慢病毒相关知识问答

慢病毒载体相关知识问答

Q:什么是慢病毒？

A: 慢病毒载体(Lenti vector)是用于感染细胞以实现稳定导入基因或siRNA的病毒载体系统，其感染效率可以达到100%。慢病毒和细胞结合后通过包装蛋白将含有目的基因或者干扰序列释放到细胞内。慢病毒RNA通过逆转录酶转录为DNA。DNA整合前复合体进入细胞核并整合到靶细胞的染色体DNA。由于靶基因或基因干扰序列整合到染色体上并且伴随着细胞分裂时DNA的复制一起复制，基因的导入能够获得稳定的表达。慢病毒的显著优势在于其可以整合到非分裂细胞，而其他载体（如非病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体）不具备整合到靶细胞染色体的特性，或者只能整合到分裂细胞的染色体（如常规的逆转录病毒）。目前我们使用的慢病毒载体是基于HIV-1改造而来，该载体使用最为广泛，经过科学家的多次改造在包装滴度和使用安全性等方面都非常理想。在实际的使用中我们可以用来表达目的基因或目的基因加上报告基因，近年来随着RNAi研究的深入，越来越多的科学家用慢病毒载体来表达干扰序列.

Q:慢病毒用于RNAi研究

A:目前慢病毒也被广泛地应用于表达RNAi的研究中。由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的siRNA半衰期短，体外合成siRNA对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。采用事先在体外构建能够表达siRNA的载体, 然后转移到细胞内转录siRNA的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成siRNA，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。在所构建的siRNA表达载体中，是由RNA聚合酶Ⅲ启动子来指导RNA合成的，这是因为RNA聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的RNA不会带poly A尾。当RNA聚合酶Ⅲ遇到连续4个或5个T时，它指导的转录就会停止，在转录产物3’端形成1~4个U。U6和H1 RNA启动子是两种RNA聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～21ntRNA和～50ntRNA茎环结构（stem loop）。在siRNA表达载体中，构成siRNA的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录,然后两条链互补结合形成siRNA；也可由载体直接表达小发卡状RNA(small hairpin RNA, shRNA), 载体包含位于RNA聚合酶Ⅲ启动子和4～5Ｔ转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有1~4 个U 3 ’ 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成siRNA。构建载体前通常要通过合成siRNA的方法，寻找高效的siRNA，然后从中挑选符合载体要求的序列，将其引入siRNA表达载体。

Q:如何生产病毒？

A:载体质粒和辅助质粒转染293细胞后收获病毒上清，通过超滤和超速离心进行纯化和浓缩获得高滴度和高纯度的慢病毒颗粒。

Q:病毒是否可以重新冻融？

A:病毒可以冻融，但是反复多次的冻融会降低病毒的滴度。

Q:什么是病毒的滴度？

A:病毒的滴度即每升溶液中含有的病毒数量。滴度值用于评估转导一定数量靶细胞所需要的病毒数量。

Q:转导单位（TU）的含义？

A:转导单位（TU）即能够感染并整合到细胞内的病毒载体基因组,

Q:MOI的含义？

A:MOI指用来转染单个细胞的病毒数量，即含义是感染时病毒与细胞数量的比值。如果MOI为1则感染每个细胞的病毒颗粒数为1。同一种类同一批次的病毒感染不同种类的细胞，其MOI值不尽相同，需要进行梯度实验测算；另外不同的滴度检测方法也会导致MOI很大的差异。

Q:可以获得的病毒可以达到多少滴度？

A:常规生产的病毒的滴度在2 x 10E8TU/ml之间。

Q:如何使用慢病毒感染细胞？

A:使用慢病毒感染细胞的操作流程取决于细胞种类，因此首先要了解细胞的来源和背景，我们将在发货时将通用操作流程发送客户。通常来讲首先要根据准确的MOI和需要感染的细胞量计算所需要的病毒量，然后将所需病毒也加入培养体系后4小时左右即可换成完全培养基正常培养。

Q:如何确定慢病毒感染靶细胞的感染效率？

A:慢病毒感染靶细胞的感染效率可以通过Real-time PCR检测靶细胞中的慢病毒载体拷贝数来测算。另外如果构建的慢病毒载体带有标记基因（如GFP、RFP等），则可以通过FACS检测阳性细胞的比

例来评估感染效率。

Q:慢病毒感染靶细胞后，目的基因的表达是瞬时表达还是稳定表达？

A:慢病毒感染靶细胞后，目的基因或者干扰序列被整合到细胞的染色体DNA;并且随靶细胞的增殖分化，目的基因或者干扰序列也随靶基因DNA的一起复制并遗传到子代细胞中,所以是稳定表达。

Q:通常生产一个慢病毒载体的实验周期是多久？

A:我们将在收到您的订单和实验材料20个工作日左右完成病毒的生产和检测，如果客户需要委托购买或者合成目的基因（干扰序列），会增加相应的实验周期。

Q:是否可以直接从慢病毒颗粒中提取慢病毒载体？

A:不可以。慢病毒载体用于转染包装细胞后生产病毒，包装好的病毒颗粒只含有载体中5' and 3' LTR's的RNA。

Q:使用公司提供的病毒可以感染多少细胞？

A:可以感染的细胞量取决于您需要感染的靶细胞的易感性，原代细胞或者难感染的细胞需要较高的MOI,因此需要的病毒量也比较多。我们建议您可以通过预实验确定目的细胞的MOI,即使用公司的GFP病毒设定不同的MOI（1、5、10、15等）分别感染目的细胞。

Q:如何知道靶细胞是否能够被慢病毒感染？

A:根据现有的研究表明，慢病毒感染谱很广，包括分裂和非分裂细胞。一方面可以通过查询文献得知是否可以被感染，另外也可以使用提供的GFP慢病毒载体对照颗粒进行预实验，确定细胞的易感性和MOI.

Q:在使用慢病毒时需要哪些预防措施？

A:慢病毒的操作要求在BSL2级别的生物安全柜内进行，实验操作人员需带上乳胶手套，按照标准的细胞培养操作流程进行。

Q:在实验室使用慢病毒是否安全？

A:慢病毒载体包括包装成分和载体成分：包装成分由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白；载体成分则与包装成分互补，即含有包装、逆转录和整合所需的HIV顺式作用序列，同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。为降低两种成分同源重组恢复成野生型病毒的可能，需尽量减少二者的同源性，如将包装成分上5′LTR换成CMV (巨细胞病毒早期启动子)、3′LTR换成SV40 polyA等。包装成分通常被分开构建到两个质粒上，一个质粒表达Gag和Pol蛋白，另一个质粒表达Env蛋白，其目的也是降低恢复成野生型病毒的可能。目前在用HIV-1载体已经进行的所有体内外实验中，未出现过有复制力的HIV，说明其安全性是有保证的。

Q:什么是自身失活慢病毒载体(SIN )？

A:SIN 载体的构建是将载体3′LTR(长末端重复序列) 中的U3区增强子和启动子序列删除。U3-LTR 是前病毒DNA 两端LTR 中U3 的模板, 在逆转录过程中, 3′L TR 中的缺失被传递到子代载体的5′L TR 中, 所形成的载体缺乏HIV-1 的增强子和启动子序列, 即使在所有病毒蛋白都存在的情况下也不能转录RNA , 产生了一个灭活的前病毒, 但其中的外源启动子仍然有活性, 能进行基因转录与表达。这种方式主要用来消除病毒LTR 中的启动子/增强子序列对病毒载体中外源启动子指导转录的干扰作用，以及消除可能的由3′L TR 启动子指导的下游基因组中原癌基因的激活与转录作用, 一定程度上提高了载体的安全性

