黑曲霉A9葡萄糖氧化酶的分离提纯及性质研究
黑曲霉A9葡萄糖氧化酶的分离提纯及性质研究
一、实验目的
1.掌握十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定葡萄糖氧化酶相对分子质量的基本原理。
2.熟悉十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法的基本操作技术。
3.了解从尼崎青霉菌中分离提纯葡萄糖氧化酶的方法。
二、实验原理
葡萄糖氧化酶(GlucoseOxidase,简称GOD)系统名为β-D-葡萄糖:氧化还原酶它能专一地将β-D-葡萄糖氧化成葡萄糖酸和过氧化氢。
葡萄糖氧化酶在食品、医药及生物等领域有着广泛的应用。分布于动物、植物及微生物体内,在微生物中主要产生于黑曲霉和青霉属菌株。为了进行葡萄糖氧化酶酶学性质、催化机理、蛋白质序列及基因等方面的研究,首先要对其进行提纯,因为黑曲霉或青霉在产生葡萄糖氧化酶的同时还常伴有过氧化氢酶、α-淀粉酶、蔗糖酶和其他杂蛋白的产生。
以黑曲霉A9菌种为材料，通过培养发酵、离心、浓缩、透析、DEAE-32离子交换柱层析、Sephacry S-200分子柱层析分离纯化葡萄糖氧化酶，测定分析其理化性质及酶学性质。
分离提纯之后的葡萄糖氧化酶的分子量测定采用是的SDS-PAGE法，根据蛋白质-SDS复合物的迁移率与蛋白质相对分子质量呈线性关系：
lgMW=lgK - bm
可以绘制出标准蛋白曲线，从而测出的葡萄糖氧化酶的分子量。
葡萄糖氧化酶的性质测定主要讨论的是温度、pH对酶活性的影响。由于葡萄糖氧化酶能够利用氧和水将葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶可将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性受体4-氨基安替吡啉和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应，因此可以借由这一反应，控制变量，比较颜色深浅反映出各个条件对酶活性的影响。
三、实验试剂与仪器
菌种河北农业大学食品科技学院酶工程实验室筛选并保存的黑曲霉菌株A9。主要药品与试剂 5.55mmol/L葡萄糖标准应用液，辣根过氧化物酶，4-氨基安替吡啉，苯酚（也可用成套试剂盒，酶试剂，酚试剂）
标准蛋白混合液， 30%丙烯酰胺贮存液，1.5mol/L Tris-HCL分离胶缓冲液，0.5mol/L Tris-HCL浓缩胶缓冲液，10%SDS， Tris-甘氨酸/SDS电泳缓冲液（PH8.3）,10%过硫酸铵，TEMED,染色液，脱色液，2*上样缓冲液等
仪器 SDS-PAGE电泳仪干净试管若干微量加样器（20、500μL) 5mL刻度吸管
四、实验步骤，
1.粗酶液制备
发酵培养基: 葡萄糖12%、磷酸氢二铵0.4% 、磷酸二氢钾0.2% 、硫酸镁
0.2% 、碳酸钙1%、吐温- 80 1% , 制备7 L 液态发酵培养基, 接种浓度104个/mL, 30℃， 4d 达产酶高峰。纱布过滤, 菌丝体研磨,用磷酸缓冲液浸酶提取胞内酶,即为粗酶液。
2.粗酶液提纯
粗酶液经过浓缩、硫酸铵分级盐析及SephadexG- 25 脱盐、离子交换层析、分子筛层析, 收集蛋白洗脱液, 进行PAGE 电泳纯度鉴定。
2.1粗酶液的浓缩
取粗酶液500mL,为除去杂蛋白，并达到浓缩酶液的目的，选择截留分子量为30,000的碳，确定压力为5psi(35kpa)，进行超滤浓缩。超滤后，用0.2mol/L 的磷酸缓冲液洗膜，并与超滤液合并，最终得到100ml左右的粗酶液，但远远超出离子交换的处理量，需进一步浓缩，4℃保存备用。
2.2硫酸铵分级盐析
为进一步除去杂蛋白，并减少离子交换的处理量，进行盐析处理，0℃条件下，用90%硫酸铵盐析48h，12,000r/min 离心除去杂蛋白，沉淀用尽量少的0.05mol/L Tris-HCL缓冲液（PH7.0)溶解，4℃保存，备用。
2.2脱盐
盐析沉淀在4℃，用SephadexG- 25脱盐，用0.05mol/L Tris-HCL缓冲液（PH7.0)洗脱，对洗脱的各管收集液用考马斯亮蓝R-250和PbAc溶液检测蛋白与盐的分离情况，最后收集合并含蛋白的洗脱液，备用。
2.3离子交换层析
将DEAE-纤维素32灌入离子交换层析柱中（Φ1.6cm*30cm），用0.05mol/L Tris-HCL缓冲液（PH7.0)平衡，使柱底部流出液的PH值与洗脱缓冲液的PH值一致，然后将脱盐后的酶液上样到平衡好的离子交换柱中，用0~0.8mol/L的NacL （同样缓冲液配制）溶液进行线性梯度洗脱，分部收集。在280nm处测紫外吸光值，收集蛋白部分。测定各管酶活，收集酶性部分洗脱液，然后进行真空冷冻浓缩处理。
2.4分子筛层析
将真空冷冻后的浓缩液加到预先用0.05mol/L Tris-HCL缓冲液（PH7.0)平衡的SephadexG- 100层析柱（Φ1.6cm*80cm），用同样的缓冲液洗脱，洗脱液在280nm处测紫外吸光值，收集含蛋白部分测定各管酶活，收集酶性部分洗脱液，备用。
2.5 PAGE电泳测定
试剂：30%丙烯酰胺贮存液，去离子水配制
1.0mol/L Tris-HCL浓缩胶缓冲液(PH6.8)
1.0mol/L Tris-HCL分离胶缓冲液(PH8.8)
电泳缓冲液 5*Tris-甘氨酸 PH8.3
电泳条件：分离胶浓度4%，浓缩胶浓度8%
浓缩胶采用恒流20mA,分离胶采用恒流10mA
3.分子量测定
SDS - PAGE 法垂直板测定分子量, 浓缩胶浓度4%, 分离胶浓度10%; 浓缩胶电压100 V, 分离胶电压200 V。低分子量标准蛋白质做标样。
3.1.1安装垂直板电泳装置
⑴垂直板电泳槽用蒸馏水洗净，晾干。⑵将两块玻璃板置于灌胶支架上，玻璃板之间留有空隙，两边用夹子夹住固定，固定玻璃板时，两边要用力均匀，防止夹坏玻璃板，勿用手接触灌胶面的玻璃，
3.1.2制胶
⑴分离胶的制备，本实验采用的是浓度为10%的分离胶，制备方法如下表:
试剂（ml）10%
H2O 4.00
30%丙烯酰胺 3.30
分离胶缓冲液pH8.8 2.50
10%SDS 0.10
10%过硫酸铵（新鲜）0.1
TEMED 0.004
总体积10
立即轻轻混匀，并迅速将其灌注于玻璃板间隙中，留出灌注浓缩胶所需要的空间。之后在胶面上加少许蒸馏水（2--3mm高），以阻止氧气进入凝胶溶液。静置约50分当凝胶与水层之间形成清晰的界面后，倒出蒸馏水并用滤纸把剩余的水分吸干。
（2）浓缩胶的制备，本实验采用的浓度是4%的浓缩胶，制备方法如下表
试剂（ml）4%
H2O 3.05
30%丙烯酰胺0.66
浓缩胶缓冲液（pH6.8） 1.25
10%SDS 0.05
10%过硫酸铵（新鲜）0.05
TEMED 0.005
总体积 5
轻轻混匀，灌注于已混合的分离胶上，插入样品梳。应注意，梳子需一次
平稳插入，梳口处不得有气泡，梳底需水平。待浓缩胶聚合完全后，小心移除梳子，装入电泳槽，上下槽中各加入pH8.3的电泳缓冲液。
3.1.3样品预处理
标准蛋白和待测样品（0.5--1.5mm/ml）与2*上样缓冲液等体积混匀，转移至带塞小离心管中，置沸水浴中加热5min，取出冷却至室温。
3.1.4上样
按事先设计好的顺序用微量加样器吸取处理过的样品和标准蛋白液，分别加至不同的梳子孔中。（一般加样体积为10--20μl）
3.1.5电泳
加样完毕，打开直流稳压电源（事先先将电泳槽与电极接好，上槽接正极，下槽接负极），浓缩胶电压为100V，当样品进入分离胶时，电压调至200V，电泳40min，关闭电源，停止电泳。
3.1.6凝胶板剥离与染色
电泳结束后，从电泳装置上卸下玻璃板，小心撬开玻璃板取出凝胶，将凝胶板做好标记后，放在大培养皿中，加入染色液，染色1--2小时。
3.1.7脱色
染色后的凝胶板用蒸馏水漂洗数次，再用脱色液脱色，直至本底无色，蛋白质区带清晰为止。
4.酶活性测定
4.1.1pH对酶活性的影响
试剂（ml） 1 2 3
PH4.0缓冲溶液 2.0
