分子生物学常用试剂配制
分子生物学常用试剂的配制
分子生物学常用试剂的配制
1．LB(Luria-Bertani)培养液、平板的配制
配制每升LB培养液，应在950ml去离子水中加入：
细菌培养用酵母提取物（bacto-yeastextract）5g
细菌培养用胰化蛋白胨（bacto-tryptone）10g
NaCl10g
摇动容器直至溶质完全溶解，用5mol/LNaOH(约0.2ml)调节pH值至7.0，加入去离子水至总体积为1L，在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min。
LB琼脂平板的配制：
先按上述配方配制液体培养基，临高压灭菌前加入琼脂糖15g/L，同法高压蒸汽灭菌20min。从高压灭菌器取出培养基时应轻轻旋动以使熔解的琼脂糖能均匀分布于整个培养基溶液中，应使培养基降温至50℃时，加入抗生素等不耐热的物质。为避免产生气泡，混匀培养基时应采取旋动的方式，然后可直接从烧瓶中倾出培养基铺制平板。90mm直径的培养皿约需30－50ml培养基，培养基完全凝结后，应倒置平皿并贮存于4℃备用。
2．琼脂糖凝胶的配制
根据所需凝胶的浓度秤取琼脂糖，加入相应电泳缓冲液中，用微波炉加热煮沸至琼脂糖完全溶解，加入适量EB混匀，适当冷却后倾入凝胶铸槽中，插入梳子，凝胶厚度不超过梳孔，如有气泡产生则用玻
璃棒驱除，不能过早拔除梳子，应待凝胶完全凝结后才能拔除梳子。3．P1、P2、P3的配制P1的配制：在800ml去离子水中溶入Tris碱6.06g，Na2EDTA·2H2O3.72g，用HCl调整pH至8.0，用去离子水调整容积至1升，每升P1内加入RNaseA100mg。
P2的配制：在950ml去离子水中溶入NaOH8.0g，20％SDS50ml，调整容积至1升。
P3的配制：在500ml去离子水中溶入醋酸钾294.5g，用冰醋酸调整pH值至5.5，用去离子水调整容积至1升。
4．常用缓冲液：
TE
pH7.4
10mmol/LTris·Cl(pH7.4)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
pH7.6
10mmol/LTris·Cl(pH7.6)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
pH8.0
10mmol/LTris·Cl(pH8.0)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
STE(亦称TEN)
0.1mmol/L NaCl
10mmol/LTris·Cl(pH8.0)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
STE液（另一种配方）
Tris-HCI10mM PH8.0
NaCl10mM
EDTA10mM PH8.0
STET
0.1mmol/L NaCl
10mmol/LTris·Cl(pH8.0)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
5%Triton X-100
TNT
10mmol/LTris·Cl(pH8.0)
150mmol/L NaCl
0.05%Tween20
电泳缓冲液
Tris-乙酸（TAE）：50×浓贮存液（每升）：242g Tris碱57.1ml冰乙酸
100ml0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用时再稀释50倍。
Tris-磷酸（TPE）：10×浓贮存液（每升）：108g Tris碱15.5ml85％磷酸（1.679g/ml）
40ml0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用时再稀释10倍。
Tris-硼酸（TBE）：5×浓贮存液（每升）：54g Tris碱
27.5g硼酸20ml0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用时再稀释10倍。
碱性缓冲液：1×使用液（每升）：5ml10mol/L NaOH
2ml0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
Tris-甘氨酸：5×浓贮存液（每升）：15.1g Tris碱
94g甘氨酸（电泳级）（pH8.3）
50ml10%SDS（电泳级）
2×SDS凝胶加样缓冲液
100mmol/L Tris·HCl(pH6.8)
200mmol/L二硫苏糖醇（DTT）
4%SDS（电泳级）
0.2％溴酚蓝
20％甘油
30％丙烯酰胺：
将29g丙烯酰胺和1gN,N’－亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中，加热至37℃溶解之，补加
水至终体积为100ml。用Nalgene滤器(0.45孔径)过滤除菌查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中
保存于室温。
10mol/L乙酸铵：
把770g乙酸铵溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。
1mol/LCaCl2：
在200ml纯水中（Milli-Q水或相当级别的水）溶解54gCaCl2·6H2O，用0.22滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于－20℃。
2.5mol/LCaCl2：
在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl2·6H2O，用0.22滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于－20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：
用20ml0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09gDTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于－20℃。
0.5mol/LEDTA(pH8.0)：
在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na·H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0，然后定容至1升，分装后高压灭菌备用。
溴化乙锭（10mg/ml）：
