生物常用试剂专题

生物染色试剂

一、常用试剂：

1.斐林试剂：鉴定还原糖（葡萄糖，果糖，麦芽糖，乳糖等等），（50-60°水浴加热）可

是还原糖产生砖红色沉淀）

2.双缩脲试剂：使蛋白质产生紫色反应，也可用于鉴定多肽链

3.苏丹3：是脂肪染成橘黄色，或者苏丹4使脂肪染成红色

4.龙胆紫，醋酸洋红：使细胞核内的染色体着色

5.碘液：使淀粉变蓝

6.甲基绿：是DNA染成绿色

7.吡罗红：吡罗红使RNA呈现红色,常用于检测细胞中RNA的分布

8.健那绿：使线粒体染成蓝绿色

二、下面介绍几个不常用的

1.班氏尿糖定性试剂：鉴定还原糖

2.二苯胺：DNA遇到二苯胺（沸水浴）染成蓝色

3.溴麝香草酚在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈黄色。变色范围pH6.0(黄)～7.6(蓝)。

溴麝香草酚蓝水溶液与二氧化碳又蓝到绿再到黄

4. 向铬酸盐溶液中加入酸时，溶液由黄色变为橙色，表明铬酸根转变为重铬酸根，反之，

重铬酸盐溶液中加入碱时，溶液又由橙色变为黄色，又转变为铬酸根。

三、课本上用到的其他溶液（但不是染色剂）

1.NaOH：用于吸收CO2 或者改变溶液的PH值

2.Ca（OH）2 用于鉴定CO2

3.质量分数15%的盐酸和体积分数95%的酒精溶液混合液（1:1）

用于分离洋葱根尖细胞，使组织细胞分离并定型

4.丙酮：在叶绿体色素提取时，用于溶解叶绿体中的色素

5.层析液：色素在其中的溶解度不同来分离色素，

四、1、斐林试剂

配制：1）甲液质量浓度为0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml

2）乙液质量浓度为0.05g/ml，取5gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml

临用时将甲、乙液等量混合

作用：鉴定还原性糖：C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。

还原性糖与斐林试剂发生作用，生成砖红色沉淀。如用于鉴定组织液中有否还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。

2、班氏尿糖定性试剂

配制：称取17.4克无水硫酸铜（CuSO4）溶解于100毫升热蒸馏水中，冷却后，稀释到150毫升。称取柠檬酸钠173克及无水碳酸钠（Na2CO3）100克，加蒸馏水600毫升，加热使之溶解，冷却后，稀释到850毫升。把硫酸铜溶液倾入柠檬酸钠及碳酸钠溶液中，搅匀后即

为班氏尿糖定性试剂。用细口瓶贮存备用（为了防止氢氧化铜沉淀的生成，故加入柠檬酸钠。柠檬酸钠是一种亲水性掩蔽性络合物形成剂，它能与铜离子形成可溶性络盐）。

使用方法同斐林试剂，所不同的是班氏试剂可长期使用。

3、双缩脲试剂

配制：A液：质量浓度为0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml

B液：质量浓度为0.01g/ml，取1gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml

使用时，先加A液，后加B液

作用：鉴定蛋白质，蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可产生紫色反应。也可用于鉴定多肽。

4、苏丹Ⅲ

配制：取0.1g苏丹Ⅲ，溶解在20ml95%酒精中

作用：鉴定脂肪，脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染成红色）。

5、质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液的混合液（1：1）。

作用：用于洋葱根尖的解离，即使组织中的细胞相互分离开来。能杀死细胞固定。

6、质量浓度为0.01g/mL的或0.02g/mL龙胆紫溶液（或醋酸洋红溶液）

配制：是将龙胆紫溶解在质量分阶段数为2%的醋酸溶液中配制而成

作用：使细胞核内的染色体着色，便于观察。

7、质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液

作用：观察成熟植物细胞质分离时用。经此处理细胞仍具活性。

8、质量浓度为0.1mg/ml的亚甲基蓝溶液

配制：将亚甲基蓝溶于蒸馏水中配制而成

作用：（1）用于观察根对矿质元素离子的交换吸附观察；

（2）用于检测水中细菌情况，根据亚甲基蓝褪色情况，判断水质被细菌污染情况。

是活体染色剂。

9、丙酮

是有机溶剂，在叶绿体中色素提取时，用于溶解叶绿体中的色素。可用酒精替代，不过提取色素时将绿叶放入酒精中隔水加热

10、层析液

配制：由20份石油醚（在60~900C下分馏出来的）、2份丙酮和1份苯混合而成。是一种脂溶性很强的有机溶剂，叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同：溶解度高的随层析液在滤纸上扩散很快；溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。