PH6.8缓冲溶液 2.0
PH9.0缓冲溶液液 2.0
葡萄糖标准应用液0.02 0.02 0.02
酶试剂 1.5 1.5 1.5
酚试剂 1.5 1.5 1.5
结果
4.1.2 温度对酶活性的影响
试剂 1 2 3
葡萄糖标准应用液（ml）0.5 0.5 0.5
酚试剂（ml） 2.0 2.0 2.0
混匀后放入室温30℃水浴60℃水浴
十分钟后加入酶试剂 2ml 酶试剂 2ml 酶试剂 2ml 结果
五、预期试验结果
1.提取出的葡萄糖氧化酶经PAGE 电泳鉴定为一条带，说明纯度较好。
2.分子量测定，经查阅，黑曲霉葡萄糖氧化酶的分子量为138 200Da 电泳结果如图所示
1、2、3、4: Sephadex G- 100 酶液 图1 PAGE 电泳 1. 加巯基乙醇的酶液; 2. 蛋白质标样;
3、4、5. 未加巯基乙醇的酶液 图2 酶蛋白SDS- PAGE 电泳图
（注：加巯基乙醇的酶蛋白显示1条带,而未加巯基乙醇的酶蛋白显示两条带。由于在加热处理样品的过程中空气中存在有还原性的物质使部分酶蛋白间的二硫键断开,所以未加巯基乙醇的3、4、5 电泳道显示两条带,第1条带为纯酶,第2条带为断开的亚基,且与1道电泳带位于相同的电泳位置。由此可见,该酶是由相同的2个亚基组成。）
3.PH对酶活性的影响
应该在PH6.8缓冲液中，显色最深。证明其最适PH接近中性
4.温度对酶活性的影响
其最适温度在30℃左右，因此30℃条件下，显色最深。
五．注意事项
1.在培养黑曲霉时，严格控制好温度等条件。
2.测定分子量时，必须作出标准曲线，不能用过去的标准曲线。
3.凝胶电泳时，样品必须经过预处理，以除去酶分子亚稳态的聚合。灌胶不能有气泡。
附录：
一、测定分子量所用试剂
1. 标准蛋白混合液选用了六种标准蛋白：兔磷酸化酶B（97,400），牛血清清蛋白（66,200），兔肌动蛋白（43,000），牛碳酸酐酶（31,000），胰蛋白酶抑制剂（20，100），鸡蛋清溶菌酶（14,400）配置成标准蛋白混合液，本实验课采用现成试剂盒。
2. 30%丙烯酰胺贮存液丙烯酰胺29.0g，甲叉丙烯酰胺 1.0g,加蒸馏水至100ml，过滤后置棕色瓶中4℃保存，可用2--3个月。
3. 1.0mol/L Tris-HCL分离胶缓冲液(PH8.8) Tris 12.13g，加少许蒸馏水溶解用1mol/L盐酸调PH至8.8，最后用蒸馏水定容至100mL，4℃保存。
4. 1.0mol/L Tris-HCL浓缩胶缓冲液（PH6.8) Tris 11.96g，加少许蒸馏水溶解用1mol/L盐酸调PH至6.8，最后用蒸馏水定容至100mL，4℃保存。
5. 10%SDS 10g SDS，加蒸馏水至100mL，完全溶解后，室温保存。
6.Tris-甘氨酸/SDS电泳缓冲液（PH8.3） Tris 3.02g，甘氨酸18.8g，SDS 1g，加蒸馏水使其溶解后,定容至1L，4℃保存。
7.10%过硫酸铵过硫酸铵10g，加蒸馏水定容至100mL，新鲜配置。
8.TEMED 不需做任何处理，原液使用。
9.染色液 2.5g考马斯亮蓝R-250，加入无水甲醇（乙醇）500mL溶解，冰醋酸70mL，补水至1L。
脱色液无水甲醇（乙醇）300mL，冰醋酸70mL，补水至1L。
10.2*上样缓冲液浓缩胶缓冲液 2.0mL、甘油 3.0mL、10%SDS 4.0mL、β-羟基乙醇1.0mL、0.1%（W/V）溴酚蓝0.5mL，混匀，加水至10mL。
二、PH、温度对酶活性的影响
11.PH4.0醋酸盐缓冲液 0.2mol/L醋酸180mL与0.2mol/L醋酸钠820mL混合。
12.PH6.8磷酸盐缓冲液 0.2mol/L磷酸氢二钠490mL与0.2mol/L磷酸氢二钠510mL混合。
13.PH9.0硼酸盐缓冲液 0.05mol/L硼砂800mL与0.2mol/L硼酸200mL混合。
14.0.1mol/L磷酸盐缓冲液（PH7.0）称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800mL中，用1mol/L氢氧化钠（或盐酸）调PH至7.0，用蒸馏水定容至1L。
15.酶试剂称取过氧化物酶1200U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于磷酸盐缓冲液80mL中，用1mol/L氢氧化钠调PH至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100mL，至4℃保存，可稳定3个月。
16.酚试剂称取重蒸馏酚100mg溶于蒸馏水100mL中，用棕色瓶贮存。
17.12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800mL中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至1L。
18.100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70mL中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100mL。2h之后方可使用。
19.5.55mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.55mL置于100mL容量瓶中，以12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
（注：也可用成套试剂盒）
黑曲霉葡萄糖氧化酶基因的原核表达及其蛋白产物的Western_blot分析
收稿日期:2008-12-25 基金项目:内蒙古自治区优秀学科带头人计划项目(20050802) 作者简介:安玉麟(1954-),男,内蒙古土默特右旗人,研究员,硕士生导师,主要从事作物栽培、育种研究工作。 黑曲霉葡萄糖氧化酶基因的原核表达及 其蛋白产物的Western 2blot 分析 安玉麟1,孙瑞芬1,张鹤龄2,郭树春1,闫素丽3 (1.内蒙古农牧业科学院生物技术中心,内蒙古呼和浩特 010031;2.内蒙古大学生命 科学学院,内蒙古呼和浩特 010021;3.内蒙古农业大学农学院,内蒙古呼和浩特 010019) 摘要:为进一步研究黑曲酶中国株3.758葡萄糖氧化酶(G OD )在大肠杆菌中的表达水平和条件,将黑曲霉中国株 3.758的葡萄糖氧化酶(G OD )基因定向克隆于原核表达载体pET 211a 上,构建了融合表达的重组质粒pET/G O ,转化E.coli BL21(DE3)plysS ,用IPTG 诱导,超声波粉碎细菌细胞,S DS 2PAGE 电泳检测,G OD 基因获得了表达,表达的融合 蛋白相对分子质量为66.5kDa 。用市售葡萄糖氧化酶免疫家兔获得抗血清,酶联法(E LIS A )测定其效价为106,West 2 ern 2blot 分析证明表达的融合蛋白与兔抗G OD 血清有较强的特异性,为黑曲霉3.758葡萄糖氧化酶(G OD )抗体的制备 奠定了基础。 