在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。
1mol/LMgCl2：
在800ml水中溶解203.3gMgCl2·6H2O，用水定容至1升，分装成小份并高压灭菌备用。
酚：氯仿：
把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/LTris·Cl(pH7.6)抽提几次以平衡
这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/LTris·Cl(pH7.6)液层，保存于4℃。
磷酸缓冲盐溶液（PBS）：
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4，用HCl调节溶液的pH值至7.4，加水定容至1升，高压蒸汽灭菌20min。保存于室温。
乙酸钾溶液（用于碱裂解）：
在60ml5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。
3mol/L乙酸钠(pH5.2和7.0)：
在800ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH至7.0，加水定容至1升，分装后高压灭菌。
1mol/LTris：
在800ml水中溶解121.1gTris碱，加入浓HCl调节pH至所需值。pH HCl
7.470ml
7.660ml
8.042ml
应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1升，分装后高压灭菌。
Tris缓冲盐溶液（TBS）：
在800ml蒸馏水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris碱，加入0.015酚
红并用HCl调pH值至7.4，用蒸馏水定容至1升，分装后在15lbf/in2(1.34×105Pa)高压下蒸汽灭菌20分鈡，于室温保存。
5mmol/LNH4Ac溶液：
秤取乙酸铵192.7g，加重蒸水250ml混匀，加重蒸水定容至500ml，1.1kg/cm2灭菌20min。
10mg/mlBSA（小牛血清白蛋白）溶液：
秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml灭菌重蒸水中。置4℃冰箱贮存备用。
10%十二烷基硫酸钠（SDS）：
在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加入水定容至1L，分装备用。
提取DNA的溶液配制
蛋白酶K（20mg/ml）：20mg溶于1ml灭菌双蒸水。
1M Tris.cl(PH8.0):121.4gTris碱溶于800ml灭菌双蒸水中,用浓HCL调节PH值至8.0,定容至1L,高压灭菌。(1L)
0.5M EDTA(PH8.0):186.1gEDTA溶于800ml灭菌双蒸水中,用NaOH 调节PH值至8.0,定容至1L,高压灭菌。(1L)
5M Nacl:58.4g Nacl溶于150ml灭菌双蒸水中,加水定容至200ml,高压灭菌。(200ml)
10%SDS:加100g SDS于900ml灭菌双蒸水中,68℃助溶，用浓HCL 调节PH值至7.2,定容至1L。(500ml)
DNA提取液：50m M Tris.cl(PH8.0)，100m M EDTA(PH8.0)，100m M
Nacl，1%SDS
3M NaAc(PH5.2):NaAc.3H2O408.1g溶于800ml灭菌双蒸水中,用冰乙酸调节PH值至5.2,定容至1L,高压灭菌。(NO)
TE(PH8.0):10m M Tris.cl(PH8.0)，1m M EDTA(PH8.0)，高压灭菌。(1L)
3M醋酸钠：称40.8g的NaoAc.3H2O加40ml去离子水溶解，用冰醋酸调节pH至5.2，最后定容至100ml。
实验室常用溶液及试剂配制(重新排版)
实验室常用溶液及试剂配制 一、实验室常用溶液、试剂的配制-------------------------------------------------------1 表一普通酸碱溶液的配制 表二常用酸碱指示剂配制 表三混合酸碱指示剂配制 表四容量分析基准物质的干燥 表五缓冲溶液的配制 1、氯化钾-盐酸缓冲溶液 2、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 3、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 4、乙酸-乙酸钠缓冲溶液 5、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲溶液 6、硼砂-氢氧化钠缓冲溶液 7、氨水-氯化铵缓冲溶液 8、常用缓冲溶液的配制 二、实验室常用标准溶液的配制及其标定-----------------------------------------------4 1、硝酸银（C AgNO3=0.1mol/L）标准溶液的配制 2、碘（C I2=0.1mol/L）标准溶液的配制 3、硫代硫酸钠（C Na2S2O3=0.1mol/L）标准溶液的配制 4、高氯酸（C HClO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 5、盐酸（C HCl=0.1mol/L）标准溶液的配制 6、乙二胺四乙酸二钠（C EDTA =0.1mol/L）标准溶液的配制 7、高锰酸钾（C K2MnO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 8、氢氧化钠（C NaOH=1mol/L）标准溶液的配制 三、常见物质的实验室试验方法 ----------------------------------------------------------6 1、柠檬酸（C6H8O7·H2O） 2、钙含量测定（磷酸氢钙CaHPO4、磷酸二氢钙Ca（H2PO4）2·H2O、钙粉等） 3、氟（Fˉ）含量的测定 4、磷（P）的测定 5、硫酸铜（CuSO4·5H2O） 6、硫酸锌（ZnSO4·H2O） 7、硫酸亚铁（FeSO4·H2O） 8、砷 9、硫酸镁（MgSO4） 四、维生素检测--------------------------------------------------------------------------------8 1、甜菜碱盐酸盐 2、氯化胆碱
常用试剂的配制
