101221胶塞细菌内毒素挑战性试验操作规程

标准操作规程

题目：细菌内毒素挑战性试验检验操作规程

制定人：制定日期：年月日编号：BSC-39-2010

审核人：审核日期：年月日颁发部门：质管部

批准人：批准日期：年月日生效日期：年月日

分发部门：质管部、技术部、中心实验室、生产和车间

1 目的：

验证胶塞置清洗机经注射用水清洗后，细菌内毒素下降103倍。

2 检验依据：

参照国家中华人民共和国药典（2010年版二部）附录XI E有关方法测定。

3 试验仪器及试剂：

试验仪器：电冰箱、鼓风干燥箱、酒精灯、漩涡振荡器、恒温水浴锅、医用净化工作台、微量加样器及无热原吸头、试管、具塞试管、手术剪刀、封口膜、计时器。

试剂：8250000EU/ml的细菌内毒素工作标准品、2.5EU/ml的鲎试剂、鲎试剂检查用

水。

4 试验步骤:

4.1试验前准备：

4.1.1将所用的器具进行无热原处理（250℃×30min干热灭菌）。

4.1.2含高浓度细菌内毒素的胶塞的制备

1ml

8.25×106EU/ml 1.65×106EU/ml 1.65×105EU/ml

5ml 10ml

取28只白色20系列胶塞，分别在胶塞嘴部滴加0.1ml 1.65×105EU/ml的细菌内毒

素，其中取出4只胶塞作湿阳性对照品（样品标注1#），其余24只胶塞在百级层流下自

然晾干（约14h），取出4只胶塞作干阳性对照品（样品标注2#），另20只胶塞备用（胶

塞经清洗机注射用水清洗后，样品标注3#）。

4.1.3 湿阳性对照试验

将4只湿阳性对照胶塞（1#）分别放入已除热原的具塞试管里，加入10ml无热原的

检查用水，将试管分别在漩涡混合器上混匀15min，取溶液（即浓度为1.65×103EU/ml）

0.1ml稀释至10ml,即为1.65×10EU/ml（理论值），将此溶液用无热原的检查用水按下方

法稀释记为作湿阳性对照的稀释液。

1ml 1ml

1.65×10EU/ml 8.25EU/ml 4.125EU/ml

1ml 1ml

取8.25×106EU/ml的细菌内毒素工作标准品用无热原的检查用水按以下方法稀释： 1ml 0.1ml 0.1ml

8.25×106EU/ml 1.65×106EU/ml 1.65×105EU/ml 1.65×103EU/ml

5ml 10ml 10ml 10ml

1ml 1ml

1.65×10EU/ml 8.25EU/ml 4.125EU/ml

1ml 1ml

取12支2EU/ml鲎试剂在酒精灯上轻灼消毒，将安瓿上部的白色粉末弹至底部，每支加0.1ml无热原的检查用水溶解，放置20min。其中8支加入上述0.1ml用作湿阳性对照的稀释液，分别标为1#-1-1、1#-1-2，1#-2-1、1#-2-2，1#-3-1、1#-3-2,1#-4-1、1#-4-2；2支加入0.1ml无热原水，作为阴性对照；两支加入0.1ml4.125EU/ml的细菌内毒素工作标准品，作为阳性对照；全部用封口膜封口，摇匀置于37℃水浴保温1h，取出缓缓倒转180度观察。做好记录。

4.1.4 20只已清洗好的胶塞和4只干品细菌内毒素检查试验方法同4.1.3。做好记录。

5、相关文件和记录

细菌内毒素挑战性试验检验原始记录 BSD-8.2.4-64