叶绿素测定方法
分光光度法测定xx含量
一、实验目的
1.了解植物组织中xx的分布及性质。
2.掌握测定xx含量的原理和方法。
二、实验原理
叶绿素广泛存在于果蔬等绿色植物组织中,并在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿体。当植物细胞死亡后,叶绿素即游离出来,游离叶绿素很不稳定,对光、热较敏感;在酸性条件下叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素,在稀碱液中可水解成鲜绿色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇。
高等植物中xx有两种:
叶绿素a 和b,两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。
叶绿素的含量测定方法有多种,其中主要有:
1.原子吸收光谱法:
通过测定镁元素的含量,进而间接计算叶绿素的含量。
2.分光光度法:
利用分光光度计测定叶绿素提取液在最大吸收波长下的吸光值,即可用朗伯—比尔定律计算出提取液中各色素的含量。
叶绿素a 和叶绿素b 在645nm和663nm处有最大吸收,且两吸收曲线相交于652nm处。
因此测定
提取液在645nm、663nm、652nm波长下的吸光值,并根据经验公式可分别计算出叶绿素a、叶绿素b
和总xx的含量。
三、仪器、原料和试剂
仪器
分光光度计、电子顶载天平(感量
0.01g)、研钵、棕色容量瓶、小漏斗、定量滤纸、吸水纸、擦境纸、滴管。
原料
xx(或烘干)的植物叶片
试剂
1. 96%乙醇(或80%丙酮)
2.xx
3.碳酸钙粉
四、操作步骤
取新鲜植物叶片(或其它绿色组织)或干材料,擦净组织表面污物,去除中脉剪碎。称取剪碎的新鲜样品2g,放入研钵中,加少量石英砂和碳酸钙粉及
3mL95%乙醇,研成均浆,再加乙醇10mL,继续研磨至组织变白。静置3~
5min。
取滤纸1张置于漏斗中,用乙醇湿润,沿玻棒把提取液倒入漏斗,滤液流至100mL棕色容量瓶中;用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次,最后连同残渣一起倒入漏斗中。
用滴管吸取乙醇,将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。
最后用乙醇定容至100mL,摇匀。
取叶绿体色素提取液在波长665nm、645nm和652nm下测定吸光度,以95%乙醇为空白对照。
五、计算
按照实验原理中提供的经验公式,分别计算植物材料中叶绿素a、b 和总叶绿素的含量