1、2，4－二硝基苯肼溶液 I．在15mL浓硫酸中，溶解3克2，4－二硝基苯肼。另在70mL95％乙醇里加20mL 水，然后把硫酸苯肼倒入稀乙醇溶液中，搅动混合均匀即成橙红色溶液（若有沉淀应过滤）。 Ⅱ．将1.2克2，4一二硝基苯肼溶于50mL30％高氯酸中，配好后储于棕色瓶中，不易变质。 I法配制的试剂，2，4－二硝基苯肼浓度较大，反应时沉淀多便于观察。Ⅱ法配制的试剂由于高氯酸盐在水中溶解度很大，因此便于检验水中醛且较稳定，长期贮存不易变质。2、卢卡斯（Lucas）试剂 将34克无水氯化锌在蒸发皿中强热熔融，稍冷后放在干燥器中冷至室温。取出捣碎，溶于23mL浓盐酸中（比重1.187）。配制时须加以搅动，并把容器放在冰水浴中冷却，以防氯化氢逸出。此试剂—般是临用时配制。 3、托伦（Tollens）试剂 I．取0.5mL10％硝酸银溶液于试管里，滴加氨水，开始出现黑色沉淀，再继续滴加氨水，边滴边摇动试管，滴到沉淀刚好溶解为止，得澄清的硝酸银氨水溶液，即托伦试剂。 Ⅱ．取一支干净试管．加入1mL5％硝酸银，滴加5％氢氧化钠2滴，产生沉淀，然后滴加5％氨水，边摇边滴加，直到沉淀消失为止，此为托伦试剂。 无论I法或Ⅱ法，氨的量不宜多，否则合影响试剂的灵敏度。I法配制的Tollens试剂较Ⅱ法的碱性弱，在进行糖类实验时，用I法配制的试剂较好。 4、谢里瓦诺夫（Seliwanoff）试剂 将0.05g间苯二酚溶于50mL浓盐酸中，再用蒸馏水稀释至100mL。 5、希夫（Schiff）试剂 在100mL热水中溶解0.2g品红盐酸盐，放置冷却后，加入2g亚硫酸氢钠和2mL浓盐酸，再用蒸馏水稀释至200mL。 或先配制l0mL二氧化硫的饱和水溶液，冷却后加入0.2g品红盐酸盐，溶解后放置数小时使溶液变成无色或淡黄色，用蒸馏水稀释至200mL。 此外，也可将0.5g品红盐酸盐溶于l00mL热水中，冷却后用二氧化硫气体饱和至粉红色消失，加入0.5g活性炭，振荡过滤，再用蒸馏水稀释至500mL。 本试剂所用的品红是假洋红（Para-rosaniline或Para-Fuchsin），此物与洋红（Rosaniline或Fuchsin）不同。希夫试剂应密封贮存在暗冷处，倘若受热或见光，或露置空气中过久，试剂中的二氧化硫易失，结果又显桃红包。遇此情况，应再通入二氧化硫，使颜色消失后使用。但应指出，试剂中过量的二氧化硫愈少，反应就愈灵敏。 6、0.1％茚三酮溶液 将0.1g茚三酮溶于124.9mL95％乙醇中，用时新配。 7、饱和亚硫酸氢钠 先配制40％亚硫酸氢钠水溶液，然后在每100mL的40％亚硫酸氢钠水溶溶液中，加不含醛的无水乙醇25mL，溶液呈透明清亮状。 由于亚硫酸氢钠久置后易失去二氧化硫而变质，所以上述溶液也可按下法配制：将研细的碳酸钠晶体（Na2CO3?10H2O）与水混合，水的用量使粉末上只覆盖一薄层水为宜，然后在混合物中通入二氧化硫气体，至碳酸钠近乎完全溶解，或将二氧化硫通入1份碳酸钠与3份水的混合物中，至碳酸钠全部溶解力止，配制好后密封放置，但不可放置太久，最好是用时新配。 8、饱和溴水 溶解15克溴化钾于100mL水中，加入10g溴，振荡即成。 9．莫利许（Molish）试剂
常用实验试剂配制
1DEPC水(1‰) 1000ml 水 1ml DEPC 根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。 20.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris 1000ml DEPC水 用HCL调ph至7.5，高压备用。 3 4%PFA的配制(ph 7.0)40g PFA 1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压) 将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。 30.2% 甘油/0.1M tris 20ml 甘油 980ml 0.1Mtris 4 20XSSC Nacl 175.3g （ph 7.0）柠檬酸钠88.2g DEPC水1000ml 分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用 5 HEPES 溶液HEPES 23.8g (ph6.8-8.0)DEPC H2O 100ml 6 50X Denhaldt′s 液 聚蔗糖（Ficoll 400）0.2g 聚乙烯吡咯烷酮(polyvinypyrrolidone) 0.2g 牛血清蛋白（BSA）0.2g DEPC 水20ml 7 预杂交buffer Deinoized formanmid 5ml 20X SSC 1.5ml 1M HEPES 0.5ml 50X Denhanldt′s液1ml 龟精DNA 0.6ml(4ug/ul) DEPC水 1.4ml 龟精DNA 要先95℃10-15min加热变性，随即冰浴。杂交buffer分装后-20℃保存。 8Washing buffer (ph7.5) maleic acid 5.8g NACL 4.4g Tween（吐温） 1.5ml 定容至500ml溶质浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 0.3% Tween 9Maleic acid buffer (ph7.5) Maleic acid 5.8g Nacl 4.4g 定容至500ml 溶质的浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 10Detection buffer
常用试剂的配制.
常用试剂的配制 1．无Ca2+、Mg2+Hanks液 NaCl 4.5g KCl 0.2g NaHCO 3 0.175g Na 2HPO 4 ·12H 2 O 0.076g KH 2PO 4 0.03g 葡萄糖 0.5g 0.4%酚红 2.5ml 将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中, 最后补加双蒸水至500ml, 以5.6%NaHCO 3调整 pH 值至7.4，4℃冰箱保存备用。 2．甲基红试剂 （1）成份 甲基红 0.1g 蒸馏水 200ml 95％乙醇 300ml （2）用途：测定甲基红反应。 3．Hanks液（原液） 原液甲： NaCl 160g KCl 8g MgSO 4·7H 2 O 2g MgCl 2·6H 2 O 2g 上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。 CaCl 2 2.8g溶于100ml双蒸水 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。 原液乙： Na 2NPO 4 ·12H 2 O 3.04g KH 2PO 4 1.2g 葡萄糖 20g 加入800ml双蒸水，溶解。 0.4%酚红溶液100ml 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。 使用时甲,乙原液按下列比例配成Hanks 液使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，8磅20min灭菌，放4℃冰箱保存，使用前用NaHCO 3 调整PH值。 4．0.4%酚红溶液 称取0.4g酚红置研钵中研碎，逐渐加入0.lmol/LNaOH并不断研磨，直到所有的颗粒
