实验七 蛙类离体心脏灌流实验
实验七蛙类离体心脏灌流
一．目的要求：
1．学习掌握离体蛙心灌流法；
2．观察Na+、K+、Ca+及肾上腺素、乙酰胆碱等对离体心脏活动的影响。
二．基本原理：
心肌具有自动节律性收缩活动的特性，可用人工灌流的方法研究心脏活动的规律及其特点，还可通过改变灌流液的成分或加入某些药物来观察其对心脏活动的影响。
三．动物、器材和试剂：
1．动物：蟾蜍
2．器材：常有手术器械、蛙心夹、蛙心插管、张力换能器、滑轮、蛙盘、滴管、烧杯。
3．试剂：任氏液、5％NaCl溶液、2％CaCl2溶液、1％KCl溶液、1:100000肾上腺素溶液、1:100000乙酰胆碱溶液、300u/ml肝素溶液。
四．方法与步骤：
1．双毁髓，将蟾蜍固定于蜡盘；
2．暴露心脏，分离心脏周围的大血管。在左主动脉下方穿一线，距动脉圆锥2~3mm 处结扎。再从左、右两主动脉下方穿一线，打一活结备用。在前、后腔静脉下穿一
线，结扎，保留静脉窦。用眼科剪在动脉圆锥前端，沿向心方向剪一斜口，然后将
盛有少量任氏液－肝素溶液的蛙心插管由此开口处插入动脉圆锥。当插管尖端到达
动脉圆锥基部时，应稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后方及心尖方向推进，经
主动脉瓣插入心室腔内（可用另一只手轻轻捏住心室，感觉插入位置，不可插得过
深，以免心壁堵住插管尖端）。
3．用滴管吸去套管中的血液，更换新的任氏液。提起打活结的备用线，将左右主动脉连同插入的插管扎紧，再将连线固定于插管的小钩上。剪断结扎线以外的血管及所
有牵连的组织，将心脏离体。用任氏液反复冲洗心室内余血，使灌流液不再有血液，至心室发白。加入一定高度的任氏液，标记。
4．用蛙心夹夹住心室尖，接滑轮，固定于张力感受器。
5．连接仪器，调整初长度，开始实验。在任氏液中加入几滴5％NaCl溶液，观察曲线变化，当曲线出现明显变化时，立即吸去灌洗液，用任氏液反复冲洗，至曲线恢复
正常。加任氏液至标记高度。同法做CaCl2、KCl、肾上腺素、乙酰胆碱，记录。
五．注意事项：
1．插入时应注意方向，不能用力过大，也不可强硬插入；
2．插管时要防止凝血，需互相配合；
3．扎插管时应扎紧，防止实验时滑出；
4．液面高度应保持一致；
5． 加药时应有前后对照；
6． KCl 、乙酰胆碱的影响较剧烈，应注意快速清除。
六． 结果与分析：
2．波形图
3m
C h a n n e l 1 (m V )
Na+增加不影响心率，但使振幅下降，收缩减弱
3m
C h a n
n e l 1 (m V )
Ca2+增加不影响心率，但使振幅增大，收缩加强
3m
C h a n n e l 1 (m V )
K+增大时心率减慢，振幅下降
3m
C h a n n e l 1 (m V )
肾上腺素增加使频率加快，振幅变大
3m
C h a n n e l 1 (m V )
乙酰胆碱增加使心率下降，振幅急剧下降
七． 思考题：
1． 此实验说明心肌有哪些生理特性？
答：兴奋性、传导性、自律性、收缩性。
2． 以本实验为例说明内环境相对恒定的重要意义。
答：细胞外液是机体中细胞所处的内环境，细胞外液内含较多的Na+、Cl+、O 2、C 6H 12O 6等，供细胞物质交换。内环境的稳态是细胞维持正常生理功能的必要条件，
也是机体维持正常生理功能的必要条件，也是机体维持正常生命活动的必要条件。
以本实验为例，当C2+增加时，心肌动作电位平台期Ca2+内流增加，导致心肌收缩能力增加，每搏做功增加。也注意到，离子浓度变化会导致渗透压的变化，影响细胞的生理功能。
3．各种离子和药物对心搏有何影响，为什么？
答：⑴Na+：Na+的主要作用是维持细胞内外液的渗透压平衡。只有当细胞外Na+浓度发生非常明显的变化时，才会影响心肌活动。细胞外Na+增加时，通过Na+~Ca+交换作用，促使心脏细胞内的Ca2+外流，从而减弱兴奋耦联作用，使心肌收缩减弱；另外，细胞外液Na+增加时，心肌细胞去极化速度和幅度增高，传导性升高。
⑵Ca2+：Ca2+直接参与心肌兴奋收缩耦联作用，血Ca2+升高时，Ca2+内流增
多，兴奋收缩耦联作用增强，心肌收缩性增强；另外，细胞外Ca2+升高时，使心肌细胞的阈电位水平上移，因而心率减慢。
⑶K+：K+升高，因为K+和Ca2+存在竞争性抑制关系，可使Ca2+内流减少，
因而心肌兴奋收缩耦联作用减弱，心肌收缩性减弱；另外，细胞外K+升高时，心肌细胞的静息电位变小，解决阈电位，因此兴奋性升高，心率加快，但传导减慢，甚至阻滞。但当静息电位过小时，Na+通道失活，则兴奋性反而降低或丧失，心率减慢。
⑷肾上腺素：能与心肌细胞膜上β受体结合，产生正性变力、变时和变传导效
应。
a.加强自律细胞4期的跨膜内向电流If，使自律性增高；
b.加强和加速慢反应细胞0期Ca2+内流，使动作电位上升幅度和速度增加，房
室交界兴奋传导速度加速；
c.使复极相K+外流增加，复极相缩短，不应期缩短。提高肌膜和肌浆网对Ca2+
的通透性，增强心肌收缩能力。
⑸乙酰胆碱：与细胞膜上M受体结合，能普遍提高膜上K+通道的通透性，促
使K+外流增加，使心肌收缩力下降。
a.静息电位绝对值增大，心肌兴奋性下降；
b.窦房结最大复极性电位绝对值增大，自律性降低，使心率减慢；
c.复极加速，动作电位时程缩短，有效不应期缩短。
离体蛙心灌流实验
实验五离体蛙心灌流实验 一实验目的 1、了解蟾蜍离体心脏的灌流的方法。 2、观察细胞外液钾离子、钙离子浓度变化对心脏活动的影响。 二实验原理 心脏离体后，如用人工灌流的方法，保持其新陈代谢的顺利进行，则心脏仍能有节律的自动收缩和舒张，并可维持较长的时间。离体心脏所需的条件应与动物内环境的理化性质基本相近，因此改变灌流液的理化因素，则可引起心脏活动的变化。 1、任氏液：正常对照 含有NaCl、CaCl2、KCl、NaH2PO4、 Na2HPO4 和蒸馏水，其电解质、晶体渗透压、pH值与蛙的组织液相近。 2、0.65%NaCl灌流： 3、2%CaCl2灌流 4、 1%KCl灌流