Q:获得慢病毒颗粒后是否可以在实验室中进一步增殖？

A:不可以。科学家考虑到了其使用的生物安全性将慢病毒载体改造成为复制缺陷型病毒载体。获得的病毒颗粒的基因组不具有重组所需要的基因，并且载体具有3'LTR.自身失活的特性。

Q:慢病毒颗粒能保存多长时间？

A:在-80度条件下，慢病毒可以保存6个月左右而滴度没有显著丢失。

Q:公司生产的慢病毒的滴度是怎么定义的？

A:公司生产的慢病毒的滴度是感染293T细胞后使用FACS检测有限稀释的病毒感染细胞的阳性细胞比例来测算，或者使用Real-time PCR的方法检测获得的。

用于RNAi的慢病毒包装简要程序

摘要：慢病毒包装简要程序：以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1106个293FT细胞。

1、取1.5ml灭菌EP管，加入1.5g包装混合质粒和0.5g表达质粒以及250l的无血清Opti MEM。轻柔混匀，室温孵育5min。

2、取1.5ml灭菌EP管，取9l 脂质体2000l溶于250l 无血清Opti-MEM I培

慢病毒包装简要程序：

以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×106个293FT细胞。

1、取1.5ml灭菌EP管，加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血清Opti MEM。轻柔混匀，室温孵育5min。

2、取1.5ml灭菌EP管，取9μl 脂质体2000l溶于250μl无血清Opti-MEM I培养基中。轻柔混匀，室温孵育5min。

3、将DNA溶液和脂质体溶液轻柔混匀。室温孵育20min

4、用胰酶消化并记数293FT细胞。用含血清的DMEM培养基重悬细胞。

5、在六孔板中每孔加入1ml含血清的生长培养基，再加入DNA-脂质体复合物。

6、将1ml重悬的293FT细胞（1×106个细胞/ml）加入到平板中。37℃CO2孵箱中孵育过夜。

7、移除含有DNA-脂质体复合物的培养基，代之以DMEM（含丙酮酸钠和非必须氨基酸）。

7、转染后48-72h收获含病毒的上清。3000 rpm 离心20min，去除沉淀。

8、病毒上清-80°C贮存。

包装出来的慢病毒对NIH/3T3细胞达90%以上感染效率。

预防诺如病毒知识.doc

预防诺如病毒学校卫生知识普及宣传稿近期，北京和深圳都发生了诺如病毒疫情，我市疾控中心提醒：目前，正值诺如病毒感染高发季，市民要注意个人卫生，如发现儿童、学生出现聚集性恶心、呕吐、腹泻等症状，要及时就诊并居家隔离治疗，以下知识大家一定要弄懂！诺如病毒虽然听起来名字有点唬人，但其实它是一种常见病毒，并不是一种新型病毒。感染后 48 小时内，患者会出现呕吐、腹泻等急性胃肠炎症状，以呕吐症状更多见。冬季又是诺如病毒暴发流行的高发季节，所以诺如病毒感染性腹泻也被称为“冬季呕吐病”。传播途径：诺如病毒感染性强，通过粪-口途径传播，可通过污染的水源、食物、物品、空气等传播，常在社区、学校、餐馆、医院、托儿所、养老院及军队等处引起集体爆发。感染原因主要有： 1、食用或饮用诺如病毒污染的食物、水或饮料； 2、接触诺如病毒污染的物体或表面，然后手接触到口； 3、直接接触感染者，如照顾病人、与病人共餐或使用相同的餐具等。感染性极强：这是一种感染性极强的病毒，只需要 10 - 100 个病毒粒子就可以致病。要知道，一次呕吐就可以排出数以亿计的病毒粒子。病毒通过气溶胶在空气中弥散，造成聚集性的疫情暴发。如果家中有人感染了诺如病毒，呕吐或腹泻后，记得按照正确的方法及时对被污染的家具、地板和衣服进行消毒——先洒上比如”84”这样含氯的消毒剂，呕吐物最好用消毒粉覆盖30分钟后，再清理。这时候，医用酒精可是无效的。抗生素无效：感染诺如病毒之后，是没有特效药物的。感染诺如病毒之后，会腹泻和呕吐，有时候我们会自行服用抗生素，这是错误的方法，抗生素对诺如病毒是无效的，只会造成抗生素的滥用。好在它是一种自愈性的疾病，和感冒一样。只需要进行对症治疗即可，如果发烧就退烧，腹泻就止泻。值得注意的是，症状消失后的 3 天以内，身上携带的病毒仍然具有强传播力。所以，痊愈后的 3 天，最好不要去人群聚集的地方，以免造成病毒的再次传播。

诺如病毒感染防控知识

诺如病毒感染防控知识诺如病毒具有高度传染性和快速传播能力，是全球急性胃肠炎的散发病例和暴发疫情的主要致病原。主要发生在学校、托幼机构和医疗机构等人群聚集场所。发病的主要表现为腹泻和/或呕吐，国际上通常称之为急性胃肠炎。诺如病毒主要通过病人的粪便排出，也可通过呕吐物排出。病人在潜伏期即可排出诺如病毒，排毒高峰在发病后2-5天，持续约2-3周，最长排毒期有报道超过56天，在免疫抑制病人中更长。 1、定义为24小时内出现排便≥3次且有性状改变（呈稀水样便），和/或24小时内出现呕吐≥2次者。 2、诺如病毒的潜伏期相对较短，通常12-48小时。 3、诺如病毒感染发病以轻症为主，最常见症状是腹泻和呕吐，其次为恶心、腹痛、头痛、发热、畏寒和肌肉酸痛等。诺如病毒感染病例的病程通常较短，症状持续时间平均为2-3天。 4、诺如病毒传播途径包括人传人、经食物和经水传播。人传人可通过粪口途径（包括摄入粪便或呕吐物产生的气溶胶）、或间接接触被排泄物污染的环境而传播。食源性传播是通过食用被诺如病毒污染的食物进行传播，污染环节可出现在感染诺如病毒的餐饮从业人员在备餐和供餐中污染食物，也可出现食物在生产、运输和分发过程中被含有诺如病毒的人类排泄物或其它物质（如水等）所污染。经水传播可由桶装水、市政供水、井水等其他饮用水源被污染所致。

保持良好的手卫生是预防诺如病毒感染和控制传播最重要最有效的措施。此外，还需注意不要徒手直接接触即食食品。诺如病毒消毒方法一、病人呕吐物、粪便用一次性吸水材料（如纱布、抹布等）沾取5000mg/L～10000mg/L 的含氯消毒液完全覆盖污染物，小心清除干净。清除过程中避免接触污染物，清理的污染物按医疗废物集中处置，或用含有效氯5000mg/L 消毒剂溶液浸泡消毒30min后处理。厕所马桶或容器内的污染物，可小心倒入足量的5000 mg/L～10000mg/L的含氯消毒液，作用30min 以上，排入有消毒装置的污水处理系统。清洁中使用的拖把、抹布等工具，盛放污染物的容器都必须用含有效氯5000mg/L消毒剂溶液浸泡消毒30min后彻底冲洗，才可再次使用。厕所、卫生间的拖把应专用。二、地面、墙壁及物体表面用于消毒地面、墙壁及物体表面的消毒液，应含有效氯1000mg/L 。有肉眼可见污染物时应先清除污染物再消毒。无肉眼可见污染物时，家具和生活设施用消毒液进行浸泡、喷洒或擦拭消毒，作用30分钟后用清水擦拭干净。墙壁可直接用消毒剂按100ml/m2～300ml/m2用量擦拭或喷洒消毒。地面消毒先由外向内喷洒一次，喷药量为100ml/m2～300ml/m2，待室内消毒完毕后，再由内向外重复喷洒一次。消毒作用时间应不少于15分钟。三、衣物、被褥等织物

