单层贴壁细胞总蛋白提取Protocol

单层贴壁细胞总蛋白提取Protocol 单层贴壁细胞总蛋白提取Protocol 准备工作:

1、1.5ml进口EP管若干。

2、用50ml管装一管PBS(加PMSF)，置于冰上预冷备用。

配置细胞裂解液:按1ml裂解液+10ul PMSF加到一起。PMSF要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合。

装一个冰盒备用。

3、离心机预冷到4?。

步骤:

1、倒掉培养基，用预冷的PBS洗涤细胞3次，每次1min。然后把皿转移到冰上。

2、6cm(10cm)直径皿的细胞，每皿加入300ul(500ul)的细胞裂解液，在冰上裂解10-30min，用干净细胞刮在冰上尽快把细胞从皿中刮下来。

3、用1.5ml进口EP管收集细胞裂解悬液，离心(12000rpm，4?，5min)。

4、将离心后的上清分装到200ul进口PCR管中，标记清楚，-80?保存。

注意:

整个过程尽量在冰上操作，刮细胞转移到EP管要快。

细胞裂解液有毒，注意保护自己，带手套口罩。

离心后，取上清不用太多，够用就行，避免杂质污染。