几乎完全解，加入0.lmol/LNaOHl0ml，然后倒入容量瓶中，并加蒸馏水至l00ml,棕色瓶保存备用。 5．pH7.2 Tris-NH 4 CI溶液(红细胞崩解液） Tris (三羟甲基氨基甲烷) 1.03g NH 4 Cl（氯化氨) 3.735g 加双蒸水至500ml，用浓HCl调pH=7.2，10磅15min灭菌后放4℃保存。 6．0.05moI/L pH8.6 巴比妥缓冲液 巴比妥 1.84g 加蒸馏水 200ml 加热溶解 巴比妥纳 10.3g 叠氮纳 0.2g 加蒸馏水溶解 , 并补加到 1000ml 。 7．磷酸盐缓冲液(PB) A 液：为 0.2mol/L 磷酸二氢钠水溶液 ,NaH 2PO 4 ·H 2 O 27.6g, 溶于蒸馏水中, 最 后补加蒸馏水至 1000ml 。 B 液：为 0.2mol/L 磷酸氢二钠水溶液 ,Na 2HPO 4 .7H 2 O 3.6g（或 Na 2 HPO 4 ·12H 2 O 71.6g, 或Na 2HPO 4 · 2H 2 O 35.6g ）, 加蒸馏水溶解，最后加水至 1000ml。若再加 蒸馏水至200ml则成为0.1mol/LPB。 8．0.1mol/LPH8.4 硼酸缓冲液（BBS） 硼酸钠（Na 2B 4 O 7 .10H 2 O） 0.46g 硼酸（H 2BO 3 ） 0.51g 加蒸馏水至100ml 溶解。9．PH7.4 0.01mol/L 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法一： 0.2mol/L Na 2HPO 4 （ Na 2 HPO 4 ·12H 2 O 71.6g加蒸馏水至1000ml） 0.2mol/L NaH 2PO 4 （NaH 2 PO 4 ·2H 2 O 35.6g加蒸馏水至1000ml） 取0.2mol/L Na 2HPO 4 81.0ml 加0.2mol/L NaH 2 PO 4 19ml,再加1900mlH 2 O和 17gNaCl即为PH7.4 0.01mol/L PBS。 PH7.4 0.01mol/L PBS再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。 配制方法二： 甲液（0.1mol/LKH 2PO 4 溶液）：KH 2 PO 4 13.608g，加蒸馏水至1000ml。 乙液（0.1mol/L Na 2HPO 4 溶液）：Na 2 HPO 4 35.814g，加蒸馏水至1000ml。 取甲液19ml，乙液81ml NaCl8.5g、Tween-20 0.5ml混合后加蒸馏水至1000ml即可。
日常溶液的配制
一.标准溶液配置 -------------------------------------------------------------------------------- 1. 0.0588mol/L高锰酸钾标准溶液 2. 0.1NＮa2S2O3·5H2O标准溶液的制备,24.82g/L 3. 6N醋酸(HAC) 4. １０％碘化钾溶液 二. 指示剂---------- ------------------------------------------------------------------ -------- 3 1. 甲基橙 2. 甲基红 3. 酚酞 4. １０％铬酸钾指示液 5. ０.５％淀粉指示液 6. 碘化钾淀粉试纸 7. 还原黄G试纸的制备 三、试剂的测定 ------------------------------------------------------------------------------- 4 1. 次氯酸钠质量浓度的测定 2. 漂白粉中有效氯的测定 3. 冰醋酸（HAC） 4. 硫化碱（Na2S） 5. 双氧水质量浓度及分解率的测定 6. 烧碱浓度测定 7. 双氧水浓度测定 四．测试方法--------------------------------------------------------------------------------- 6
1. 比移值测定法（滤纸／染液上升法） 2. 缩水率测定 3. pH值的测定 4. 生物整理用纤维素酶活力的测定方法 ４.１．滤纸崩溃法 ４.２．CMC粘度法 一. 标准溶液配置 1．0.0588mol/L高锰酸钾标准溶液 称取9.5g纯高锰酸钾(KMnO4)溶于1L蒸馏水中,再煮沸15min左右,待冷却后盖紧,避免与尘埃及有机物接触,同时不可与强光接触.静置数天后,用石棉过滤储存于棕色试剂瓶中,并放置暗处,然后用草酸钠标定. ２．０.１N Na2S2O3·5H2O标准溶液的制备24.82g/L 制备：称取２５g化学纯粹的硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O），溶解于１Ｌ新煮沸（煮沸以驱除水中溶解的二氧化碳和防止微生物的作用，如有二氧化碳的存在，并与水反应生成碳酸，会使硫代硫酸钠起分解作用．）而冷却的，加有0.1g无水碳酸钠的蒸馏水中，搅动使溶解，移入暗色大瓶中保存，瓶口用塞子盖紧，待校准． 制备或保存时应注意下列几点：日光能促进Ｎa2S2O3 溶液分解作用，所以Ｎa2S2O3溶液应该保存在清洁的有色瓶中,尽可能避免和空气接触．制成的Ｎa2S2O3溶液，它的浓度随放置时间稍有改变，在最初１０－１４天中，浓度常常有些增加，过此以后浓度就会慢慢减小．若在配置溶液时加入Na2CO3，使其在溶液中的浓度约为0.01－0.02%，就可以防止溶液的分解．
流式细胞所用试剂配置及荧光特性