诺如病毒防治知识宣传

诺如病毒防治知识宣传一、概述诺如病毒感染性腹泻是由诺如病毒属病毒引起的腹泻，具有发病急、传播速度快、涉及范围广等特点，是引起非细菌性腹泻暴发的主要病因。诺如病毒感染性强，以肠道传播为主，可通过污染的水源、食物、物品、空气等传播，常在社区、学校、餐馆、医院、托儿所、孤老院及军队等处引起集体暴发。诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行，全年均可发生感染，感染对象主要是成人和学龄儿童，寒冷季节呈现高发。二、临床症状诺如病毒感染主要引起胃肠炎，具有发病急、传播速度快、涉及范围广等特点。胃肠炎的症状是恶心、呕吐、腹泻等，部分人主诉有头痛、发热、寒战、肌肉疼痛。症状通常持续1-2天。普遍感到病情严重，一日多次剧烈呕吐。症状一般摄入病毒后24-48小时出现, 但是暴露后12小时也可能出现症状。没有证据表明感染者能成为长期病毒携带者，但是从发病到康复后2周感染者的粪便和呕吐物中可以检出病毒。三、传播途径诺如病毒主要经消化道传播，传染性强。感染者粪便和呕吐物中可以发现诺如病毒，可以通过几种方式感染诺如病毒：食用诺如病毒污染的食物或饮用诺如病毒污染的饮料;

接触诺如病毒污染的物体或表面，然后手接触到口；直接接触到感染者（如照顾病人，与病人同餐或使用相同的餐具）。食物和饮料很容易被诺如病毒污染，因为病毒很小，而且摄入不到100个病毒就能使人发病。食物可以被污染的手、呕吐物或粪便污染的物体表面直接污染，或者通过附近呕吐物细小飞沫污染。尽管病毒在人体外很难繁殖，但是一旦存在食品或水中，就能引起疾病。有些食品在送至饭店或商店前可能被污染。一些暴发是由于食用从污染的水中捕获的牡蛎。其它产品如色拉和冰冻水果也可能在来源地被污染。四、治疗方法诺如病毒引起的感染尚无特殊的治疗手段，以对症治疗为主，病程一般为2~3天，恢复后无后遗症。然而不能喝足够多水来补充呕吐、腹泻丢失的水分，可能出现脱水，需要特殊的医学观察的人包括儿童、年老者和不能自理的所有年龄段人。五、预防措施预防诺如病毒感染性腹泻的关键是把好病从口入”这一关，要注意饮食和饮水卫生，养成良好的卫生习惯。 1、保护环境卫生。不乱扔垃圾，不随地大小便，对病人的呕吐物及粪便要及时消毒处理，确保周围环境的清洁；被污染衣物应该用肥皂水彻底清洗； 2、注意饮食卫生，以免病从口入” A、不吃不洁净的食物、不购买街边小店的零食，如：烧烤、串串香、凉

诺如病毒的基本知识

附件：诺如病毒的基本知识诺如病毒，或称诺罗病毒、诺沃克病毒，又称为小圆结构病毒，是一种能引起非细菌性急性胃肠炎的病毒。临床常表现为起病急骤、恶心、呕吐、腹部绞痛和头疼等不适症状，一般感染人口密度较高。在卫生环境差的地方，该病毒由粪便、口水等传播，人食用被污染的蚌类（如牡蛎）也会感染。诺如病毒生物特性诺如病毒是“打不死的小强”，对外界的抵抗力较强。这种病毒不管是冷冻数年,还是以60℃的水加热30分钟都能存活,只有在含较高浓度的氯消毒剂作用30分钟后才被杀死。所以污染物只能用漂白粉消毒，要泡半小时以上。诺如病毒- 传播途径诺如病毒的感染全年均可发生，尤以冬季较多。而人类是唯一已知的宿主。传播途径主要有：生吃海鲜容易感染诺如病毒，如生食海贝类及牡蛎等水生动物。非细菌性急性胃肠炎患者的呕吐物及粪便，或者干燥之后通过尘埃感染。诺如病毒- 临床表现潜伏期为24-48小时，一般不超过96小时。临床表现与其他病毒性胃肠炎相似，起病突然，主要症状为发热、恶心、呕吐、痉挛性腹痛及腹泻。可单有呕吐或腹泻，亦可先吐后泻。成人腹泻较突出，儿童呕吐较多。粪便呈黄色稀水便，每日数次至十数次不等，无脓血与黏液。可伴有低热、咽痛、流涕、咳嗽、头痛、肌痛、乏力及食欲减退。多呈自限性，恢复后无后遗症，预后较好，少有死亡病例。病程长及病情较重者排毒时间也较长，传染性可持续到症状消失后两日。本病免疫期短暂，可反复感染。诺如病毒- 易染人群该疾病多发生在学校、家庭、旅游区、医院、食堂、军队等，饮用被病毒污染的水及生食牡蛎等水生动物是引起爆发流行的主要原因。诺如病毒性胃肠炎的传染源为该病的患者、隐性感染者及健康携带者。主要传播途径是粪口传播。此外，日常生活接触也可引起该病的传播。诺如病毒以老人和小孩等体质比较弱的人最容易感染。诺如病毒- 治疗方法目前尚无特效的抗病毒药物，以对症或支持治疗为主，使用抗生素是没用的，所以在治疗中不要滥用抗生素，诺如病毒感染的潜伏期只有1至2天，自然病程较短，一般患者3天左右即可自愈。脱水是诺如病毒感染性腹泻的主要死因，所以补水非常重要。对严重病例尤其是幼儿及体弱者应及时输液或口服补液，以纠正脱水、酸中毒及电解质紊乱。诺如病毒- 预防控制预防健康教育加强以预防肠道传染病为重点的宣传教育，提倡喝开水，不吃生的半生的食物，尤其是禁止生食贝类等水产品，生吃瓜果要洗净，饭前便后要洗手、养成良好的卫生习惯。免疫接种目前尚无理想的疫苗。加强饮用水卫生要加快城乡自来水建设。在暂时达不到要求的地区，必须保护水源，改善饮用水条件，实行饮水消毒。抓好饮食卫生严格执行《中华人民共和国食品卫生法》，特别要加强对饮食行业（包括餐厅、个体饮食店、学校周边饮食摊档等）、农贸集市、集体食堂等的卫生管理。食物加工者要严