5、1:10000 E 灌流 6、1:10000 Ach灌流 7、心得安 β1受体阻断剂，抑制肾上腺素与β1受体结合，使E不能发挥作用。 8.、阿托品 M受体阻断剂，抑制Ach减慢心率，加速房室传导，增加心房收缩力。 三实验器材 微机生物信号处理系统， physiology系统，学校服务器系统，蟾蜍离体蛙心，任氏液，1%KCl，3%CaCl2，65%NaCl，1/10000 E，心得安+1/10000,1/10000 Ach，阿托品+1/10000 Ach。 四实验步骤 1、标本制备（观看视频） 2、仪器及标本的连接 3、具体软件操作： 1）离子试剂：任氏液→0.65%NaCl溶液→任氏液清洗→1%KCl溶液→任氏液清洗→2%CaCl2溶液→任氏液清洗 2）药物试剂：肾上腺素（E）→任氏液清洗→心得安→任氏液清洗→Ach，任氏液清洗→阿托品→任氏液清洗。 五实验结果
图1 离体蛙心灌流
生理学实验报告-蛙心灌流
实验名称： 蛙类离体心脏灌流 课程名称：生理学实验 指导教师：龙天澄张碧鱼陈笑霞 实验人：叶永锋08344031 学院：海洋学院 实验时间：2009年12月09日
一、【目的要求】 1、学习斯氏离体蛙心灌流法。 2、了解心肌的生理特性。 3、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh)等对离体心脏活动的影响。 二、【原理】 将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。血钾浓度过高时（高于7.9mmol/L），心脏兴奋性、自律性、传导性及收缩性都下降，表现为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒张期。血钙浓度升高时，心脏收缩力增强，过高可使心室停搏于收缩期。血钙浓度降低，心肌收缩力减弱。血中钠离子浓度的轻微变化，对心肌影响不明显，只有发生明显变化时，才会影响心肌的生理特性。肾上腺素可使心率加快、传导加快及心肌收缩力增强，乙酰胆碱则与肾上腺素的作用相反。 三、【实验仪器】 青蛙、常用手术器械、蛙板(或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、纱布、棉线、橡皮泥、任氏液。蛙心套管(斯氏套管或八木氏套管)、套管夹、0．65％NaCl、5％NaCI、2％CaCl2、1％KCl、1：5 000肾上腺素、1：10 000乙酰肌碱、300U／mL肝素。 四、【方法与步骤】 1、斯氏蛙心插管法 （1）一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中， 按前面的方法暴露心脏。仔细识别心脏周围的大 血管(见右图)。在左主动脉下方穿一线，于动脉 圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。 再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备 用。左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪 在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜 口。选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量 (套管内2～3 cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶 液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)。用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液)，再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，看清静脉窦的位置，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血，
离体蛙心灌流及药物对心脏的影响
离体蛙心灌流及药物对心脏的影响 一、实验目的： 1、学习蛙心灌流方法。 2、了解离体心脏的自律性与环境中各因素变化的关系，观察理化因素 对蛙心活动的影响。 二、实验对象：蟾蜍 三、实验方法： 1、标本制备： 取蟾蜍→破坏CNS→固定→剪皮→打开胸腔（暴露胸骨柄，用镊子把胸骨柄捏起来，用粗剪刀剪断，沿胸骨将锁骨剪断，去除多余的骨头，注意勿将心脏剪破）→用眼科剪小心剪开心包膜→暴露心脏→在主动脉叉下方穿一根丝线备用→用蛙心夹在心舒张期夹住心尖部→在左侧主动脉分叉处2-3mm处剪一剪口→将盛有一定量任氏液的蛙心插管插入到主动脉球→将插入到主动脉球的套管稍向后退，再向左下逆时针旋转90°，插入心室→结扎固定→剪断血管和背面静脉窦以下组织，游离标本 2、连接装置： 蛙心管内保持2ml灌流液，用木夹夹住蛙心套管，蛙心夹的线与张力换能器相连，换能器与电脑的相应通道相连。 3、运行电脑： 打开电脑→Medlab→实验/常用生理实验→离体蛙心灌流 四、实验结果： 分别观察正常心脏活动曲线及加入不同溶液后的心脏活动曲线的变化。 曲线规律：心脏节律； 曲线疏密：心率 曲线基线：心室舒张最大程度 顺序观察项目药量心肌(率、力)变化 正常任氏液灌流正常 1 0.65%NaCl 灌流 1~2d 2 2% CaCl 2 3 1%KCl 1~2d 4 1:10000 NA 1~2d 5 1:100000 ACh 1~2d 6 3% LH 1~2d 2.5% NaHCO3 2~4d 7 1:100000 Isop 1ml +任氏液1ml 8 1:1000 prop 0.2ml+任氏液1.8ml 出现效应后，抽出一半液体后 立即加入Isop1ml