关键词:黑曲霉3.758;葡萄糖氧化酶基因;融合表达;抗血清;E LIS A ;Western 2blot 中图分类号:T Q920.1 文献标识码:A 文章编号:1000-7091(2009)04-0084-04 Prokaryotic Expression and Western 2blot Analysis of G lucose Oxidase G ene from Aspergillus niger AN Y u 2lin 1,S UN Rui 2fen 1,ZHANG He 2ling 2,G UO Shu 2chun 1,Y AN Su 2li 3 (1.Biotechnology Research Center ,Inner M ong olia Academy of Agriculture and Husbundary Sciences ,Huhhot 010031,China ;2.C ollege of Life Science ,Inner M ong olia University ,Huhhot 010021,China ;3.Agricultural C ollege of Inner M ong olia Agricultural University ,Huhhot 010019,China )Abstract :In order to further study expressed level and condition of G lucose oxidase (G OD )from Aspergillus niger 31758in E.coli ,the coding region of G OD from A.niger 3.758was inserted into the prokary otic expression vector pET 2 11a ,and the recombinant plasmid was trans formed into E.coli BL21(DE3)plysS.The result of S DS 2PAGE showed that the G OD gene was expressed by IPTG induction ,and the m olecular weight of the fusion protein was about 66.5kDa.An 2tiserum was produced in rabbit immunized with commercial G OD ,and E LIS A analysis proved that the titer of this antibody was 106.The Western 2blotting result confirmed that the antibody reacted specifically to the expressed fusion protein.The study established basis for preparation of G OD antibody from Aspergillus niger 3.758. K ey w ords :Aspergillus niger 3.758;G lucose oxidase gene ;Fusion expression ;Antiserum ;E LIS A ;Western 2blot 葡萄糖氧化酶(β2D 2glucose :oxygen 12oxidoreduc 2tase EC1.1.3.4,简称G OD ),催化β2D 葡萄糖氧化生 成δ2葡萄糖酸酯和O 2,O 2被还原生成H 2O 2(β2D 2glu 2cose +O 2→glucose 2δ2lactone +H 2O 2)[1]。G OD 的活性最早是1928年由Muller 在黑曲霉的抽提物中发现 的,后来在黑曲霉[2,3]和青霉[4]中都纯化到了G OD 。现已从几种微生物中得到了G OD ,但从黑曲霉中得到的G OD 活性最强。目前G OD 已在临床检测、食 品工业、生物传感器、有机酸生产及抗真菌病转基因研究等方面得到广泛应用[5],而且编码G OD 的基因 已从不同的真菌菌株中分离、克隆。Frederick 等[1]和Whittington 等[6]将来自黑曲霉的G OD 基因成功地重组到酵母中,获得了具有生物活性的酿酒酵母G OD 。Witt 等[7]等在大肠杆菌中表达了青霉G OD 。国内周亚凤等[8]也在酵母中高效表达了黑曲霉G OD 。母敬郁等[9] 利用高表达分泌纤维素酶的真菌 华北农学报?2009,24(4):84287
西那卡塞市场调研分析报告 (1)
盐酸西那卡塞调研报告 目录 一、概述： 盐酸西那卡塞通过增加钙敏感受体对细胞外的钙浓度敏感性来直接降低甲状旁腺激素水平。适用于治疗进行透析的慢性肾病（CKD）患者的继发性甲状旁腺功能亢进（SPTH）、甲状旁腺癌患者的高血钙症和治疗不能接受甲状旁腺切除术的原发性甲
状旁腺功能亢进引起的严重高血钙症（来源：FDA说明书2011版；2007版仅有前两 种适应症） 2004年3月由Amgen开发在美国经FDA批准上市，用以治疗继发性甲状旁腺机能亢进，商品名Sensipar。2004年12月，该药在欧洲以同样的适应症上市，商品名Mimpara. 2008年1月，盐酸西那卡塞由Kirin(now Kyowa Hakko Kirin)开发后在日本上市，用以治疗继发性甲状旁腺功能亢进（SHPT），商品名年1月，盐酸西那 卡塞在加拿大、澳大利亚上市。 二、审批情况 目前国内在审批情况如下表： 三原研药销售情况 通过分析安进公司04-12年公司年报数据得出该药物大概的销售状况如下（单 位：百万美元）： 若以此增速预算，本年度该药物在美国销售额可达亿美元。而除美国外的市场份额
为7900万美元，增速8%。照此计算，全年额度可达亿。2012年全年额度已达亿美元，本年势必会冲破10亿美元大关，成为重磅炸弹级药物。 从以上两图看来，该药物销售持续增长。该药物全球市场08-12年四年复合增长率为%，美国市场08-12年四年复合增长率为%。目前国内尚无该药上市。 网上搜索其价格，在一家名为加拿大白求恩药房（）的网上药店有售，价格如 下图。 四、甲状旁腺相关疾病临床现状： 甲状腺与甲状旁腺： 甲状腺和甲状旁腺是两种独立的内分泌腺，有完全不同的功能。 甲状腺形如蝴蝶，两叶各位于气管一侧，由一条甲状腺组织连接。甲状腺产生甲状腺素和三碘甲状腺氨酸，调节人体的新陈代谢。这些激素增加，提供能量和刺激组织生长修复的生化过程就加快；甲状腺激素减少，这些过程就减慢。甲状腺C 细胞分泌的降钙素（CT）降低血钙的水平。而甲状旁腺由四个腺体组成，每个小如一颗豌豆，都是位于甲状腺后面，深埋于甲状腺内。这些腺体分泌甲状旁腺激素（ＰＴＨ），与降钙素和维生素D（1,25-（OH）2D3）共同起作用，调节血液的含钙量。甲状旁腺激素的作用与降钙素相反：前者提高血钙量，方法之一是使骨骼把钙释入血流；后者于需要时降低血钙量。两者中，甲状腺激素在稳定血钙量方面所起的作用 较大。 附：三种激素对钙磷的调节 甲状旁腺疾病： 甲状旁腺疾病分为两大类：甲状旁腺功能亢进（简称甲旁亢）和甲状旁腺功能减 低（简称甲旁低）； 本次立项调研产品主要与甲状旁腺功能亢进（简称甲旁亢）有关，相关疾病概述如 下： 甲状旁腺最重要的功能是通过增加或减少甲状旁腺激素的分泌量来维持人体血钙水平的相对稳定。甲状旁腺功能亢进症简称甲旁亢，指甲状旁腺分泌过多甲状旁腺激素（PTH）。甲状旁腺功能亢进可分为以下四种：
氨基葡萄糖
氨基葡萄糖 葡萄糖的一个羟基被一个氨基取代的化合物。分子式C6H13O5N，俗称氨基糖。广泛存在于自然界，2-氨基-2-脱氧-D-葡萄糖通常以N-乙酰基衍生物（如甲壳素）或以N-硫酸酯和N-乙酰-3-O-乳酸醚（胞壁酸）形式存在于微生物、动物来源的多糖和结合多糖中。 α型氨基葡萄糖为针状结晶，熔点88℃，比旋光度+100°→47.5°(水)；β型为针状结晶，熔点110℃(分解)，+28°→+47.5°(水)；溶于水。2-氨基-2-脱氧-D-葡萄糖是多种抗生素的组分。 氨基葡萄糖化学分子结构式 氨基葡萄糖，它是人体内合成的物质，是形成软骨细胞的重要营养素，是健康关节软骨的天然组织成份。随着年龄的增长，人体内的氨基葡萄糖的缺乏越来越严重，关节软骨不断退化和磨损。美国、欧洲和日本的大量医学研究表明：氨基葡萄糖可以帮助修复和维护软骨，并能刺激软骨细胞的生长。 氨基葡萄糖种类 氨基葡萄糖硫酸盐与盐酸盐的区别 目前，市场上氨糖主要分为氨糖盐酸盐与氨糖硫酸盐两种，在中国的临床试验中，氨糖硫酸盐与盐酸盐治疗效果相似，但是就对身体副作用来说，氨糖盐酸盐身体有不适的一组较多，主要体现在胃部疼痛，好转反应多，效果相对不明显。在国际上，众多知名终端产品含有氨基葡萄糖，如爱尔兰罗达制药厂的维固力、美国登喜健（鲨鱼软骨素氨糖片）、倍健等品牌都选用性能优越的硫酸氨糖。 研究： 盐酸氨糖的临床效果并不明显：科学家们观察了盐酸氨基葡萄糖对膝关节炎病人疼痛及功能障碍的治疗，结果发现8周后，疼痛指数与治疗前及安慰组没有明显区别。 为什么硫酸型氨基葡萄糖更易吸收？ 人体软骨对氨糖的吸收主要是靠“硫酸根”介导的，硫酸氨糖则具有这种“硫酸根”；而盐酸氨糖则是不容易被人体吸收差的“盐酸根”。人的关节重要成分含有“硫酸根”（如硫酸软骨素等）对于同含有“硫酸根”的氨糖，会显得更为“亲近”，吸收更好。此外硫酸氨糖的氨糖比例高，纯度高，杂质极少，这无疑更提高了硫酸氨糖对关节炎的治疗作用。