慢病毒包装实验步骤

慢病毒包装实验的要点： 1：良好的293FT细胞状态是转染成功的首要因素，细胞代数不宜超过30代； 2：细胞铺板需均匀，避免细胞成团，影响转染效率；尽量多的细胞转入质粒，产生的病毒就越多； 3：细胞换液和共转染时，动作要轻柔避免细胞漂浮。尽量少的细胞死亡，产生的病毒就越多；实验前要准备的试剂、耗材和仪器；试剂准备：10%灭活胎牛血清+90%DMEM配好的完全培养基,0.25%胰酶，PBS,TRL转染试剂，包装质粒，目的质粒，无血清培养基。耗材准备：10cm细胞培养皿，6孔细胞培养板，吸头规格1ml、200ul、10ul，10ml移液管，离心管规格15ml、5ml、1.5ml，0.22um PVDF滤膜和10ml无菌注射器，试管架。仪器准备：倒置荧光显微镜，普通光学倒置显微镜，电动移液器，吸引器，移液枪，二级生物安全柜，二氧化碳细胞培养箱。第一天：上午（病毒包装质粒共转染前，293FT细胞复苏后至少让其传代两次以上，293FT 细胞能成倍的增长，确定细胞状态好）；实验前准备：安全柜开紫外灯照30分钟；把培养基和试剂放置常温；消化细胞：从37 5%的co2细胞培养箱拿出细胞状态良好的293FT细胞，吸出原培养基，加入PBS 1ml略洗之后吸出，加入1ml胰酶消化1-2min，轻轻拍打培养皿，再加入3ml新鲜培养基终止消化，将培养皿中的细胞转移至15ml离心管内离心1000r /5min,吸出上清液，加入10ml PBS 吹打混匀后，离心1000r /5min, 吸出上清液。细胞铺板：在10cm细胞培养皿上标记细胞名称、细胞代数、时间和操作人，将计数好大约2.5×106个293FT细胞吸入15ml离心管，再加入完全培养基至10ml充分混匀，然后把混匀的293FT细胞移入10cm培养皿）。放置培养箱中培养48h。插入铺板后图片

诺如病毒预防小常识

For personal use only in study and research; not for commercial use 诺如病毒预防小常识诺如病毒（英语：Norovirus，NV），又称为诺罗病毒、诺沃克病毒或脓融病毒，是一种引起非细菌性急性胃肠炎的病毒。感染诺如病毒后最常见的症状是腹泻、呕吐、恶心，或伴有发热、头痛等症状。儿童患者呕吐、恶心多见，成人患者以腹泻为多，呕吐少见。病程一般为2-3 天，此病是一种自限性疾病，恢复后无后遗症。冬春开学季，也是学校诺如病毒爆发疫情的危险期。对个人要求：（1）保持良好的饮食习惯。不要吃没熟的食物（如海鲜、沙拉类），不吃变质、不洁、生冷、生腌食物，食物需要至少煮沸15～20 分钟后才可放心食用。（2）养成良好的个人卫生习惯。坚持勤洗手、勤剪指甲。进食或处理食物前，应用肥皂及清水洗净双手。如厕或处理呕吐物及粪便后须彻底洗净双手。（3）及时就医。出现呕吐、腹泻等胃肠症状时，应尽早到各医院的肠道门诊就诊，不要跟亲朋好友接触。不去人群密集的公共场所，减少传染的机会。对学校要求：（1）加强健康教育。学校开展多种形式的健康宣教，普及诺如病毒感染胃肠炎防治知识。（2）加强消毒和通风。每日对教室、卫生间、楼道、门把手等公共场所和用品用具进行消毒，对呕吐物及时清除消毒。搞好环境卫生，保持教室和活动室通风。（3）加强食品卫生和饮用水管理。工作人员要注意个人卫生，防止带病上岗，加工食物时防止生熟不分和交叉污染。桶装水应符合相关卫生标准，饮水机加强清洗消毒。（4）加强个人防护。遇有学生在教室等公共场所呕吐，老师要及时疏散周边学生，及时清理消毒呕吐物，处理呕吐物时要注意个人防护，防止感染。（5）加强风险沟通。与学生家长保持沟通，做好解释工作，防止造成不必

诺如病毒试题及答案

诺如病毒的防控知识培训试题单位：姓名：成绩：一、填空 1. 没有证据表明诺如病毒感染者能成为长期病毒携带者，但是从发病到感染者的粪便和呕吐物中可以检出病毒。 2. 诺如病毒属杯状病毒，源于的一所学校引起的一次胃肠炎暴发。 3. 目前，诺如病毒有个种，其中个种能感染人类。在这几个种中已经确认有个型，而新亚型也在不断涌现，这使得疫苗开发变得困难。二、单选 1.关于诺如病毒感染引起的胃肠炎，说法不正确的是（） A.具有发病急、传播速度快、涉及范围广等特点。 B.症状是恶心、呕吐、腹部痉挛性腹泻。 C.症状通常持续5-7天。 D.症状一般摄入病毒后24-48小时出现，但是暴露后12小时也可能出现症状。 2.诺如病毒的感染方式，说法不正确的是（） A.食用诺如病毒污染的食物或饮用诺如病毒污染的饮料； B.接触诺如病毒污染的物体或表面，然后手接触到口；

C.照顾病人，与病人同餐或使用相同的餐具)。 D.病毒很小，摄入1000个病毒才能使人发病。 3. 下列说法，错误的是（） A.诺如病毒很难灭活，它们存留在物体表面数天或数周后仍然可以感染人类。 B.可以在冷冻、加热条件下生存，甚至与一些消毒剂共存。 C.诺如病毒携带者粪便和呕吐物中带有数十亿病毒颗粒，少量病毒颗粒即可引起感染。 D.人群对诺如病毒普遍易感，感染后缺乏持久的免疫力,并且产生的免疫力对诺如病毒其他变异株也有保护作用。三、多选 1. 下列关于诺如病毒急性胃肠炎说法正确的是（） A.诺如病毒可引起急性胃肠炎，主要症状为腹泻、呕吐、恶心和腹痛 B.潜伏期多为48～96小时。 C.儿童患者表现为呕吐为主，成人患者腹泻较多。 D.大多数感染者在1～3天后好转，但小孩、老人和低免疫力低下者可能导致严重脱水。 2. 预防诺如病毒暴发，下列措施正确的是（） A.厨工应保持良好的手部卫生，避免裸手直接接触即食食品。 B.厨工出现腹泻、呕吐等症状时应该避免进入厨房和制作食物。 C.目前尚未有疫苗可以预防诺如病毒感染。 D.呕吐或腹泻后应清洗和消毒被污染的地方和衣物。四、判断 1.诺如病毒急性胃肠炎潜伏期多在48～96h，最短24h，最长96h。( ) 2. 除符合临床诊断病例条件外，必须在粪便标本或呕吐物中检测出诺如病毒才能成为确诊病例。( )

诺如病毒相关知识模板

诺如病毒相关知识一、诺如病毒简介诺如病毒感染性腹泻是由诺如病毒引起的腹泻，是引起非细菌性腹泻暴发的主要病因。诺如病毒感染性强，以肠道传播为主，可通过污染的水源、食物、物品、空气等传播。潜伏期多在24～48小时，最短12小时，最长72小时。人感染诺如病毒发病突然，主要症状为呕吐和腹泻，

可伴有恶心、发热和腹痛，儿童病例以呕吐为主，成人病例腹泻为多，其他包括发热、头痛和全身酸痛等。24小时内腹泻4～8次，粪便为稀水便或水样便，无粘液脓血。大便常规镜检通常无炎性细胞，白细胞计数<10/HP，未见红细胞。原发感染患者的呕吐症状明显多于续发感染者，有些感染者仅表现出呕吐症状。多数患者发病后1-3天即可康复，愈后良

