优选菌种的制备和保藏

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1.涂片染色法
应用:可同时计数不同微生物的菌数,适 于土壤、牛奶中细菌计数。
方法:用镜台测微尺计算出视野面积;取 0.01ml菌液涂于1cm2面积上,计数后代 入公式:
每ml原菌液含菌数 = 视野中平均菌数×涂布面积/视野面积×100 ×稀释倍数
2.血球计数板法
原理:将1cm2×0.1mm的薄层空间划分为400小格,从 中均匀分布地选取80或100小格,计数其中的细胞数目, 换算成单位体积中的细胞数。
适用范围:个体较大细胞或颗粒,如血球、酵母菌等。
不适用于细菌等个体较小的细胞,因为(1)细菌细胞 太小,不易沉降;(2)在油镜下看不清网格线,超出 油镜工作距离。
特点:快速,准确,对酵母菌可同时测定出芽率,或在 菌悬液中加入少量美蓝可以区分死活细胞。
2.血球计数板法
3.比浊法
原理是在一定范围内,菌悬液中的细胞浓度与混浊度成 正比,即与光密度成正比,菌数越多,光密度越大。因 此,借助于分光光度计,在一定波长下测定菌悬液的光 密度,就可反应出菌液的浓度。
方式
无性繁殖 有性繁殖
一般为无性繁殖,二源自文库裂法。
➢ 同形裂殖:裂殖后形成的子细 胞大小相等。
➢ 异形裂殖:分裂产生两个大小 不等的子细胞。
细菌分裂过程:
➢ ①菌体伸长,核质体分裂 ➢ ②形成横隔壁 ➢ ③子细胞分离
☆少数有菌毛的菌可进行有性繁殖
三、放线菌的生长繁殖
1、放线菌的形态构造
★由分枝状菌丝组成。菌丝无隔膜,仍属单细 胞。菌丝直径与杆菌相似(1 m左右);细 胞壁含磷壁酸、二氨基庚二酸,不含几丁质、 纤维素;革兰氏阴性。
★技术要求:样品充分混匀,操作熟练快速(15~20min完 成操作),严格无菌操作;
★注意事项:每一支吸管只能用于一个稀释度,样品混匀 处理,倾注平板时的培养基温度;
★适用范围:中温、好氧和兼性厌氧、能在营养琼脂上生 长的微生物,
★误差:多次稀释造成的误差是主要来源,其次还有由于 样品内菌体分布不均匀、以及不当操作
★菌丝根据形态和功能不同可 分为:
基内菌丝(Substrate mycelium)
气生菌丝(Aerial mycelium) 孢子丝(Reproductive mycelium)
2、放线菌的繁殖方式
放 线菌的繁殖
无 性孢子(主要)
菌 丝片段
分生孢子
孢子囊孢子
横隔分裂 缩缢分裂
繁 殖方式


孢子
菌 丝片段
3.节孢子(arthrospore,又称粉孢子)
形成特征:由菌丝断 裂而成。 孢子形态:常呈成串 短柱状。 举例:白地霉。
4.厚垣孢子(Chlamydospore)
形成特征:部分菌丝细胞 质浓缩、变圆,周围生出 厚壁而成。 孢子形态:圆形、柱形等。 举例:总状毛霉。
厚垣孢子
1. 卵孢子(oospore)
4.担孢子(basidiospore)
有性结构及其形态特征: 担子菌所特有,经两性细 胞核配合后产生的外生孢 子。因着生在担子上而得 名。
所属分类地位:担子菌纲
五、微生物生长的测定方法
描述不同种类、不同生长状态的微生物生长情况, 需选用不同的测定指标。 (一)微生物细胞数目的检测法 直接法(血球计数板、比例计数法) 间接法(活菌计数法、液体稀释法、膜过滤法) (二)微生物生长量和生理指标测定法 直接法(干重法,堆体积法) 间接法(比浊法,碳、氮含量法,其它生理指标)
个体生长——微生物细胞个体吸收营养物质,进行新陈代谢,原 生质与细胞组分的增加为个体生长。
群体生长——群体中个体数目的增加。可以用重量、体积、密度 或浓度来衡量。(由于微生物的个体极小,所以常用群体生长来 反映个体生长的状况)个体生长个体繁殖 群体生长
群体生长 = 个体生长 + 个体繁殖
二、细菌的繁殖
平板菌落计数法4.平板菌落计数法
1ml 1ml 1ml
1ml
9ml 9ml 9ml
9ml
1ml
1ml
×2 ×2
有性结构及其形态特 征:由大小不同的配 子囊结合后发育而成。
小配子囊称雄器;大 配子囊称藏卵器。
所属分类地位:卵菌 纲。
2. 接合孢子(zygospore):
有性结构及其形态特征: 是 由菌丝生出的结构大小相似、 形态相同或略有不同两个配 子囊接合后发育而成。 所属分类地位:接合菌纲
接合孢子形成过程:
3.子囊孢子(ascospore):
有性结构及其形态特征:在子囊中形成。
子囊:两性细胞接触以后形成的囊状结构。子囊的形成有两种方 式:
①两个营养细胞直接交配而成,其外面无菌丝包裹; ② 从一个特殊的、来自产囊体菌丝(称为产囊丝)的结构 上产生子囊,多个子囊外面被菌丝包围形成子实体,称为子囊果。
所属分类地位:子囊菌纲
优选菌种的制备和保藏
1
一、生长与繁殖的概念
生长——微生物细胞吸收营养物质,进行新陈代谢,当同化作用> 异化作用时,生命个体的重量和体积不断增大的过程。
繁殖——生命个体生长到一定阶段,通过特定方式产生新的生命 个体,即引起生命个体数量增加的生物学过程。
发育——从生长到繁殖,是生物的构造和机能从简单到复杂、 从量变到质变的发展变化过程,这一过程称为发育。


有性孢子
无性孢子


卵孢子
孢囊孢子

接合孢子
分生孢子

子囊孢子
节孢子
担孢子
后垣孢子
1.孢囊孢子 (sporangiospore)
):
形成特征:形成于菌丝的特化结 构——孢子囊内。 孢子形态:近圆形。 举例:根霉、毛霉。
2.分生孢子(Canidinm):
形成特征:由分生孢子梗顶端细胞特化而成的单个 或簇生的孢子。 孢子形态:极多样。 举例:曲霉、青霉。
特点:快速、简便;但易受干扰。
4.平板菌落计数法
★A standard plate count (viable count) reflects the number of viable microbes and assumes that each bacterium grows into a single colony; plate counts are reported as number of colony-forming units (CFU) per ml (CFU/ml) or per g (CFU/g) of sample.
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