氨基葡萄糖行业研究报告
中国氨基葡萄糖行业市场前景调查及投融资战略研究报告 2017-2022年
前言 企业成功的关键就在于，能否跳出红海，开辟蓝海。那些成功的公司往往都会倾尽毕生的精力及资源搜寻产业的当前需求、潜在需求以及新的需求！随着行业竞争的不断加剧，大型企业间并购整合与资本运作日趋频繁，国内外优秀的企业愈来愈重视对行业市场的研究，特别是对企业发展环境和客户需求趋势变化的深入研究，逐渐成为行业中的翘楚！ 中商产业研究院发布《2017-2022年中国氨基葡萄糖行业市场前景调查及投融资战略研究报告》利用中商数据库长期对氨基葡萄糖行业市场跟踪搜集的相关数据，全面准确地为您从行业的整体高度架构分析体系。报告从行业的宏观环境出发，以氨基葡萄糖行业的产销状况和行业的需求走向为依托，详尽分析了近年中国氨基葡萄糖行业当前的市场容量、产销规模、发展速度和竞争态势；报告还同时分析了氨基葡萄糖行业进出口市场、行业的上下游产业链运营情况，行业市场需求特征等，并且对氨基葡萄糖行业市场领先企业经营状况进行分析，最后对未来几年氨基葡萄糖行业发展趋势与投资前景做出预测。
【出版日期】2016年 【交付方式】Email电子版/特快专递 【价格】纸介版：25800元电子版：25500元纸介+电子：25800元 第一章氨基葡萄糖产业概述 一、氨基葡萄糖定义 二、氨基葡萄糖分类 三、氨基葡萄糖用途 四、氨基葡萄糖经营模式 第二章全球及中国氨基葡萄糖市场分析 第一节氨基葡萄糖行业国际市场分析 一、氨基葡萄糖重点生产企业 二、氨基葡萄糖产品技术动态 三、氨基葡萄糖竞争格局分析 四、氨基葡萄糖国际市场前景 第二节氨基葡萄糖行业国内市场分析 一、氨基葡萄糖国内市场现状 二、氨基葡萄糖产品技术动态 三、氨基葡萄糖竞争格局分析 四、氨基葡萄糖国内需求现状 五、氨基葡萄糖国内市场趋势 第三节氨基葡萄糖国内外市场对比分析 第三章氨基葡萄糖行业市场环境分析 一、国际宏观经济及前景预测 （一）国际宏观经济环境分析 （二）国际经济市场前景分析 二、国内宏观经济及前景预测 （一）中国宏观经济环境分析 （二）中国经济市场前景展望 第四章氨基葡萄糖行业相关政策分析 一、氨基葡萄糖行业监管体制 二、氨基葡萄糖行业政策分析 三、氨基葡萄糖相关标准分析
葡萄糖氧化酶及其应用汇编
葡萄糖氧化酶及其应用 【摘要】:葡萄糖氧化酶是一种需氧脱氢酶,对人体无毒、副作用，广泛应用于食品、医药、饲料等行业中，起到了去除葡萄糖、脱氧、杀菌等作用。该文从葡萄糖氧化酶的性质、生产和应用等方面对其进行了简单介绍。 【关键词】：葡萄糖氧化酶性质生产应用 The glucose oxidase and its application Abstract: Glucose oxidase (GOD) is an aerobic dehydrogenase. It has no side effects and non-toxicity on human. GOX，which has played an important role on removing glucose，de-oxidization and sterilization，is widely applicated in food, medicine, feed stuff and other fields. This paper reviews the property, production and application of Glucose oxidase. Key Words: Glucose oxidase property production application 葡萄糖氧化酶（Glucose oxidase EC 1.1.3.4.）全称为β-D-吡喃型葡萄糖需氧脱氢酶，简称GOD，它能在有氧的条件下专一性将β-D-葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。早在1904年，人们就发现了葡萄糖氧化酶，但当时对其商业价值认识的不足，并未引起人们的重视。直到1928年，Muller首先从黑曲霉的无细胞提取液中发现葡萄糖氧化酶，并进一步通过试
葡萄种植可行性分析报告
葡萄种植可行性分析报告 葡萄种植可行性分析报告 目录 一气候及土壤要求 二经济效益 三营养价值 四社会和生态效益 五市场前景分析 六葡萄品种选择 七启动资金及未来收益预算 八风险分析与防控 九山东沂蒙苗木基地配套服务宗旨 葡萄鲜果，果色艳丽、汁多味美、营养丰富，深受广大消费者的青睐。葡萄是见效最快的果树之一，具有高产、稳产等优势，一般当年种，第二年即可量产，3年大丰收，在正常管理条件下，一般无大小年现象，产量相当稳定。 （一）气候及土壤要求 葡萄抗抗逆性强，生长旺盛，到目前为止，幅员辽阔的中国大地上遍地可见葡萄的影子，无论东北三省，还是西北高原，黄河流域或是多雨江南。葡萄之抗性，适应广普性是其它任何—种果树不可相比的。葡萄对土壤的要求极低，除严重沙化，重盐碱地等极端土质不适合种植葡萄外，其他的诸如黑土、
黄土、红土、冲积平原、河滩淤地整改土地都可以种植葡萄，尤其是土壤肥沃的平原地段，更适宜种植葡萄。 葡萄的适应性强，具有广阔的发展前景。其经济寿命一般20～30年，若管理精细，可长达30～40年。鲜果供应期长，自5月上旬鲜果陆续上市，直至10月。定植后，第二年开始结果，一般二年生葡萄亩产就达1000千克，三年生的亩产可达XX千克，四年生的亩产可达3000千克。在管理好的条件下，每亩可获得近两万元的收益。近年来引入欧亚种葡萄，其经济价值更可观，每亩收益可高达2万元以上。葡萄除鲜食外，还可用来酿制葡萄酒，制成葡萄汁，具有防暑、止渴、降血脂、血压的功效。另外，还可晾成葡萄干、制成糖水葡萄罐头和果浆、果冻等。 （三）营养价值 葡萄的营养价值高，是一种普遍受人喜爱的果品，其色香味俱佳，既能满足人们的感官享受，又具有很高的营养及保健价值。据测定，葡萄含有 65%~85%水分，15%~25%糖类，主要是葡萄糖和果糖，0.5%~1.5%有机酸，主要是苹果酸和酒石酸，0.3%~0.5%矿物质，含有多种维生素和蛋白质、氨基酸，红葡萄中含有较多的色素与单宁。每千克鲜葡萄可产生2928.8~4184焦耳的热量，经自然风干活人工烘制的葡萄干，含糖量达60%以上，每千克可产生13974.6焦耳的热量。葡萄汁发酵酿成的普通酒是一种营养保健型饮料，含有大量的氨基酸和维生素，含有24种微量元素及其他营养成分。李时珍在《本草纲目》中就曾记载葡萄酒有“暖腰肾、耐寒、驻颜色”的功能。美国著名杂志《科学》1997年1月发表的最新研究报告称，在葡萄及其产品中在发现一种抗癌物质叫“resveratrol”，该物质的大量存在能够阻止癌变发生。在此之前，大量的研究报告指出，适量饮用葡萄酒尤其是红葡萄酒，能够减少脂肪在血管里的沉积，减少心血管疾病发生的危险。 （四）社会和生态效益 1、改善当地生态环境：
氨基葡萄糖的检测方法汇总
