第十二章 脑脊液检验

第十二章脑脊液检验

脑脊液（CSF）是存在于脑室和蛛网膜下腔内的一种无色透明的液体，70%来自脑室脉络丛主动分泌和超滤所形成的液体，30%由大脑和脊髓细胞间隙所产生。生理情况下，正常成人脑脊液总量为120～180ml（平均150ml）。脑脊液具有重要的生理作用：①缓冲、减轻或消除外力对脑组织和脊髓的损伤。②调节颅内压。

③供给中枢神经系统营养物质，并运走代谢产物。④调节神经系统碱贮量，维持脑脊液pH在7.31～7.34。

⑤转运生物胺类物质，参与神经内分泌调节。

第一节标本采集与处理

本节考点:

（1）脑脊液检验的适应证和禁忌证

（2）标本采集与处理

（一）脑脊液检验的适应证和禁忌证

脑脊液检验需要进行腰椎穿刺采集标本，必要时行小脑延髓池和脑室穿刺。脑脊液穿刺的时机与疾病有关，化脓性脑膜炎于发病后1～2d、病毒性脑膜炎于发病后3～5d、结核性脑膜炎于发病后1～3周、疱疹性脑膜炎于流行性感冒前驱症状期开始后5～7d穿刺采集标本。由于脑脊液标本采集有一定的创伤性，因此，临床应用中必须要严格掌握其适应证和禁忌证。脑脊液检验的适应证和禁忌证见表1-12-1。

腰椎穿刺成功后立即测定脑脊液压力，然后留取脑脊液标本于3个无菌试管中，每个试管1～2ml。第一管做病原生物学检验，第二管做化学和免疫学检验，第三管做理学和细胞学检验。标本采集后应立即送检，并于1h内检验完毕。因标本放置过久，可造成细胞破坏、葡萄糖等物质分解、细菌溶解等，影响检验结果。脑脊液标本应尽量避免凝固和混入血液。若混入血液应注明，进行细胞计数时应做校正。

第二节理学检查

本节考点:

（1）颜色

（2）透明度

（3）凝固性

（4）比密

（一）颜色

肉眼观察脑脊液颜色变化，分别以无色、乳白色、红色、棕色或黑色、绿色等描述。正常脑脊液无色透明，新生儿胆红素较多可呈黄色。当中枢神经系统有炎症、损伤、肿瘤或梗阻时，破坏了血-脑脊液屏障，使

脑脊液成分发生改变，而导致其颜色发生变化。脑脊液的颜色变化及其常见的原因见表1-12-2；脑脊液新鲜出血与陈旧性出血的鉴别见表1-12-3；脑脊液呈黄色称为黄变症，其原因及临床意义见表1-12-4。

表1-12-2 脑脊液常见的颜色变化及临床意义

肉眼观察脑脊液透明度变化，分别以“清晰透明”、“微浑”、“浑浊”等描述。正常脑脊液清晰透明。脑脊液的透明度与其所含的细胞数量和细菌多少有关，当脑脊液白细胞超过300×106／L时，可呈浑浊；脑脊液中蛋白质明显增高或含有大量细菌、真菌时，也可使脑脊液浑浊。结核性脑膜炎的脑脊液可呈毛玻璃样的浑浊，化脓性脑膜炎的脑脊液呈脓性或块样浑浊，穿刺损伤性脑脊液可呈轻微的红色浑浊。

（三）凝固性

正常脑脊液放置12～24h后不会形成薄膜、凝块或沉淀。脑脊液形成凝块或薄膜与其所含的蛋白质，特别是与纤维蛋白原的含量有关，当脑脊液蛋白质含量超过10g／L时，可出现薄膜、凝块或沉淀。化脓性脑膜炎的脑脊液在1～2h内呈块状凝固；结核性脑膜炎的脑脊液在12～24h内呈薄膜或纤细的凝块；神经梅毒的脑脊液可有小絮状凝块；蛛网膜下腔梗阻的脑脊液呈黄色胶样凝固。脑脊液同时存在胶样凝固、黄变症和蛋白质-细胞分离（蛋白质明显增高，细胞正常或轻度增高），称为Froin-Nonne综合征，这是蛛网膜下腔梗阻的脑脊液特点。

（四）比密

脑脊液比密为：①腰椎穿刺：1.006～1.008。②脑室穿刺：1.002～1.004。③小脑延髓池穿刺：1.004～1.008。凡是脑脊液中的细胞数量增加和蛋白质含量增高的疾病，其比密均增高。常见于中枢神经系统感染、

