ELISA试剂盒说明书……IFN-γ
(IFN-γγ)酶联免疫分析（ELISA）
小鼠γ干扰素(IFN-
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，组织及相关液体样本中γ干扰素(IFN-γ)含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠γ干扰素(IFN-γ)水平。用纯化的小鼠γ干扰素(IFN-γ)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入γ干扰素(IFN-γ)，再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的γ干扰素(IFN-γ)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠γ干扰素(IFN-γ)浓度。
试剂盒组成：
试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份
封板膜2片（48）2片（96）
密封袋1个1个
酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：1800ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：
1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/
分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标
准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1200ng/L，800ng/L，400ng/L，200ng/L，100ng/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批见应分别小于9%和15%
检测范围：
50ng/L-1500ng/L
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
FOR RESEARCH USE ONLY
Mouse Interferonγ
Drug Names
Kit..
Generic Name：Mouse Interferonγ(IFN-
IFN-γγ)ELISA Kit
Purpose
This kit allows for the determination of IFN-γconcentrations in Mouse serum,tissue and other biological fluids.
Principle of the assay
T he kit assay Mouse IFN-γlevel in the sample，use Purified Mouse IFN-γantibody to coat microtiter plate wells,make solid-phase antibody,then add IFN-γto wells,Combined antibody which With HRP labeled goat anti-mouse become antibody-antigen-enzyme-antibody complex,after washing Completely,Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed,reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of450nm. The concentration of IFN-γin the samples is then determined by comparing the O.D.of the samples to the standard curve.
Materials provided with the k it
Materials provided with
the kit
48determinations96determinations Storage User manual11
Closure plate membrane22
Sealed bags11
Microelisa stripplate112-8℃Standard：1800ng/L0.5ml×1bottle0.5ml×1bottle2-8℃
Standard diluent 1.5ml×1bottle 1.5ml×1bottle2-8℃HRP-Conjugate reagent3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Sample diluent3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Chromogen Solution A3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Chromogen Solution B3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Stop Solution3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃
wash solution （20ml×20fold）
×1bottle
（20ml×30fold）
×1bottle
2-8℃
Specimen requirements
1.serum
serum--coagulation at room temperature10-20mins，centrifugation20-min at the speed of 2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.
2.plasma
plasma--use suited EDTA,citrate or heparinized plasma as an anticoagulant,mix10-20 mins,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.
3.Urine-collect sue a sterile container,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.
remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.
4.cell culture supernatant-detect secretory components,collect sue a sterile container,
centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,detect the composition of cells,Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）,Cell concentration reached1million/ml,repeated freeze-thaw cycles,damage cells and release of intracellular components,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.
5.Tissue samples-After cutting samples,check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）,Rapidly
frozen with liquid nitrogen,maintain samples at2-8℃after melting,add PBS（PH7.4）,
Homogenized by hand or Grinders,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.
remove supernatant.
6.extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevant
literature,and should be experiment as soon as possible after the extraction.If it can’t, specimen can be kept in-20℃to preserve,Avoid repeated freeze-thaw cycles.
7.Can’t detect the sample which contain NaN3,because NaN3inhibits HRP active.
Assay procedure
1.Dilute and add sample to Standard:set10Standard wells on the ELISA plates coated,add Standard100μl to the first and the second well,then add Standard dilution50μl to the first and the second well,mix;take out100μl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separately.then add Standard dilution50μl to the third and the forth well,mix;then take out50μl from the third and the forth well discard,add50μl to the fifth and the sixth well,then add Standard dilution50μl to the fifth and the sixth well,mix;take out50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well,then add Standard dilution50μl to the seventh and the eighth well,mix;take out50μl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well,add Standard dilution50μl to the ninth and the tenth well,mix,take out50μl from the ninth and the tenth well discard(add Sample50μl to each well after Diluting,(density:1200ng/L,800ng/L,400ng/L,200ng/L,100ng/L)
2.add sample：Set blank wells separately(blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent,other each step operation is same).testing sample well.add Sample dilution40μl to testing sample well,then add testing sample10μl(sample final dilution is 5-fold),add sample to wells,don’t touch the well wall as far as possible,and Gently mix.
3.Incubate:After closing plate with Closure plate membrane,incubate for30min at37℃.
4.Configurate liquid:30-fold(or20-fold)wash solution diluted30-fold(or20-fold)with distilled water and reserve.