氨基葡萄糖的检测 葡萄糖的一个羟基被一个氨基取代的化合物。分子式C6H13O5N，俗称氨基糖，简称氨糖。又名葡萄糖胺，广泛存在于自然界；市面上氨糖主要分为盐酸氨糖与硫酸氨糖两种。目前，氨糖的分析方法主要有分光光度法、HPLC和HPIC等，最常用的分析方法为高效液相色谱法，近年来离子色谱技术在糖类化合物分析中的应用也越来越广泛。 分光光度法 （《中国药典》2010 年版二部附录IVA）测定。 1 对照品溶液的制备：精密称取经105干燥至恒重的盐酸氨基葡萄糖对照品适量，加水溶解制成每1ml约含25μ的溶液作为对照品溶液。 2 供试品溶液的制备：精密称取样品约25mg，置100ml 量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml 量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，既得。 3 测定法：分别取对照品溶液及供试品溶液各 5ml 分别置具塞试管中，另取具塞试管蒸馏水5ml作为空白，各加乙酰丙酮试液（取乙酰丙酮2ml，加 0.5mol/L 碳酸钠溶液至50ml，临用前配置成1.0ml，摇匀，置沸水浴中（1分钟后密塞），准确加热25 分钟，取出，用冰水迅速冷却后，加无醛乙醇3.0ml，60水浴中保温10 分钟后，再加对二甲氨基苯甲醛试液（对二甲氨基苯甲醛0.8g，加无醛乙醇15ml 及盐酸15ml，摇匀)1.0ml，强力振摇，并继续在 60水浴中保温1 小时，立即用冷水冷却至室温。参照分光光度法（《中国药典》2010 年版二部附录IVA）在525nm 波长处分别测定吸光度，计算，既得。 HPLC-ELSD法（高效液相色谱法） 依据：GB/T20365-2006 1、主要使用仪器 高效液相色谱仪， ELSD蒸发光散射检测器，色谱柱 2、标准溶液的配制 准确称取硫酸软骨素和氨基葡萄糖标准品各约0.1g。分别加1mL乙腈，超声1min后，加纯水定容至10mL。吸取上述硫酸软骨素和氨基葡萄糖标准溶液各
关于高端矿泉水市场分析报告
高端矿泉水市场分析 营销环境分析 随着人们对生活质量要求的不断提高，饮用水的健康问题已经越来越受到公众的关注，同时高端消费群体对高档水的需求也在不断增长。据省瓶装饮用水行业协会的数据显示，我国国高档水的消费群体已经形成，未来5年，中国高端水市场容量将不少于100亿元。另外2008年中国瓶装饮用水产业规模达到400亿元，但利润率却只有3.85%，这也意味着中国瓶装饮用水正进入“微利时代”，于是在低端水市场也呈现寡头低价竞争的局面，低薄的利润已经难以刺激新进入者的积极性，因此中国矿泉水的高端风潮就此拉开。但是长期以来，国高档饮用水市场一直是由外资品牌占据主导地位。据悉，依云、斯柏克林、巴黎水等外资品牌占有的市场份额超过50%，其中，仅依云的市场份额就超过10%，如今这一格局正在被打破。国多家企业纷纷瞄准这一行业，高档水市场变得空前繁荣。5100冰川、九千年、昆仑山、无量藏泉、景田百岁山、日之泉麦饭石等高端水市场新品牌越来越多地出现在矿泉水市场上。更多高端水的新品牌不断出现在市场上，昆仑山就是一个。目前，我国消费者消费高端产品的需求和能力都不高，虽然中国饮用水产业经过多年的发展逐渐走向成熟，但是相对于我国消费者而言，高端产品的需求和消费能力还有待提高。依云虽然早已先打开高端水市场，但一直处在低端的中国矿泉水主战场以及人们日益提高的消费需求环境下，昆仑山计入高端饮用水空当还是具备一定优势。 消费者分析:
在欧美地区，公众非常注重喝天然矿泉水，人们认为喝天然矿泉水非常健康，有助于提升生命质量。相比之下，国公众对健康饮水的观念相对薄弱，她希望大家都能关注健康饮水，提高喝健康好水的意识。但从消费者行为来看，昆仑山矿泉水这个高端饮用水能够展示消费者的身份、地位、经济实力，给消费者带来自尊和优越感，会受到一些富豪阶层的青睐。从消费者行为来看，昆仑上矿泉水的营销方式应当满足消费者的需求，让消费者觉得物有所值。在营销上，让消费者联想到来自巍巍昆仑五千米下的那种清凉和享受。 产品分析： 1、昆仑山矿泉水的宣传：“水质决定生命质量”众所周知，水是万物之本，水是生命之源。人体的70%是水，水不仅起着解渴和维持生命的作用，更重要的是水为人体的健康保驾护航。同时也大大提高了人们的生命质量，在现代社会成为一种时尚的生活态度和生活方式，是尊贵身份的象征。虽然人们都知道水是生命之根本，但是在现代社会中，很多人却忽略了水的重要性和对于水的选择。在人类赖以生存的地球上，北纬30度到北纬40度之间，是盛产天然好水的黄金水源带，昆仑山天然雪山矿泉水就产自其中。昆仑山玉珠峰海拔6000多米，常年冰雪覆盖，是小分子团水，呈弱碱性，且富含多种有益于人体健康的微量元素，符合人体生理所需，恰好成黄金比例。人体水系统以18天为一个循环周期，在每天黄金补水时刻，选择来自黄金水源带的昆仑山天然雪山矿泉水，连续饮用能够很好改善身体机能，让您的生命水系统为之焕然一新。从现在开始，改变您的饮水习惯，‘会喝水，喝好水，多喝水’，选择昆仑山，全面提高生命质量。 2、昆仑上矿泉水的价格 目前，昆仑山矿泉水价位一般在5元，与竞争者富士山天然水500毫升18.4元的价格、350毫升的法国依云11元、5100售价8元左右相比有价格优势。但是如果昆仑山”只是又一款“富含多种微量元素和矿物质”的矿泉水，从千岛湖出来的农夫山泉，从岛来火山岩矿泉水，从高原下来的5100，都是“富含多种微量元素和矿物质”的“健康安全”的矿泉水，5元的价格消费者未必会买账。因此，就需要昆仑山采取尾数定价的方式，定价为4.8元、4.9元等等，给消费者以便宜感。或从昆仑山矿泉水的品牌层面上下手，让品牌的神秘、高贵、厚重感突出出来。 3、特点介绍 【1】水源来自海拔六千米高德昆仑山雪山源头，常年被冰雪覆盖，无污染水源来自省昆仑山玉珠峰，玉珠峰海拔6000米以上，自然环境优越，常年冰雪覆盖，泉水天然纯正。
葡萄糖氧化酶(Ⅰ)
混合型饲料添加剂葡萄糖氧化酶（Ⅰ） 生产许可证号：豫饲添（2015）H10020 企业标准代号：Q/HMY 017—2016 批准文号： 原料组成 葡萄糖氧化酶、甘露寡糖、蒙脱石等。 成分分析保证值 项目指标 酶活力，U/kg ≥3000.0 水分，% ≤10.0 铅（以Pb计），mg/kg ≤30.00 总砷，mg/kg ≤10.00 黄曲霉毒素B1，μg/kg≤10.00 使用说明 1．适用动物：各日龄段的家禽和猪。 2．用法用量：每1kg饲料添加本品1--3g，也可根据具体情况酌情使用。 3．注意事项：在饲料中添加应确保混合均匀；避免阳光暴晒。 贮存条件与方法 本品应在常温、避光、通风干燥处保存。 净含量： 保质期：完整包装和要求贮运条件下，保质期18个月。 生产日期： 生产批号：
Additive of Mixed Feed: Glucose oxidase (I) Production licenses: 豫饲添（2015）H10020 Enterprise standard code: Q/HMY 017—2016 Ingredients Glucose oxidase, mannooligosaccharides, montmorillonite and so on. Guarantee Value of the Composition Items Indicators Enzyme activity，U/kg ≥3000.0 Water，% ≤10.0 Lead ( calculated by Pb)，mg/kg ≤30.00 Total arsenic，mg/kg ≤10.00 Aflatoxin B1，μg/kg≤10.00 Instructions for use 1. Applicable animals: poultry and pigs of all ages. 2. Dosage: mix 1~3g of the additive in 1kg of feed, it may also be used according to specific circumstances. 3. Note: ensure being mixed well when added to the feed; avoid exposure to sun Storage conditions and methods Preserve in a ventilated and dry place at room temperature, protected from light. Expiry date:18 months under the condition of complete packing and required storage and transportation.