好。如频繁呕吐或腹泻，可导致脱水，引起严重的健康问题，尤其常见于幼小儿童、老年人和基础性疾病患者。二、妥善处理，做好控制工作 1.做好病人的医疗救治，轻症患者可居家隔离治疗，症状严重者需送医院治疗，并做好病人隔离消毒等。病人患病期间应停止上课，至症状消失后72小时方可复课。 2.及时妥善处理病人的呕吐物、腹泻物和各种被污染的物品及场所。

病人的呕吐物、腹泻物要及时掩闭覆盖，消毒清理。各种被污染的物品和场所（如衣物、地板、桌椅、餐厨具、污水及厕所等），应进行彻底清洁、消毒。三、诺如病毒感染性腹泻消毒处理方法（一）消毒处理的基本要求出现腹泻、呕吐症状病人，要对其进行隔离，尽快采取消毒措施。由于诺如病毒对常用的消毒剂抵抗力

较强，应选用高效消毒剂或有效的物理消毒方法才能达到消毒的目的。要特别注意病人排泄物、呕吐物及其容器、餐饮具、食物、污水及厕所的彻底消毒。还要对病人经常接触的环境物体表面和疫点室内地面、墙壁、家具表面、衣服、家用物品、纸张、书报与垃圾等进行消毒。消毒时应正确选择消毒剂，合理使用消毒方法，加强对消毒液浓度测

慢病毒生产及使用操作手册

慢病毒生产及使用操作手册一、实验流程制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒，三种质粒载体分别进行高纯度无毒素抽提，共转染293T细胞，转染后6 h 更换为完全培养基，培养48和72h后，分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，病毒上清液通过超离心浓缩病毒。以下容由汉恒生物科技（上海）有限公司精心整理总结。二、实验材料（一）慢病毒载体、包装细胞和菌株该病毒包装系统为三质粒系统，组成为pspax2, pMD2G, pHBLV TM系列质粒。 1、载体信息（见附录） 2、细胞株293T，慢病毒的包装细胞，为贴壁依赖型成上皮样细胞，生长培养基为DMEM(含10% FBS)。贴壁细胞经培养生长增殖形成单层细胞。 3、菌株大肠杆菌菌株DH5α。用于扩增慢病毒载体和辅助包装载体质粒。三、包装细胞293T细胞的培养（一）293T细胞的冻存随着传代的次数增加，293T细胞会出现生长状态下降、突变等。为了防止此类现象的出现，我们需要在开始就对细胞进行大量冻存，以保证实验的稳定性和持续性。在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。 1、去掉上清液，加入PBS洗去残留的培养基； 2、加入0.25%的胰酶，消化1～2min后，镜下观察细胞变圆，细胞间间隙加大时，去除胰酶，加入新鲜培养基吹打混匀，移入离心管中。 3、细胞计数，将细胞全部晃下，加入3mL 37 ℃预热的10％DMEM，用10mL 移液管进行吹打，较大力吹打6～8 次即可，不留死角，之后，将所有细胞吸出，置于15mL 离心管中，取50ul 混匀后的细胞于1.5mL eppendorf 管中，加入450ul 10％DMEM，即为10 倍稀释，混匀，取10ul 细胞于计数板中计数。计数板上共4 大格，每大格16 小格。计数时，4 大格均计数，总数除以4（得每大格细胞数），再乘以10（10 倍稀释），即为实际n万/mL 细胞浓度。

诺如病毒的宣传知识

诺如病毒宣传知识诺如病毒是急性肠胃炎最常见的病原体，该病毒基因多样且高度变异，每隔数年就会出现新变异株，人一生中可多次获得感染。诺如病毒感染通常表现为自限性疾病，预后良好。临床特征：最常见的症状是腹泻、呕吐、反胃、恶心和胃痛，其他包括发热、头痛和全身酸痛等。多数患者发病后1-3天即可康复。如频繁呕吐或腹泻，可导致脱水，引起严重的健康问题，尤其常见于幼小儿童、老年人和基础性疾病患者。脱水主要表现为少尿、口干、咽干、站立时感头晕目眩，在儿童中可表现为啼哭无泪或少泪、异常瞌睡或烦躁。传播：诺如病毒传染性强，所有人群均易感。病人发病前至康复后2周，均可在粪便中检到诺如病毒，但患病期和康复后三天内是传染性最强的时期。通常通过以下途径获得感染： ⑴食用或饮用被诺如病毒污染的食物或水； ⑵触摸被诺如病毒污染的物体或表面，然后将手指放入口中； ⑶接触过诺如病毒感染患者，如照顾患者、与患者分享食物或共用餐具。 (4)诺如病毒在密闭场所中（如托幼机构、幼儿园、学校、养老院、游船等）传播速度快，易引起暴发。治疗：尚无特异的抗病毒药物。患者应补充足够的水分以预防脱水。轻

度脱水时，运动饮料或其他饮品（不含咖啡因或酒精）可起到一定的补水效果，但不能补充重要的营养成分和矿物质，因此，在药店购买口服补水溶液是最有效的治疗方法。严重脱水时应及时住院输液治疗。预防： ⑴注意洗手卫生，用肥皂和清水认真洗手，尤其在如厕和更换尿布后，以及每次进食、准备和加工食物前。 ⑵水果和蔬菜食用前应认真清洗，牡蛎和其他贝类海产品应深度加工后食用。诺如病毒抵抗力较强，在60℃高温或经快速汽蒸仍可存活。 ⑶诺如病毒感染儿童应远离厨房或食物加工场所。 ⑷诺如病毒感染病人患病期至康复后3天内不能准备加工食物或为其他患者陪护。 ⑸及时用含氯漂白剂或其他有效消毒剂清洗消毒被患者呕吐物或粪便污染的表面，立即脱掉和清洗被污染的衣物或床单等，清洗时应戴上橡胶或一次性手套，并在清洗后认真洗手。

诺如病毒知识及预防(参考文章)

病毒简介显微镜下的诺如病毒诺如病毒感染性腹泻是由诺如病毒属病毒引起的腹泻，具有发病急、传播速度快、涉及范围广等特点，是引起非细菌性腹泻暴发的主要病因。诺如病毒感染性强，以肠道传播为主，可通过污染的水源、食物、物品、空气等传播，常在社区、学校、餐馆、医院、托儿所、孤老院及军队等处引起集体暴发。传播途径诺如病毒感染性强，以肠道传播为主，可通过污染的水源、食物、物品、空气等传播，常在社区、学校、餐馆、医院、托儿所、孤老院及军队等处引起集体暴发。疾控专家称，病程为自限性，一般2～3天即可恢复。诺如病毒的各种传播途径，如牲畜等感染者粪便和呕吐物中可以发现诺如病毒，可以通过几种方式感染诺如病毒： 1、食用诺如病毒污染的食物或饮用诺如病毒污染的饮料；因为病毒很小，而且摄入不到100个病毒就能使人发病。接触诺如病毒污染的物体或表面，然后手接触到口。 2、直接接触感染者，如照顾病人、与病人共餐或使用相同的餐具也可引起传播。直接接触到感染者(如照顾病人，与病人同餐或使用相同的餐具)。 3、食物可以被污染的手、呕吐物或粪便污染的物体表面直接污染，或者通过附近呕吐物细小飞沫污染。尽管病毒在人体外很难繁殖，但是一旦存在食品或水中，就能引起疾病。 4、有些食品在送至饭店或商店前可能被污染。一些暴发是由于食用从污染的水中捕获的牡蛎。其它产品如色拉和冰冻水果也可能在来源地被污染。临床表现潜伏期多在24～48h，最短12h，最长72h。感染者发病突然，主要症状为恶心、呕吐、发热、腹痛和腹泻。儿童患者呕吐普遍，成人患者腹泻为多，24h内腹泻4～8次，粪便为稀水便或水样便，无粘液脓血。大便常规镜检WBC<15，未见RBC。原发感染患者的呕吐症状明显多于续发感染者，有些感染者仅表现出呕吐症状。此外，也可见头痛、寒颤和肌肉痛等症状，严重者可出现脱水症状。诺如病毒会引起胃肠道感染。主要症状为恶心、呕吐、腹部痉挛性腹泻，通常持续1-2天，一般在感染病毒后12-48小时出现症状。

