金银花的成分及功效

引言

1 引言

金银花，是规定的在中国许多配方中被广泛使用的草药之一。它有清热，解热，解毒，消炎的作用。因此，它已经被规定去用来治疗感冒发烧，发热性疾病，痢疾以及致命的肿胀。许多以前的报告中，绿原酸作为金银花的主要成分之一，由于其高含量和抗菌性，就被广泛用来控制衡量金银花的质量。若干种其他成分，如黄酮，环烯醚萜苷和皂苷，由于它们的有效的活动，也已被发现并使用于先进的分析技术。因此，在过去几年，金银花的研究和临床应用已经取得了巨大的进步。自由基是高活性物种在身体正常的代谢功能中产生或者是从环境引进的。自由基已被报道出在超过60种不同的健康状况中扮演很重要的角色，包括老化过程，癌症，动脉粥样硬化等。因此，它是通过清除这些有害自由基利于我们的健康。如今，科学家们一直在探索的生物传感器，用来评估其抗氧化状态，以防止一些疾病和控制食品的质量，这已经导致了一场革命，是前景大好的医疗保健的新范例。1,1 -二苯基-2-苦味（DPPH）是稳定氮为中心的自由基之一，是有效的回收的抗氧化剂自由基的代表之一。虽然金属螯合作用往往被认为作为一个轻微的抗氧化作用机制，但是离子减少的能力，也是抗氧化剂重要的属性之一。抗氧化剂可以绑定，并减少为Fe2 +变为Fe3 +离子，形成一个无效的Fe2 +抗氧化剂的复杂保护。一种抗氧化剂清除DPPH自由基和铁还原能力，历来被广泛接受的抗氧化能力理论。虽然金银花已被广泛研究了很多年，到目前为止没有制备金银花提取物的抗氧化活性的研究报道。在这项研究中，我们研究了不同的试剂，从金银花两种不同的检测发现，三种提取物表现出抗氧化活性。绿原酸是金银花的重要组成部分，金银花的抗氧化活性的贡献非常明显。

2材料与方法

2.1物料

金银花样品采自中国河南省。

高效液相色谱法（HPLC）仪器购买了从美国实验室联盟公司。

贝克曼杜640分光光度计，配备热自动分析购买于贝克公司（美国）。

DPPH和菲林试剂均购自Sigma公司（美国）。

高效液相色谱分析中使用的所有试剂均为色谱纯。其他试剂均为分析纯。2.2方法

金银花提取物绿原酸的抗氧化活性研究

2.2.1制备金银花提取物

金银花样品在50℃下干燥至恒重。称取约10 g样品加入到不同的溶剂，包括蒸馏水，70％的乙醇和甲醇250毫升，加入到圆底烧瓶。将混合物加热回流4小时。提取物进行筛选和检测残留物，在相同条件下重新提取。提取物相混合，集中减压旋转蒸发至干。残渣溶于30毫升酒精，100毫升容量瓶中，产品储存于4°C下24小时，离心10000转/分钟30分钟。金银花粗提取物上清液和冻干超细粉长期贮存，溶解甲醇中进行高效液相色谱鉴定与定量分析。

2.2.2高效液相色谱分析

在通过0.22微米的膜过滤器之前，加载到HPLC系统中溶解提取物并进行筛选。制备色谱柱，在25°C进样20μL或1毫升样品循环使用。流动相溶剂两部分组成：水（溶剂A）和柠檬酸水。在30分钟内，用溶剂B等梯度洗脱。流速为0.2毫升/分钟，分别制备。绿原酸在波长为324纳米下检测，不同浓度的绿原酸20微升被载入，建立校准曲线绘制与浓度（X）的峰面积（Y）的高效液相色谱图。每个固体粉末溶解后，用甲醇浓度0.5 mg / ml和20μl的粗提取物的金银花绿原酸进行识别和量化，分别装入HPLC系统。金银花绿原酸的含量，确定相应的校准曲线，并表示毫克每克金银花绿原酸的含量。每个提取物中绿原酸的峰面积等于三个平行绿原酸的量，确定色谱峰的保留时间与绿原酸的对应关系。通过柱分离测定绿原酸的抗氧化活性，并测定相同的色谱条件下的绿原酸色谱峰的保留时间和手动收集。

2.2.3各提取物中总酚类化合物含量

总酚类化合物含量测定根据甲醇溶液在760 nm处的吸光度参考。样品（150微升，三个重复），采用菲林试剂和碳酸盐（7.5％）750μL，在试管混合后，50℃保温10分钟，在760 nm处测定吸收波长。

2.2.4清除DPPH自由基的测定

每个样品的能力，根据分光对清除DPPH自由基的过程测量。简言之，各提取物的新鲜配制原液稀释成不同的甲醇溶液浓度（50，100，250，500，1 000，2 000微克/毫升）。在本实验中使用绿原酸，量化，并用甲醇溶解。DPPH自由基的甲醇溶液（100μmol，2.90毫升）加入到样品中。混合物震荡30秒和黑暗的房间中20分钟。记录在517 nm处的吸光度。根据公式计算样品DPPH自由基的

结果与讨论

清除效果。清除作用（％）= [（AC-AA）/ AC]×100

在AC控制的吸收和AA是样品的吸光度。DPPH自由基清除反应动力学的样本，包括1000μg/ml绿原酸和70％乙醇提取物。2分钟后，大力摇晃3秒混合物，记录吸光度。抗坏血酸作为阳性和阴性对照。结果是三个平行测量结果的平均值。

2.2.5铁抗氧化能力（FRAP还原力）法

FRAP测试是一种简单可靠的色度方法，通常用于测量总抗氧化能力。简言之，FRAP还原试剂900μL，准备温暖在37°C的90μL蒸馏水和测试样品30μL 的混合。FRAP还原试剂中包含的10 mmol / L的TPTZ溶液2.5毫升，40mmol/ L 盐酸加20 mmol / L的氯化铁2.5ml和25毫升0.3mol/ L的醋酸缓冲液，pH值3.6。混合物大力震荡3秒和室温下30分钟，记录最大吸收波长（595纳米）的读数。降低铁的反应动力学的样本，包括绿原酸和70％的乙醇提取物100μg。每30秒在37℃下30分钟，得到贝克曼DU-640分光光度计的读数。抗坏血酸和甲醇分别担任正面和负面的控制，结果为三个平行测量的平均值。

3结果与讨论

众所周知，金银花的药理和生物活性密切联系，其中绿原酸已被广泛的研究主要是由于其高含量和生物活性功能的绿原酸。在这项研究中，我们准备不同溶剂的三个金银花提取物绿原酸成分鉴定与绿原酸的参考的保留时间，用高效液相色谱法量化。

在测试范围（0.02〜0.50毫克/毫升）。两者具有良好的线性关系。此外，对总酚类化合物在金银花及其提取物的含量也进行了量化的探讨，了解酚类化合物含量和抗氧化活性之间的关系。结果取三次测量的平均值。

表1 绿原酸和总酚类化合物在金银花及其提取物的含量