不规则抗体筛选操作规程

不规则抗体筛选操作规程

一．试剂和仪器

1.抗人球蛋白（IgG,C3b/C3d）多特异检测试剂卡或抗人球蛋白（IgG）单特异检测试剂卡。

2.上海血液生物医药有限公司3%抗筛试剂红细胞悬液

3.离心机和孵育器

二．标本收集与处理

1．血清或血浆都可以使用。

2．如果在直接抗人球蛋白实验中加入了血浆标本，因为钙离子的失活，补体依赖的抗体可能无法检测出来，所以建议使用血清标本。

三．操作步骤

1．取出试剂卡，平衡至室温；使用前离心确保无气泡和断层。2．观察卡的反应液面高度，确保试剂液面高于凝胶平面3mm左右，否则请勿使用；撕开试剂卡上的锡纸，撕开后的微柱请于1小时内进行下面操作。

3. 分别向反应柱内加入50 ul患者血清或血浆。注意，加样时，吸头请勿触及微柱管壁。

4．再分别向反应柱内加入10ul 3%红细胞悬液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(抗筛红细胞)。

5．观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹几下微柱充分，使反应物混匀。

6．在孵育仓中37℃孵育15分钟。

7．用离心机离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行。

8. 从微柱正反两面判读并记录结果。

四．结果判读

阳性结果（＋）：红细胞凝集为阳性结果。

阴性结果（－）：无溶血及红细胞未凝集为阴性结果。

溶血会导致玻璃珠上方呈粉红色或红色。如果发现溶血现象，则应先将血清或血浆置于56℃水浴30min以灭活补体，然后再重复试验，观察红细胞凝集现象。

4 + 反应：红细胞在柱中玻璃珠上面凝集，并形成一个环形带。

3 + 反应：发生凝集的大部分红细胞停留在玻璃珠的上半部分。

2 + 反应：发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少

量细胞。

1 + 反应：大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠床的下半部分，柱的

底部有少量红细胞。

阴性反应：所有红细胞均穿过玻璃珠床，在柱的底部形成一个平整的红细胞聚集带。

五.注意事项

1. 试剂卡应保存在2～25℃，请勿冷冻保存；请勿将试剂卡放入自动除霜的冰柜中，也不要放在离热源很近或阳光直射的地方。如果试剂卡放在冰箱中，使用前应先恢复至室温。

2.卡中液体试剂的冻结或蒸发都有可能影响未凝集红细胞通过玻璃珠到达微柱底部；另外细菌污染也有可能引起假阳性结果。

3.红细胞悬液的配制请参阅说明书要求。

4.微柱中加入样本或试剂时，请注意以下几点

1）加样枪的位置：加样枪枪头应与微柱管壁保持大约45度角，并

避免直接接触。

2）操作之前请详细阅读试剂使用说明书，加样量要准确。

5.反应结果应双面判读。

6.质控管：用于阴性质控，即用微柱中的试剂进行平行试验，正常情况下未发生凝集反应的红细胞在微柱中能够顺利通过玻璃珠之间的间隙到达底部，否则说明这张卡或红细胞本身有质量问题。

如质控管是阳性结果，提示试验结果应进一步分析。

7.如果试剂卡出现以下结果后，请按要求处理，必要时经销商联系：1）正常情况下，微柱中的液面应高于玻璃珠水平面3mm左右，当微柱中试剂液面等于或低于玻璃珠水平面时，请不要使用此卡。2）由于运输原因，导致试剂盒倒臵时间过长，可能会在试剂或微柱中出现气泡。操作人员取卡时如果发现有气泡，可将卡垂直向上，用手轻弹，把气泡弹出，如果气泡过大不能弹出，可用离心机离心一次，即可将气泡清除。

3）如果试剂卡有明显损坏（微柱裂开或锡纸裂开等），试剂中有明显的颗粒物质，请不要使用。

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