实用指导(二)：慢病毒感染贴壁细胞实验步骤

实用指导（二）：慢病毒感染贴壁细胞实验步骤和元生物|2016-03-1513:51 慢病毒慢病毒（Lentivirus）是一类改造自人免疫缺陷病毒(HIV)的病毒载体，基因组为RNA，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒基因组进入细胞后，在细胞浆中反转录为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录成mRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白；或产生小RNA。慢病毒介导的基因表达或小RNA干扰作用持续且稳定，并随细胞基因组的分裂而分裂。以24孔为例：第一天：准备细胞将状态良好的目的细胞接种到24孔板中，细胞计数后，进行铺板，每孔加入500ul培养基。保证第二天感染病毒时融合效率达到30-40%。通常，24孔板内以 5-8*10^4cells/孔的密度铺板。第二天：病毒感染，换液1计算病毒加药量选择合适MOI值，进行病毒感染。加药量计算方法：（细胞数×MOI值/病毒原液滴度）×10^3=病毒加药量（μl）。 2弃去部分培养基将每组中加入的病毒及感染增强剂的体积去掉，保证加入病毒和感染增强剂后，每孔中仍保持500ul的液体量。 3加入慢病毒加药量计算方法

（细胞数×MOI值/病毒原液滴度）×10^3=病毒加药量（μl），培养基的总量必须充分覆盖住细胞。 4添加感染增强剂polybrene,保证终浓度为5ug/ml Polybrene是一种聚阳离子，可以中和电荷以促进假病毒外壳与细胞膜的作用。Polybrene 最佳浓度因不同细胞株而异并应根据经验而定（通常范围为2-10μg/ml）。过长时间暴露于Polybrene（>12小时）可对某些细胞产生毒性作用。 5病毒感染8~12小时后，观察细胞状态。如细胞状态差，尽快换新鲜培养基；如细胞状态良好，可以在24小时内换液，但不宜超过24小时。弃去培养基后每孔加入500μl新鲜的完全培养基。5%CO2培养箱培养。第五天：观察荧光表达情况病毒感染细胞72h后，在荧光显微镜下观察细胞，估计慢病毒感染目的细胞的效率。若荧光弱，可到96h后观察。如果96h仍无荧光，即感染实验失败。

诺如病毒感染防治知识

诺如病毒感染防治知识诺如病毒是急性肠胃炎最常见的病原体，该病毒基因多样且高度变异，每隔数年就会出现新变异株，人一生中可多次获得感染。诺如病毒感染通常表现为自限性疾病，预后良好。临床特征：最常见的症状是腹泻、呕吐、反胃、恶心和胃痛，其他包括发热、头痛和全身酸痛等。多数患者发病后1-3天即可康复。如频繁呕吐或腹泻，可导致脱水，引起严重的健康问题，尤其常见于幼小儿童、老年人和基础性疾病患者。脱水主要表现为少尿、口干、咽干、站立时感头晕目眩，在儿童中可表现为啼哭无泪或少泪、异常瞌睡或烦躁。传播：诺如病毒传染性强，所有人群均易感。病人发病前至康复后2周，均可在粪便中检到诺如病毒，但患病期和康复后三天内是传染性最强的时期。通常通过以下途径获得感染： ⑴食用或饮用被诺如病毒污染的食物或水； ⑵触摸被诺如病毒污染的物体或表面，然后将手指放入口中； ⑶接触过诺如病毒感染患者，如照顾患者、与患者分享食物或共用餐具。诺如病毒在密闭场所中（如托幼机构、幼儿园、学校、养老院、游船等）传播速度快，易引起暴发。治疗：尚无特异的抗病毒药物。患者应补充足够的水分以预防脱水。轻度脱水时，运动饮料或其他饮品（不含咖啡因或酒精）可起到一定的补水效果，但不能补充重要的营养成分和矿物质，因此，在药店购买口服补水溶液是最有效的治疗方法。严重脱水时应及时住院输液治疗。预防： ⑴注意洗手卫生，用肥皂和清水认真洗手，尤其在如厕和更换尿布后，以及每次进食、准备和加工食物前。 ⑵水果和蔬菜食用前应认真清洗，牡蛎和其他贝类海产品应深度加工后食用。诺如病毒抵抗力较强，在60℃高温或经快速汽蒸仍可存活。

⑶诺如病毒感染儿童应远离厨房或食物加工场所。 ⑷诺如病毒感染病人患病期至康复后3天内不能准备加工食物或为其他患者陪护。 ⑸及时用含氯漂白剂或其他有效消毒剂清洗消毒被患者呕吐物或粪便污染的表面，立即脱掉和清洗被污染的衣物或床单等，清洗时应戴上橡胶或一次性手套，并在清洗后认真洗手。

慢病毒包装、浓缩、纯化、滴度实验步骤

一、包装细胞293T细胞的培养一、293T细胞的冻存 1. 随着传代的次数增加，293T细胞会出现生长状态下降，出现突变等。所以要在细胞购进时就进行冻存。 2. 在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。 3. 倒去细胞上清液，加入D-Hank's液洗去残留的培养基。 4. 加入0.25%的胰酶，消化10-20s后倒去。 5. 镜下观察细胞变圆，细胞间间隙加大时，加入新鲜培养基吹打混匀。 6. 细胞计数。 7.将细胞离心，1000rpm，2min。 8. 根据计数结果加入细胞冻存液（70%完全培养基+20%FBS+10% DMSO）重悬细胞，密度为3×106个/ml。 10. 第二天将细胞放入液氮灌，并记录。二、293T细胞的传代 1. 当细胞生长至汇合率达到80~90%需要对细胞进行传代操作，以扩大细胞数量，维持细胞良好的生长状态。 2. 消化细胞，方法同上。 3. 细胞离心结束后，加入完全培养基重悬。密度为3×105个/ml。 4. 分到10cm培养皿中，10ml/皿。三、293T细胞的复苏 1. 当细胞传代次数过多（超过50代），细胞状态变差时或细胞出现污染事故时，需要丢弃并对开始冻存的细胞进行复苏。 2. 打开水浴锅，设置温度为40℃。 3. 查看细胞库记录，根据记录从液氮灌中取出冻存的细胞（需戴上棉手套，防止被冻伤），迅速丢入水浴锅中并快速晃动，在1~2 min内使细胞溶液完全溶解。 4. 将1ml细胞溶液加入9 ml完全培养基中并混匀后转入10cm培养皿。 5. 放回37℃、3%CO2和95%相对湿度的培养箱中培养。 6. 第二天观察细胞存活率。倒掉旧的培养基，加入10ml新鲜培养基。二、慢病毒的包装、浓缩和滴度测定 1. 所用病毒检测引物为WPRE特异引物，序列如下