、流式细胞术常用试剂 1、10％NaN 3：将 10gNaN3 溶解于 100ml 蒸馏水中，室温保存；活体实验或在辣根过氧化 酶反应中可不使用 NaN 3。 2、 3％ BSA/PBS ： 100ml PBS 中加入 3g BSA ，使之溶解，再加入 0.2ml 10％的 NaN 3。 3、500mmol/L EDTA ：将 186g EDTA?Na 2?2H 2O 溶解于 400ml 蒸馏水中，用 NaOH 将 PH 调 至 8.0 ，补充蒸馏水至 500ml ，分装，高压灭菌，室温保存。 4g 多聚甲醛溶于100ml PBS ，加入数滴 NaOH ，在通 PH 至 7.4，使用前新鲜配制。 5、消化液： 0.25％胰蛋白酶（用培养液或 PBS 配制）或 0.25％胰蛋白酶与 0.02％ EDTA 的 混合液。 6、红细胞裂解液： NH 4CI 4.16g , KHCO 3 0.5g , EDTA?2Na 0.02g ，溶于 100ml 水中，调 PH 至 7.2，补充蒸馏水至 500ml ， 4 度储存，使用时需恢复至室温。 7、流式细胞抗体稀释剂： 0.1mmol/L PBS 液（PH 7.4）+ 1 % BSA + 0.1% Na 2N 3。 8、常用细胞破膜 剂： PBS 液（PH 7.4） + 1% FBS （或 BSA ） + 0.1% NaN 3+ 0.1% saponin （Sigma 的效果不错） 。 9、流式细胞染色洗涤液：含 2%的 BSA 、 0.1%NaN3 的 PBS （PH 7.4）。 10、PI 染液（保存液，10务用于细胞周期和凋亡检测）：10mg PI 溶于10ml PBS ,加入2mg 无DNA 酶的RNA 酶，4度保存备用。应用时，10倍稀释，每管加 0.3ml ?0.5ml PI 染液。 11、Hanks 液的配制（BSS ，主要用于培养液、稀释剂和细胞清洗液，不能单独作为细胞、 组织培养液） 原液 A NaCl 160g MgSO 4?7H 2O 2g KCl 8g MgCl?6H 2O 2g CaCl 2 2.8g 溶于 1000ml 双蒸水 原液 B 1） N a 2HPO 4?12H 2O 3.04g KH 2PO 4 1.2g 葡萄糖 20.0g 溶于 800ml 双蒸水 2） 0.4%酚红溶液：取酚红 0.4g 置玻璃研钵中，逐滴加入 0.1N NaOH 并研磨，直至完全溶 解，约加入 0.1N NaOH 10ml 。将溶解的酚红吸入 100ml 量瓶中，用双蒸水洗下研钵中残留 的酚红4、4％多聚甲醛：在磁力搅拌下，将 风柜中于 60 度加热，使其溶解，调整
实验常用试剂、缓冲液的配制方法
实验常用试剂、缓冲液的配制方法 1、1M Tris-HCl□组份浓度1 M Tris-HCl （pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L □配置方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 pH值浓HCl 7.4 约70mL 7.6 约60mL 8.0 约42mL 4. 将溶解定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl （pH8.8）□配制量1L □配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）□配制量1L □配置方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。 1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL 500 mM EDTA（pH8.0）20mL 2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。 4、3 M 醋酸钠□组份浓度3 M 醋酸钠 （pH5.2）□配制量100mL □配置方法1. 称取40.8gNaOAc?3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。 2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。 3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 5、PBS Buffer□组份浓度137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 □配制量1L □配置方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。 NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6、10 M醋酸铵□组份浓度10 M醋酸铵 □配制量100mL □配置方法1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至100mL。 3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.密封瓶口于室温保存。 注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。 7、Tris- HCl平衡苯酚□配置方法 1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。 2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。 3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： ①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。 ②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。 ③加入等体积的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 ④重复操作步骤③。 ⑤加入等体积的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 ⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。 ⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。 ⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。 8、苯酚/氯仿/异戊醇□配置方法 1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。 2. 配置方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
流式常用试剂配制