补钙市场分析实施报告
目前中国补钙保健品市场容量已超过百亿（1999年，国内补钙制剂市场实现销售收入120亿元）。巨大的市场潜力，使中国补钙市场几年间诞生了300来个品牌。同时，中国市场这么大，尚无一家企业可以一统江山。据了解，国内"纯钙"产品生产正逐渐形成区域化格局。除东北地区、华北地区、华南地区、华东地区、西北地区已形成大品牌大规模生产外，目前西南、华中、华东地区已建立起新品牌钙生产基地。 目前市场上的形形色色的补钙保健品可归为三类：一类是无机盐，如：碳酸钙、磷酸钙及氧化钙等;第二类是有机酸盐，如：葡萄酸钙、乳酸钙、柠檬酸钙、醋酸钙、L-苏糖酸钙等;第三类是生物钙，由富钙海洋生物贝壳经机械加工而成。其中无机盐类补钙保健品不易于人体吸收，而有机酸钙和生物钙产品的补钙效果相对更好。 随着国家有关法律法规的出台，尤其是关于取消"健"字产品的决定，国内补钙保健品市场必然朝着运行更规范的方向发展。潜力巨大的补钙市场还远没有补充分开发，目前市场的回落只是暂时性的。淘汰一批只会带旺一批，结束多头管理格局，肃清行业中参差不齐的加盟者队伍，抬高进入的门槛，既明晰了企业今后专注发展的方向，也无疑增加了更多的商机。国内城乡居民保健类消费支出正以15％～30％的速度增长，远高于发达国家12％的增长速度，老百姓保健意识的逐渐增强为补钙保健品提供了一个广阔的市场。 补钙产品竞争品牌分析 哈药系补钙产品哈药集团的三精葡萄糖酸钙和新盖中盖目前占据约３０亿元钙剂市场的半壁江山，是目前钙剂市场的领导品牌。在１９９９～２０００年间，盖中盖的“高举高打”推广策略不仅大大推进了中国钙剂市场的发展，也奠定了自己市场老大的地位，曾经创造过单月回款４亿元的奇迹。后来由于广告风波导致产品销售一度陷入困境。经调整市场战略，哈药集团又推出了新盖中盖品牌，并凭此新品牌卷土重来，收复失地。新盖中盖口服液定位于儿童市场，高盖片定位于老年市场，目前已成为了钙剂市场的领导品牌。哈药的竞争力体现在巨大的品牌影响力上，其强势的营销执行力使品牌影响力如日中天，这在其补钙系列产品中表现尤其明显。 钙尔奇Ｄ苏州立达生产。该产品采取专业推广为主、ＯＴＣ推广为辅的市场策略，在专业市场（医院渠道），其占有率为同类产品中第一，这为其产品在零售市场的销售提供了强大动力。目前，其在ＯＴＣ市场的广告诉求对象以女性为主。然而广告的作用在于提示消费者，促进销售作用有限；同时受限于专业渠道，该产品的市场份额主要分布在大、中城市，二三级市场急待开拓。 乐力美国矿维公司生产，１９９６年进入中国市场。该产品在推广初期采取区域代理制，通过代理商进行专业渠道的推广，２０００年销售额达到１亿元。后来通过加强零售渠道的推广力度，并进行了全国市场的整合，借助２０００年“盖中盖广告事件”后其销量迅速上升，目前年销售额为５亿元左右。乐力的成功来自于其清晰的市场整体战略和持续的市场投入。另外，其良好的疗效打造了强大的产品力，从而获得了良好的消费者口碑，重复购买人群在不断扩大。如果能够在整体市场战略上进行更加专业的策划，并采取更加积极的推广手段，乐力应该还会有更大的上升空间。 巨能钙北京巨能公司是在盖天力之后较早进行钙剂市场开拓疆土的一个企业，其产品巨能钙口服液是第三代补钙产品，具有较好的疗效。２０００年该产品的销售额高达１０亿元。后来随着钙剂市场的低迷，产品销售有所滑坡，其也基本上放弃了在全国范围内的广告宣传。目前其在北京等地的销售比较理想。据说巨能钙片剂现正在申报一类新药，公司亦将转向药品领域经营，产品销售亦有由过去的大市场、大推广方式转向社区活动和会议营销的方式。 龙牡壮骨颗粒武汉健民出品，产品为中西合剂，２０世纪９０年代中期为钙剂市场第一品牌，年销
氨基葡萄糖市场简介
氨基葡萄糖市场简介 产品简介： 氨基葡萄糖是一种从天然甲壳素中提取的氨基己糖，是硫酸软骨素的主要成分。它能促进人体粘多糖的合成，提高关节滑液的粘性，能改善关节软骨的代谢，有利于关节软骨的修复，具有明显的消炎镇痛作用。它具有促进抗生素注射效能的作用，可供糖尿病者作营养补助剂，代替皮质醇治疗肠炎，对治疗风湿性关节炎、乙型肝炎等有一定疗效。利用它合成的另一种新的水溶性抗癌药物氯脲霉素具有亚硝基脲类化合物的抗癌性，同时又具有抑制骨髓毒性较小的特点，对黑色素瘤，肺癌，肾癌等显示一定疗效。此外，它还可以用于化妆品、饲料添加剂和食品添加剂。 氨基葡萄糖以硫酸盐或盐酸盐的形式存在，目前氨基葡萄糖依据原料来源分为两大类：一类是天然海洋虾蟹壳提取氨基葡萄糖，另一类是发酵类氨基葡萄糖，又称素食类氨基葡萄糖。 药理作用： 1、治疗与修复关节软骨组织； 2、消炎止痛； 3、刺激蛋白多糖的合成； 4、防止软骨组织退化引发的各种疾病； 5、活化自然杀伤细胞（NK）、淋巴因子激活杀伤细胞（LAK）等细胞，具 有免疫调节、抗肿瘤活性作用。 质量标准： USP 、 EP 、 CP 市场简介： 国际市场上，氨基葡萄糖产品有200余种，目前氨基葡萄糖类骨关节产品大体上可分为两类：一是添加化学消炎药的氨基葡萄糖制剂，在美国受到FDA 的严格管理，这类制剂主要有氨基葡萄糖＋布洛芬、氨基葡萄糖＋吡罗昔康。二是为数众多的氨基葡萄糖类保健食品，按膳食补充剂类产品进行管理。其中，氨基葡萄糖类保健食品又可分为3类：一是单纯的氨基葡萄糖成分制剂；二是氨基葡萄糖＋硫酸软骨素的复合制剂；三是氨基葡萄糖＋其他成分组成的复方产品，如氨基葡萄糖＋MSM（一种保护骨关节的保健物质）、氨基葡萄糖＋菠萝蛋白酶、氨基葡萄糖＋维生素D3、氨基葡萄糖＋透明质酸等。西方各国基本上都将氨基葡萄糖作为保健食品进行管理。 我国从上世纪70年代开始，利用沿海地区大量的海洋水产加工副产品虾蟹壳生产甲壳素，进而开发出系列衍生产品，如壳聚糖和氨基葡萄糖等原料。上世纪90年代末，我国已经成为全球最大的甲壳素与氨基葡萄糖原料生产国和出口国。
葡萄糖氧化酶在食品工业中的应用