5.washing：Uncover Closure plate membrane,discard Liquid,dry by swing,add washing buffer to every well,still for30s then drain,repeat5times,dry by pat.
6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent50μl to each well,except blank well.
7.incubate：Operation with3.
8.washing：Operation with5.
9.color：Add Chromogen Solution A50ul and Chromogen Solution B to each well,evade the light preservation for15min at37℃
10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well,Stop the reaction(the blue color change to yellow color).
11.assay：take blank well as zero,Read absorbance at450nm after Adding Stop Solution and within15min.
Important notes
1.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced15-30minutes in
the room temperature,ELISA plates coated if has not use up after opened,the plate should be stored in Sealed bag.
2.washing buffer will Crystallization separation,it can be heated the water helps dissolve
when dilute.Washing does not affect the result.
3.add Sample with sampler Each step,And proofread its accuracy frequently,avoids the
experimental error.add sample within5min,if the number of sample is much,recommend to use Volley.
4.if the testing material content is excessively higher(The sample OD is bigger than the first
standard well),please dilute Sample(n-fold),Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.
5.Closure plate membrane only limits the disposable use,to avoid cross-contamination.
6.The substrate evade the light preservation.
7.Please according to use instruction strictly,The test result determination must take the
microtiter plate reader as a standard.
8.All samples,washing buffer and each kind of reject should according to infective material
process.
9.Do not mix reagents with those from other lots.
Calculate
Assay range
50ng/L -1500ng/L
Storage and validity
1．Storage ：
2-8℃.
2．validity ：six months.
Take the standard density as the horizontal,the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper,Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve,multiplied by the dilution multiple,or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation,calculate the sample density,multiplied by the dilution factor,the result is the sample actual density.
This chart for reference only
elisa试剂盒
elisa试剂盒 Elisa试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒IgM 抗体ELISA检测。 目录 1elisa试剂盒简介 2优点 3回收率 4发展 5使用方法 6制备方法 7影响 8检测原理 9操作步骤 10试剂器材 elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。 然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2优点 一、高效、灵敏、特异的抗体； 二、稳定的重复性和可靠性； 三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体； 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型； 五、节省实验经费。
大鼠皮质醇(Cortisol)ELISA试剂盒说明书
大鼠皮质醇(Cortisol)酶联免疫分析试剂盒 使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂盒仅供体外研究使用! 预期应用 ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关生物液体中皮质醇(Cortisol)含量。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗皮质醇(Cortisol)抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗皮质醇(Cortisol)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的皮质醇(Cortisol)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。ELISA法 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板：一块（96孔） 2. 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上， 然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为180 ng/ml，做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)后，分别稀释成180 ng/ml，90 ng/ml，45 ng/ml，22.5 ng/ml，11.25 ng/ml， 5.63 ng/ml，2.82 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。 如配制90 ng/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 180 ng/ml的上述标准品加入含有 0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 3. 样品稀释液：1×20ml。 4. 检测稀释液A：1×10ml。 5. 检测稀释液B：1×10ml。 6. 检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算 好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 7. 检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶 液A。 8. 底物溶液：1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10. 终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 11. 覆膜：5张 12. 使用说明书：1份 自备物品 1. 酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热） 2. 微量加液器及吸头，EP管 3. 蒸馏水或去离子水，全新滤纸