一、流式细胞术常用试剂 1、10％NaN3：将10gNaN3溶解于100ml蒸馏水中，室温保存；活体实验或在辣根过氧化酶反应中可不使用NaN3。 2、3％BSA/PBS：100ml PBS中加入3g BSA，使之溶解，再加入0.2ml 10％的NaN3。 3、500mmol/L EDTA：将186g EDTA?Na2?2H2O溶解于400ml蒸馏水中，用NaOH将PH调至8.0，补充蒸馏水至500ml，分装，高压灭菌，室温保存。 4、4％多聚甲醛：在磁力搅拌下，将4g多聚甲醛溶于100ml PBS，加入数滴NaOH，在通风柜中于60度加热，使其溶解，调整PH至7.4，使用前新鲜配制。 5、消化液：0.25％胰蛋白酶（用培养液或PBS配制）或0.25％胰蛋白酶与0.02％EDTA的混合液。 6、红细胞裂解液：NH4Cl 4.16g，KHCO3 0.5g，EDTA?2Na 0.02g，溶于100ml水中，调PH 至7.2，补充蒸馏水至500ml，4度储存，使用时需恢复至室温。 7、流式细胞抗体稀释剂：0.1mmol/L PBS液（PH 7.4）＋1％BSA＋0.1％Na2N3。 8、常用细胞破膜剂：PBS液（PH 7.4）＋1％FBS（或BSA）＋0.1％NaN3＋0.1％saponin（Sigma 的效果不错）。 9、流式细胞染色洗涤液：含2％的BSA、0.1％NaN3的PBS（PH 7.4）。 10、PI染液（保存液，10×，用于细胞周期和凋亡检测）：10mg PI溶于10ml PBS，加入2mg 无DNA酶的RNA酶，4度保存备用。应用时，10倍稀释，每管加0.3ml～0.5ml PI染液。 11、Hanks液的配制（BSS，主要用于培养液、稀释剂和细胞清洗液，不能单独作为细胞、组织培养液） 原液A NaCl 160g MgSO4?7H2O 2g KCl 8g MgCl?6H2O 2g CaCl2 2.8g 溶于1000ml双蒸水 原液B 1）Na2HPO4?12H2O 3.04g KH2PO4 1.2g 葡萄糖20.0g 溶于800ml双蒸水 2）0.4％酚红溶液：取酚红0.4g置玻璃研钵中，逐滴加入0.1N NaOH并研磨，直至完全溶
关于生物化学常用试剂配制
常规试剂配制和测定方法 一、溶液的配制 1. Mandels营养盐溶液（1000 mL） 名称重量（g） 硫酸铵（(NH4)2SO4）14 磷酸二氢钾（KH2PO4）20 尿素（H2NCONH2） 3 硫酸镁（MgSO4·7H2O） 3 氯化钙（CaCl2·2H2O） 4 注：用煮沸10 min后的蒸馏水配制。 2. Mandels微量元素溶液（1000 mL） 名称重量（g） 氯化钴（CoCl2·6H2O） 硫酸锌（ZnSO4·7H2O） 硫酸锰（MnSO4·H2O） 硫酸亚铁（FeSO4·7H2O） 注：用煮沸10 min后的蒸馏水配制。 3. DNS试剂的配制（1000 mL） （1）取：3,5-二硝基水杨酸（C7H4N2O7）7.5 g 氢氧化钠（NaOH ）14.0 g 充分溶解于1000 mL 水中（水预先煮沸10 min） （2）加入：酒石酸钾钠（C4H4O6KNa·4H2O）216.0 g 苯酚（在50 ℃水浴中融化）mL 偏重亚硫酸钠（Na2S2O5） 6.0 g
（3）充分溶解后盛于棕色瓶中，放置5天后便可使用，平时盛一小瓶(250 mL)使用，要放在冰箱中冷藏。此溶液每月配制一次。 注意：倒入瓶中时要尽量装满！！ 4. 考马斯亮蓝G-250的配制（1000 mL） 称考马斯亮蓝G-250 100 mg即0.1g溶于50mL 95%乙醇中，加入100 mL 85 %磷酸，用蒸馏水稀释至1000 mL ，滤纸过滤。最终试剂中含%（w/v）考马斯亮蓝 G-250，%（w/v）乙醇，%（w/v）磷酸。 5. 1.0 M柠檬酸缓冲溶液的配制（1000 mL） 名称分子量Mn 重量(g) 柠檬酸（C6H8O7·H2O）210 210 NaOH 40 准确称取柠檬酸210 g，溶于约750 mL煮沸（10 min）蒸馏水中，待柠檬酸充分溶解后加入氢氧化钠74.5 g，完全溶解后将上述溶液转移到1000 mL容量瓶中，冷却后将容量瓶定容到1000 mL（原始）。（检验方法：取1.0 M柠檬酸缓冲溶液稀释20倍，测定稀释液的pH值，pH值应为） 6. 标准糖溶液的配制和标准方程的测定 （1）标准糖溶液的配制 准确称取2.000 g葡萄糖/木糖（葡萄糖/木糖需105 ℃烘干3 h），蒸馏水溶解，全部转移至1 L容量瓶内，摇匀，配制成2 g/L葡萄糖/木糖溶液。 取9个100 mL容量瓶、1支20 mL刻度吸管，分别吸取2 g/L葡萄糖/木糖溶液10 mL、20 mL、30 mL、40 mL、50 mL、60 mL、70 mL、80 mL、90 mL依次加入容量瓶，蒸馏水定容，摇匀。即为0.2 g/L、0.4 g/L、0.6 g/L、0.8 g/L、1.0 g/L、1.2 g/L、1.4 g/L、1.6 g/L、1.8 g/L、2.0 g/L葡萄糖/木糖标准溶液。 取6个30 mL容量瓶、1支20 mL刻度吸管，分别吸取2 g/L葡萄糖溶液10 mL、12 mL、14 mL、16 mL、18 mL、20 mL依次加入容量瓶，每瓶再加入mL柠檬酸缓冲液，蒸馏水定容，摇匀。即为1.0 g、1.2 g、1.4 g、1.6 g、1.8 g、2.0 g酶解葡萄糖。（2）标准方程的测定： ①葡萄糖/木糖标准方程的测定
盐酸标准溶液的配制和标定
盐酸标准溶液的标定 一．仪器与试剂 仪器：全自动电光分析天平 1台 （1）称量瓶 1只 （2）试剂瓶 1000ml 1个 （3）锥形瓶 250ml 3个 （4）酸式滴定管 50ml 1支 （5）量筒 50mL 1只 试剂： （1）0.1mol/L 盐酸待标定溶液 （2）无水碳酸钠（固基准物） （3）溴甲酚绿-甲基红混合指示剂 二、步骤 0.1mol/L 盐酸标准溶液的标定 1．标定步骤 用称量瓶按递减称量法称取在270~300℃灼烧至恒重的基准无水碳酸钠0.15~0.22g(称准至0.0002g)，放入250ml 锥形瓶中，以50ml 蒸馏水溶解，加溴甲酚绿-甲基红混合指示剂10滴（或以25ml 蒸馏水溶解，加甲基橙指示剂1~2滴），用0.1mol/L 盐酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色（或由黄色变为橙色），加热煮沸2分钟，冷却后继续滴定志溶液呈暗红色（或橙色）为 终点。平行测定3次，同时做空白实验。以上平行测定3次的 算术平均值为测定结果。 2．计算 ()99 .52100001?-?=V V m C HCl 式中： m —基准无水碳酸钠的质量，g; V 1—盐酸溶液的用量，ml; V 0—空白试验中盐酸溶液的用量，ml; 52.99—1/2 Na 2CO 3摩尔质量，g/mol C HCL —盐酸标准溶液的浓度，mol/L.