葡萄糖氧化酶在食品工业中的应用 葡萄糖氧化酶( glucose oxidase，GOD) 系统名称为β－D －葡萄糖氧化还原酶。GOD 能专一地氧化β－D－葡萄糖，生成过氧化氢和葡萄糖酸。GOD 是一种天然的食品添加剂，能够利用氧气将葡萄糖氧化成葡萄糖酸并生成过氧化氢，因而具有去除葡萄糖、脱氧以及生成葡萄糖酸等作用，对人体无毒、无副作用，因而被广泛地应用于食品工业，目前主要应用在以下几个方面: 一、脱氧 葡萄酒、啤酒、果汁、奶粉等食品常常出现变色、浑浊、沉淀等现象，影响了产品的品质。究其原因是因为氧气氧化了其中的还原性物质如黄酮、亚油酸、亚麻酸等。GOD 可快速高效地去除食品中的氧气，保护食品中还原性物质不被氧化破坏，达到脱氧保鲜的效果。 二、去葡萄糖 食品加工工艺中经常发生的美拉德反应能使产品褐变，破坏产品品质，全球每年因为美拉德反应造成的食物浪费都很巨大。GOD 能将葡萄糖分子上的醛基转变为羧基，消除美拉德反应，从而抑制食品的非酶褐变，保持产品的色泽和溶解性。将GOD 添加到蛋白粉、果酱制品等糖含量较高的食品中，能除去葡萄糖，抑制产品加工过程中产生的褐变。同时由于葡萄糖含量降低，微生物生长受到抑制，产品的货架期得以延长。 三、改良面粉 传统的小麦粉强筋剂以溴酸钾的应用最为普遍，但溴酸钾经研究发现是动物组织致癌毒物，不利于人体健康。目前，GOD 作为面粉改良剂溴酸钾的替代品，已经用作一种更为安全的面粉改良剂，在这方面的研究己取得了一些阶段性的成果。 四、杀菌 由于葡萄糖氧化酶的脱氧作用，因此在抑制好氧菌的生长繁殖方面有很好的效果; 同时产生的过氧化氢也能起到杀菌作用。在实际的生产应用中，常将过氧化氢酶与葡萄糖氧化酶组成酶系添加于食品中，这样既能利用过氧化氢的杀菌作用，同时由于过氧化氢酶的存在能去除残留在食品中的过氧化氢，不仅延长食品的保质期，对食品的品质也不会造成影响。GOD 相比于其他化学抑菌剂的优势在于其作为生物制剂安全性更高，添加于食品中更加安全放心。目前工业化生产GOD 的菌株主要有黑曲霉和青霉。虽然黑曲霉产酶水平较高，但是反应速率却远低于青霉所产GOD，由于黑曲霉产酶水平高生产成本低利润相对较高，所以目前市场上GOD以黑曲霉来源居多。夏盛葡萄糖氧化酶以特异青霉（Penicillium notatum）为生产菌种，经液体深层发酵精制而成，具有流动性好、作用PH范围宽、反应速率高、酶蛋白纯度高等特点。 沈涛
氨基葡萄糖详细讲解
氨基葡萄糖详解 氨基葡萄糖详解氨基葡萄糖，葡萄糖的一个羟基被一个氨基取代的化合物。分子式C6H13O5N，俗称氨基糖。广泛存在于自然界，2-氨基-2-脱氧-D-葡萄糖通常以N-乙酰基衍生物(如甲壳素)或以N-硫酸酯和N-乙酰-3-O-乳酸醚(胞壁酸)形式存在于微生物、动物来源的多糖和结合多糖中。目前主要萃取自虾、蟹等甲壳类动物。基本简介氨基葡萄糖（C6H13NO5）又称葡萄糖胺、葡糖胺或氨基葡糖，是葡萄糖的一个羟基被氨基取代后的化合物。氨基葡萄糖是蛋白质或脂类糖基化反应中的重要前体。氨基葡萄糖衍生物N-乙酰氨基葡萄糖是甲壳素的单体，甲壳素广泛存在于节肢动物的外骨骼以及真菌的细胞壁之中。另一种衍生物N-乙酰基胞壁酸是组成细菌细胞壁的主要成分。氨基葡萄糖是自然界含量最丰富的单糖之一[1]。工业上通常采用水解甲壳类动物外骨骼制取氨基葡萄糖。氨基葡萄糖经常被用于骨关节炎的膳食辅助治疗，但是疗效仍然有一定争议。 基本信息α型氨基葡萄糖为针状结晶，熔点88℃，比旋光度+100°→47.5°(水)；β型为针状结晶，熔点110℃(分解)，+28°→+47.5°(水)；溶于水。2-氨基-2-脱氧-D-葡萄糖是多种抗生素的组分。氨基葡萄糖，它是人体内合成的物质，是形成软骨细胞的重要营养素，是健康关节软骨的天然
组织成份。随着年龄的增长，人体内的氨基葡萄糖的缺乏越来越严重，关节软骨不断退化和磨损。美国、欧洲和日本的大量医学研究表明：氨基葡萄糖可以帮助修复和维护软骨，并能刺激软骨细胞的生长。种类编辑盐酸氨基葡萄糖通过刺激粘多糖的生化合成及增加量骨骼钙质的摄取，提高骨与软骨组织的代谢功能与营养，亦能改善及增强滑膜液的粘稠度，增加滑膜液合成，提供关节润滑功能，本品可阻断骨关节炎的病理过程，防治疾病进展，改善关节活动功能，缓解关节疼痛，抑制及消退关节变性形成。中文名盐酸氨基葡萄糖 中文别名：盐酸葡萄糖胺；葡萄糖胺盐酸盐; 氨基葡萄糖盐酸盐; 葡糖胺盐酸盐外文名Glucosamine hydrochloride主要成分盐酸氨基葡萄糖。性状 简介通用名盐酸氨基葡萄糖英文名Glucosamine hydrochloride主要成分盐酸氨基葡萄糖，其化学名为：2-氨基-2-脱氨-葡萄糖盐酸盐：其结构式为分子式： C6H13N05· HCl分子量：215.63性状本品为为白色或类白色结晶性粉末或颗粒药代动力学氨基葡萄糖盐酸盐氨基葡萄糖盐酸盐，英文D-Glucosamine Hydrochloride，分子式 C6H13NO5·HCl，分子量215.5，它对人体具有重要的生理功能，参与肝肾解毒，发挥抗炎护肝作用，对治疗风湿性关节炎症和胃溃疡有良好的疗效，是合成抗生素和抗癌药物的主
葡萄糖氧化酶
论文 课程：酶工程 题目：葡萄糖氧化酶在饮料中的作用姓名：周梦洁 学号：094031252 指导老师：王伟
葡萄糖氧化酶在饮料中的应用 摘要：葡萄糖氧化酶(Clucose Oxidase,全称β—D—吡喃型葡萄需氧脱氢酶,简称（GOD）是食品工业中常用的一种酶，以一定方式加入GOD可以有效地防止罐装容器内壁的氧化腐蚀。在果汁、果酒、水果罐头、色拉调料中加入GOD，可防止氧化变质。此外，还可应用于奶粉、油脂、鱼、虾、蟹、肉和炸制食品等的保鲜。G0D作为一种天然的食品添加剂，对人体无毒无副作用。它不但除氧速度快、热稳定性好，使用过程中无须添置任何设备或改变生产工艺外，而且添加量小、添加方法茼单、使用后去氧效果明显，不会出现混浊沉淀现象，可保持食品、饮料原有的色、香、味，因而受到了食品和饮料生产企业尤其是啤酒企业的热烈欢迎。 关键字：酶的简介酶的性质特点作用机理发展前景 一：葡萄糖氧化酶的简介： 葡萄糖氧化酶(Clucose Oxidase,全称β—D—吡喃型葡萄糖需氧脱氢酶,简称（GOD）是食品工业,这种酶能高度专一性地催化β—D—葡萄糖与空气中的氧反应,使葡萄糖氧化为葡萄糖酸,所以葡萄糖氧化酶既是一种去氧剂,又是一种脱糖剂,其催化时需要 F A D作为辅基参与作用,反应过程如下: 总反应式:C_6H_2O_6+1/2O_2→C_6H_(12)O_7 G OD广泛分布于动、植物和微生物体，高浓度的葡萄糖氧化酶为淡黄色粉末，易溶于水，完全不溶于乙醚、氯仿、丁醇、吡啶、甘油、乙二醇。50％丙酮、66％甲醇能使其沉淀，一般制品中含有过氧化氢酶。分子量为150000左右，每克分子酶含2克分子FAD。酶的最大光吸收波长为377nm和455nm。在紫外光下无萤光，但是在热、酸或碱处理后具有特殊的绿色。固体酶制剂在0℃下保存至少稳定两年，在－15℃下稳定8年。葡萄糖氧化酶稳定的pH范围为3～4，最适pH5，如果没有葡萄糖等保护剂的存在，pH 大于8或小于3，葡萄糖氧化酶将迅速失活。葡萄糖氧化酶的作用温度为30～60℃，该酶对EDTA、KCN及NaF不受阻抑，但HgCl、AgCl、对氯汞苯甲酸和苯肼对酶有阻抑。 二：葡萄糖氧化酶的性质特点 （1）无毒性：酶本身无毒性、无味、无嗅,不会损害食品的价值。 (2)高度催化性：酶制剂有高度催化性,用低浓度的酶也能使反应迅速地进行,如1gα-淀粉酶晶体在65℃条件下只需15min,就可使2t淀粉转化为糊精。 (3)作用条件温和：酶剂作用所要求的温度、pH值等作用条件都很温和,不会损
葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 【原理】 葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 【试剂】 1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。 2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定 3 个月。 3 ．酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。 4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。 5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。 6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。2h 以后方可使用。 7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 【操作步骤】 1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2 ．手工操作法取试管 3 支，按下表操作。 读取标准管及测定管吸光度。 【计算】 【参考范围】空腹血清葡萄糖为 3.89 ～ 6.11mmol/L 。 【临床意义】 1 ．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 2 ．病理性高血糖 (1) 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。
葡萄糖氧化酶
登录 | 下载 | 刷新注意：如果你不能正常浏览本页，请关闭上网助手等拦截工具的所有拦截选项! 商务版 | 政务版 | 短信 | ENGLISH 新型饲料添加剂———葡萄糖氧化酶 作者：摘自：中国饲料添加剂网日期：2005-06-09 葡萄糖氧化酶(ＧｌｕｃｏｓｅＯｘｉｄａｓｅ,简称ＧＯＤ)是一种需氧脱氢酶,能专一地氧化β-Ｄ-葡萄糖成为葡萄糖酸和过氧化氢。1928年Ｍｕｌｌｅｒ首先从黑曲霉的无细胞提取液中发现葡萄糖氧化酶。1960年Ｋｕｓａｉ等、1964年Ｐａｚｕｒ和Ｓｗｏｂｏｄ-ｄａ分别从青霉素和黑曲霉中提纯葡萄糖氧化酶。1995年,Ｐｅｔｒｕｃｃｉｏｌｉ等用青霉素的突变株生产出葡萄糖氧化酶。我国自1986年开始研究葡萄糖氧化酶的制备提纯工艺,1998年正式投入生产,1999年农业部将其定为12种允许使用的饲料酶制剂添加剂之一。 1 葡萄糖氧化酶的理化性质 高纯度葡萄糖氧化酶为淡黄色粉末,易溶于水,不溶于乙醚、氯仿、丁醇、吡啶、甘油、乙二醇等有机溶剂,50%丙酮、60%甲醇能使其沉淀。一般制品中均含有氧化氢酶,酶的最大光吸收波长为377～455ｎｍ。在紫外光下无荧光,但在热、酸或碱处理后具有特殊的绿色。固体葡萄糖氧化酶制剂在0℃下保存至少稳定2年,在-15℃下则可稳定8年。葡萄糖氧化酶稳定的ｐＨ值范围为3～4,最适ｐＨ值为5,如果没有葡萄糖等保护剂的存在,ｐＨ值大于8或小于3葡萄糖氧化酶将迅速失活。葡萄糖氧化酶的作用温度为30～60℃,该酶不受乙二胺四乙酸、氰化钾及氟化钠抑制,但受氯化汞、氯化银、对氯汞苯甲酸和苯肼抑制。 2 葡萄糖氧化酶在饲料行业中的应用 作为国家允许使用的饲料酶制剂之一,葡萄糖氧化酶在食品、医药、饲料等行业中得到了广泛应用。葡萄糖氧化酶是一种新型的酶制剂,能够改善动物肠道环境,调节饲粮消化,促进动物生长。含葡萄糖氧化酶、乳酸过氧化物(ＬＰＯ)和乳铁蛋白的混合饲料添加剂,可用于预防牲畜胃肠道感染、腹泻,并有促进动物生长作用。加有葡萄糖氧化酶的青贮饲料对长膘的牛有利,其原因是葡萄糖氧化酶可以消耗青贮的氧气,提高青贮内的缺氧程度,有利于厌氧性乳酸菌的增殖,加快了乳酸菌的发酵过程,迅速产生大量乳酸,使青贮的ｐＨ值很快下降,抑制了有害细菌的繁殖,避免了异常发酵,最终保 证青贮质量。 3 葡萄糖氧化酶促生长的作用机理 3.1 消除肠道病原菌生存环境 保持肠道菌群生态平衡葡萄糖氧化酶能催化肠道内的葡萄糖产生葡萄糖酸和过氧化氢,当过 氧化氢积累到一定浓度时,直接抑制大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、葡萄球菌、弧菌的生长繁殖。其作用机理完全不同于抗生素,不会产生菌体抗药性或药物残留。葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖去除肠道内氧气,为厌氧有益菌双歧杆菌的增殖制造厌氧环境;生成的葡萄糖酸可降低胃肠内ｐＨ值为乳酸菌生长制造酸性环境。有益菌大量增殖形成微生态竞争优势,不利于大肠杆菌、沙门氏菌等有害菌存活,控制感染,排除腐败物质,提高巨噬细胞活性,从而提高机体免疫力。 3.2 保护肠道上皮细胞完整 肠道上皮细胞保持高度的物理完整,可以阻挡大量病原体的侵入。畜禽处于应激状态时,过多有氧化作用的“自由基”会破坏肠道上皮细胞,而葡萄糖氧化酶具有氧化作用,能清除自由基,保护肠道上皮细胞完整。 3.3 改善肠道酸性消化环境葡萄糖氧化酶催化葡萄糖生成葡萄糖酸,在肠道内发挥酸化剂的作用,创造酸性环境;降低胃中的ｐＨ值,激活胃蛋白酶,促进矿物质和维生素Ａ、Ｄ的吸收,并且酸性肠道环境可减少有害菌繁殖,预防腹泻。葡萄糖氧化酶还能同时改善饲料的适口性,在动物出现拒食、厌食、消化不良、腹泻时,添加葡萄糖氧化酶可以使动物迅速恢复正常采食。 3.4 解除肠道霉菌毒素中毒 葡萄糖氧化酶直接抑制黄曲霉、黑根霉、青霉等多种霉菌,对黄曲霉毒素Ｂ1中毒症有很好的预防效果。高温季节,饲料发霉产生的毒素会使动物肝肿大、胸腺萎缩、巨噬细胞受到毒害,进而导致