自己翻译的罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书
罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书 注意：Label溶液含有甲次砷酸盐和二氯化钴，严禁吸入和食入。 反应悬浮物收集于密闭、不易碎、有明确标识的容器中，按有毒废物处理。 需要自己配置的其他物品： 除上表所列试剂外，还需准备以下溶液。下表列出每步所需物品概览：
产品概述： 特异性：TUNEL 反应优先标记凋亡产生的DNA 链断裂，从而辨别凋亡与坏死、以及由抑 制细胞生长的药物或放射线产生的primary DNA 链断裂 实验干扰：假阴性：在某些型式的凋亡细胞中DNA 链断裂可能缺失或不完全。空间位阻， 如细胞外元件可能阻止TdT 到达DNA 断裂处。两种情况均能产生假阴性。 假阳性：在坏死晚期，可能产生大量的DNA 片段 DNA 链断裂也可能在具有高增殖和代谢活动的细胞中出现。两种情况均能产生 假阳性。为确认细胞死亡的凋亡型式，应认真进行每种细胞的形态学检查 凋亡过程中产生的形态学改变尤其特征形式，因此，对于可以结果进行解释时， 细胞形态评估是一项重要的参数 样本：细胞离心涂片和细胞涂片 在chamber slides 上培养的黏附细胞 冰冻或福尔马林固定、石蜡包埋样本 分析时间：2-3小时，除外培养、固定和渗透 检测次数：一个试剂盒50T
步骤和所需材料： 1 流程图： 2 样品准备 黏附细胞、细胞涂片和细胞离心涂片 需准备的其他试剂：Washing buffer：磷酸盐缓冲液（PBS） Blocking buffer封闭溶液：甲醇稀释的3% H2O2 Fixation solution固定溶液：PBS配制的4%多聚甲醛，ph ，新鲜配制 Permeabilisation solution 渗透液：%Triton1）X-100溶于%柠檬酸钠溶液 中，新鲜配制 步骤：下表描述了细胞固定、内源性过氧化物酶封闭和细胞渗透过程。 组织部分 福尔马林-包埋组织 福尔马林包埋组织的预处理：可按4种不同的方式预处理。如用蛋白酶K，不含核酸酶，浓 度、孵育时间和温度应按组织类型优化 注意：只用罗氏应用科学的蛋白酶K，因其经检测不含核酸酶， 核酸酶可导致假阳性。 另外3中替代方法在下表中描述（step 2） 需准备的其他试剂：二甲苯和乙醇（浓度：95%，90%，80%，70%，溶于双蒸水中）
人(Human)瘦素(LEP)ELISA试剂盒说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）瘦素（LEP）ELISA检测试剂盒 使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被瘦素（LEP）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的瘦素（LEP）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱 操作注意事项 1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。 4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5.所有液体组分使用前充分摇匀。
ELISA操作步骤
Envirology ELISA试剂盒说明书 试剂盒内容物： ●Cry1Ab/Cry1Ac 抗体包被固相板 ●Cry1Ab/Cry1Ac 阳性对照组 ●Cry1Ab/Cry1Ac 酶结合物 ●底物 未提供的物品： ●TPBS清洗缓冲液（PBS/0.05% Tween-20 wash buffer），常温保存，最多一年，然后丢弃。 ●萃取缓冲液（PBS0.55% Tween-20）。可以将0.5 ml Tween-20加入到100 ml 上一步的TPBS 缓冲液内制得。不使用时放在冰箱内冷藏，ELISA分析时升至室温使用。 ●HCL(1 Mol/L) 终止液。将83 ml盐酸溶液（37%）到917ml蒸馏水或去离子水中制的。 配置过程在通风橱内操作。室温下保存可使用2年。 ●一次性吸管，可调节排气移液枪，记号笔，parafilm膜等。 实验步骤： ●此步在15min内完成。加50ul 到板孔内，随即在相应板孔内进行如下操作，加50ul 萃取缓冲液作为空白对照，加50ul Cry1Ab阳性对照，加50ul样品萃取物到板孔内。 ●在桌面上晃动96孔板20~30秒，使内容物充分混匀。注意勿使内容物溅出！ ●盖上盖子勿使水分蒸发，并在室温下孵化1~2小时。如果有孔板摇床，可在200 rpm速 度下摇动孔板。注意：根据组织萃取方法，用户应该决定一个合适的孵化时间，以使得到最佳结果。 ●孵化结束后，小心移去盖子并将孔内液体甩到废水池内，要剧烈甩弃，尽量甩尽孔内液 体。用TPBS清洗缓冲液清洗板孔（300ul/孔），然后甩尽缓冲液，3次重复。 ●每孔加100ul底物。 ●在桌面上晃动96孔板20~30秒，使内容物充分混匀。盖上盖子室温下孵化15~30分钟。 ●加100ul HCL(1 M)终止液，并且混匀。此步能使孔内物质变黄。注意：在加入终止液 后30分钟内读板。 读板： ●调节读板仪波长到450nm。如果读板仪有双波长功能，可依据文献选600、630或者 650nm作为备选波长。 ●设置读板仪空白项到空白对照孔。
Annexin V-FITC PI细胞凋亡检测试剂盒
Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒 Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit 一、试剂盒说明 在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS ）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS ）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca 2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素FITC 标记，以标记了的Annexin V 作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶（Propidium Iodide, PI ）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。 二、试剂盒组份 组份 (20 assays) (50 assays) (100 assays) 储存条件 AnnexinV-FITC 100 μL 250μL 500 μL Propidium Iodide 100 μL 250μL 500 μL Binding Buffer 10.0 mL 25 mL 50 mL 注：1、Annexin V-FITC 组份建议按需分装小份冻存于-20 ℃，避免反复冻融； 2、Propidium Iodide 和Binding Buffer 组份不用时可放置于4℃保存，Propidium Iodide 需要避光。 3、Store at -20℃ for 12 months 三、试剂盒以外自备仪器和试剂 流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器 1.5m L Microtube 、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS 、不含EDTA 的胰酶消化液 四、使用注意事项 1. 微量试剂取用前请离心集液。 2. Annexin V-FITC ，Propidium Iodide （PI ）避光保存及使用。对于Annexin V-FITC 这个组份，建议您在收到产品之后，分装为小份避光保存于-20℃，即用即取。 3. Propidium Iodide （PI ）有毒，操作时要戴手套。 4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，不推荐用于检测组织样本。 5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而 用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。 6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。 7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每 次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。 五、 操作方法 1. 悬浮细胞离心（2000rpm 离心5min ）收集；贴壁细胞用不含EDTA 的胰酶消化收集（注：胰酶消化时间不 易过长，否则容易引起假阳性）； -20℃避光 4℃避光 4℃
人CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)ELISA检测试剂盒说明书
人CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）ELISA检测试剂 盒说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 樊克生物专业供应： 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）含量。 试验原理： CX3CR1试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知CX3CR1浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将CX3CR1和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合 的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中CX3CR1的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗CX3CR1抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
免疫学--ELISA原理
ELISA原理－－操作规则（新手适用）点击次数：3347 发布时间：2010-7-12 8:45:33 ELISA原理－－操作规则（新手适用） 酶联免疫吸附实验 ELISA 一．实验目的 酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原）, 再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）－－待测抗体（抗原）－－酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。 二．实验原理 用于免疫酶技术的酶有很多，如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等。常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。由于酶摧化的是氧化还
原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中的氧化作用使颜色加深，无法准确地定量。 辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素（protonhemin）区作辅基。酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。氯化血红素辅基的最大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm，所以酶的浓度和纯度计算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分浓度为100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶浓度以 mg/ml 计算是HRP的A（1cm 403nm mg/ml=2.5）HRP纯度（RZ）=A403nm/A275nm纯度RZ（Ｒeinheit Zahl）值越大说明酶内所含杂质越少。高纯度HRP的RZ值在3.0左右，最高可达3.4。用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在3.0以上。 ELISA的基本原理有三条： （1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性； （2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性； （3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。
一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒说明书
一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒说明书 货号：T2190 规格：20次 保存：-20oC保存，荧光标记液需避光保存。 产品简介： 细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上绿色荧光探针荧光素(FITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP)，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。 一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于经过固定和洗涤的细胞或组织，只要经过一步染色反应，洗涤后就可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到呈现绿色荧光的凋亡细胞。 TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下，最好同时检测多个凋亡指标。产品内容： 1.TdT酶100μl 2.荧光标记液900μl 3.TdT酶稀释液(选用)500μl
人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书,5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒
人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试 剂盒 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒 产品规格：96T/48T。 供应商：上海乔羽生物有限公司 上海乔羽有限公司，有elisa试剂盒，抗体，培养基 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒其主要特点如下 专一性强：抗原与抗体的免疫反应是专一反应，而免疫酶技术以免疫反应为基础，所检测的对象是抗原（或抗体），使用的抗体除标记了酶以外，与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。 灵敏度高：由于抗体联结上了酶，因此，借助于酶与底物的显色反应，显示抗原与抗体的结合，大大提高了检测的灵敏性，使检测水平接近放射免疫测定法。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 1.标准品复溶：试剂盒提供6管标准品，每管已标定浓度，并且冻干。实验前在每个标准品管中加入0.5mL 样本稀释液，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动助其溶解，使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。 2.20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒试剂的准备： 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 ELISA试剂盒的优势： 全面——混合8 种不同的常见抗原，对自身免疫性疾病进行全面筛查。
人B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA检测试剂盒,ELISA试剂盒说明书
人B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）ELISA检测试剂 盒,ELISA试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 上海乔羽生物专业供应： 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本B细胞淋巴瘤因子2 （Bcl-2）含量。 试验原理： Bcl-2试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知Bcl-2浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行 检测。先将Bcl-2和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合 物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中Bcl-2的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗Bcl-2抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性
凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒
凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(通用)（BIOTIN标记POD法,适用于细胞、组织样本） 使用说明书 一、TUNEL制品说明 凯基TUNEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA 的断裂情况，其原理是生物素（biotin）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3‘－OH末端，并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）特异结合，在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺（DAB）的存在下，产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH 形成，很少能够被染色。 本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）的凋亡原位检测。 本试剂盒特点 ●操作简便：使用Ready-to-Use型试剂，并配有Proteinase K 和DAB。 ●高灵敏度：可以单一检出初期的凋亡细胞。 ●高特异性：能特异性染色凋亡细胞。 ●快速操作：整体操作约需3小时。 ●用途广泛：可应用于组织切片、细胞样本等。 ●方便观察：使用光学显微镜观察实验结果。 ●高正确性：有阳性对照片的制备方法，可以确认试剂盒的有效性
使用注意事项 1．使用前请认真阅读本说明书，提前准备好相关试剂。 2．因本试剂盒中组分均为微量，使用前请离心集液。 3．为避免试验误差、降低试剂的损耗，建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。 4． TdT 酶反应液最好在使用前根椐样本数量集中配制，再分别滴加于各样本片上，避免每个样本单独配制而产生的试剂损耗。 5. 为防止样本脱落，请使用硅烷（Silane）处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。 6. 固定好的样本可以在-20℃的70%乙醇中放置30分钟或至过夜，以改善细胞的渗透性。 7. 使用PBS清洗细胞样本时，不要直接加在细胞样本上，以防止细胞样本的脱落。 8. 进行PBS清洗时，以5分钟清洗3次为标准。 9. DAB为固体粉末，使用前加入PBS配制成20×DAB（10 mg/ml）后，按说明书显色使用。 二、TUNEL试剂盒组分 试剂盒以外自备仪器和试剂
小鼠Ⅰ型胶原 (Col I)-ELISA试剂盒说明书
小鼠Ⅰ型胶原 (Col I)酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书 产品编号：E-EL-M0314 （本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!） 声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISA kit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组Col I浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。 *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）
检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠Col I抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的Col I会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠Col I抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠Col I抗体与结合在包被抗体上的小鼠Col I结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，Col I浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中Col I的浓度。 标本收集: 1.血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集 血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可 检测。避免使用溶血，高血脂标本。 3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞 会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟，取上清检测。 4.细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 （具体处理方法可参考：https://www.360docs.net/doc/c2470222.html,/news2.asp?tid=477 ） 6.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7.标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃冰箱内，避免反复冻融， 1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。 8.如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做 预实验，以确定稀释倍数)。 试验所需自备物品: 1.酶标仪(450nm波长滤光片) 2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3.37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水 4.吸水纸
ELISA原理及步骤
ELISA原理－－操作规则（新手适用） 点击次数：3347 发布时间：2010-7-12 8:45:33 ELISA原理－－操作规则（新手适用） 酶联免疫吸附实验 ELISA ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大，可概括四个方面：1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。2、研究抗酶抗体的合成。3、显现微量的免疫沉淀反应。4、定量检测体液中抗原或抗体成份。一．实验目的 酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原）, 再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）－－待测抗体（抗原）－－酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。 二．实验原理
用于免疫酶技术的酶有很多，如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等。常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。由于酶摧化的是氧化还原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中的氧化作用使颜色加深，无法准确地定量。 辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素（protonhemin）区作辅基。酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。氯化血红素辅基的最大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm，所以酶的浓度和纯度计算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分浓度为100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶浓度以mg/ml 计算是HRP 的A（1cm 403nm mg/ml=）HRP纯度（RZ）=A403nm/A275nm纯度RZ（Ｒeinheit Zahl）值越大说明酶内所含杂质越少。高纯度HRP的RZ值在左右，最高可达。用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在以上。 ELISA的基本原理有三条： （1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性； （2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性； （3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。 三、实验方法 基本方法一用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