氢氧化钠溶液的标定 1、试剂： （1）0.1000mol/L 氢氧化钠待标定溶液 （2）酚酞指示剂 2、仪器： （1）全自动电光分析天平 1台 （2）称量瓶 1只 （3）碱式滴定管 （50mL ） 1支 （4）锥形瓶 （250mL ） 3支 （5）烧杯 （250mL ） 2只 （6）洗瓶 1只 （7）量筒 （50mL ） 1只 3、测定步骤： 准确称取在110℃~120℃准确称取在110~120℃烘至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾0.5~0.6g(称准至0.0002g)，放入250ml 三角瓶中，加入250ml 的蒸馏水溶解，加酚酞指示剂2滴，用0.1mol/LNaOH 溶液滴定至由无色变为红色30秒不褪色为终点，平行测定3次，同时作空白试验。 4、计算：C (NaOH)=22 .204)(100001?-?V V m 式中：m —邻苯二甲酸氢钾的质量，g 1V —NaOH 溶液的用量，ml 0V —空白试验NaOH 溶液的用量，ml 204.22 —邻苯二甲酸氢钾的摩尔质量，g/mol NaOH C —NaOH 标准溶液的浓度，mol/L
实验常用试剂,缓冲液的配制方法
实验常用试剂、缓冲液的配制方法 Ampicillin（氨卡青霉素）100mg/ml □组份浓度100mg/ml Ampicillin □配制量50mL □配置方法 1.称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。 2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 Kan（卡那霉素）50mg/ml □组分浓度50mg/ml卡那霉素 □配制量50mL □配制方法 1.称取2.5g卡那霉素置于50ml塑料离心管中。 2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50mL。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷) 24 mg/ml □组份浓度24mg/L IPTG □配制量50mL □配置方法 1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。
2.加入40mL 灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 X- Gal 20mg/m □组份浓度20mg/L X-Gal □配制量50mL □配置方法 1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。 2.加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解， 定容至50mL。 3.小份分装（1mL/份）后，-20℃避光保存。 LB培养基 □组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl □配制量1L □配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone（胰化蛋白胨）10g Yeast Extract（酵母提取物）5g NaCl（氯化钠）10g 2.加入约800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 3.滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.2-7.3。
化验室化学试剂管理规定
化验室化学试剂管理规定 1.范围和目的 本规程适用于品检科所有化学试剂以及配制试剂。 制定本规程的目的是为了建立化验室化学试剂的购买、接受、储存、发放、使用、销毁使用管理规程，使化验员能正确地使用试剂，保证化验工作质量。 2.化学试剂的购买： 技术员根据库存量及化学试剂检验需要量提出购买计划，经化验室负责人审核，公司厂长批准，交供应科采购员购买。 3.化学试剂的入库 购买后由采购员直接交给仓库管理员并办理入库手续。 技术人员根据购买计划办理出库手续并通知化学试剂管理员到出库接受。 化学试剂管理员先检查包装的完好性，封口是否严密,试剂无泄漏，标签是否粘贴牢固无破损，内容清晰,贮存条件明确，瓶签已部分脱胶的，应及时用胶水粘贴。无标签的试剂不得入库。严格按采购计划单内容，逐一核对。 化学试剂保管员必须每天检查一次温湿度表并记录。超出规定范围的应及时调整。 无标签的试剂应予销毁。 4.化学试剂的领用 化验员根据检验需要量提出领用要求。 化学试剂管理员根据化验员的要求发放化学试剂，并填写化学试剂领用记录。 5.化学试剂贮存 原装化学试剂贮存环境 55 5 55℃,相对湿度以45-75%为宜。 5应有良好的通风设备。 化验室内化学试剂的贮存 5 配制好的化学试剂应存放于试剂架上。性质不稳定的配制试剂应根据不同的性质存放，如放在阴暗处、冰箱等地方。使用化学试剂的过程中应特别注意其外观的变化。 配制化学试剂一般贮存1~2个月为宜,过期不得使用,须重新配制。在使用过程中发现有沉淀的，亦不得使用。 55需要冷藏保存的化学试剂应放在冷藏箱内保存。 易潮解、易失水风化、易挥发易吸收、二氧化碳、易氧化、易吸水变质化学试剂，需密闭保存或蜡封保存,应存放试剂柜下部柜中,平时应关门上锁；。 易爆炸品、易燃品、腐蚀品应单独存放,平时应关门上锁,剧毒品用后归还专用库（柜）。某些高活性试剂应低温干燥贮放。 保持室内清洁,通风和温湿度应符合规定。 每日检查一次消防灭火器材的完好状况,保证随时可以使用。
常用试剂的配方
一.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇 至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。 3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。 1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。 1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。 25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。 1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。
生物学常用试剂配制完整版
生物学常用试剂配制 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】
