石蜡切片和HE染色

石蜡切片&HE染色

组织石蜡切片（常规）

1、取材：8*6*2mm

2、固定：PFA固定过夜（12-24h）

3、梯度脱水：50%酒精1h,75%酒精1h(可长期保存)，85%酒精1h，95%酒精1h，100%

酒精30min两次。

4、透明：100%酒精+二甲苯（1：1）30-45min，二甲苯ⅰ30min，二甲苯ⅱ30min,观察到透

明为止。

5、浸蜡:二甲苯+石蜡（1：1）1h，石蜡ⅰ1h，石蜡ⅱ1h(过夜)。

6、包埋：将组织取出并放入盒内调整好位置，将组织完全平放于盒中，用针头将组织上浸

蜡时残留的蜡剔除，使它可以完全被包埋，最后将蜡块于室温慢慢冷却后放入4℃冰箱中保存备用。

7、切片：用刀片将包有组织的蜡块进行修切，切成5-4μm厚的连续薄片，仔细观察薄片中

央的组织，取较为完整的组织薄片。

8、展片与烤片：将蜡片黏贴在载玻片上，放于展片机中42℃展片1-2分钟。最终后放入

60℃烤片机中烤片1-2h.

9、脱蜡与复水：将切片依次经过二甲苯，两次，各20min。无水酒精（5min）95%酒

精（5min）80%酒精（3min）70%酒精（3min）蒸馏水（5min）。

HE染色

1、组织切片脱蜡至蒸馏水

2、苏木素染色5min,自来水冲洗

3、0.5%盐酸乙醇（0.5ml HCl + 100ml 70%乙醇）分化30s（提插数下）

4、自来水浸泡15min或温水（约50℃）5min

5、置伊红液2min

6、常规脱水，透明，封片：95％乙醇（I）1min→95％乙醇（Ⅱ）5min→100％乙醇（I）5min→

100％乙醇（Ⅱ）5min→二甲苯乙醇（1：1）5min→二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min→二甲苯（Ⅲ）5min→中性树脂封固

HE染色注意事项：

1. 染色时调节pH值很重要。如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。因此，要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min，这样可以使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳，可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。

2. 切片染苏木精后，分色这一步是关键，应在显微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚（晰）而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。

3. 切片经酒精脱水后，入二甲苯时可出现白色不透明状态，此为脱水不彻底，应将切片退回无水酒精，更换酒精、二甲苯，以求彻底脱水与透明。

4. 在染色过程中不要让切片干燥，以免切片收缩、变形，影响神经元形态。

5. 切片从二甲苯取出或进入二甲苯前，切片周边均应擦干净或吸干多余水分。

6. 最后封固时，要用中性树脂，防止日后褪色，盖片要选大于组织块的面积，如漏出一部分不久将会褪色，所用树脂浓度要适当，树脂封固时不能有气泡。

苏木精—伊红染色法简称HE染色法，它是最常用的普通染色方法。苏木精（hematoxylin）是阳离子染料，将细胞核内的嗜碱性物质染成蓝紫色。伊红（eosin）是阴离子染料，将细胞质和胶原纤维等染成粉红色。