拷贝/ml 报告检测值;检测线以上但≤5 000拷贝/ml建议重新采样检测，临床医生可结合流行病学史、CD4+、CD8+T淋巴细胞计数或HIV抗体随访检测结果等进行诊断或排除诊断。 2.CD4+T淋巴细胞检测 CD4+T淋巴细胞是HIV感染最主要的靶细胞，HIV感染人体后，出现CD4+T淋巴细胞进行性减少，CD4+/CD8+T淋巴细胞比值倒置，细胞免疫功能受损。目前常用的CD4+ T淋巴细胞亚群检测方法为流式细胞术，可以直接获得CD4+T淋巴细胞数绝对值，或通过白细胞分类计数后换算为CD4+T淋巴细胞绝对数。 CD4+T淋巴细胞计数的临床意义:了解机体免疫状态和病程进展、确定疾病分期、判断治疗效果和HIV感染者的临床并发症。 CD4+T淋巴细胞检测频率:需根据患者的具体情况由临床医师决定。一般建议:对于CD4+T淋巴细胞计数>350个/μl的(无症状)HIV感

艾滋病初筛实验室及检测点申报表(I)

附件1 艾滋病检测筛查实验室申请表申请单位：涡阳中医院地址：邮编：233600 电话：055 开展的业务项目：HIV检测拟申请的实验室名称：艾滋病检测筛查实验室 2012年9 月13 日填一、实验室人员名单及基本情况：姓名性别年龄技术职称职务从事病毒血清学检验时间培训情况备注（专职/兼职）谢犇男27岁检验师6年已培训兼职宋文娟女25岁检验士2年已培训兼职王晓燕女37岁检验师15年已培训兼职二、实验室设施、仪器设备情况：

仪器设备名称厂家型号主要用途购买时间运转状况核实者酶标仪科华ST360 病毒定量2012.8 良好李文杰洗板机上海科华 ST36w 洗版2012.8 良好李文杰加样器上海求精50-250u l 加样2012.1 运转良好李文杰高压锅江阴滨江YX-280 B型高压消毒2012.4 运转良好李文杰恒温箱江苏姜堰YY9103 7 温育血清2012.8 运转良好李文杰生物安全柜蚌埠 BSC-15 00 安全防护2012.8 运转良好李文杰注：1、设施、仪器设备表格不够可另附页 2、运转状况可按运转正常、需小修、需大修三档填写

三、申请理由：艾滋病病毒检测单位（盖章）___2012__年___9__月 __13___日四、当地卫生行政部门初审意见单位（盖章）_____年_____月_____日五、筛查实验室审评专家组意见：组长（签字）专家（签字）_____年_____月_____日六、省（市地）级卫生行政部门意见：单位（盖章）_____年_____月_____日附件2 艾滋病抗体检测点申请表申请单位：__________________________________ 地址：__________________________________ 邮编：__________________________________ 电话：__________________________________

艾滋病研究用P3级生物安全实验室

艾滋病研究用P3级生物安全实验室徐立大* 王秋娣** 冯佩明*** *中国预防医学科学院环境卫生与卫生工程研究所 **中国预防医学科学院 ***中国洁净学会近几年来，我们曾经为国内一些单位主持设计和施工建造了若干个用于艾滋病研究的P3级安全实验室，并全部一次通过了卫生部验收。也曾经参加过一些单位P3级生物安全实验室家验收工作。深深感到在P3级生物安全实验室的建设市场等方面存在着不少问题。本文结作中的一些体会提出一些看法，以期得到有关人员的重视。自八十年代以来，艾滋病已在全世界广泛流行，严重地威胁着人类的健康和生存。为了战胜迄今无法治愈的疾病，医务工作者和相关科研人员与之进行了顽强的斗争，人类正在朝着有日最终控制和战胜这种疾病的道路上艰难的前进着。既取得了一步一步的胜利，同时也付出重的代价。代价之一就是一些从事此项研究的工作人员自己也受到了感染，甚至变为艾滋病病据美国疾病控制中心(CDC)统计，截止到1992年9月30日，在美国从事艾滋病研究的工作中有25人感染了艾滋病病毒，其中23人与临床有关，2人与临床无关。共有12人已经发为艾滋病病人。在我国，艾滋病流行趋势不容乐观，将会有越来越多的临床和研究人员从事滋病防治有关的工作，虽然至今尚未发现因职业接触导致艾滋病病毒感染的报告，但是为了于未然，及早采取措施保护这些工作人员免受艾滋病病毒的感染已是刻不容缓的事情。在诸范措施中，建设既能保护工作人员，又能保护环境的P3级生物安全实验室是其中重要的一一、艾滋病实验室的分级我国至今还未颁布有关生物安全实验室的标准。但对人体有危害的微生物则按其危险性分为类。但由于发表较早，其中并没有列入艾滋病病毒(HIV)。而且我国有关的分类表也并未指种微生物应该在什么级别的实验室中进行操作。国外资料显示，一些国家既有微生物危险性表，又指出进行操作相对应的实验室级别，对于保护人体健康和环境具有很强的指导作用。国外的资料表明，当进行艾滋病研究时，针对不同的实验内容和操作过程，应该采取不同等防护措施。尽管研究表明，艾滋病病毒的职业性感染的危险性并不高，但是感染了HIV的后十分严重的。实验室工作人员不应低估这种危险性。实验室感染HIV的危险主要是由于手、和眼、鼻和口腔的粘膜感染了污染的血液和体液所致。至今尚无证据表明HIV可以通过空气传播。针对艾滋病的感染途径，世界卫生组织提出了有关艾滋病诊断和研究实验室的生物安作指南。并对血清学实验室、病毒分离实验室以及研究和生产实验室分别提出要求。现在仅