常用试剂 储存注意事项：储存于阴凉、通风的地方；远离火种、热源。避免光照。室温不超过30℃，相对湿度不超过80％。包装必须密封，切勿受潮。应与易（可）燃物、还原剂、碱类、醇类、食用化学品分开存放，切忌混储，储区应备有合适的材料收容泄漏物。 操作注意事项：尽量在通风橱操作，加强通风，避免粉尘扩散。远离易燃、可燃物，避免与还原剂、碱类、醇类接触，防止包装及容器损坏。 EDTA（PH ） 组分浓度: mol/L EDTA（MW：） 配制量: 500ml 配制方法: 1．称取93g Na2EDTA·2H2O置于500ml蓝盖瓶中。 2．加入400ml的去离子水，置于磁力搅拌器上充分搅拌。 3．用NaOH调节调节pH值至（约需加入20g固体NaOH），当pH 接近时， EDTA方可完全溶解，加入去离子水定容至1L。 4．高温高压灭菌后，室温保存半年。 5M NaCl 组份浓度： 5mol/L NaCl (MW： 配制量： 1L 配制方法： 1.准确称取氯化钠，置于1L的蓝盖瓶中。 2.用去离子水溶解并稀释至1L。 3.高温高压灭菌后，常温保存。 CaCl2 组份浓度：L CaCl2 (MW： 配制量： 50ml 配制方法: 1.准确称取氯化钙 g于50ml的conical tube中。 2.用去离子水溶解并稀释至500ml，用μm滤膜过滤除菌滤膜过滤除菌到进口的conical tube。 3.贮存于4℃。 50% 甘油 组分浓度： 50%(V/V) glycerol 配制量： 100ml 配制方法: 1. 量取下列试剂，置于250ml蓝盖瓶中： 100% glycerol 50ml 2.加入50ml去离子水，充分搅拌溶解。 3.高温高压灭菌，4℃保存。 4.使用时，到超净台分装。 Amp-氨苄青霉素（钠盐） 放置：置于4°C冰箱
常用试剂及标准溶液的配制
常用试剂的配制 一、常用试剂的配制： 1、100g/L钼酸铵溶液：称取100克钼酸铵于500毫升烧杯中加水溶液、移入1升，稀释至刻度，混匀。（如溶液浑浊，应过滤）。 2、200g/L硫氰酸钾溶液：称取200克硫氰酸钾于500毫升烧杯中，溶解于水，移入1升容量瓶中，稀释至1升体积。 3、50g/L氯化钡溶液：称取50克二氯化钡于500毫升烧杯中，溶解于水，移入1升容量瓶中，稀释至1升体积。 4、100g/L酒石酸溶液：称取100克酒石酸溶于水中，移入1升容量瓶中，稀释至刻度。 5、150g/L氢氧化钾溶液：称取150克氢氧化钾溶于水中，移入1升容量瓶中，稀释至刻度。 6、20g/L二安替比林甲烷（DAM）溶液：称取出20克二安替比林甲烷于烧杯中加水约200毫升，再加1+1盐酸333毫升，搅拌溶解，继续加水稀至1升，混匀，此溶液酸度为2mol/L。保存于棕色瓶中。 7、氨性缓冲液（PH=10）： 称取67.5克氯化铵溶于200毫升水中，加入570毫升浓氨水、稀释至1升。 8、醋酸——醋酸钠缓冲液（PH=5.2~5.9）。 O）溶解于水，称取无水乙酸钠79克（或称取150克结晶醋酸钠NaAC˙3H 2 加7.7毫升乙酸、稀至1升，用间隔为0.2的PH试纸检验其PH值。 9、硫酸——草酸——硫酸亚铁铵混合液： 称取30克硫酸亚铁铵于1升烧杯中，加150毫升水，缓缓加入166毫升1+1的硫酸，搅拌使其溶解。冷却后移入1升的容量瓶中，再称30克草酸于另一烧杯中，加热水溶解，冷却后移入上述容量瓶中，稀释至刻度、混匀。 10、邻菲啰啉—盐酸羟胺—醋酸—醋酸钠缓冲混合液。 称取100克无水醋酸钠（或150克结晶醋酸钠）和5克盐酸羟胺，分别溶于水，另称0.25克邻啡啰啉溶于15毫升醋酸中，将三溶液混合，用水稀释1升、混匀。 11、酒石酸钾钠—三乙醇胺混合液：
流式常用试剂配制
流式常用试剂配制
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一、流式细胞术常用试剂? １、1０％NａN3：将１0gNaＮ３溶解于100ml蒸馏水中,室温保存；活体实验或在辣根过氧化酶反应中可不使用NaN3。 ?2、3%BSA／PBS:１00ml PBS中加入３g BＳA，使之溶解，再加入0.２mｌ10%的NaN3。? 3、5００mmol／ＬEＤＴＡ:将186g EDＴA?Na2?2H2O溶解于40０ml蒸馏水中,用NaＯＨ 4、4%多聚甲醛:在磁将PＨ调至8.０，补充蒸馏水至500ｍｌ,分装,高压灭菌,室温保存。?? 力搅拌下，将4g多聚甲醛溶于100ml PBS，加入数滴ＮａOH,在通风柜中于60度加热，使其溶解，调整PH至7.4,使用前新鲜配制。 ?5、消化液:0．２5%胰蛋白酶（用培养液或ＰBS配制)或0.25%胰蛋白酶与0.02％EDTＡ的混合液。6??、红细胞裂解液:NH4Cl4．１6g,KHＣＯ3 0.5ｇ,EDTA?2Nａ0．02g，溶于10０ml水中，调PH至7.2，补充蒸馏水至500ml，4度储存，使用时需恢复至室温。? 7、流式细胞抗体稀释剂：0.1mmol/L PBS液（ＰH 7.4)+１%BSA＋0.1％Na2N３。 ?8、常用细胞破膜剂：PBS液(PH 7.4)＋1%FBＳ（或ＢSA)+0．１％ＮａN3+0．1％sapoｎi 9、流式细胞染色洗涤液:含2%的BＳA、0.１％ＮaN3的PＢＳｎ(Siｇｍa的效果不错)。?? （PH 7.４)。 ?1０、PＩ染液(保存液，10×,用于细胞周期和凋亡检测):10mｇPI溶于10ml PBS，加入2mg 无DＮＡ酶的RＮA酶，4度保存备用。应用时，10倍稀释，每管加０.３ml~０.5mlＰI 染液。 ?1１、Hanks液的配制（ＢＳS,主要用于培养液、稀释剂和细胞清洗液,不能单独作为细胞、组织培养液)?原液A?ＮaCl 1６０g?MgSO４?７Ｈ2Ｏ2g KCｌ8ｇ?MgCl?6H2O 2g ＣaCl2 2．８ｇ?溶于１00０ml双蒸水?原液B1?)Na2ＨPO4?1２H2O 3.0４g KH2PO4 1.2ｇ?葡萄糖2０．0ｇ 溶于800ｍｌ双蒸水 2）0.4％酚红溶液:取酚红0．４g置玻璃研钵中,逐滴加入0.1ＮNaOH并研磨,直至完全溶解,约加入0.1NＮaOH 10mｌ。将溶解的酚红吸入１00ｍl量瓶中,用双蒸水洗下研钵中残留的酚红液，并入量瓶中,最后补加双蒸水至100ｍl。 将1）液和2)液混合,补加双蒸水至1000ｍｌ即为原液B。 应用液：?原液A １份 原液B1份?双蒸水18份 混合后，分装于２00ｍl小瓶中，高压灭菌。临用前用无菌的５.６%NaHCＯ3调PH至7.2～ 12、磷酸盐缓冲液的配制（ＰＢ) 7.6。?? A液(0.2mｏｌ／L NａＨ2PO4水溶液): ＮaH２PO4?Ｈ2Ｏ27.6g，溶于蒸馏水中,稀释至10０0mｌ。 B液（0.2mol/ＬNa2ＨＰO4水溶液）: Na2ＨＰＯ4?7Ｈ2O ５3.6g加蒸馏水溶解,加水至１000ｍｌ。 不同PＨ值ＰB的配制： A液ｘml（参照下表)中,加入Ｂ液ｙml，为0.2mｏｌ/L的PB。若再加蒸馏水至20０mｌ,则成0.１mｏｌ／ＬPＢ。 PＨx/ml y/ml