神经系统寄生虫病、脑血管病、脑肿瘤、脑出血、脑退行性变和神经梅毒等。

第三节显微镜检查

本节考点：

细胞计数与分类计数

（一）细胞计数与分类计数

1.检测原理

①清亮或微浑的脑脊液标本，可以直接计数细胞总数，或稀释后再直接计数，将结果乘以稀释倍数。

②可采用直接计数法计数白细胞，或稀释后再直接计数，将结果乘以稀释倍数。

③白细胞直接计数后，在高倍镜下根据白细胞形态特征进行分类计数。也可采用Wright染色后，油镜下分类计数。

2.方法学评价

细胞总数计数和分类计数常用显微镜计数法。白细胞直接分类法简单、快速，但准确性差，尤其是陈旧性标本，细胞变形，分类困难，误差较大。涂片染色分类法细胞分类详细，结果准确可靠，尤其是可以发现异常细胞如肿瘤细胞，故推荐使用此法。该法不足之处是操作较复杂，费时。

脑脊液细胞收集有几种方法，离心涂片法常影响细胞形态及分类。目前，玻片离心沉淀法和细胞室沉淀法已用于脑脊液细胞的浓缩和收集，其优点是收集的细胞形态完整（尤其是细胞室沉淀法），分类效果好。另外，玻片离心沉淀法阳性率高。

血细胞分析仪进行脑脊液计数和白细胞分类，此法简单、快速，可以自动化。但病理性、陈旧性标本中的组织、细胞的碎片和残骸以及细胞变形等都可以影响细胞分类和计数，故重复性、可靠性有待进一步探讨。另外，蛋白质含量高，尤其有凝块的脑脊液标本容易使仪器发生堵孔现象，故不推荐使用。

3.质量控制

（1）细胞计数：①标本采集后应在1h内进行细胞计数。标本放置过久，细胞可能凝集成团或被破坏，影响计数结果。②标本必须混匀后方可进行检查，否则会影响计数结果。

（2）校正与鉴别：①因穿刺损伤血管，引起血性脑脊液，白细胞计数结果必须校正，以消除因出血带来的白细胞。②细胞计数时，应注意红细胞、白细胞与新生隐球菌的鉴别。新生隐球菌不溶于乙酸，加优质墨汁后可见未染色的荚膜；白细胞也不溶于乙酸，加酸后细胞核和细胞质更加明显；红细胞加酸后溶解。

（3）检查方法：白细胞直接计数法的试管与吸管中的冰乙酸要尽量去尽，否则可使结果偏低。若标本陈旧、细胞变形时，白细胞直接分类法误差大，可采用涂片染色分类法分类计数。

（4）染色固定：涂片染色分类计数时，离心速度不能太快，否则会影响细胞形态，可采用玻片离心法、沉淀室法收集细胞。涂片固定时间不能太长，更不能高温固定，以免使细胞皱缩，影响检验结果。

4.参考值

①无红细胞。②白细胞极少，成人：（0～8）×106／Ｌ，儿童：（0～15）×106／L，主要为单个核细胞，淋巴细胞与单核细胞之比为7：3。

5.临床意义

脑脊液白细胞达（10～50）×106／Ｌ为轻度增高，（50～100）×106／Ｌ为中度增高，大于200×106／Ｌ为显著增高。脑脊液中血细胞增高的程度及临床意义见表1-12-5。

近年来，常采用玻片离心法、沉淀室法、微孔薄膜筛滤法、纤维蛋白网细胞捕获法等收集细胞，并进行染色。常用的染色方法有May-Grunwald-Giemsa染色法、PAS染色法、过氧化酶染色法、脂类染色法、硝基四氮唑蓝（NBT）染色法和吖啶橙荧光染色法等，重点检查脑脊液腔壁细胞、肿瘤细胞和污染细胞（表1-12-6）。

第四节化学与免疫学检查

本节考点：

（1）酸碱度

（2）蛋白质

（3）葡萄糖

（4）氯化物

（5）酶学

（6）蛋白电泳

（7）免疫球蛋白

（8）其他检查

（一）酸碱度

正常脑脊液pH为7.31～7.34，且相对稳定。中枢神经系统炎症时，脑脊液pH低于正常，化脓性脑膜炎时脑脊液的pH明显减低，在测定脑脊液的pH的同时测定脑脊液中乳酸含量，对判断病情变化更有参考价值。

（二）蛋白质

1.检测原理：脑脊液蛋白质的检验有定性和定量两种方法，并可根据需要计算蛋白商（球蛋白／清蛋白）

）[脑脊液清蛋白（g/L）/血清清蛋白（g/L）]。

和脑脊液清蛋白指数（R

alb

（1）定性法

1）Pandy试验：脑脊液中的蛋白质与苯酚结合形成不溶性蛋白盐而出现白色浑浊或沉淀。

2）硫酸铵试验：包括Ross-Jone试验和Nonne-Apelt试验。饱和硫酸铵能沉淀球蛋白，出现白色浑浊或沉淀。若球蛋白增多则Ross-Jone试验阳性；Nonne-Apelt试验可检测球蛋白和清蛋白。