艾滋病检测实验室基本标准

艾滋病检测实验室基本标准一、艾滋病确证中心实验室（一）人员条件。由8名以上专职技术人员组成，其中具有高级卫生技术职称人员4名，中、初级卫生技术职称人员各2名。高级技术负责人需具有5年以上艾滋病病毒检测和研究经验，接受过国际或国家级艾滋病检测技术培训，并获得培训证书。（二）实验室条件。需有独立的符合二级生物安全实验室（BSL-2）要求的以下实验区域，包括血清学检测、质量控制、核酸检测、基因序列测定及分析、免疫学检测、血清库和冷库等，并将实验区域分为清洁区、半污染区、污染区、确证区、消毒间。具有满足艾滋病病毒分离、培养与扩增、浓缩与纯化、中和试验等需要的三级生物安全实验室（BSL-3）。（三）仪器设备条件。 1. 血清学检测：检测设备至少包括全自动酶标仪、生物安全柜（生物安全II级）、加样器（10、20、100、200、1000μl）、连续加样器、普通冰箱、低温冰箱、超低温冰箱、水浴箱、普通离心机、高速离心机、旋转震荡器、全自动免疫印迹仪、高压蒸气灭菌器、干燥箱，恒温培养箱。 2. 病原学检测：加样器（10、20、100、200、1000μl），生物安全柜（生物安全II级），旋涡震荡器，小型自动酶标仪，二氧化碳培养箱、倒置荧光显微镜（配备专用计算机和必要的摄像器材）、干烤消毒箱、液氮贮存箱、超声波清洗器、安全防护用品和实验室恒温设备等。

附注：实验需要在生物安三级全实验室中开展。 3. 核酸定性和定量检测：试剂准备区：冰箱、超纯水机、真空干燥机、洁净工作台、高速离心机、加样器、振荡器、废弃物容器、紫外灯。样品处理区：冰箱、生物安全柜、高速离心机、加样器、旋涡振荡器、恒温水浴箱、紫外灯。扩增区：PCR仪、冰箱、小型高速离心机、加样器、废弃物容器、紫外灯。扩增产物分析区：冰箱、小型高速离心机、加样器、电泳仪、恒温水浴、凝胶成像系统、上下水设备、基因序列测定仪、洁净工作台，紫外灯等。测定HIV RNA应配备-80℃冰箱，上述其它冰箱为2-8℃和-20℃。二、艾滋病检测确证实验室（一）人员条件。至少由5名医技人员组成，其中专职人员至少2名，具有副高级卫生技术职称人员至少1名。负责确证试验的技术人员需具有3年以上从事艾滋病病毒抗体检测工作经验、接受过艾滋病检测确证中心实验室的培训，并获得培训证书。（二）实验室条件。需有独立的血清学检测实验室，分为清洁区、半污染区、污染区、确证区、消毒间，符合二级生物安全实验室（BSL-2）要求。根据需要可设置核酸检测。（三）仪器设备条件。配备血清学检测和二级生物安全实验室（BSL-2）所需仪器设备，至少包括全自动酶标仪、全自动蛋白印迹仪、普通冰箱3至4台、低温冰箱、超低温冰箱、水浴箱（或温箱）、恒温培养箱、离心机、旋转震荡器、摇床、加样器（仪）、纯

艾滋病检测实验室基本标准

全国艾滋病检测工作管理办法附：艾滋病检测实验室基本标准二、艾滋病检测确证实验室 (一)人员条件。至少由5名医技人员组成，其中专职人员至少2名，具有副高级卫生技术职称人员至少1名。负责确证试验的技术人员需具有3年以上从事艾滋病病毒抗体检测工作经验、接受过省级以上艾滋病检测技术培训，并获得培训证书。 (二)建筑条件。需有独立的血清学检测实验室，分为清洁区、半污染区和污染区，符合二级生物安全实验室(BSL-2)要求。根据需要可设置核酸检测、免疫学检测等建筑区域。 (三)仪器设备条件。配备血清学检测和二级生物安全实验室(BSL-2)所需仪器设备，至少包括酶标读数仪、洗板机、普通冰箱、低温冰箱、水浴箱(或温箱)、离心机、旋转震荡器、摇床、加样器(仪)、专用计算机和必要的摄像器材、消毒和污物处理设备、实验室恒温设备、安全防护用品和生物安全柜。具有建立血清库和数据库的设备条件。三、艾滋病检测筛查实验室 (一)艾滋病筛查中心实验室及艾滋病筛查实验室。 1、人员条件：至少由3名医技人员组成，其中具有中级卫生技术职称人员至少1名。负责筛查试验的技术人员需具有2年以上从事病毒性疾病血清学检测工作经验，接受过省级以上艾滋病检测技术培训，并获得培训证书。 2、建筑条件：实验室或检测区域应分为清洁区、半污染区和污染区，应符合二级生物安全实验室(BSL-2)要求。 3、仪器设备条件：配备艾滋病病毒抗体筛查试验所需设备，至少包括酶标读数仪、洗板机、普通冰箱、水浴箱(或温箱)、离心机、加样器(仪)、消毒与污物处理设备、实验室恒温设备、安全防护用品和生物安全柜。 (二)艾滋病检测点。 1、人员条件：至少由2名经过艾滋病检测技术培训并获得培训证书的专业人员组成。 2、建筑条件：需有艾滋病检测区域或专用实验台，能开展简便、快速检测。 3、设备条件：需配备快速试验所必须的物品，包括普通冰箱、消毒与污物处理设备、一次性消耗品、安全防护用品。