1、蛙心灌流实验报告
蛙心灌流实验 实验目的 1、学习斯氏或八木氏离体蛙心灌流法。 2、了解心肌的生理特性。 3、观察Na+、K+、Ca2+及肾上腺素（Adr）、乙酰胆碱（Ach）等对离体心脏活动的影响。实验原理 动物的离体心脏，用理化特性类似于其血浆的代体液灌流时，在一定的时间内，仍然保持有节律的舒张活动。改变灌流液的理化特性，这种节律的舒缩活动也随之发生改变，说明内环境理化因素的相对恒定是维持心脏正常节律活动的必要条件。 实验材料与用品 1、材料：蟾蜍、斯氏蛙心套管、套管夹、支架、双凹夹、蛙心夹、蛙板（蜡盘）、常用手术器械、滴管、废液缸、棉线 2、药品：任氏液、0.65%NaCl、2%CaCl2 、1%KCl、0.01% 肾上腺素、0.01%乙酰胆碱 3、仪器：计算机采集系统、张力传感器 实验步骤 1、取一只蟾蜍，用探针破坏其脑脊髓后仰卧固定于蛙板上，剪开胸前区皮肤，剪去胸骨，暴露心脏。用眼科镊提起心包膜，再用眼科剪在心脏收缩时将其剪破，使心脏完全暴露出来。 2、识别心脏的各个部分，包括心房、心室、静脉窦等，并观察心跳。 3、插蛙心插管，制备离体蛙心。在左主动脉下穿一线结扎，靠近动脉窦，接着在左右主动脉下方穿一线，并打一松结留作固定插管用。 4、用手提起结扎线，用眼科剪在左侧主动脉距分叉3mm处向心脏剪一斜口，右手将盛有少量任氏液的蛙心插管由此口插入，先进入动脉圆锥，然后在心室收缩时，向前略向左推动蛙心插管，使之经主动脉瓣插入心室腔内（注意：为了使蛙心插管顺利插入心室，应使心室与动脉圆锥成一条直线）。进入心室的标志是随着心室搏动，均有血液喷入插管，插管的液面随着心搏而升降。结扎插管并将结扎线固定于插管侧面的小钩上，以防止标本滑脱。在蛙心插管插入心室后，用吸管及时吸出管内的血液，更换新鲜任氏液。提起插管，剪断主动脉左、右侧分支，轻轻提起插管和心脏，在静脉窦下方绕一线，将左右肺静脉及前后腔静脉一起结扎（切勿损伤静脉窦），在结扎线下方剪去所有牵连的组织，将心脏摘出。用任氏液反复冲洗（10~25滴/min的速度缓慢点滴）任氏液。至插管内任氏液完全澄清无色为止。以后做实验注意每次换液时，插管内液面应保持相同的高度。
蛙心灌流实验报告
实验二离体蛙心灌流实验 专业：学号：姓名： 一、实验目的 1.学习离体器官（蛙心）灌流的方法。 2.观察理化因素对蛙心活动的影响。 二、实验原理 蛙心的灌流:蛙心无营养性血管，离体之后采用人工灌流的方法，仍可保持其新陈代谢，心脏仍能有节律的自动收缩、舒张，并维持较长时间，心肌的营养是通过心脏内膜液体的直接渗透而得。 心肌： 1. 含有NaCl、CaCl2、KCl、NaH2PO4、Na2HPO4 和蒸馏水，其电解质、晶体渗透压、pH值与蛙的组织液相近。 2.0.65%NaCl灌流： 3.2%CaCl2灌流：
4.1%KCl灌流：
5.1:10000 E灌流 6.1:10000 Ach灌流 7.心得安 β 1受体阻断剂，抑制肾上腺素与β 1 受体结合，使E不能发挥作用。 8.阿托品 M受体阻断剂，抑制Ach减慢心率，加速房室传导，增加心房收缩力。
三、 实验器材 离体蛙心 任氏液、l ％KCl 溶液、2％CaC12溶液、0.65%NaCl 溶液、1:10000 肾上腺素、1:10000乙酰胆碱、心得安、阿托品 四、 实验步骤 五、 结果与分析 心率：34次/min 最大收缩力：2.5g 最小收缩力：1.1g 图1 正常脉搏曲线 心率：35次/min 最大收缩力：1.6g 最小收缩力：1.1g 图2 0.65%NaCl 灌流脉搏曲线 任氏剂 0.65%NaCl 任氏液清洗 2%CaCl 2 任氏液清洗 1%KCl 任氏液 2.药物试剂 E 任氏液清洗 心得安+E 任氏液清洗 Ach 任氏液清洗 阿托品+Ach 任氏液 1.离子试剂
实验5离体蛙心灌注
实验五离体蛙心灌注 目的 学习离体蛙心灌流的方法；观察内环境理化因素的相对恒定对维持心脏正常节律性活动的重要作用；了解肾上腺素、乙酰胆碱等激素、神经递质对心脏活动的调节意义。 原理 动物的离体心脏，用理化特性类似于其血浆的代体液灌流时，在一定的时间内，仍然保持有节律的舒张活动。改变灌流液的理化特性，这种节律的舒缩活动也随之发生改变，说明内环境理化因素的相对恒定是维持心脏正常节律活动的必要条件。 器材与药品 蛙心陶罐、蛙心夹、常用蛙手术器械、铁架台、双凹夹、滴管、小烧杯、氯化钠溶液（1%NaCl）、氯化钙溶液（2%Ca Cl）、氯化钾溶液（1%KCl）、肾上腺素（1/10000Ad）、乙酰胆碱（1/100000Ach）、任氏液（Ri/lger’s solution新鲜配制）等。 步骤 （1）取一只蟾蜍或蛙，用探针破坏其脑脊髓后仰卧固定于蛙板上，剪开胸前区皮肤，剪去胸骨，暴露心脏。用眼科镊提起心包膜，再用眼科剪在心脏收缩时将其剪破，使心脏完全暴露出来。 （2）识别心脏的各个部分，包括心房、心室、静脉窦等，并观察心跳。 （3）插蛙心插管，制备离体蛙心。先在左右主动脉下方穿一线，并打一松结留作固定插管用。再在左主动脉下穿一线结扎。用手提起结扎线，用眼科剪在左侧主动脉距分叉3mm处向心脏剪一斜口，右手将盛有少量任氏液的蛙心插管由此口插入，先进入动脉圆锥，然后在心室收缩时，向前略向左推动蛙心插管，使之经主动脉瓣插入心室腔内（注意：为了使蛙心插管顺利插入心室，应使心室与动脉圆锥成一条直线）。进入心室的标志是随着心室搏动，均有血液喷入插管，插管的液面随着心搏而升降。结扎插管并将结扎线固定于插管侧面的小钩上，以防止标本滑脱。注意在蛙心插管插入心室后，用吸管及时吸出管内的血液，更换新鲜任氏液。