代用品：93号汽油、四氯化碳

11、SiO2、CaCO3

加入少许SiO2是为了研磨得充分；加入少许CaCO3是为了防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。

12、碘液

配制：取2gKI ，溶解在5ml蒸馏水中，再加1gI，待溶解后用蒸馏水稀释至300ml。溶液在光亮处容易变成紫色，必须保存在暗色玻璃瓶里。

作用：用来测定淀粉，淀粉遇碘后，形成紫色的复合物。

13、二苯胺

配制：称取1.5g二苯胺，溶于100mL冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸，用棕色瓶保存。临用前，在10mL的上述溶液中再加入0.1mL体积分数为0.2%的乙醛溶液。

作用：DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色。

14、NaOH：用于吸收CO2（验证光合作用需要CO2）或改变溶液的pH,

15、Ca(OH)2：鉴定CO2（验证呼吸作用产生CO2）。

16、NaHCO3：提供CO2等

聚焦高考试题中有关染色剂使用的考查

（新高考）

一染色剂的应用

1 DNA和RNA的染色鉴定

甲基绿和吡罗红是混合染色剂。甲基绿是具有金属光泽的绿色微结晶或亮绿色粉末。溶于水，显蓝绿色。稍溶于乙醇，不溶于戊醇。吡咯在盐酸作用下聚合成为吡咯红，可与RNA结合呈现红色。

这两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。

利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以观察到DNA和RNA在细胞中的分布情况。注意：①盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂进人细胞，同时使染色体中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。② 2种染色剂要混合使用，而且要现配现用。

2 健那绿染液与线粒体的观察

健那绿染液是专一性的线粒体的活细胞染料，线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态( 即有色状态)呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原成为无色状态。因此可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色，而细胞质接近无色。

线粒体能在健那绿染液中维持活性数小时，通过染色，可以在高倍显微镜下观察到生活状态的线粒体的形态和分布。

3. 碱性染料与染色体的观察

生物实验中所用的染料，按其来源可分为天然染料和人工染料两大类。人工染料根据其主要化学成分的性质，又分成碱性染料、酸性染料和中性染料三大类，其碱性、酸性和中性是由染料中有色部分的性质所决定的。若染料的有色部分为阴离子，即为“酸性”染料；若染料的有色部分为阳离子，则称为“碱性”染料；若染料的阴、阳离子均有颜色，则称为“中性”染料。

染色体(质)是细胞核内容易被碱性染料染成深色的物质。

在观察植物细胞有丝分裂实验中，常用龙胆紫溶液使染色体染成紫色，也使用醋酸洋红溶液使染色体着红色。二者染色时间都不可过长。

l ％～2 ％龙胆紫溶液俗称紫药水，是人们所熟悉的外用药。龙胆紫溶液的配制是将龙胆紫溶解在质量分数为2％的醋酸溶液中配制而成。染色中使用的龙胆紫溶液略呈酸性，

l％醋酸洋红本身也是酸性，同样具有碱性的助色基团。配方中的醋酸是染料的溶剂，在染色时增加了细胞的通透性，利于染液的离子进入细胞而使细胞核内的染色体着色。

此外，改良苯酚品红溶液也可使染色体着色。

4 亚甲基蓝是一种活体染色体

亚甲基蓝是细胞的活体染色剂，0．01％亚甲基蓝对细胞无毒害，亚甲基蓝是一种有机物小分子，在水中离解成亚甲基蓝的阳离子(呈蓝色)和氯离子(无色)，亚甲基蓝阳离子可通过主动运输进入到细菌体内，在酶的作用下被细菌分解成无色的小分子，使蓝色褪去。褪色程度越大，说明细菌越多，水污染越严重，因此可用于水污染程度指示剂。此外，亚甲基蓝是氧化还原指示剂，在有氧的环境中蓝色褪去，可用作氧气检测剂。

5 苏丹红与脂肪鉴定

苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ是人工合成的苏丹红系列染料。常作为一种工业染料，被广泛用于如溶剂、油、蜡、汽油的增色以及鞋、地板等增光。近年有不法分子用于食品添加剂，对人体有害。

苏丹红为亲脂性化合物。在脂肪类物质中的溶解度大于在其他溶剂( 如酒精、丙酮) 中的溶解度时，染料颗粒便大量进入脂肪类物质的结构内，在脂滴中溶解积累，并吸附在脂肪颗粒结构上，苏丹Ⅲ遇脂肪显橘黄色，苏丹Ⅳ遇脂肪显红色。苏丹Ⅳ染液与脂肪的亲和力比较强，所以染色时间应比苏丹Ⅲ短。