3）Lee-Vinson试验：磺基水杨酸和氯化高汞均能沉淀脑脊液蛋白质，根据沉淀物的比例不同，可鉴别化脓性和结核性脑膜炎。

（2）定量法：利用比浊法、染料结合比色法和免疫学方法检测脑脊液蛋白质含量。常用的方法为磺基水杨酸-硫酸钠比浊法。

2.方法学评价：脑脊液蛋白质检验方法较多，不同的方法由于所选用的试剂、条件不同，其灵敏度和特异性也不相同。其方法学评价见表1-12-7。

表1-12-7 脑脊液蛋白质检验的方法学评价

（1）因穿刺出血，脑脊液可有血液蛋白质混入，可出现假阳性。

（2）试验中所用试管和滴管须十分洁净，否则易出现假阳性。

（3）苯酚不纯可引起假阳性；室温低于10℃、苯酚饱和度减低也可引起假阴性。

（4）人工配制含球蛋白的溶液作阳性对照，可在正常脑脊液或配制与正常脑脊液基本成分相似的基础液中加不同量的球蛋白。

4.参考值

定性：阴性（或弱阳性）。定量：腰椎穿刺：0.20～0.40g／L；小脑延髓池穿刺：0.10～0.25g／L；脑室穿刺：0.05～0.15g／L；蛋白商：0.4～0.8；清蛋白指数：7×l0 -3。

5.临床意义

更脑脊液蛋白质含量增高是血-脑脊液屏障功能障碍的标志。由于脑脊液清蛋白只来自血清，因此，R

alb

能反映血-脑脊液屏障完整性。脑脊液蛋白质增高可见于中枢神经系统的感染、梗阻和出血等多种疾病，其常见的原因见表1- l2-8。导致血-脑脊液屏障功能障碍的原因见表1-12-9。

发性硬化症、神经梅毒、脑脊髓膜炎、亚急性硬化性全脑炎等。②蛋白商减低：提示脑脊液清蛋白含量增高，见于化脓性脑膜炎急性期、脑肿瘤、脊髓压迫症等。

（三）葡萄糖

1.检测原理：脑脊液葡萄糖含量大约为血糖的50%～80%（平均60%），其高低与血糖浓度、血-脑脊液屏障的通透性、葡萄糖的酵解程度有关。脑脊液葡萄糖检验多采用葡萄糖氧化酶法和己糖激酶定量法。

2.参考值：①腰椎穿刺：2.5～4.4mmol／L。②小脑延髓池穿刺：2.8～4.2mmol／L。③脑室穿刺：

3.0～

4.4mmol／L。

3.临床意义

（1）葡萄糖减低：①细菌性脑膜炎和真菌性脑膜炎，以化脓性脑膜炎早期减低最明显。②脑寄生虫病等。

③脑肿瘤。④神经梅毒。⑤低血糖昏迷、胰岛素过量所致的低血糖状态。

（2）葡萄糖增高：①新生儿及早产儿。②糖尿病或静脉注射葡萄糖。③脑或蛛网膜下腔出血所致的血性脑脊液。④病毒性脑膜炎或脑炎。⑤急性颅脑外伤、中毒、缺氧、脑出血等所致下丘脑损伤等。

（四）氯化物

1.检测原理：由于脑脊液中蛋白质含量较少，为了维持脑脊液和血浆渗透压的平衡（Donnan平衡），氯化物含量约为血浆1.2～1.3倍。氯化物定量检验方法与血清氯化物检验方法相同，测定方法有硝酸汞滴定法、电量分析法、离子选择性电极法和硫氰酸汞比色法。临床常用电极法。

2.方法学评价：几种脑脊液氯化物检测的方法学评价见表1-12-10。

4.临床意义

（1）氯化物减低：①细菌或真菌感染，特别是化脓性、结核性和隐球菌性脑膜炎的急性期、慢性感染的急性发作期。②细菌性脑膜炎的后期，由于脑膜有明显的炎症浸润或粘连，局部有氯化物附着，使脑脊液氯化物减低。③呕吐、肾上腺皮质功能减退时，由于血氯减低，使脑脊液氯化物含量亦减低。

（2）氯化物增高：主要见于尿毒症、肾炎、心力衰竭、病毒性脑膜炎或脑炎。

第五节病原生物学检查

本节考点:

（1）细菌学检查

（2）寄生虫检查

（一）细菌学检查

1.显微镜检查：脑脊液涂片革兰染色或碱性亚甲蓝染色检查致病菌。革兰染色用于检查肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、葡萄球菌、铜绿假单胞菌、链球菌、大肠埃希菌等；碱性亚甲蓝染色用于检查脑膜炎球菌。显微镜检查对化脓性脑膜炎诊断的阳性率为60%～90%。如果怀疑为结核性脑膜炎，可采用抗酸染色，油镜下寻找抗酸杆菌。新生隐球菌检查常采用印度墨汁染色法，若呈假阳性，可采用苯胺墨染色法。