人表皮生长因子elisa试剂盒使用方法
人表皮生长因子elisa试剂盒使用方法 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围：96T 25pg/ml-480pg/ml 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本表皮生长因子(EGF)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人表皮生长因子(EGF)水平。用纯化的人表皮生长因子(EGF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入表皮生长因子(EGF)，再与HRP标记的表皮生长因子(EGF)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的表皮生长因子(EGF)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人表皮生长因子(EGF)浓度。 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 操作程序总结： 计算 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒使用说明书
人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）ELISA 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 樊克生物专业供应： 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本8羟基脱氧鸟苷 （8-OHdG）含量。 试验原理： 8-OHdG试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知8-OHdG浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将8-OHdG和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合 的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中8-OHdG的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗8-OHdG抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性
(完整版)Elisa常见类型及实验标准操作方法与常见问题
Elisa常见类型及实验标准操作方法与常见问题 酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种实验室常用的检测方法，广泛应用于测量溶液中的分析物（抗体或抗原）的浓度。与其他基于抗体的检测方法不同的是，酶联免疫吸附试验或酶免疫测定（EIA）通过与固相支持物的结合和系列洗涤步骤，实现特异性和非特异性相互作用的分离，并可通过最终有色产物的形成，定量分析原始样品中分析物的含量。 ELISA 实验通常以细胞培养上清液、血清、血浆以及组织裂解物等为样品。该实验必备三种试剂：固相的抗原或抗体；酶标记的抗原或抗体；酶作用的底物。根据样品的性质、检测的实验条件、试剂的来源，可设计出不同类型的ELISA 检测方法。 该实验可迅速分析大量平行样品，在基础研究和临床诊断实践中广泛使用。 一、直接ELISA 原理：将抗原与固相载体连接，洗涤除去未结合的抗原及杂质。加酶标抗体进行孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。加底物反应。直接法主要用于测定抗原。 优点：操作流程简短，实验步骤少；无需使用二抗，避免了交叉反应；实验步骤少，操作不易出错。 缺点：实验中的一抗需要直接用酶标记，成本相对较高。 二、间接法ELISA
原理：将抗原与固相载体相连结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。加入特异性一抗与固相抗原相结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，加酶标二抗。固相免疫复合物中的抗体与酶标二抗结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，加底物显色。 优点：酶标二抗可加强信号，提高灵敏度；灵活性更大，同一酶标二抗可应用于多种不同的一抗；不直标一抗，可保留更多的免疫反应性；成本更低，使用标记抗体更少。 缺点：交叉反应几率升高。 三、双抗夹心法ELISA 原理：双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子，但不适用于小分子抗原。将特异性抗体（捕获抗体）与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。加入待检样品，保温孵育。样品中的特异性抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。加酶标抗体（检测抗体）保温孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。加底物反应。 双抗原夹心法测抗体的反应模式与测抗原相似，用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。
人白介素18(IL-18)ELISA分析检测试剂盒使用说明书
人白介素18（IL-18）ELISA分析检测试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中转化生长因子（IL-18）的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素18（IL-18）水平。用纯化的转化生长因子（IL-18）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入转化生长因子（IL-18），再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的转化生长因子（IL-18）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人白介素18（IL-18）浓度。 试剂盒内容及其配制： 试剂盒成份96孔配置48孔配置 96/48人份酶标板1块板 （96T） 半块板 （48T） 塑料膜板盖1块半块 标准品：100ng/ml 1瓶 （1.0ml） 1瓶 （0.5ml） 空白对照1瓶 （1.0ml） 1瓶 （0.5ml） 标准品稀释缓冲液1瓶 （8.0ml） 1瓶 （4.0ml） 生物素标记的抗OT抗体1瓶 （8.0ml） 1瓶 （4.0ml） 亲和链酶素-HRP 1瓶 （12ml） 1瓶（5ml） 洗涤缓冲液1瓶 （20ml） 1瓶（10ml） 底物A 1瓶 （6.0ml） 1瓶 （3.0ml） 底物B 1瓶 （6.0ml） 1瓶 （3.0ml） 终止液1瓶 （6.0ml） 1瓶 （3.0ml）
试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存 说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：45μ mol/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存 浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1 瓶 （20ml×30倍） ×1瓶 2-8℃保存 自备材料： 1. 蒸馏水。 2. 加样器：5ul、10ul 、50ul 、100ul 、200ul 、500ul、1000ul。 3. 振荡器及磁力搅拌器等。 样品收集、处理及保存方法： 1、血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000 ×g离心30分钟去除颗粒。 3、细胞上清液……1000 ×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4、组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000 ×g离心10分钟，取上清液。 5、保存……如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 人白介素18ELISA试剂盒操作注意事项： ●试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 ●实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 ●不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。