诺如病毒基本知识

诺如病毒基本知识诺如病毒感染性腹泻是由诺如病毒引起的病毒性胃肠道疾病，具有发病急、传播速度快、涉及范围广等特点，是引起非细菌性感染性腹泻暴发的主要病原。感染后主要症状是腹泻、呕吐、发热等，患者通常1～2天即可痊愈，但抵抗力弱的老年人在感染病毒后病情容易恶化。常在学校、托幼机构、养老院、医院及社区等处暴发流行。诺如病毒是一组无包膜单链RNA病毒，根据结构蛋白VP1诺如病毒至少可分为5组，GI-GV，其中GI，GII，GIV可感染人类。每组诺如病毒可以分为不同的基因型，GI有8个型别而GII有21个型别。从2001年开始GII-4型成为导致全球诺如病毒胃肠炎暴发的主要型别，而GII-4型不断变异导致不同变异株在全球不断流行。诺如病毒对外界环节具有一定的抵抗力。对多种消毒剂如酒精、季胺也有一定的抵抗能力。因此，彻底消灭环节中的诺如病毒是比较困难的。诺如病毒可耐受普通饮水中3.75-6.25mg/L的氯离子浓度（游离氯0.5-1.0mg/L），但在高浓度的氯离子（处理污水用的氯离子浓度）存在时，诺如病毒可灭活。传染源：人类是人诺如病毒已知的唯一的宿主，患者和隐性感染者均为本病的传染源，30%为隐性感染。诺如病毒是传染性很强的病毒，感染剂量为约18个（10-100个）病毒颗粒。病毒通常通过病人的粪便排毒，但也可通过呕吐物排毒，病毒在粪便中的平均排毒时间长达4周，但是排毒的高峰期为感染后2-5天，粪便中排毒的病毒载量为50-1000亿/克。隐性感染者排毒量低于发病人群，隐性感染的人群在诺如病毒的传播及暴发中的作用至今还不明了。传播途径：一般通过粪口传播，也可通过气溶胶或接触被病毒污染的环境表面进行传播。主要有3种传播途径：人传人、食源性传播和水源性传播。易感人群：全人群对诺如病毒均易感，小于5岁和大于65岁者高发。人体对诺如病毒产生的免疫保护比较复杂，在志愿者实验中即使对受试者重复给予同一株或不同株诺如病毒，某些受试者仍会重复感染。即使有抗体的存在也很难保护机体不受感染，除非通过短时间内相同毒株的重复暴露而获得的免疫力，抗体的保护力可持续8周到6个月。流行特征：全年均可发病，冬季有流行上升的趋势。诺如病毒是导致社区、门诊及急诊的急性胃肠炎的重要原因。人群集中单位可发生暴发，病毒传染性强、隐传播途径复杂、传播速度快，控制难度大，容易出现暴发和短时间内较大范围流行。血清调查表明诺如病毒感染在全球相当普遍，2006年中国CDC在17个省份建立了病毒性腹泻监测网络，诺如病毒感染从2007年的11.2%上升至2011年的20.3%，2012

慢病毒感染细胞操作手册

慢病毒感染细胞实验方法

一、实验概述培养生长状态良好的目的细胞，根据慢病毒感染预实验结果设计各组实验条件，进行正式感染。若为荧光标记的慢病毒感染，参照预实验确定的感染时间点，于荧光显微镜下观察GFP表达情况，荧光率达70-80％左右，细胞汇合度达80%左右，收集细胞进入下游实验。若为抗性基因（如Puromycin）标记的慢病毒感染，感染48 h-72h后，使用抗生素筛选48h，收集细胞汇合度70%-80%左右的生长状态良好的细胞进行下游实验。二、实验材料 1.主要试剂试剂名称试剂来源cat.No. 胎牛血清Ausbian VS500T DMEM Corning 10-013-CVR 胰酶生工生物工程（上海）股份有限公司T0458-50G Puromycin Clontech 631305 D-Hanks 上海吉凯基因技术有限公司配制 2.主要仪器仪器名称仪器来源cat.No. 荧光显微镜奥林帕斯IX71 CO2培养箱日本三洋SANYO MCO-175 倒置显微镜上海蔡康光学仪器有限公司XDS-100 离心机赛默飞世尔科技(中国)有限公司Fresco 21 生物安全柜上海振样创空气净化设备有限公司Bio 1200-Ⅱ-A2 三、实验步骤 1．准备目的细胞（1）从液氮罐中取出细胞冻存管，迅速放入37℃水浴中，并不时摇动使其尽快解冻。（2）完全解冻后，1300 rpm，离心3 min，75%酒精擦拭冻存管消毒后，移至生物安全柜。（3）吸去冻存液上清，加入1 mL新鲜的完全培养基重悬细胞，将细胞悬液接种至含有3 mL完全培养基的6-cm dish 中，轻轻晃匀后置于37℃、5% CO2培养箱。（4）24 h后更换一次培养液继续培养，待细胞汇合度达80%左右传代培养，保持细胞良好的生长状态。

诺如病毒防治核心知识

勤洗手，吃熟食，跟诺如say byebye！诺如病毒是什么？诺如病毒是人杯状病毒科诺如病毒属的一组病毒，以冬春季节高发为特征，常在学校、医院和孤老院等集体单位引起暴发，具有发病急、传播速度快等特点，累及成人和儿童，是非细菌性腹泻暴发疫情的主要病原。感染诺如病毒以后有哪些症状？诺如病毒致病性非常强，潜伏期相对较短，通常仅为12-48小时，患病期和康复后三天内是传染性最强的时期。临床症状表现为腹泻和呕吐为主，其次为恶心、腹痛、头痛、发热、畏寒和肌肉酸痛等，多数患者发病后1-3填即可康复。呕吐或腹泻严重者应及早就医。诺如病毒如何传播？ 1、食用或引用被诺如病毒污染的水或食物； 2、接触过诺如病毒感染患者，如照顾患者、与患者分享食物或共用餐具。在学校等人口密集场所易引起暴发。诺如病毒如何治疗？目前尚无特异的抗病毒药物和疫苗，患者应补充足够的水分以预防脱水。轻度脱水时可口服补液盐，严重脱水时应及时住院输液治疗。省疾控中心提醒搞好个人卫生、食品卫生和饮水卫生是预防本病的关键。应养成勤洗手、不喝生水、生熟食物分开避免交叉污染等健康生活习惯。 1、注意洗手卫生，尤其是有5岁以下婴幼儿的家庭，要做到饭前便后勤洗手，采用肥皂和流动水至少洗20秒。 2、水果和蔬菜食用前应认真清洗，在加工食物的时候要煮熟煮透，不生吃或半生吃海产品，尤其是牡蛎和其他贝类海产品应深度加工后食用。诺如病毒抵抗力较强，在60℃高温或经快速汽蒸仍可存活。不饮生水及生熟混合水。 3、托幼、学校等应严格进行校内环境消毒工作，一旦发现儿童、学生出现相关症状，应及时向辖区疾控中心报告。 4、诺如病毒感染病人应于急性期至症状完全消失后3天内隔离治疗，建议食品从业人员连续2次诺如病毒核酸检测阴性后重新上岗。