生理学实验报告蛙心灌流
生理学实验报告-蛙心灌流
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蛙类离体心脏灌流 一、【目的要求】 1、学习离体蛙心灌流法。 2、观察Nａ＋,K+,Ｃa2+及肾上腺素(Adｒ),乙酰胆碱（ＡCｈ)，乳酸对离体心脏活动的影响。 二、【原理】 将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩,心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分,观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。外源性给予去甲肾上腺素或乙酰胆碱可产生类似心交感神经或迷走神经兴奋时对心脏的作用。 三、【实验仪器】 青蛙、常用手术器械、蛙板（或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、棉线、任氏液。套管夹、0．６5％ＮaＣl、２％ＣａＣl2、1%KCl、１：1０000肾上腺素、1：10000乙酰肌碱、3%乳酸。 四、【方法与步骤】 １、斯氏蛙心插管法 (１)一只青蛙,双毁髓后背位置于蜡盘中,按前面的方法暴露心脏。仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时,结扎位置可靠上些)。再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。左手提起主动脉上的结扎线,右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内2～3cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。当套管尖端到达动脉圆锥基部时,应将套管稍稍后退,使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进,经主动脉瓣插入心室腔内（于心室收缩时插入,但不可插得过深,以免心室壁堵住套管下口)。此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入）。用滴管吸去套管中的血液,更换新鲜任氏液。稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液）,再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏,看清静脉窦的位置,于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血,使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致（１．５~２ｃm）,即可进行实验。 (2）将插好离体心脏的套管固定在支架上,用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉(不可夹得过多，以免因夹破心室而漏液)。再将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与张力传感器相连(如右图）。注意:勿使灌流液滴到传感器上。调节显示器上心脏收缩曲线的幅度适中。 2、实验观察 (1）记录正常心搏曲线 (2）改用0．65%ＮaCＩ溶液灌流,并作好加药标记,观察心搏变化。待曲线氏插管装置出现明显变化时,立即吸去套管中的灌流液,同时做好冲洗标记，并用新鲜任氏液清洗2—3次,待心搏恢复正常。注意:换液时切勿碰套管，以免影响描记曲线的基线,同时保持灌流液面一致(以下同）。
离体蛙心灌流实验方法的比较研究
万方数据
?１４５６? 间上比双管法短（Ｐ＜０．０５）；双管法的心脏离体后存活时间明显长于单管法（Ｐ＜０．０５）；单管法对动脉瓣的损伤率、心律失常的发生率明显较双管法高（Ｐ＜０．０５）。实验结果见表１。 Ｆｉｇ１Ｄｉａｇｒａｍｏｆｏｎｅ—ｅａｎｕｌａｐｅｒｆｕｓｉｏｎｄｅｖｉｃｅ 图１单管灌流装置模式图 Ｆｉｇ２Ｄｉａｇｒａｍｏｆｔｗｏ—ｅａｎｕｌａｐｅｒｆｕｓｉｏｎｄｅｖｉｃｅ． 图２双管灌流装置模式图 表１两种方法优缺点比较 Ｆｉｇ１Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆａｄｖａｎｔａｇｅ矗ｄｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｗｉｔｈｔｗｏｐｅｒｆｕｓｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ（互±Ｓ．ｎ＝１２） Ｏｎｅ——ｅａｎｕｌａＴｗｏ——ｃａｎｌｌｌａ Ｔｉｍｅｏｆｅａｎｎｕｌａｔｉｏｎ（ｍｉｎ）４８．３５±７．２８５９．９５±２１．２３。 Ｔｉｍｅｏｆｉｓｏｌａｔｅｄｈｅａｒｔ（ｍｉｎ）６４．３０±２１．１８６０．１０±１８．４８ Ｈｅａｒｔｓｕｒｖｉｖａｌｔｉｍｅ（ｈ）１．７１±１．４０２．５７±０．５９＋ Ｄａｍａｇｅｏｆａｏｒｔｉｃｖａｌｖｅ（％）５８．３０。 Ａｒｒｈｙｔｈｍｉａ（％）６６．７２５．０。 ＲｅｃｏｒｄｉｎｇａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｓｙｓｔｅｍＳａｍｅＳａｍｅ ＣｏｓｔｏｆｄｅｖｉｃｅＬｏｗｅｒＨｉｇｈｅｒ。Ｐ＜０．０５ｍｏｎｅ—ｅａｎｕｌａｍｅｔｈｏｄ． 