显微镜的使用、徒手切片法和绘图法

显微镜的使用、徒手切片法及绘图法

一．实验目的

⑴掌握徒手切片、表面制片方法

⑵熟悉显微镜使用方法及作图要领

二．实验内容

1．显微镜的使用

生物显微镜由光学部分和机械部分组成

⑴光学部分——目镜、物镜、聚光器、可变光栏、反射镜

※两次放大，即物镜将标本做第一次放大，目镜将第一次放大的像做第二次放大，两者相乘即是观察到的放大倍数

⑵机械部分包括镜坐、镜臂、镜筒、载物台、粗细调节手轮及推动器

⑶操作：

①将显微镜防置离桌缘约10厘米处

②对光：上升聚光镜至载物台水平，打开光栏，将低倍镜转至镜筒的正下放（用转盘听到“得”一声）转动反光镜，同时从接目镜向下看，直至明亮均匀在视野。

③装片：将观察的标本片从镜前方横置于载物台上

④调节焦距：向外旋转粗调节手轮，使镜筒慢慢下降，注意镜头与标本的距离，自目镜向下观察直至物像清楚为止。（向外物镜下降，向内物镜上升）

另外：高倍镜应先在低倍镜下选择物像，移至视野中心，转动转盘使高倍镜转至镜筒正下方，应能看到欲观察之物像，用细调节手轮使之图象清晰。

⑷注意点：

①取拿显微镜时，一手握镜臂，一手托镜坐，轻取轻放。

②先用低倍镜观察，看清物象后再换高倍镜，

③在用高倍镜观察时，注意物镜与所观察标本的间距，以防错误操作，而损坏镜头，压碎标本片

④注意保持显微镜的干燥和清洁，不得随意拆卸镜头，镜头要用擦镜纸擦拂，要防止水或药液外溢而污染镜头及其他部位。

2．徒手切片法

系用刀片或徒手切片器将材料切成薄片，可在显微镜下观察组织构造、细胞特征的制片法。

材料：新鲜应除净泥沙、干燥须经软化，

优点：简便快速能保持植物原有结构的真像，色彩和内含物

缺点：厚薄不一，不利于长期保存。

①方法

a：取材，固定与切片：选取易软化的中药材适当部位，切成2-3厘米的小段，用拇指及食指和中指夹住材料，下端用无名指托住，另手持刀片自左向右移动手腕，牵拽切片，动作要轻要快，切禁不能是拉锯式，在切的同时经常用水湿润，对于叶或柔软的材料，须用材料夹住。（如用胡萝卜、马铃薯等）

b：装片：将切好的薄片用毛笔小心移入盛有清水的培养皿中，取载玻片滴加甘油和试液，用镊子或毛笔将切片移于其上。再加一滴甘油于片上，加上盖玻片，加盖玻片时以45度角避免产生气泡，也可滴加水合氯醛试液加热透化，再滴加稀甘油，加盖薄片后进行观察。3．表面制片法

多用于对叶片、果实或草本植物茎表皮组织的观察，可观察到表皮细胞形态（波浪形、长方形、圆形、多角形）、气孔类型（不等式、不定式、平轴式、垂轴式等）、毛茸特征（星状毛、人字毛、T形毛）和着生情况，通常用钟表镊子夹住叶片或果实的表面，轻轻撕取（叶片可沿叶脉撕取、果实可沿果柄撕取）其表皮置于载玻片上的水、甘油或水合氯醛试液内，注意其上表面朝上方，加盖玻片观察。

4．绘图要领

在中药的性状和显微鉴定工作中，图可以集中的突出表现实物的主要特征，有些特征比摄影照片效果还好，因此除去用文字记录观察到的外形、组织、细胞及内含物特征外，有时还需要绘出中药材的外形和显微图，以补充文字叙述的不足，因此绘图是中药鉴定和研究工作中的一项基本技能

注意：①绘制精确的图形要根据观察的实物

②绘图有显微描绘法和徒手法两种

③按绘图工具常分，铅笔绘图法和墨线绘图法两种

其中绘显微组织图和粉末图要用通用的代表符号。见下图

对中药形状图要求富有立体感，不能随意夸张和任意涂影，必须要有一定的透视知识如：前大后小、近明远暗、透视方向要一致等基础知识。

（1）绘图原则

①一切结构均用线条来表示

②不能借助工具，必须徒手作图，与建筑设计图相区别

③显示立体结构可用透视线来表示，可以用圆点衬托明暗光线，不能涂影，点要小而圆，

由密到稀逐步过渡。

④各部位应先画出引线再注文字

引线一般要用直尺画实线来表示，要求细直、均匀、不交叉（从左向右引线）标注可直接用文字也可用数码，再在图下集中注明，图下须注明标本的名称、部位（根、叶）和放大倍数。

用直尺量出画在纸上的图像的长度或大小

放大倍数=—————————————————————————————

用显微镜目尺量出被测观察物在同一方向上的实际长度或大小

（2）徒手绘图法的步骤

①选择最典型的标本或结构

②仔细观察各部位的形状和结构及其之间的比例关系和较明显的立体结构

注意：皮层、木质部、韧皮部、髓各部分所占的比例(先画表皮或木栓，再画形层成) ③用HB或2H铅笔绘图所有全部作业全都用铅笔来完成。

注意：

①准备一本实验记录本，填写内容、方式

②每次实验结束后，认真填写实验室日志，

三．作业

1．将通用的代表符号绘制下来

2．绘一张根类横切面徒手切片组织简图

3．绘一张表面制片图