抗生素的配制

抗生素的配制

Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT

抗生素贮存液a工作浓度

浓度保存条件严紧型质粒松弛型质粒

氨苄青霉素50mg/ml(溶于水)-20℃20μg/ml60μg/ml

羧苄青霉素50mg/ml(溶于水)-20℃20μg/ml60μg/ml

氯霉素34mg/ml(溶于乙醇)-20℃25μg/ml170μg/ml

卡那霉素10mg/ml(溶于水)-20℃10μg/ml50μg/ml

链霉素10mg/ml(溶于水)-20℃10μg/ml50μg/ml

四环素b5mg/ml(溶于乙醇)-20℃10μg/ml50μg/ml

a：以水为溶剂的抗生素贮存液通过μm滤器过滤除菌。以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。

b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。

常用抗生素？

氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）？

溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。？

羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）？

溶解羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。？

甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）？

溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。？

卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）？

溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。？

氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）？

溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。？

链霉素（streptomycin）（50mg/ml）？

溶解链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。？

萘啶酮酸（nalidixicacid）（5mg/ml）？

溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。？

四环素（tetracyyline）（10mg/ml）？

溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

几种溶液的配制方法

1、PBS:

取ZLI-9061PBS溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，测pH值应在~之间，若偏离此范围，请用的HCL或NaOH调整。

2、TBS：

缓冲液配方：（）

Tris（三羟甲基氨基甲烷）？

1NHCL约420ml

双蒸水加至1000ml

Tris缓冲液配制方法：

先以少量双蒸水（300~500ml）溶解Tris，加入HCl后，用HCl（1N）或NaOH（1N）将pH调至，最后双蒸水加至1000ml。此液为储备液，4℃冰箱中保存。

配方：

Tris-HCI缓冲液（）100ml

NaCI~9gL)

双蒸水加至1000ml

TBS配制方法：

先以少量双蒸水溶解NaCl，再加入Tris-HCl缓冲液，最后加双蒸水至

1000ml，充分摇匀。

3、枸橼酸盐缓冲液（Citratebuffer）：

储存液：

枸橼酸溶液：称取枸橼酸（C6H8O7H20）溶于1000ml蒸馏水中。

枸橼酸钠溶液：称取枸橼酸钠（C6H5Na3O72H20）溶于1000ml蒸馏水中。

工作液：

取9mlA液和41mlB液加入450ml蒸馏水中，溶液pH值应为？

？

4、胰酶（Trypsin）：

胰蛋白酶消化液：

常用浓度为%，即使用前将一滴试剂1胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合（1:3稀释），则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从%（1:10稀释）至%（1:1稀释）。

胰蛋白酶：

取或胰蛋白酶加入到%或%的无水氯化钙水溶液中，溶解即可。

5、胃酶（Pepsin）：

4%胃蛋白酶，用LHCL配制。

（我公司备有ZLI-9013胃蛋白酶消化工作液，不需稀释直接滴加使用，欢迎选购）

6、DAB：

9033DABKit：

使用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中，即可获得1mlDAB工作液，简单易用。

：

6mgDAB溶于10mlTBS（），再加入浓度为3％的H2O2，过滤掉沉淀物，即可。

7、AEC：

4mgAEC溶于1ml二甲基甲酰胺中，加入14ml浓度为的醋酸缓冲液（），然后加入%H2O2，过滤掉沉淀物。

8、RIPA：

1×PBS，1%NP40，，%SDS（此液体可长期保存）。以下抑制剂以储存液方式保存，临用前加入RIPA中。

mlPMSF异丙醇溶液（用量为10l/ml）

（Sigma产品，用量为30l/ml）

冷冻液

（用量为10l/ml）

9、BlottoA：

常规使用1×PBS，5%milk，%Tween20。

10、BlottoB：

与Phosphotyrosine抗体共用，1×PBS，1%milk，%Tween20。部分实验中milk可完全去除，但可能引起背景增高。

目的：配制500ml的50mg/ml氨苄青霉素贮存液。

实验用品的准备：足够量的2ml的EP管，滤头（内装有两层滤膜）、两个

50ml的离心管、注射器，以上用品除注射器外都要进行高压灭菌；

注意：

（1）滤头灭菌前，安装滤膜时，不要旋得太紧，待灭菌后使用前于超净台上用力旋紧，以防漏液。

（2）EP管，滤头、两个50ml的离心管灭菌后要进行烘干。

抗生素溶液的配制：

（1）称取25g的氨苄青霉素粉末，倒入盛有200—300ml去离子水的烧杯中，最好在烧杯上面盖个东西（封口膜或者干净的滤纸），以防止粉末飘出，轻摇烧杯，可见氨苄青霉素粉末迅速溶解。

（2）待氨苄青霉素粉末溶解完，加去离子水至500ml，稍等几分钟让粉末完全溶解，以免过滤时堵塞滤膜。

氨苄青霉素溶液的过滤除菌及分装：

（1）取出旧报纸包裹的滤头，用力旋紧，备用。

（2）用注射器吸取配制好的溶液，然后把滤头安在注射器上，缓缓推动注射器活塞，把溶液经滤膜推至50ml的离心管中，直至把两个离心管都注满。

注意：动作用缓和，一只手拿着活塞，一只手拿着滤头，使滤出液出口正对着离心管，还要防止染菌。

（3）把50ml离心管中已除菌的氨苄青霉素溶液分装到2ml的EP管中。（4）重复（2）、（3）直至把500ml溶液分装完毕。

（5）在EP管上做好标记，包括名称、日期等。

（6）把做好标记的盛有氨苄青霉素的EP管于-20℃保存