讨论 离体心脏灌流是研究心脏功能的重要手段之一，广泛应用于医学、生物学、药学等教学和科研工作中。采用离体心脏灌流系统可以直观地观察心脏的活动，研究心脏舒缩功能，心率和节律变化，前后负荷及各种体液因素等对心脏功能的影响【５Ｊ。采用蛙心脏进行离体心脏灌流是较为常用的一种模型，因其稳定，经济，一直被人们广泛采用。进行离体心脏灌流实验，首先需要保证心脏在体外较长时间存活，然后根据实验目的进行灌流和施加实验因素。无论是心脏离体前的插管、血流冲洗等操作，还是心脏离体后用人工溶液代替血液进行灌流，均使心脏脱离了生理性神经体液环境。因此，使离体心脏较长时问存活，并维持良好的状态对于完成实验和取得可靠实验数据极为重要。本研究比较了当前应用较为普遍的两种方法，并探讨了它们各自的优缺点。 本研究结果表明，单管法插管数量少，操作相对简单，缩短离体前等血管分离和插管等所需时间，可为完成各实验项目赢得足够在体外存活时间。其缺点是需将套管从主动脉经过动脉瓣插入心室，血液在心室收缩时射入动脉和插管内，而舒张时返流回心室，这样不仅打破了心脏单方向泵血的生理特征，而且，由于易发生心脏瓣膜及心肌损伤，使心律失常发生率增高，导致实验失败。常常影响实验结果的客观性及实验的顺利进行。离体心脏在体外的存活时间也较双管法短。双管法虽然需要对腔静脉和主动脉进行分别插管（双管），插管所需时问较管法要长，但因其不通过主动脉瓣，对主动脉瓣及心室肌的损伤机会大大减小，灌流液从静脉插管进入心脏，从动脉插管流出，使心脏血液单方向流动，符合心脏工作的生理特征。因此，心脏在体外存活时间反而较单管法长，而且一旦插管成功，各实验项目应能够得以顺利进行。采用双管法主要缺点除插管操作时间比单管法长外，因其灌流装置略复杂，需要特殊定制，费用较单管法实验装置高。从用途方面分析，双管灌流法还可用于研究心输出量，以及前、后负荷对心脏功能的影响等。如在双管法中改变Ｂ管中的液体量即容量负荷，改变Ａ管的口径（即后负荷）；而单管法的输入和输出均在同一管中，不适用于此项研究。 作者认为在离体蟾蜍心脏灌流实验中，采用双管法能使心脏瓣膜完好无损，保证血液单一方向流动，心脏存活时间长，能观察和记录心肌收缩力和心输出量，且记录的实验结果准确，便于整理分析，得出正确结论。而且由于实验成功机率高，减少了实验动物及试剂的消耗，值得在教学及科学研究工作推广应用。 ［参考文献］ ［１］ＭｃＫｅａｎＴ，ＳｅｈｅｒｚｅｒＡ，ＰａｒｋＨ．Ｈｙｐｏｘｉａａｎｄｉｓｅｈａｅｍｉａｉｎｂｕｆｆｅｒ—ｐｅ删ｔｏａｄｈｅａｎｓ［Ｊ］．Ｊ脚Ｂｉｄ，１９９７，２００ （１９）：２５７５—２５８１． ［２］ＨｕｓｓｅｉｎＡＡ，ＮａｂｉｌＺＩ，ＺａｌａｔＳＭ，ｅｔａ１．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｖｅｎｏｍｓｆｒｏｍｔｈｒｅｅｓｐｅｃｉｅｓｏｆｂｅｅｓ：ｅｆｆｅｃｔｓｏｎｈｅａｒｔａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄｂｌｏｏｄ［Ｊ］．ＪＮａｔＴｏｘｉｎｓ，２００１，１０（４）：３４３—３５７．［３］任京力，赵树进，杨太成，等．肾上腺素能ｐ。受体亚型特异性抗体的制备及鉴定［Ｊ］．中山医科大学学报，２００２， ２３（１）：３７—３９，４３． ［４］高兴亚，汪晖，戚晓红，等主编．机能实验学［Ｍ］．北京：科学出版社，２００２．７２—７４． ［５］黄敏，冬冬主编．医学机能实验学［Ｍ］．北京：科学出版社，２（１０２．４８—５０． ［６］胡还忠主编．医学机能学实验教程［Ｍ］．北京：科学出版社，２００２．１３３—１３６． ［７］朱建平主编．生理科学实验教程［Ｍ］．北京：科学出版社，２００３．８２—８５． ［８］徐怡，汤剑清，刘少金，等．蛙心灌流实验中值得注意的几个问题［Ｊ］．数理医药学杂志，２００２，１５（５）：４０３— ４０４． ［９］季淑梅，王庆山，范振中，等．介绍一种简单、新型的主要用于蛙心灌注实验的计滴装置［Ｊ］．中国应用生理 学杂志，２００４，２０（１）：９５—９７． 万方数据
实验二 离体蛙心灌流
实验二蛙心灌流观察体液因素对心脏活动的影响 [原理] 心脏的正常节律性活动需要一个适宜的内环境（如Na＋，K＋，Ca2＋等的浓度及比例、pH值和温度），而内环境的变化则直接影响到心脏的正常节律性活动。在体心脏还受交感神经和迷走神经的双重支配，交感神经末梢释放递质去甲肾上腺素，使心肌收缩力加强，传导速度加快，心率加快；迷走神经末梢释放乙酰胆碱，使心肌收缩力减弱，心肌传导速度减慢，心率减慢。将失去神经支配的离体心脏保持于适宜的理化环境中（如任氏液），在一定时间内仍能产生自动节律性兴奋和收缩。而改变任氏液的组成成分，离体心脏的活动就会受到影响。用受体阻断剂阻断受体，则相应的受体不能发挥作用。 本实验通过观察内环境理化因素对维持心脏正常节律性活动的重要作用，了解Na+，K+，Ca2＋离子以及肾上腺素（β受体激动剂）、乙酰胆碱（M受体激动剂）等激素对心脏活动的调节意义。各种体液因素都是通过影响细胞质内钙离子浓度来起作用。钙离子浓度升高，心肌收缩力量增强，反之减弱。 [目的] 学习离体蛙心灌流的方法； 观察钠、钾、钙三种离子对心脏活动的影响； 观察肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。 [材料及设备] BL-420型生物机能试验系统，蛙，蛙心套管，蛙心夹，任氏液（与蛙心内环境相似的溶液），0.65%氯化钠，2%氯化钙，1%氯化钾，0.01%肾上腺素，0.0 1%乙酰胆碱，滴管，万能支架，张力换能器。 [方法及步骤] （一）制备离体蛙心