2.细菌培养：主要适用于脑膜炎奈瑟菌、链球菌、葡萄球菌、大肠埃希菌、流感嗜血杆菌等。同时，也要注意厌氧菌、真菌的培养。

3.ELISA：检测结核杆菌抗体：结核杆菌感染时，可产生特异性的抗结核抗体，可采用最简便、灵敏度高的ELISA检测此抗体。如果脑脊液中抗结核抗体水平高于血清，这对结核性脑膜炎的诊断及鉴别诊断具有特殊价值。

（二）寄生虫检查

1.脑脊液涂片检查：可发现血吸虫卵、肺吸虫卵、弓形虫、阿米巴滋养体等。

2.脑囊虫检查：脑囊虫补体结合试验诊断脑囊虫的阳性率可达88%；致敏乳胶颗粒玻片凝集试验诊断脑囊虫的符合率为90%；ELISA法对诊断脑囊虫病具有高度的特异性。

3.梅毒螺旋体检查：神经梅毒的诊断首选灵敏度、特异性均很高的螺旋体荧光抗体吸收试验（FTA-ABS）；其次选用性病研究实验室玻片试验（VDRL），其灵敏度为50%～60%，特异性为90%。现多使用快速血清反应素试验（RPR）为筛检，梅毒螺旋体微粒凝集试验（TPPA）为梅毒确诊试验。

第六节质量控制与临床应用

本节考点：

（1）质量控制

（2）临床应用

（一）质量控制

为了给临床诊断提供准确的依据，必须严格质量控制，以保证结果的准确性。因此，脑脊液检验的质量控制应注意统一操作规程、加强室内质控等。

1.规范操作规程

由于操作方法和判断标准的不统一，不仅为临床诊断、观察疗效和判断预后带来困难，也不利于开展脑脊液检验的室内评价。因此，脑脊液检验应统一操作规程，采用标准化的检验方法，并定期检查各种试剂的质量及仪器的性能。

目前，脑脊液细胞计数和分类计数的室内质控尚无理想的方法。为了提高检验质量，应该：①严格操作规程，控制各种影响因素。②白细胞分类采用染色分类法，采用玻片离心沉淀法或细胞室沉淀法收集细胞。

2.设立阳性和阴性对照或质控物

①脑脊液化学和免疫学检验应选择灵敏度和特异性高、操作简便的方法。②对于定性检验，为了防止假阳性和假阴性结果，每次都应做阳性和阴性对照，以保证结果的准确性和可靠性。对于定量检验，可使用定值的质控物伴随常规检验做室内质控，以减少结果的误差，提高检验结果的可靠性和可比性。

（二）临床应用

1.诊断与鉴别诊断中枢神经系统感染性疾病：对于脑膜炎或脑炎的患者，通过检查脑脊液压力、颜色，并对脑脊液进行化学和免疫学、显微镜检查，不仅可以确立诊断，而且对鉴别诊断也有极大的帮助。另外，对细菌性和病毒性脑膜炎的鉴别诊断也可选用LD、ADA、溶菌酶等指标。

2.诊断与鉴别诊断脑血管疾病：头痛、昏迷或偏瘫的患者，其脑脊液为血性，首先要鉴别是穿刺损伤出血还是脑出血、蛛网膜下腔出血。若脑脊液为均匀一致的红色，则可能为脑出血、蛛网膜下腔出血；若第1管脑脊液为红色，以后逐渐变清，则多为穿刺损伤出血；若头痛、昏迷或偏瘫患者的脑脊液为无色透明，则

多为缺血性脑病。另外，还可选用LD、AST、CPK等指标诊断或鉴别诊断脑血管病。

3.辅助诊断脑肿瘤：大约70%恶性肿瘤可转移至中枢神经系统，此时的脑脊液中单核细胞增加、蛋白质增高、葡萄糖减少或正常。因此，脑脊液细胞计数和蛋白质正常，可排除肿瘤的脑膜转移。若白血病患者脑脊液发现白血病细胞，则可诊断为脑膜白血病。脑脊液涂片或免疫学检查发现肿瘤细胞，则有助于肿瘤的诊断。β2-M、LD、PHI、溶菌酶等指标也有助于肿瘤的诊断。

4.诊断脱髓鞘病：脱髓鞘病是一类颅内免疫反应活性增高的疾病，多发性硬化症是其代表性疾病。除了脑脊液常规检查外，MBP、免疫球蛋白、AChE等检查也有重要诊断价值。

常见脑或脑膜疾病的脑脊液检验结果见表1-12-14。脑脊液实验室检查对疾病的诊断灵敏度（S）和特异性（Sp）见表1-l2-15，脑脊液检查项目分类见表1-12-16。