诺如病毒防治知识要点

诺如病毒防治知识要点诺如病毒是急性肠胃炎最常见的病原体，也是引起非细菌性腹泻暴发的主要病因。诺如病毒感染性腹泻具有发病急、传播速度快、涉及范围广等特点。诺如病毒感染通常表现为自限性疾病，预后良好。诺如病毒感染者发病突然，潜伏期多在24-48小时，最短12小时，最长72小时，主要症状为恶心、呕吐、发热、腹痛和腹泻，儿童患者呕吐普遍，成人患者腹泻为多，24小时内腹泻4-8次，粪便为稀水便或水样便，无粘液脓血，原发感染患者的呕吐症状明显多于续发感染者，有些感染者仅表现出呕吐症状。此外，也可见头痛，寒颤和肌肉痛等症状，严重者可出现脱水症状。人类是诺如病毒胃肠炎唯一的传染源,包括患者、隐性感染者和健康携带者。粪便排毒通常发生在暴露后15小时,在暴露后24～72小时传染性最强,可持续到症状消失后2周以上。粪－口途径是主要传播方式，也可以通过污染的水源、食物、物品、气溶胶等传播。人群对诺如病毒普遍易感，小剂量即可感染，感染后缺乏持久的免疫力。目前尚无特效的抗病毒药物，以对症或支持治疗为主，一般不需使用抗菌素，预后良好。脱水是诺如病毒感染性腹泻的主要死因，对严重病例尤其是幼儿及体弱者应及时输液或口服补液，以纠正脱水，酸中毒及电解质紊乱。诺如病毒腹泻要从以下几个方面做好预

防：（1）要养成良好的卫生习惯，饭前便后和处理加工食物前需认真洗手；（2）注意饮食卫生，不吃生冷食品和未煮熟煮透的食物，尤其尽量不吃半生的海水产品；（3）一旦出现呕吐、腹泻等症状，要立即去正规医疗机构就诊，切勿上班或上学；（4）应及时清理患者的呕吐物或粪便，彻底消毒被污染的衣物或床单，并做好个人的防护，彻底洗手；（5）流行期尽量减少外出聚会和参与大型活动，减少感染机会。

诺如病毒题库

十六、诺如病毒一、填空 1. 没有证据表明诺如病毒感染者能成为长期病毒携带者,但是从发病到康复后2周感染者的粪便和呕吐物中可以检出病毒。 2. 诺如病毒属杯状病毒,源于１９6８年美国的一所学校引起的一次胃肠炎暴发。 3. 目前，诺如病毒有5个种,其中3个种能感染人类。在这几个种中已经确认有25个型,而新亚型也在不断涌现，这使得疫苗开发变得困难。二、单选 1.关于诺如病毒感染引起的胃肠炎，说法不正确的是（C) A.具有发病急、传播速度快、涉及范围广等特点。 B.症状是恶心、呕吐、腹部痉挛性腹泻。 C.症状通常持续5-7天。 D.症状一般摄入病毒后２4－４8小时出现，但是暴露后1２小时也可能出现症状。 2.诺如病毒的感染方式,说法不正确的是(Ｄ） A.食用诺如病毒污染的食物或饮用诺如病毒污染的饮料； B.接触诺如病毒污染的物体或表面，然后手接触到口； C.照顾病人，与病人同餐或使用相同的餐具)。 D.病毒很小，摄入1０00个病毒才能使人发病。３. 下列说法，错误的是（Ｄ） A.诺如病毒很难灭活，它们存留在物体表面数天或数周后仍然可以感染人类。Ｂ．可以在冷冻、加热条件下生存,甚至与一些消毒剂共存。

C.诺如病毒携带者粪便和呕吐物中带有数十亿病毒颗粒,少量病毒颗粒即可引起感染。 D.人群对诺如病毒普遍易感,感染后缺乏持久的免疫力，并且产生的免疫力对诺如病毒其他变异株也有保护作用。三、多选 1. 下列关于诺如病毒急性胃肠炎说法正确的是（ACＤ） A．诺如病毒可引起急性胃肠炎，主要症状为腹泻、呕吐、恶心和腹痛 B.潜伏期多为4８~96小时。Ｃ.儿童患者表现为呕吐为主，成人患者腹泻较多。 D．大多数感染者在1～３天后好转，但小孩、老人和低免疫力低下者可能导致严重脱水。 2. 预防诺如病毒暴发，下列措施正确的是（AＢＣD）Ａ.厨工应保持良好的手部卫生,避免裸手直接接触即食食品。 B.厨工出现腹泻、呕吐等症状时应该避免进入厨房和制作食物。 C.目前尚未有疫苗可以预防诺如病毒感染。 D．呕吐或腹泻后应清洗和消毒被污染的地方和衣物。四、判断１．诺如病毒急性胃肠炎潜伏期多在4８~9６h,最短２4ｈ，最长96h。× 2. 除符合临床诊断病例条件外，必须在粪便标本或呕吐物中检测出诺如病毒才能成为确诊病例。√ 3．以村、居委会、学校、托儿所、养老院或其他集体为单位，一周内出现２0例及以上病毒性腹泻临床诊断病例为疑似暴发疫情。√

关于慢病毒感染的相关知识总结

慢病毒使用操作手册一、慢病毒的储存与稀释: 1. 病毒的储存：收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口） ①病毒可以存放于-80℃6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，建议在使用前需要重新滴定病毒滴度 ②反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度10%；因此在病毒使用过程中应仅尽量避免反复冻融，为避免反复冻融,建议收到病毒后按照每次的使用量进行分装。 2. 病毒的稀释：如果需要稀释病毒，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用培养目的细胞用PBS或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)。混匀分装后4℃保存(请尽量在三天内用完) 分装后使用。二、慢病毒用于体外（In Vitro）实验：感染培养原代细胞和建系细胞。慢病毒对各种细胞和组织的亲嗜性不同，在使用慢病毒之前可以通过查阅相关文献，了解慢病毒对您的目的细胞的亲嗜性，感染复数（MOI 值）以及在体（In Vivo）注射所需要的病毒量。如果没有相关文献支持，可以通过感染预实验得到合适的感染复数（MOI 值）（使用24孔板检测病毒对目的细胞的亲嗜性）。慢病毒感染目的细胞预实验 1. 慢病毒感染目的细胞预实验注意事项： ①测定慢病毒对目的细胞的亲嗜性时，需要同时设置对慢病毒亲嗜性较高的细胞(HEK293T，Hela）作为平行实验的对照细胞。 ②在进行慢病毒感染实验时，可以用完全培养基（培养目的细胞用）稀释；理论上，含有血清，双抗或者其他营养因子的完全培养基不影响慢病毒的感染效率。 ③一般慢病毒单位为TU/ml，即每毫升中含有具有生物活性的病毒颗粒数。如：病毒滴度为>1X108 TU/ml 即每毫升病毒液中至少含有1X108个具有生物活性的慢病毒颗粒。 2. 以24孔培养板为例，进行目的细胞和HEK293T 细胞的感染预实验实验前按照不同的MOI设置不同的感染孔，并根据MOI和细胞数量计算所需要的病毒量，如有必要可以使用PBS溶液或者无血清培养基稀释病毒原液。第一天，准备细胞：在24孔培养板接种若干孔，每个孔内接种3~5X104个目的细胞，铺板时细胞的融合率为50%左右，每孔培养基体积为100 μl；进行病毒感染时细胞的融合度约为70%左右。第二天，准备病毒：取出4℃保存的病毒，使用台式离心机离心20 秒（使病毒完全悬于离心管底部即可）；如果是冻存在-80℃的病毒需要先在冰上融化后使用。亦可以根据实验室的实际情况将按照MOI准确计算好的慢病毒稀释到培养基中，并尽可能保证所获得的含