1．用探针破坏蟾蜍的脑和脊髓。 2.蟾蜍固定。将蟾蜍仰卧位固定于蛙板上。 3．打开蟾蜍胸腔。用剪刀剪开胸骨表面皮肤并游离、去掉胸骨，再用眼科剪剪开心包以暴露心脏。 4.蟾蜍心脏插管。用小剪刀在主动脉的根部朝心室的方向剪一小口，以灌有任氏液的蛙心滴管的尖端，由此口插入动脉球。然后将插管稍向后退，再转向心室中央的方向，插入心腔内。如确实插入心室，即以另一线将动脉球与套管的尖端一起结扎固定，然后将结扎剩下的线头结扎在套管侧壁的小玻璃钩上，并固定之，以免心脏滑脱。注意：插套管时要特别小心，应逐渐试探插入，以免损伤心肌，然后滴入少量任氏液。套管插好后的斜口应向心室腔，以免心室收缩时堵塞斜口。如果其深度和位置合适，则套管中的液面随心脏的跳动而上升和下降。于是可将与心脏相连的血管和其他组织剪断，摘出心脏，但切勿损伤静脉窦。然后用任氏液洗涤心脏内外，并经常保持其湿润。 （二）仪器连接 将两个双凹夹固定于万能支架上，将连有分离好的离体蛙心的蛙心滴管固定在上方的双凹夹上，将张力换能器置于下方双凹夹，用连有丝线的蛙心夹于心舒期夹住心尖；再将丝线连结在张力感受器上（张力感受器事先接在计算机的3 通道上）。即可在显示屏上显示出心博曲线，根据屏幕显示信号适当调整扫描速度和灵敏度等，等得到满意的图形就开始试验。 [实验项目] ?正常心脏收缩的曲线：用滴管向蛙心套管中注入1—3毫升任氏液（以后的溶液量均应与第一次相同）。注意观察心跳频率和收缩强度。 ?钠离子的影响：向套管中加入2%氯化钠数滴，观察心脏活动有何变化？ 待心脏活动发生明显改变时，添加新鲜的任氏液进行洗涤，反复数次， 直至心脏恢复正常活动后，再加入其它溶液（以下实验皆同此）。
离体蛙心灌流(精)
离体蛙心灌流 实验目的 学习离体蛙心灌流的方法； 观察钠、钾、钙三种离子对心脏活动的影响。 观察肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。 实验器材 动物：蟾蜍 器材：斯氏蛙心套管、套管夹、常用手术器械、任氏液、张力换能器、蛙心夹、0.65%NaCl 溶液、5%NaCl溶液、2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1:5000肾上腺素溶液、1:10000乙酰胆碱溶液、300u/ml肝素溶液 实验方法与步骤 1、离体蛙心的制备：双毁髓→左主动脉结扎→左右两主动脉下方活结备用→剪口，插 管（管内盛任氏液与肝素）→结扎备用线（套管＋左右主动脉）→剪断动脉→结扎并剪断静脉。 2、固定套管并用任氏液换洗血液；进入RM6240系统。 3、观察并记录正常心搏曲线； 4、向套管内分别加入以下溶液（0.65%NaCl溶液2d 、5%NaCl溶液2d 、1%KCl溶 液1-2d 、2%CaCl2溶液1d 、1:5000肾上腺素溶液1-2d 、1:10000乙酰胆碱溶液1-2d ），观察并记录曲线变化。 实验结果 此图为蛙心正常心搏曲线
由波形图可知，Nacl可使心肌收缩能力减弱，心率减慢，导致心率曲线幅度减小。 有波形图可知，向任氏液中加入5%Nacl之后心搏曲线的幅度大大降低。
KCl导致心脏肌细胞收缩能力减弱，心率减慢。 此图为加入Cacl2溶液后蛙心收缩曲线的变化 可使心肌收缩能力增强，心率加快，导致心率曲线幅度由上图可知，CaCl 2 增加。
由波形图可知，肾上腺素可使心肌收缩力增强，心率加快。 此图为加入乙酰胆碱后蛙心收缩曲线的变化 由上图可知，乙酰胆碱可使心肌收缩能力减弱，心率减慢，导致心率曲线幅度降低。 实验结果分析 离体蛙心仍可具有揭露性收缩，是因为作为蛙心正常起搏点的经脉都（其功能相当于人体心脏的窦房结）能产生自动节律，通过传导系统维持心脏的波动，心脏正常德节律性兴奋和收缩活动必须在适宜的礼花环境才能维持，一旦适宜 的环境被干扰或破坏，心脏后东就会受到影响。
生理学实验报告-蛙心灌流
蛙类离体心脏灌流 一、【目的要求】 1、学习离体蛙心灌流法。 2、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh),乳酸对离体心脏活动的影响。 二、【原理】 将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。外源性给予去甲肾上腺素或乙酰胆碱可产生类似心交感神经或迷走神经兴奋时对心脏的作用。 三、【实验仪器】 青蛙、常用手术器械、蛙板(或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、棉线、任氏液。套管夹、0．65％NaCl、2％CaCl2、1％KCl、1：10000肾上腺素、1：10000乙酰肌碱、3%乳酸。 四、【方法与步骤】 1、斯氏蛙心插管法 （1）一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按前面的方法暴露心脏。仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内2～3 cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)。用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液)，再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，看清静脉窦的位置，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血，使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致(1.5～2 cm)，即可进行实验。 （2）将插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉(不可夹得过多，以免因夹破心室而漏液)。再将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与张力传感器相连（如右图）。注意：勿使灌流液滴到传感器上。调节显示器上心脏收缩曲线的幅度适中。 2、实验观察 (1)记录正常心搏曲线 (2)改用0．65％NaCI溶液灌流，并作好加药标记，观察心搏变化。待曲线氏插管装置出现明显变化时，立即吸去套管中的灌流液，同时做好冲洗标记，并用新鲜任氏液清洗2—3次，待心搏恢复正常。注意：换液时切勿碰套管，以免影响描记曲线的基线，同时保持灌流液面一致(以下同)。
关于离体蛙心灌流演示实验的解释
关于离体蛙心灌流演示实验的说明 一．实验目的 1.演示蛙心灌流实验, 得出兴奋传递需要神经递质，阐明兴奋在神经元间传递的实质。 2.分析蛙心灌流实验结果，体验学科知识的形成过程，培养探究意识和理性思维。 二．实验原理 乙酰胆碱是M胆碱能受体激动剂，当乙酰胆碱与心肌细胞膜上的M胆碱能受体特异性结合时，会使心率减慢、房室传导减慢、心肌收缩力减弱。 阿托品是M胆碱能受体阻断剂，抑制乙酰胆碱与M受体结合，从而加速房室传导，增加心肌收缩力。 三．材料与用具 1.实验动物 牛蛙 2.实验试剂 任氏液（Biotopped） 乙酰胆碱（博美）：1:10000mg/L 硫酸阿托品注射液（天津金耀药业有限公司）：1:2000mg/L 3.实验器材 解剖器材：托盘、解剖蛙板、蛙钉、镊子、眼科剪、毁髓针、棉线、烧杯、滴管。 蛙心管流装置：铁支架、蛙心夹、蛙心插管、蛙心套管、力传感器、信号集线器、数据线、DisLab波形软件 四．实验步骤及结果（一）课前准备 1.蛙心解剖 1）毁脑毁脊髓 2）打开胸腔 3）剪开心包膜、暴露心脏2.蛙心插管 1）结扎 2）插管 3）心脏离体 4）铁支架固定 （二）课堂演示 1.演示步骤
1）观察任氏液条件下，心脏跳动频率及幅度。 2）加入2滴1∶10000乙酰胆碱溶液，观察心脏跳动频率及幅度变化。 3）当出现明显变化时，加入少许1:2000mg/L阿托品溶液，观察心脏跳动频率及幅度变化。 2.实验结果 1）任氏液条件下，心脏跳动频率及幅度 结果：心脏跳动正常。 2）滴加1：10000乙酰胆碱溶液 结果：心脏跳动变慢。 3）滴加1:2000阿托品溶液 结果：心脏跳动逐渐恢复。 附：实验用具及药品
离体蛙心灌流
一、实验目的： 学习斯氏离体蛙心灌流法；了解心肌的生理特征；观察Na+、K+、Ca+、及肾上腺素（Adr）、乙酰胆碱（Ach）等对离体心脏活动的影响。 二、实验原理： 将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。血钾浓度过高时（高于7.9mmol/L）,心脏兴奋性、自律性、传导性及收缩性都下降，表现为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒张期，血钙浓度升高时，心脏收缩力增强，过高可使心室停搏于收缩期。血钙浓度降低，心肌收缩力减弱，血中钠离子浓度的轻微变化，对心肌影响不明显，只有发生明显变化时，才会影响心肌的生理特性。肾上腺素可以使心率加快、传导加快及心肌收缩力加强，乙酰胆碱则肾上腺素的作用相反。 三、实验仪器： 青蛙、常用手术器械、蛙板、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针型露丝刺激电极、滴管、培养皿（或小烧
杯）、纱布、棉线、橡皮泥、任氏液。蛙心套管（斯氏套管或八木式套管）、套管夹、氯化钠溶液、氯化钙溶液、氯化钾溶液、肾上腺素、乙酰胆碱、肝素。 四、实验步骤： 1、斯氏蛙心插管法： （1）一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按前面的方法暴露心脏。仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内2～3 cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)。用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液)，再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，看清静脉窦的位置，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血，
生理学实验报告蛙心灌流
实验名称: 蛙类离体心脏灌流 课程名称：生理学实验 指导教师：龙天澄张碧鱼陈笑霞 实验人：叶永锋08344０３１ 学院：海洋学院 实验时间：２009年１２月09日
一、【目的要求】 1、学习斯氏离体蛙心灌流法. 2、了解心肌的生理特性. ３、观察Nａ＋,K＋，Cａ２+及肾上腺素(Ａdr），乙酰胆碱（ACh)等对离体心脏活动的影响。 二、【原理】 将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响,可以通过改变灌流液的某些成分,观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性,都与钠、钾及钙等离子有关.血钾浓度过高时（高于7。9mmol/Ｌ）,心脏兴奋性、自律性、传导性及收缩性都下降,表现为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒张期。血钙浓度升高时，心脏收缩力增强,过高可使心室停搏于收缩期。血钙浓度降低,心肌收缩力减弱.血中钠离子浓度的轻微变化，对心肌影响不明显,只有发生明显变化时，才会影响心肌的生理特性。肾上腺素可使心率加快、传导加快及心肌收缩力增强，乙酰胆碱则与肾上腺素的作用相反。 三、【实验仪器】 青蛙、常用手术器械、蛙板(或蜡盘）、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿（或小烧杯）、纱布、棉线、橡皮泥、任氏液。蛙心套管(斯氏套管或八木氏套管)、套管夹、0．６5％NaCl、5％ＮaCＩ、2％CaCl2、1%K Ｃｌ、1：5 ０00肾上腺素、1：１0 00０乙酰肌碱、３00U/mL肝素。 四、【方法与步骤】 １、斯氏蛙心插管法 (1）一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中,按 前面的方法暴露心脏。仔细识别心脏周围的大血 管(见右图)。在左主动脉下方穿一线，于动脉圆 锥处结扎(动物个体小时,结扎位置可靠上些）。 再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备 用。左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪 在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜 口。选择大小适宜的蛙心套管,然后将盛有少量 (套管内2～3 cm高度)任氏液（内加入一滴肝素 溶液）的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥（见右图).当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进,经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。此时可见套管中血液冲人套管,并使液面随心脏搏动而亡下移动,表明操作成功(否则需退回并重新插入).用滴管吸去套管中的血液,更换新鲜任氏液。稳定住套管后,轻轻提起备用线,将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧（不得漏液），再将结线固定在套管的小玻璃钩上,然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，看清静脉窦的位置，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系,使心脏离体(切勿损伤静脉窦）。用任氏液反复冲洗心室内余血,
实验7 离体蛙心灌注
实验6 离体蛙心灌注 【目的】 学习离体蛙心灌流的方法；观察内环境理化因素的相对恒定对维持心脏正常节律性活动的重要作用；了解肾上腺素、乙酰胆碱等激素、神经递质对心脏活动的调节意义。 【原理】 动物的离体心脏，用理化特性类似于其血浆的代体液灌流时，在一定的时间内，仍然保持有节律的舒张活动。改变灌流液的理化特性，这种节律的舒缩活动也随之发生改变，说明内环境理化因素的相对恒定是维持心脏正常节律活动的必要条件。 【器材与药品】 二道生理记录仪、肌张力换能器、蛙心陶罐、蛙心夹、常用蛙手术器械、铁架台、双凹夹、滴管、小烧杯、氯化钠溶液（1%NaCl）、氯化钙溶液（2%Ca Cl）、氯化钾溶液（1%KCl）、肾上腺素（1/10000Ad）、乙酰胆碱（1/100000Ach）、任氏液（Ri/lger’s solution新鲜配制）等。 【步骤】 （1）取一只蟾蜍或蛙，用探针破坏其脑脊髓后仰卧固定于蛙板上，剪开胸前区皮肤，剪去胸骨，暴露心脏。用眼科镊提起心包膜，再用眼科剪在心脏收缩时将其剪破，使心脏完全暴露出来。 （2）识别心脏的各个部分，包括心房、心室、静脉窦等，并观察心跳。 （3）插蛙心插管，制备离体蛙心。先在左右主动脉下方穿一线，并打一松结留作固定插管用。再在左主动脉下穿一线结扎。用手提起结扎线，用眼科剪在左侧主动脉距分叉3mm处向心脏剪一斜口，右手将盛有少量任氏液的蛙心插管由此口插入，先进入动脉圆锥，然后在心室收缩时，向前略向左推动蛙心插管，使之经主动脉瓣插入心室腔内（注意：为了使蛙心插管顺利插入心室，应使心室与动脉圆锥成一条直线）。进入心室的标志是随着心室搏动，均有血液喷入插管，插管的液面随着心搏而升降。结扎插管并将结扎线固定于插管侧面的小钩上，以防止标本滑脱。注意在蛙心插管插入心室后，用吸管及时吸出管内的血液，更换新鲜任氏液。
生理学实验报告-蛙心灌流
生理学实验报告-蛙心灌流-标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII
实验名称： 蛙类离体心脏灌流 课程名称：生理学实验 指导教师：龙天澄张碧鱼陈笑霞 实验人：叶永锋 08344031 学院：海洋学院 实验时间： 2009年12月09日
一、【目的要求】 1、学习斯氏离体蛙心灌流法。 2、了解心肌的生理特性。 3、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh)等对离体心脏活动的影响。 二、【原理】 将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。血钾浓度过高时（高于7.9mmol/L），心脏兴奋性、自律性、传导性及收缩性都下降，表现为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒张期。血钙浓度升高时，心脏收缩力增强，过高可使心室停搏于收缩期。血钙浓度降低，心肌收缩力减弱。血中钠离子浓度的轻微变化，对心肌影响不明显，只有发生明显变化时，才会影响心肌的生理特性。肾上腺素可使心率加快、传导加快及心肌收缩力增强，乙酰胆碱则与肾上腺素的作用相反。 三、【实验仪器】 青蛙、常用手术器械、蛙板(或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、纱布、